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      一種膠體金標(biāo)記的快速檢測條的制作方法

      文檔序號:5871867閱讀:200來源:國知局
      專利名稱:一種膠體金標(biāo)記的快速檢測條的制作方法
      技術(shù)領(lǐng)域
      本發(fā)明涉及生物檢測,特別涉及一種膠體金標(biāo)記的快速檢測試條。
      背景技術(shù)
      免疫膠體金技術(shù)(Immunogold labelling techique)是上世紀(jì)80年代繼熒光素、 放射性同位素和酶三大標(biāo)記技術(shù)后發(fā)展起來的固相標(biāo)記免疫測定技術(shù)。該技術(shù)主要利用了 金顆粒具有高電子密度的特性,當(dāng)這些標(biāo)記物在相應(yīng)的配體處大量聚集時,形成肉眼可見 的紅色或粉紅色斑點,因而用于定性或半定量的快速免疫檢測方法 中。該技術(shù)主要是將特 異性的抗原或抗體以條帶狀固定在硝酸纖維膜上,膠體金結(jié)合墊為吸附或涂抹有膠體金標(biāo) 記試劑在玻璃纖維膜,當(dāng)待測樣品加到試紙條一端的樣品墊上后,通過毛細(xì)作用向前移動 到膠體金結(jié)合墊上并溶解膠體金結(jié)合墊上的膠體金標(biāo)記試劑后相互反應(yīng),再移動至固定的 抗原或抗體區(qū)域時,待測物金標(biāo)試劑復(fù)合物與之發(fā)生特異性結(jié)合而被截留,膠體金標(biāo)記聚 集在檢測帶上,可通過目測得到直觀的顯色結(jié)果;而游離的標(biāo)記物則越過檢測帶,從而達(dá)到 與檢測物自動分離的目的。膠體金顆粒本身為紅色,不需要加入發(fā)色試劑,省卻了酶標(biāo)的致 癌性底物及終止液的步驟,對人體無毒害,金標(biāo)記物比酶標(biāo)記物更穩(wěn)定,試驗結(jié)果可以長期 保存而不腿色。免疫膠體金層析技術(shù)作為診斷試劑廣泛應(yīng)用到臨床后,由于它的快速簡便、 準(zhǔn)確,具有高度特異性和高敏感性,結(jié)果直觀可靠,而且試劑和樣品用量極少,無需儀器設(shè) 備,簡化了煩瑣的常規(guī)操作過程,同時也減小了因操作引起的誤差,是一種目前發(fā)展最快的 復(fù)合型免疫層析技術(shù)。被認(rèn)為是微生物和傳染病及寄生蟲病診斷技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)化最有前途的新 技術(shù)之一,并且可以進(jìn)一步研發(fā)定量或半定量檢測試紙條以及通用檢測試紙條,因此該技 術(shù)具有巨大的發(fā)展?jié)摿蛻?yīng)用前景。目前生產(chǎn)的膠體金檢測試紙條,是在條狀的一定長度的雙面膠帶一面上粘附著反 應(yīng)層,反應(yīng)層依次由點樣區(qū)、膠體金結(jié)合區(qū)、檢測區(qū)、檢測物回收區(qū)組成;點樣區(qū)為玻璃纖維 或硝酸纖維素膜;膠體金結(jié)合區(qū)鋪著一層固定有膠體金標(biāo)記物的玻璃纖維;檢測區(qū)為硝酸 纖維素膜,其上固定有檢測帶和質(zhì)控帶;檢測物回收區(qū)通常為吸水性能較強的纖維材料,如 粗纖維吸水膜,相連區(qū)域之間的膜材料有部分重疊,且膜材料從下層往上依次為檢測區(qū)、膠 體金結(jié)合區(qū)、點樣區(qū),有利于檢測物在膜材料之間泳動。