本發(fā)明涉及中藥領(lǐng)域,具體為燈盞花定性定量中藥飲片的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)、操作規(guī)程與制造工藝。
背景技術(shù):
燈盞花(gerberajamesonii),是菊科植物短葶飛蓬erigeronbreviscapus(vant.)hand-mazz的干燥全草,又名燈盞細(xì)辛、東菊,主要分布于我國(guó)西南地區(qū),尤以云南較多。夏、秋二季采挖,除去雜質(zhì),曬干。首載于《滇南本草》,《中國(guó)藥典》1977年版一部曾予收載。燈盞花性寒、微苦、甘溫辛,具有微寒解毒、祛風(fēng)除濕、活血化瘀、通經(jīng)活絡(luò)、消炎止痛的功效。過(guò)去30多年來(lái),我國(guó)學(xué)者從該植物分離出了黃酮、咖啡??崴?、γ-吡喃酮、香豆素、木脂素、萜類(lèi)、甾醇、芳香酸、脂肪酸及其他類(lèi)型化合物,其中的酚酸類(lèi)成分,特別是黃酮和咖啡酰奎尼酸類(lèi)被普遍認(rèn)為是燈盞花的抗氧化和心腦血管活性成分。為進(jìn)一步闡明燈盞花的化學(xué)成分,對(duì)燈盞花的乙醇提取物進(jìn)行了分離,得到十二個(gè)化合物,分別鑒定為槲皮素-3-o-β-d-葡萄糖苷、5,7-二羥基色原酮、3-o-咖啡酰-γ-奎尼內(nèi)酯、柚皮素、3,5-二-o-咖啡??崴帷?,4-二-o-咖啡??崴?、4,5-二-o-咖啡酰奎尼酸、1,3-二-o-咖啡??崴?、1,5-二-o-咖啡??崴帷?-o-咖啡??崴?、4-o-咖啡??崴岷途G原酸。目前燈盞花注射液在臨床上除主要用于心腦血管系統(tǒng)疾病外,在糖尿病、腎病、頸性眩暈、老年性疾病的治療上也有較好的療效。燈盞花作為常用中藥,具有強(qiáng)大的開(kāi)發(fā)潛力。隨著社會(huì)對(duì)燈盞花的需求量日益增加,傳統(tǒng)煎煮服用較為耗時(shí)費(fèi)力,因此迫切需要一種可沖泡服用的燈盞花中藥飲片。
本發(fā)明所要解決的問(wèn)題是解決目前市場(chǎng)上的普遍存在中藥飲片療效不明顯與中藥材因環(huán)境污染而重金屬超標(biāo)、農(nóng)藥殘留超標(biāo)等質(zhì)量問(wèn)題。
中藥飲片是中國(guó)中藥產(chǎn)業(yè)不可缺失的部分,是中醫(yī)臨床辯證施治必需的傳統(tǒng)武器,其品質(zhì)直接影響中醫(yī)臨床防病、治病的療效,另外針對(duì)現(xiàn)代人快速的生活節(jié)奏,本發(fā)明提供的高品質(zhì)、可沖泡服用改變傳統(tǒng)煎煮服用方法的中藥飲片有較大的市場(chǎng)需求。
附圖說(shuō)明
附圖1是燈盞花定性定量中藥飲片生產(chǎn)工藝流程圖。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素:
為了解決上述問(wèn)題,本發(fā)明提供的燈盞花定性定量中藥飲片的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)與制造工藝,增加對(duì)藥屑雜質(zhì)、重金屬及有害元素、有機(jī)氯農(nóng)藥殘留量、黃曲霉毒素b1、二氧化硫殘留量的檢測(cè),并將含量測(cè)定中的野黃芩苷總量的標(biāo)準(zhǔn)限度從0.30%提高至0.33%。并通過(guò)特定的工序生產(chǎn)出燈盞花中藥飲片,確保中藥飲片符合高標(biāo)準(zhǔn)高品質(zhì)的要求。
本發(fā)明提供的燈盞花定性定量中藥飲片的制造工藝,包括以下步驟:
a10、凈制:清除混在藥物中的雜質(zhì)及霉變品等,或?qū)⑺幬锇创笮∵M(jìn)行分檔,以便達(dá)到潔凈或進(jìn)一步加工處理。
a20、潤(rùn)藥:凈制后的藥材放入洗潤(rùn)池中,噴水堆潤(rùn)6-8h,至藥材徹底潤(rùn)透。
