專(zhuān)利名稱：快速目視比色檢測(cè)三聚氰胺的試劑盒及檢測(cè)方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種基于未修飾納米金可視化檢測(cè)三聚氰胺的方法，特別涉及快速目 視比色檢測(cè)三聚氰胺的試劑盒及檢測(cè)方法。
背景技術(shù)：
自從2008年由三聚氰胺引發(fā)的一系列事件后，暴露了奶制品檢測(cè)技術(shù)的致命缺 陷，導(dǎo)致了我國(guó)奶制品行業(yè)的誠(chéng)信危機(jī)，使我國(guó)的奶制品安全檢測(cè)問(wèn)題面臨著巨大的挑戰(zhàn)。三聚氰胺是一種三嗪類(lèi)含氮雜環(huán)有機(jī)化工原料，常用于制造三聚氰胺甲醛樹(shù)脂， 是建筑業(yè)中常用的防火材料，廣泛應(yīng)用于塑料、裝飾、涂料和造紙等行業(yè)。國(guó)際化學(xué)品安全 規(guī)劃署和歐洲聯(lián)盟委員會(huì)合編的《國(guó)際化學(xué)品安全手冊(cè)》第三卷表明長(zhǎng)期或反復(fù)大量攝入 三聚氰胺可能對(duì)腎與膀胱產(chǎn)生影響，導(dǎo)致產(chǎn)生結(jié)石。由此可見(jiàn)，三聚氰胺是一種禁止用于食品及動(dòng)物飼料的化學(xué)物質(zhì)，被國(guó)家衛(wèi)生部 列入可能違法添加的非食用物質(zhì)的“黑名單”。但仍有不良商家非法添加到牛奶以及其它蛋 白制品中，就因其含氮量較高(66%)，加入食品中可產(chǎn)生表觀蛋白質(zhì)含量虛高的假象。因 此，設(shè)計(jì)一種快速、簡(jiǎn)便的檢測(cè)方法能現(xiàn)場(chǎng)實(shí)時(shí)檢測(cè)奶制品中三聚氰胺，遏制人為添加，顯 得尤為重要。目前國(guó)內(nèi)外用于原料奶及奶制品中三聚氰胺檢測(cè)的常用方法有美國(guó)FDA方法 (GC-MS和HPLC)以及國(guó)標(biāo)法(GB/T22388-2008)中的高效液相色譜法(HPLC)、液相色譜-質(zhì) 譜/質(zhì)譜法(HPLC-MS/MQ，氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法(GC-MQ，這些方法雖然能夠?qū)崿F(xiàn)三聚氰 胺的精確檢測(cè)，但其需要精密儀器、復(fù)雜操作、檢測(cè)費(fèi)用高；此外還包括表面增強(qiáng)拉曼光譜 法(SERS)、酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)等雖然相對(duì)快速簡(jiǎn)便但其檢測(cè)時(shí)間長(zhǎng)，費(fèi)用較高。而 且，以上方法都需要專(zhuān)業(yè)技術(shù)人員進(jìn)行操作并且前處理復(fù)雜。有的檢測(cè)方法在大部分食品 生產(chǎn)企業(yè)和普通消費(fèi)者中難以普及。因此提高奶制品檢測(cè)技術(shù)的可行性、靈敏度和特異性 成為研究的重點(diǎn)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種高效、可靠、低成本的快速目視比 色檢測(cè)三聚氰胺的試劑盒。本發(fā)明的第二個(gè)目的是提供一種用快速目視比色檢測(cè)三聚氰胺的試劑盒檢測(cè)三 聚氰胺的方法?？焖倌恳暠壬珯z測(cè)三聚氰胺的試劑盒，所述試劑盒包括A、納米金溶液粒徑為5 IOnm ；B、100 300g/L的三氯乙酸水溶液；C、3MNa0H 水溶液；D、離心管2mL 和 5mL ；E、過(guò)濾器0· 22μπι ；