制作時這些膜材料直接與雙面膠 帶粘合,然后將雙面膠的另一面貼在一個與膠帶相同規(guī)格的塑料板上即得到檢測試紙條, 在檢測過程中,當(dāng)液態(tài)待檢物滴加到樣品吸收膜上,在毛吸作用下,待檢物泳動到膠體金墊 上,溶解膠體金結(jié)合區(qū)域的膠體金標(biāo)記試劑并相互反應(yīng)生成復(fù)合物,在纖維膜的毛吸作用 下,復(fù)合物向檢測區(qū)泳動,這個過程中,承載膠體金標(biāo)試劑的玻璃纖維或其它膜材料與雙面 膠之間的粘連界面會對膠體金標(biāo)記試劑的泳動產(chǎn)生阻力,影響檢測速度,同時影響膠體金 的化學(xué)穩(wěn)定性,影響檢測的靈敏性,并導(dǎo)致試紙條的有效期縮短,對生產(chǎn)廠家造成經(jīng)濟損 失,而目前未見解決這一問題的文獻(xiàn)或生產(chǎn)報道。

      發(fā)明內(nèi)容
      本發(fā)明根據(jù)上述領(lǐng)域的缺陷,提供一種膠體金標(biāo)記的快速檢測試紙條。一種膠體金標(biāo)記的快速檢測試紙條,包括粘連在片狀載體材料上的反應(yīng)層,所述 反應(yīng)層一端到另一端依次為相鄰接的點樣區(qū)、膠體金結(jié)合區(qū)、檢測區(qū)、回收區(qū),所述點樣區(qū) 鋪有玻璃纖維,所述膠體金結(jié)合區(qū)鋪有膠體金結(jié)合墊,所述檢測區(qū)鋪有硝酸纖維素膜,其特 征在于所述反應(yīng)層還包括膠體金結(jié)合墊與片狀載體材料之間的一層無紡布。所述膠體金結(jié)合墊為固定有膠體金標(biāo)記試劑的一層無紡布。 所述膠體金結(jié)合墊表面到點樣區(qū)的玻璃纖維表面覆蓋有一層無紡布。所述膠體金結(jié)合墊是將膠體金均勻涂抹于無紡布上。所述無紡布密度25-30g/m2,吸水性60-70ml/m2,擴散性瞬間擴散,釋放性全 部釋放所述片狀載體材料為雙面膠。所述雙面膠的另一面粘附于硬質(zhì)防水載體板上。本發(fā)明提供一種膠體金標(biāo)記的檢測試紙條,通過在膠體金結(jié)合點墊與片狀載體材 料之間加一層無紡布材料。待測樣品從點樣區(qū)泳動到膠體金標(biāo)結(jié)合墊后與其上的膠體金標(biāo)記 試劑結(jié)合一起泳動到檢測區(qū),由于膠體金結(jié)合墊與載體材料沒有直接粘連,粘連界面不會對 膠體金標(biāo)記標(biāo)記復(fù)合物造成阻力,檢測物的泳動速度大大提高,有實驗數(shù)據(jù)證明,本發(fā)明的檢 測試劑條對一般陽性樣品(約100mIU/ml)在20秒以內(nèi)即可在檢測區(qū)讀出檢測結(jié)果,而其它 現(xiàn)有檢測試紙條需要60-80秒才會顯示檢測結(jié)果,即泳動速度提高了 3倍,見表1。本發(fā)明還提供一種采用無紡布制作膠體金結(jié)合墊的檢測試劑條,通過對比試驗, 發(fā)現(xiàn),本發(fā)明的檢測試劑條上的膠體金標(biāo)記試劑的穩(wěn)定性較好。見表2本發(fā)明進(jìn)一步優(yōu)選在膠體金結(jié)合區(qū)表面至點樣區(qū)的玻璃纖維表面在覆蓋一層無 紡布,由于點樣區(qū)的玻璃纖維主要提供檢測試劑泳動所需要的定向的毛吸作用力,而玻璃 纖維具有疏水性,對檢測樣品的穩(wěn)固能力較差,樣品容易浮在玻璃纖維表面,由于無紡布具 有良好的吸附能力和釋放液體的能力,在表層最先承接檢測樣品,先吸收了檢測樣品中的 部分水份,樣品中的蛋白質(zhì)等檢測靶標(biāo)物質(zhì)被同時滲透到玻璃纖維上,無紡布直接與硝酸 纖維膜接觸,這樣玻璃纖維和無紡布上的液體通過層析作用很快擴散到硝酸纖維膜上進(jìn)行 反應(yīng),不但可提高檢測靈敏性,還可以提高反應(yīng)速度。