a30、切制:按全自動(dòng)高速切片機(jī)操作規(guī)程操作,調(diào)好刀距0.4mm,進(jìn)行切藥。
a40、干燥:采用熱風(fēng)循環(huán)烘箱進(jìn)行干燥,將藥材鋪于烘箱架子上,攤鋪厚度均勻,厚度在3cm以下。打開(kāi)開(kāi)關(guān),開(kāi)啟加熱開(kāi)關(guān)、風(fēng)機(jī),在溫度60±2℃進(jìn)行干燥,在溫度達(dá)到設(shè)定溫度后干燥5-7h,干燥完畢,關(guān)閉加熱開(kāi)關(guān),繼續(xù)吹風(fēng),待箱內(nèi)溫度降下至35~40℃,關(guān)閉風(fēng)機(jī)。干燥后崗位人員需填寫(xiě)中間產(chǎn)品請(qǐng)檢單,交質(zhì)量部由qa取樣進(jìn)行水分檢查。
a50、包裝:根據(jù)本品包裝規(guī)格要求進(jìn)行包裝。包裝前需對(duì)包裝間進(jìn)行檢查,確認(rèn)包裝生產(chǎn)線的清場(chǎng)已經(jīng)完成,并核對(duì)包裝材料是否符合要求。內(nèi)包裝:在設(shè)備上調(diào)整好需要印制的生產(chǎn)日期、批號(hào),qa監(jiān)控,稱取規(guī)定重量的藥材放入料斗中,用封口機(jī)封口,要求做到封口嚴(yán)密、平整、美觀外包裝:在設(shè)備上調(diào)整好需印制的生產(chǎn)日期及批號(hào),qa監(jiān)控,在外包裝盒子上打印批號(hào)、生產(chǎn)日期,打印過(guò)程中需注意批號(hào)及生產(chǎn)日期是否清晰。將內(nèi)包裝完成后的飲片及檢驗(yàn)報(bào)告書(shū)放入外包盒中,4袋/盒。將每10盒飲片,套入1個(gè)熱縮膜中,進(jìn)行熱收縮;熱收縮后裝入大紙箱中,240盒/箱。操作過(guò)程中,qa隨時(shí)抽檢。
a60、成品:包裝后崗位人員需填寫(xiě)成品請(qǐng)檢單,交質(zhì)量部由qa取樣進(jìn)行產(chǎn)品檢查。
增加對(duì)藥屑雜質(zhì)、重金屬及有害元素、有機(jī)氯農(nóng)藥殘留量、黃曲霉毒素b1、二氧化硫殘留量的檢測(cè),并將含量測(cè)定中的野黃芩苷總量的標(biāo)準(zhǔn)限度從0.30%提高至0.33%。修訂后的燈盞花定性定量中藥飲片的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)如下所示:
燈盞花飲片
拼音名稱:dengzhanhuayinpian
包裝:純鋁復(fù)合膜包裝。
【性狀】取本品適量,在日光下觀察,本品呈不規(guī)則碎,質(zhì)脆,斷面黃白色,有髓或中空。葉皺縮、破碎,黃綠色。嗅之,氣微香,嘗之,味微苦。
【鑒別】
顯微鑒別
儀器及用具:中藥粉碎機(jī)、藥典篩、顯微鏡、酒精燈
試劑及試液:水合氯醛試液、甘油醋酸試液、甘油乙醇試液、稀甘油(試劑均使用分析純,實(shí)驗(yàn)用水為純化水)
測(cè)定:取本品葉適量,切片置載玻片上,滴加甘油醋酸試液、水合氯醛試液或其他試液1~2滴,蓋上蓋玻片。必要時(shí)滴加水合氯醛試液后,在酒精燈上加熱透化,并滴加甘油乙醇試液或稀甘油,蓋上蓋玻片,于顯微鏡下觀察:本品葉表面觀:表皮細(xì)胞壁波狀彎曲,有角質(zhì)線紋,氣孔不定式。非腺毛1~8細(xì)胞,長(zhǎng)約180~560μm。腺毛頭部1~4細(xì)胞,柄1至多細(xì)胞。
結(jié)果判定:本品葉表面觀:表皮細(xì)胞壁波狀彎曲,有角質(zhì)線紋,氣孔不定式。非腺毛1~8細(xì)胞,長(zhǎng)約180~560μm。腺毛頭部1~4細(xì)胞,柄1至多細(xì)胞。
高效液相色譜鑒別
儀器及用具:中藥粉碎機(jī)、分析天平、藥典篩、超聲波清洗機(jī)、高效液相色譜儀
試劑及試液:甲醇、磷酸、三氯甲烷(其中甲醇為色譜純,其他試劑為分析純,實(shí)驗(yàn)用水為純化水)
測(cè)定及結(jié)果判定取本品,照(含量測(cè)定)項(xiàng)下的方法試驗(yàn),供試品色譜應(yīng)呈現(xiàn)與對(duì)照品色譜保留時(shí)間相一致的色譜峰。
【檢查】
檢查
藥屑、雜質(zhì)
儀器及用具:中藥粉碎機(jī)、分析天平、藥典篩
照雜質(zhì)檢查法(通則2301)測(cè)定。取供試品約100g(精確到0.1g),攤開(kāi),揀出雜質(zhì),用6號(hào)篩篩出藥屑,合并,稱重,計(jì)算其在供試品中的量(%)。
結(jié)果判定:本品藥屑、雜質(zhì)不得過(guò)3%。
水分
儀器及用具:中藥粉碎機(jī)、分析天平、藥典篩、電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱、稱量瓶
測(cè)定及結(jié)果判定:照水分測(cè)定法(通則0832第二法)測(cè)定。取供試品2~5g,平鋪于干燥至恒重的扁形稱量瓶中,厚度不超過(guò)5mm,疏松供試品不超過(guò)10mm,精密稱定,開(kāi)啟瓶蓋在100~105℃干燥5小時(shí),將瓶蓋蓋好,移置干燥器中,放冷30分鐘,精密稱定,再在上述溫度干燥1小時(shí),放冷,稱重,至連續(xù)兩次稱重的差異不超過(guò)5mg為止。根據(jù)減失的重量,計(jì)算供試品中含水量(%)。
結(jié)果判定:本品水分不得過(guò)12.0%。
總灰分
儀器及用具:中藥粉碎機(jī)、分析天平、藥典篩、馬弗爐、電爐、坩堝
測(cè)定及結(jié)果判定:照灰分測(cè)定法(通則2302)測(cè)定。取供試品2~3g(如須測(cè)定酸不溶性灰分,可取供試品3~5g),置熾灼至恒重的坩堝中,稱定重量(準(zhǔn)確至0.01g),緩緩熾熱,注意避免燃燒,至完全炭化時(shí),逐漸升高溫度至500~600℃,使完全灰化并至恒重。根據(jù)殘?jiān)亓浚?jì)算供試品中總灰分的含量(%)。結(jié)果判定:本品總灰分不得過(guò)15%。
重金屬及有害元素
儀器及用具:中藥粉碎機(jī)、分析天平、藥典篩、微波消解儀、原子吸收分光光度計(jì)
試劑及試液:硝酸、磷酸二氫銨、硝酸鎂、碘化鉀、抗壞血酸、鹽酸、硼氫化鈉、氫氧化鈉、硫酸、高錳酸鉀、鹽酸羥胺(其中硝酸、磷酸二氫銨、硝酸鎂為優(yōu)級(jí)純,其他試劑均使用分析純,實(shí)驗(yàn)用水為純化水)
標(biāo)準(zhǔn)樣品:鉛單元素標(biāo)準(zhǔn)樣品、鎘單元素標(biāo)準(zhǔn)樣品、砷單元素標(biāo)準(zhǔn)樣品、汞單元素標(biāo)準(zhǔn)樣品、銅單元素標(biāo)準(zhǔn)樣品
方法:照鉛、鎘、砷、汞、銅測(cè)定法(通則2321)測(cè)定
鉛的測(cè)定(石墨爐法)
測(cè)定條件參考條件:波長(zhǎng)283.3nm,干燥溫度100~120℃,持續(xù)20秒;灰化溫度400~750℃,持續(xù)20~25秒;原子化溫度1700~~2100℃,持續(xù)4~5秒。
鉛標(biāo)準(zhǔn)貯備液的制備精密量取鉛單元素標(biāo)準(zhǔn)溶液適量,用2%硝酸溶液稀釋?zhuān)瞥擅?ml含鉛(pb)1μg的溶液,即得(0~5℃貯存)。
標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備分別精密量取鉛標(biāo)準(zhǔn)貯備液適量,用2%硝酸溶液制成每1ml分別含鉛0ng、5ng、20ng、40ng、60ng、80ng的溶液。分別精密量取1ml,精密加含1%磷酸二氫銨和0.2%硝酸鎂的溶液0.5ml,混勻,精密吸取20μl注入石墨爐原子化器,測(cè)定吸光度,以吸光度為縱坐標(biāo),濃度為橫坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