本發(fā)明中制備檢測試紙條的膠體金結(jié)合墊,采用浸透法制的,即將膠體金_抗原/ 抗體復(fù)合物浸透無紡布并涂抹均勻,干燥而得,如此操作可獲得性質(zhì)穩(wěn)定,充分吸附結(jié)合膠 體金抗體/抗原復(fù)合物的膠體金結(jié)合墊。本發(fā)明的檢測試劑條的其它部分為常規(guī)結(jié)構(gòu),采用常規(guī)材料,如檢測區(qū)采用硝酸 纖維素膜,其上設(shè)置檢測帶和質(zhì)控帶。而本發(fā)明優(yōu)選采用密度為25-30g/m2,吸水性為60-70ml/m2,并且要保證液體既能 在無紡布上快速擴散開,又能保證液體通過層析作用在5-10秒鐘內(nèi)全部釋放。通過試驗發(fā) 現(xiàn),無紡布的密度直接影響產(chǎn)品的性能,太低,無紡布的吸水量太少,達(dá)不到產(chǎn)品的檢測濃 度,太高,就會導(dǎo)致液體不易在無紡布布上擴散和釋放。因此我們把無紡布的技術(shù)指標(biāo)及質(zhì) 量要求進(jìn)行了規(guī)定,作為無紡布的內(nèi)控標(biāo)準(zhǔn)


      圖1檢測試紙條層結(jié)構(gòu)示意圖1-點樣區(qū)2-膠體金結(jié)合墊3-檢測區(qū)4-回收區(qū) 5_片狀載體材料Ia-玻璃纖維Ib-無紡布2a_膠體金結(jié)合墊2b_無紡布,3a_硝酸纖維 素膜,4a_吸水纖維
      具體實施例方式本發(fā)明提供一種 膠體金標(biāo)記的快速檢測試紙條,包括粘連在片狀載體材料5上的 反應(yīng)層,所述反應(yīng)層一端到另一端依次為相鄰接的點樣區(qū)1、膠體金結(jié)合區(qū)2、檢測區(qū)3、回 收區(qū)4,所述點樣區(qū)鋪有玻璃纖維la,所述膠體金結(jié)合區(qū)2鋪有膠體金結(jié)合墊2a,所述檢測 區(qū)3鋪有硝酸纖維素膜3a,其特征在于所述反應(yīng)層還包括膠體金結(jié)合墊2a與片狀載體材 料5之間的一層無紡布lb。當(dāng)待測樣品從點樣區(qū)1泳動到膠體金標(biāo)結(jié)合墊2a后與其上的 膠體金標(biāo)記試劑結(jié)合一起泳動到檢測區(qū)3,由于膠體金結(jié)合墊2a不與載體材料5直接粘連, 粘連界面不會對膠體金標(biāo)記試劑結(jié)合復(fù)合物造成阻力,檢測物的泳動速度大大提高。本發(fā)明還提供一種采用無紡布制作膠體金結(jié)合墊2a的檢測試劑條,通過對比試 驗,發(fā)現(xiàn),本發(fā)明的檢測試劑條上的膠體金標(biāo)記試劑的穩(wěn)定性較好。本發(fā)明進(jìn)一步優(yōu)選在所述膠體金結(jié)合墊2a表面至點樣區(qū)1的玻璃纖維Ia表面覆 蓋有一層無紡布2b,由于無紡布具有良好的吸附能力,在點樣區(qū)表層最先承接檢測樣品,先 吸收了檢測樣品中的部分水份,樣品中的蛋白質(zhì)等檢測靶標(biāo)物質(zhì)被同時滲透到玻璃纖維Ia 上,可提高檢測靈敏性。本發(fā)明進(jìn)一步提供一種優(yōu)選方案,即所述膠體金結(jié)合墊2a即將膠體金-抗原/抗 體復(fù)合物浸透無紡布并涂抹均勻,干燥后剪裁制得。本發(fā)明采用的無紡布密度25-30g/m2,,吸水性60-70ml/m2,擴散性瞬間擴散, 釋放性全部釋放本發(fā)明中采用粘附反應(yīng)層的片狀載體材料5為雙面膠。具有方便操作,低成本的 特點,雙面膠的另一面還可以粘附在硬質(zhì)載體板上,制作成更易于保存的產(chǎn)品。實驗例1.檢測速度對比同時滴加等量的檢測液,計時,記下出現(xiàn)檢測帶所需的時間。結(jié)果見表1表1不同廠家HCG試紙條100mIU/ml檢測速度對比試驗 實驗例2.穩(wěn)定性比較試驗