供試品溶液的制備a法取供試品粗粉0.5g,精密稱定,置聚四氯乙烯消解罐內(nèi),加硝酸3~5ml,混勻,浸泡過(guò)夜,蓋好內(nèi)蓋,旋緊外套,置適宜的微波消解爐內(nèi),進(jìn)行消解(按儀器規(guī)定的消解程序操作)。消解完全后,取消解內(nèi)罐置電熱板上緩緩加熱至紅棕色蒸氣揮盡,并繼續(xù)緩緩濃縮至2~3ml,放冷,用水轉(zhuǎn)入25ml量瓶中,并稀釋至刻度,搖勻,即得。同法同時(shí)制備試劑空白溶液。
測(cè)定法精密量取空白溶液與供試品溶液各1ml,精密加含1%磷酸二氫銨和0.2%硝酸鎂的溶液0.5ml,混勻,精密吸取10~20μl,照標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備項(xiàng)下方法測(cè)定吸光度,從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出供試品溶液中鉛(pb)的含量,計(jì)算,即得。
鎘的測(cè)定(石墨爐法)
測(cè)定條件參考條件:波長(zhǎng)228.8nm,干燥溫度100~120℃,持續(xù)20秒;灰化溫度300~500℃,持續(xù)20~25秒;原子化溫度1500~1900℃,持續(xù)4~5秒。
鎘標(biāo)準(zhǔn)貯備液的制備精密量取鎘單元素標(biāo)準(zhǔn)溶液適量,用2%硝酸溶液稀釋?zhuān)瞥擅?ml含鎘(cd)1μg的溶液,即得(0~5℃貯存)。
標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備分別精密量取鎘標(biāo)準(zhǔn)貯備液適量,用2%硝酸溶液稀釋制成每1ml分別含鎘0ng、0.8ng、2.0ng、4.0ng、6.0ng、8.0ng的溶液。分別精密吸取10μl,注入石墨爐原子化器,測(cè)定吸光度,以吸光度為縱坐標(biāo),濃度為橫坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
供試品溶液的制備同鉛測(cè)定項(xiàng)下供試品溶液的制備。
測(cè)定法精密吸取空白溶液與供試品溶液各10~20μl,照標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備項(xiàng)下方法測(cè)定吸光度(若供試品有干擾,可分別精密量取標(biāo)準(zhǔn)溶液、空白溶液和供試品溶液各1ml,精密加含1%磷酸二氫銨和0.2%硝酸鎂的溶液0.5ml,混勻,依法測(cè)定),從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出供試品溶液中鎘(cd)的含量,計(jì)算,即得。
砷的測(cè)定(氫化物法)
測(cè)定條件采用適宜的氫化物發(fā)生裝置,以含硼氫化鈉和0.3%氫氧化鈉溶液(臨用前配制)作為還原劑,鹽酸溶液(1→100)為載液,氮?dú)鉃檩d氣,檢測(cè)波長(zhǎng)為193.7nm。
砷標(biāo)準(zhǔn)貯備液的制備精密量取砷單元素標(biāo)準(zhǔn)溶液適量,用2%硝酸溶液稀釋?zhuān)瞥擅?ml含砷(as)1μg的溶液,即得(0~5℃貯存)。
標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備分別精密量取砷標(biāo)準(zhǔn)貯備液適量,用2%硝酸溶液稀釋制成每1ml分別含砷0ng、5ng、10ng、20ng、30ng、40ng的溶液。分別精密量取10ml,置25ml量瓶中,加25%碘化鉀溶液(臨用前配制)1ml,搖勻,加10%抗壞血酸溶液(臨用前配制)1ml,搖勻,用鹽酸溶液(20→100)稀釋至刻度,搖勻,密塞,置80℃水浴中加熱3分鐘,取出,放冷。取適量,吸入氫化物發(fā)生裝置,測(cè)定吸收值,以峰面積(或吸光度)為縱坐標(biāo),濃度為橫坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
供試品溶液的制備同鉛測(cè)定項(xiàng)下供試品溶液的制備中的a法制備。
測(cè)定法精密吸取空白溶液與供試品溶液各10ml,照標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備項(xiàng)下,自“加25%碘化鉀溶液(臨用前配制)1ml”起,依法測(cè)定。從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出供試品溶液中砷(as)的含量,計(jì)算,即得。
汞的測(cè)定(冷蒸氣吸收法)
測(cè)定條件采用適宜的氫化物發(fā)生裝置,以含0.5%硼氫化鈉和0.1%氫氧化鈉的溶液(臨用前配制)作為還原劑,鹽酸溶液(1→100)為載液,氮?dú)鉃檩d氣,檢測(cè)波長(zhǎng)為253.6nm。
汞標(biāo)準(zhǔn)貯備液的制備精密量取汞單元素標(biāo)準(zhǔn)溶液適量,用2%硝酸溶液稀釋?zhuān)瞥擅?ml含汞(hg)1μg的溶液,即得(0~5℃貯存)。
標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備分別精密量取汞標(biāo)準(zhǔn)貯備液0ml、0.1ml、0.3ml、0.5ml、0.7ml、0.9ml,置50ml量瓶中,加20%硫酸溶液10ml、5%高錳酸鉀溶液0.5ml,搖勻,滴加5%鹽酸羥胺溶液至紫紅色恰消失,用水稀釋至刻度,搖勻。取適量,吸入氫化物發(fā)生裝置,測(cè)定吸收值,以峰面積(或吸光度)為縱坐標(biāo),濃度為橫坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
供試品溶液的制備a法取供試品粗粉0.5g,精密稱定,置聚四氟乙烯消解罐內(nèi),加硝酸3~5ml,混勻,浸泡過(guò)夜,蓋好內(nèi)蓋,旋緊外套,置適宜的微波消解爐內(nèi)進(jìn)行消解(按儀器規(guī)定的消解程序操作)。消解完全后,取消解內(nèi)罐置電熱板上,于120℃緩緩加熱至紅棕色蒸氣揮盡,并繼續(xù)濃縮至2~3ml,放冷,加20%硫酸溶液2ml、5%高錳酸鉀溶液0.5ml,搖勻,滴加5%鹽酸羥胺溶液至紫紅色恰消失,轉(zhuǎn)入10ml量瓶中,用水洗滌容器,洗液合并于量瓶中,并稀釋至刻度,搖勻,必要時(shí)離心,取上清液,即得。同法同時(shí)制備試劑空白溶液。
測(cè)定法精密吸取空白溶液與供試品溶液適量,照標(biāo)準(zhǔn)曲線制備項(xiàng)下的方法測(cè)定從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出供試品溶液中汞(hg)的含量,計(jì)算,即得。
銅的測(cè)定(火焰法)
測(cè)定條件檢測(cè)波長(zhǎng)為324.7nm,采用空氣-乙炔火焰,必要時(shí)進(jìn)行背景校正。
銅標(biāo)準(zhǔn)貯備液的制備精密量取銅單元素標(biāo)準(zhǔn)溶液適量,用2%硝酸溶液稀釋?zhuān)瞥擅?ml含銅(cu)10μg的溶液,即得(0~5℃貯存)。
標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備分別精密量取銅標(biāo)準(zhǔn)貯備液適量,用2%硝酸溶液制成每1ml分別含銅0μg、0.05μg、0.2μg、4μg、0.6μg、0.8μg的溶液。依次噴入火焰,測(cè)定吸光度,以吸光度為縱坐標(biāo),濃度為橫坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
供試品溶液的制備同鉛測(cè)定項(xiàng)下供試品溶液的制備。
測(cè)定法精密吸取空白溶液與供試品溶液適量,照標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備項(xiàng)下的方法測(cè)定。從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出供試品溶液中銅(cu)的含量,計(jì)算,即得。