      本發(fā)明產(chǎn)品出廠期36個月后與其它現(xiàn)有產(chǎn)品進(jìn)行檢查穩(wěn)定性比較,結(jié)果見表2表2不同廠家HCG試紙條穩(wěn)定性對比試驗
      權(quán)利要求
      一種膠體金標(biāo)記的快速檢測試紙條,包括粘連在片狀載體材料上的反應(yīng)層,所述反應(yīng)層一端到另一端依次為相鄰接的點樣區(qū)、膠體金結(jié)合區(qū)、檢測區(qū)、回收區(qū),所述點樣區(qū)鋪有玻璃纖維,所述膠體金結(jié)合區(qū)鋪有膠體金結(jié)合墊,所述檢測區(qū)鋪有硝酸纖維素膜,其特征在于所述反應(yīng)層還包括膠體金結(jié)合墊與片狀載體材料之間的一層無紡布。
      2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的膠體金標(biāo)記的快速檢測試紙條,其特征在于所述膠體金結(jié) 合墊為固定有膠體金標(biāo)記試劑的一層無紡布。
      3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的膠體金標(biāo)記的快速檢測試紙條,其特征在于所述膠體金結(jié) 合墊表面至點樣區(qū)的玻璃纖維表面覆蓋有一層無紡布。
      4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的膠體金標(biāo)記的快速檢測試紙條,其特征在于所述膠體金結(jié) 合墊是將膠體金均勻涂抹于無紡布上后干燥而得。
      5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的膠體金標(biāo)記的快速檢測試紙條,其特征在于所述無紡布密 度25-30g/m2,吸水性60-70ml/m2,擴散性瞬間擴散,釋放性全部釋放。
      6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的膠體金標(biāo)記的快速檢測試紙條,其特征在于所述片狀載體 材料雙面膠。
      7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的膠體金標(biāo)記的快速檢測試紙條,其特征在于所述雙面膠的 另一面粘附在硬質(zhì)防水載體板上。
      全文摘要
      本發(fā)明“一種膠體金標(biāo)記的快速檢測試紙條”,屬于生物檢測領(lǐng)域。包括粘連在片狀載體材料上的反應(yīng)層,所述反應(yīng)層一端到另一端依次為相鄰接的點樣區(qū)、膠體金結(jié)合區(qū)、檢測區(qū)、回收區(qū),所述點樣區(qū)鋪有玻璃纖維,所述膠體金結(jié)合區(qū)鋪有膠體金結(jié)合墊,所述檢測區(qū)鋪有硝酸纖維素膜,其特征在于所述反應(yīng)層還包括膠體金結(jié)合墊與片狀載體材料之間的一層無紡布。本發(fā)明進(jìn)一步采用無紡布作為膠體金結(jié)合墊的材料,實驗數(shù)據(jù)證明,本發(fā)明的快速檢測試紙條在檢測速度,試劑穩(wěn)定性方面都顯著優(yōu)于現(xiàn)有其他膠體金標(biāo)記檢測試紙。
      文檔編號G01N33/558GK101871938SQ201010175320
      公開日2010年10月27日 申請日期2010年5月12日 優(yōu)先權(quán)日2010年5月12日
      發(fā)明者祝明 申請人:藍(lán)十字生物藥業(yè)(北京)有限公司
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