結(jié)果判定:本品含鉛不得過(guò)8mg/kg、鎘不得過(guò)0.8mg/kg、砷不得過(guò)4mg/kg、汞不得過(guò)0.8mg/kg、銅不得過(guò)20mg/kg。
有機(jī)氯類(lèi)農(nóng)藥殘留量
儀器及用具:中藥粉碎機(jī)、分析天平、藥典篩、旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀、超聲波清洗機(jī)、氣相色譜儀
試劑及試液:石油醚(60~90℃)、丙酮、氯化鈉、二氯甲烷、無(wú)水硫酸鈉(其中石油醚(60~90℃)為色譜純,其他試劑均使用分析純,實(shí)驗(yàn)用水為純化水)
對(duì)照品:α-bhc,β-bhc,γ-bhc,δ-bhc、pp′-dde,pp′-ddd,op′-ddt,pp′-ddt、pcnb農(nóng)藥對(duì)照品
方法:照農(nóng)藥殘留量測(cè)定法(通則0512第一法)測(cè)定。
色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)以(14%-氰丙基-苯基)甲基聚硅氧烷或(5%苯基)甲基聚硅氧烷為固定液的彈性石英毛細(xì)管柱(30m×0.32mm×0.25μm),63ni-ecd電子捕獲檢測(cè)器。進(jìn)樣口溫度230℃,檢測(cè)器溫度300℃,不分流進(jìn)樣。程序升溫:初始100℃,每分鐘10℃升至220℃,每分鐘8℃升至250℃,保持10分鐘。理論板數(shù)按α-bhc峰計(jì)算應(yīng)不低于1×106,兩個(gè)相鄰色譜峰的分離度應(yīng)大于1.5。
對(duì)照品貯備溶液的制備精密稱取六六六(bhc)(α-bhc,β-bhc,γ-bhc,δ-bhc)、滴滴涕(ddt)(pp′-dde,pp′-ddd,op′-ddt,pp′-ddt)及五氯硝基苯(pcnb)農(nóng)藥對(duì)照品適量,用石油醚(60~90℃)分別制成每1ml約含4~5μg的溶液,即得。
混合對(duì)照品貯備溶液的制備精密量取上述各對(duì)照品貯備液0.5ml,置10ml量瓶中,用石油醚(60~90℃)稀釋至刻度,搖勻,即得。
混合對(duì)照品溶液的制備精密量取上述混合對(duì)照品貯備液,用石油醚(60~90℃)制成每1l分別含0μg、1μg、5μg、10μg、50μg、100μg、250μg的溶液,即得。
供試品溶液的制備取供試品,粉碎成粉末(過(guò)三號(hào)篩),取約2g,精密稱定,置100ml具塞錐形瓶中,加水20ml浸泡過(guò)夜,精密加丙酮40ml,稱定重量,超聲處理30分鐘,放冷,再稱定重量,用丙酮補(bǔ)足減失的重量,再加氯化鈉約6g,精密加二氯甲烷30ml,稱定重量,超聲15分鐘,再稱定重量,用二氯甲烷補(bǔ)足減失的重量,靜置(使分層),將有機(jī)相迅速移入裝有適量無(wú)水硫酸鈉的100ml具塞錐形瓶中,放置4小時(shí)。精密量取35ml,于40℃水浴上減壓濃縮至近干,加少量石油醚(60~90℃)如前反復(fù)操作至二氯甲烷及丙酮除凈,用石油醚(60~90℃)溶解并轉(zhuǎn)移至10ml具塞刻度離心管中,加石油醚(60~90℃)精密稀釋至5ml,小心加入硫酸1ml,振搖1分鐘,離心(3000轉(zhuǎn)/分鐘)10分鐘,精密量取上清液2ml,置具刻度的濃縮瓶中,連接旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器,40℃下(或用氮?dú)?將溶液濃縮至適量,精密稀釋至1ml,即得。
測(cè)定法分別精密吸取供試品溶液和與之相對(duì)應(yīng)濃度的混合對(duì)照品溶液各1μl,注入氣相色譜儀,按外標(biāo)法計(jì)算供試品中9種有機(jī)氯農(nóng)藥殘留量。
結(jié)果判定:本品含總六六六(α-bhc、β-bhc、γ-bhc、δ-bhc之和)不得過(guò)0.2mg/kg、總滴滴涕(pp′-dde、pp′-ddd、op′-ddt、pp′-ddt之和)不得過(guò)0.2mg/kg、五氯硝基苯不得過(guò)0.1mg/kg。
黃曲霉毒素b1
儀器及用具:中藥粉碎機(jī)、分析天平、藥典篩、均質(zhì)瓶、離心機(jī)、高效液相色譜儀(配置熒光檢測(cè)器及衍生化泵、衍生化保溫箱)
試劑及試液:甲醇、乙腈、碘、氯化鈉、免疫親合柱(其中乙腈為色譜純,其他試劑為分析純,實(shí)驗(yàn)用水為純化水)
對(duì)照品:黃曲霉毒素b1對(duì)照品
方法:照黃曲霉毒素測(cè)定法(通則2351)測(cè)定。
色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑;以甲醇-乙腈-水(40∶18∶42)為流動(dòng)相;采用柱后衍生法檢測(cè),碘衍生法:衍生溶液為0.05%的碘溶液(取碘0.5g,加入甲醇100ml使溶解,用水稀釋至1000ml制成),衍生化泵流速每分鐘0.3ml,衍生化溫度70℃以熒光檢測(cè)器檢測(cè),激發(fā)波長(zhǎng)λex=360nm(或365nm),發(fā)射波長(zhǎng)λex=450nm。兩個(gè)相鄰色譜峰的分離度應(yīng)大于1.5。
混合對(duì)照品溶液的制備精密量取黃曲霉毒素b1對(duì)照品溶液(標(biāo)示濃度為1.0μg/ml)0.5ml,置10ml量瓶中,用甲醇稀釋至刻度,作為貯備溶液。精密量取貯備溶液1ml,置25ml量瓶中,用甲醇稀釋至刻度,即得。
供試品溶液的制備取供試品粉末約15g(過(guò)二號(hào)篩),精密稱定,置于均質(zhì)瓶中,加入氯化鈉3g,精密加入70%甲醇溶液75ml,高速攪拌2分鐘(攪拌速度大于11000轉(zhuǎn)/分鐘),離心5分鐘(離心速度2500轉(zhuǎn)/分鐘),精密量取上清液15ml,置50ml量瓶中,用水稀釋至刻度,搖勻,用微孔濾膜(0.45μm)濾過(guò),量取續(xù)濾液20.0ml,通過(guò)免疫親合柱,流速每分鐘3ml,用水20ml洗脫,洗脫液棄去,使空氣進(jìn)入柱子,將水?dāng)D出柱子,再用適量甲醇洗脫,收集洗脫液,置2ml量瓶中,并用甲醇稀釋至刻度,搖勻,即得。
測(cè)定法分別精密吸取上述混合對(duì)照品溶液5μl、10μl、15μl、20μl、25μl,注入液相色譜儀,測(cè)定峰面積,以峰面積為縱坐標(biāo),進(jìn)樣量為橫坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。另精密吸取上述供試品溶液20~25μl,注入液相色譜儀,測(cè)定峰面積,從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出供試品中相當(dāng)于黃曲霉毒素b1的量,計(jì)算,即得。
結(jié)果判定:本品每1000g含黃曲霉毒素b1不得過(guò)5μg。
二氧化硫殘留量
儀器及用具:中藥粉碎機(jī)、分析天平、藥典篩、電熱套
試劑及試液:過(guò)氧化氫、甲基紅乙醇溶液、0.01mol/l氫氧化鈉滴定液、鹽酸溶液(6mol/l)(試劑均使用分析純,實(shí)驗(yàn)用水為純化水)
方法:照二氧化硫殘留量測(cè)定法(通則2331)測(cè)定。取藥材或飲片細(xì)粉約10g,精密稱定,置兩頸圓底燒瓶中,加水300~400ml。打開(kāi)回流冷凝管開(kāi)關(guān)給水,將冷凝管的上端e口處連接一橡膠導(dǎo)氣管置于100ml錐形瓶底部。錐形瓶?jī)?nèi)加入3%過(guò)氧化氫溶液50ml作為吸收液(橡膠導(dǎo)氣管的末端應(yīng)在吸收液液面以下)。使用前,在吸收液中加入3滴甲基紅乙醇溶液指示劑(2.5mg/ml),并用0.01mol/l氫氧化鈉滴定液滴定至黃色(即終點(diǎn);如果超過(guò)終點(diǎn),則應(yīng)舍棄該吸收溶液)。開(kāi)通氮?dú)?,使用流量?jì)調(diào)節(jié)氣體流量至約0.2l/min;打開(kāi)分液漏斗c的活塞,使鹽酸溶液(6mol/l)10ml流入蒸餾瓶,立即加熱兩頸燒瓶?jī)?nèi)的溶液至沸,并保持微沸;燒瓶?jī)?nèi)的水沸騰1.5小時(shí)后,停止加熱。吸收液放冷后,置于磁力攪拌器上不斷攪拌,用氫氧化鈉滴定液(0.01mol/l)滴定,至黃色持續(xù)時(shí)間20秒不褪,并將滴定的結(jié)果用空白實(shí)驗(yàn)校正。
結(jié)果判定:本品二氧化硫殘留量不得過(guò)150mg/kg。
浸出物
儀器及用具:中藥粉碎機(jī)、分析天平、藥典篩、恒溫水浴鍋、電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱
試劑及試液:乙醇(試劑使用分析純,實(shí)驗(yàn)用水為純化水)
方法:醇溶性浸出物,照醇溶性浸出物測(cè)定法(通則2201)項(xiàng)下的熱浸法測(cè)定,用乙醇作溶劑。
熱浸法取供試品約2~4g,精密稱定,置100~250ml的錐形瓶中,精密加乙醇50~100ml,密塞,稱定重量,靜置1小時(shí)后,連接回流冷凝管,加熱至沸騰,并保持微沸1小時(shí)。放冷后,取下錐形瓶,密塞,再稱定重量,用乙醇補(bǔ)足減失的重量,搖勻,用干燥濾器濾過(guò),精密量取濾液25ml,置已干燥至恒重的蒸發(fā)皿中,在水浴上蒸干后,于105℃干燥3小時(shí),置干燥器中冷卻30分鐘,迅速精密稱定重量。除另有規(guī)定外,以干燥品計(jì)算供試品中醇溶性浸出物的含量(%)。
結(jié)果判定:本品醇溶性浸出物不得少于7.0%。
含量測(cè)定
儀器及用具:中藥粉碎機(jī)、分析天平、藥典篩、超聲波清洗機(jī)、高效液相色譜儀
試劑及試液:甲醇、磷酸、三氯甲烷(其中甲醇為色譜純,其他試劑為分析純,實(shí)驗(yàn)用水為純化水)
對(duì)照品:野黃芩苷對(duì)照品
方法:照高效液相色譜法(通則0512)測(cè)定。
色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑;以甲醇-0.1%磷酸溶液(40∶60)為流動(dòng)相;檢測(cè)波長(zhǎng)為335nm。理論板數(shù)按野黃芩苷峰計(jì)算應(yīng)不低于5000。
對(duì)照品溶液的制備取野黃芩苷對(duì)照品適量,精密稱定,加甲醇制成每1ml含0.1mg的溶液,即得。
供試品溶液的制備取本品粗粉約0.5g,精密稱定,置索氏提取器中,加三氯甲烷適量,加熱回流至提取液無(wú)綠色,棄去三氯甲烷液,藥渣揮去溶劑,連同濾紙筒移入具塞錐形瓶中,精密加入甲醇50ml,密塞,稱定重量,放置1小時(shí),水浴中加熱回流1小時(shí),放冷,再稱定重量,用甲醇補(bǔ)足減失的重量,搖勻,濾過(guò)。精密量取續(xù)濾液25ml,回收溶劑至干,殘?jiān)眉状既芙獠⑥D(zhuǎn)移至10ml量瓶中,加甲醇至刻度,搖勻,濾過(guò),取續(xù)濾液,即得。
測(cè)定法分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各5~10μl,注入液相色譜儀,測(cè)定,即得。
結(jié)果判定:本品按干燥品計(jì)算,含野黃芩苷(c21h18o12)不得少于0.33%。
微生物限度
沙門(mén)菌取本品10g,以無(wú)菌接種至適宜體積(經(jīng)方法適用性實(shí)驗(yàn)確定)的胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基中,混勻,按非無(wú)菌產(chǎn)品微生物限度檢查:控制菌檢查法檢查。
結(jié)果判定:沙門(mén)菌不得檢出(10g)。
耐膽鹽革蘭陰性菌取本品,以無(wú)菌胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基為稀釋劑,制成1∶10的供試液,混勻,按非無(wú)菌產(chǎn)品微生物限度檢查:控制菌檢查法檢查。
結(jié)果判定:耐膽鹽革蘭陰性菌應(yīng)小于104cfu(1g)。