F、塑料吸管；G、三聚氰胺標(biāo)準(zhǔn)比色卡；所述納米金溶液是用下述方法制成量取IOOmL質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0. 01%的氯金酸水溶 液于容器中，加入1 4mL質(zhì)量分?jǐn)?shù)為1 %的檸檬酸三鈉水溶液，于室溫下磁力攪拌均勻后， 加入2 4mL硼氫化鈉-檸檬酸三鈉混合水溶液，所述混合水溶液中硼氫化鈉的質(zhì)量分?jǐn)?shù) 為0. 075 %，所述檸檬酸三鈉的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為1 %，于室溫下，在轉(zhuǎn)速為200 300轉(zhuǎn)/分鐘的 條件下攪拌20-40min，得到桔紅色的納米金溶液，加入ImL質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0. 02% NaN3水溶液， 再用0. 22 μ m過(guò)濾器過(guò)濾后4°C避光保存；三聚氰胺標(biāo)準(zhǔn)比色卡是用下述方法制成(1)配制濃度分別為 240mg/L、120mg/L、60mg/L、30mg/L、15mg/L、7. 5mg/L,3mg/L, lmg/L和Omg/L的三聚氰胺-牛奶溶液(2)取步驟(1)的各個(gè)濃度的三聚氰胺-牛奶溶液2. OmL分別放入5mL離心管 中，每個(gè)離心管中加入0. 1 0.4mL 100-300g/L的三氯乙酸水溶液，用手劇烈振蕩混勻，靜 置2 3min，先用濾紙過(guò)濾到另外的離心管中，用3M NaOH水溶液調(diào)節(jié)pH值至7 8，再用 0. 22 μ m過(guò)濾器過(guò)濾，得提取液；(3)將步驟⑵獲得的提取液各取0. 15mL分別加入到0.3mL納米金溶液中，混合 均勻，室溫顯色反應(yīng)Imin后用數(shù)碼相機(jī)記錄顯色結(jié)果，采集圖片后，用具有顏色梯度的圖 片組成標(biāo)準(zhǔn)色塊，將標(biāo)準(zhǔn)色塊按照三聚氰胺濃度高低進(jìn)行排列并在其下方標(biāo)注相應(yīng)的三聚 氰胺濃度，制作成卡片。快速檢測(cè)三聚氰胺的方法，包括如下步驟(1)準(zhǔn)備權(quán)利要求1所述試劑盒；(2)對(duì)被測(cè)液態(tài)奶樣品或被測(cè)奶粉樣品進(jìn)行前處理所述液態(tài)奶樣品前處理為取2. OmL液態(tài)奶至5mL離心管中，加入0. 1 0. 4mL 100 300g/L的三氯乙酸水溶液，用手劇烈振蕩混勻，靜置2 3min，先用濾紙過(guò)濾到另一 離心管中，用3M NaOH水溶液調(diào)節(jié)pH值至7 8，再用0. 22 μ m過(guò)濾器過(guò)濾，得提取液；所述奶粉樣品前處理為稱取0. 4g奶粉至5mL離心管管中，先加入2. OmL水，溶解 后加入0. 2 0. 6mL 100-300g/L的三氯乙酸水溶液，用手劇烈振蕩混勻，靜置2 ^iin先 用濾紙過(guò)濾到另一離心管中，用3M NaOH水溶液調(diào)節(jié)pH值至7 8，再用0. 22 μ m過(guò)濾器過(guò) 濾，得提取液；(3)樣品檢測(cè)取經(jīng)樣品前處理后的牛奶提取液或奶粉提取液0. 15mL加入到0. 3mL納米金溶液 中，在室溫下反應(yīng)lmin，根據(jù)樣品呈現(xiàn)的不同顏色，與三聚氰胺標(biāo)準(zhǔn)比色卡比對(duì)后確定是否 含有三聚氰胺或三聚氰胺的含量。本發(fā)明的有益效果在于本發(fā)明的試劑盒制備方法簡(jiǎn)單、成本低廉，制備的納米金穩(wěn)定性好，靈敏度高，無(wú) 需任何標(biāo)記可即可用于三聚氰胺檢測(cè)；對(duì)樣品基質(zhì)效應(yīng)抗干擾能力強(qiáng)，簡(jiǎn)化后的前處理不 僅提高了效率，縮短了檢測(cè)周期，而且不需要離心機(jī)及專(zhuān)業(yè)的技術(shù)人員，易于實(shí)施；三聚氰 胺標(biāo)準(zhǔn)比色卡可以不憑借光譜儀等任何儀器，直接通過(guò)肉眼比色即可判斷是否含有三聚氰 胺及其含量范圍，因此檢測(cè)成本低，攜帶方便；本發(fā)明所提供的三聚氰胺快速檢測(cè)試劑盒中的主要試劑均以工作液形式提供，獨(dú)立包裝，方便使用，易于保存非常適合于現(xiàn)場(chǎng)應(yīng)用。本 發(fā)明反應(yīng)迅速，在室溫條件下從樣品預(yù)處理到檢出結(jié)果只需12分鐘，實(shí)現(xiàn)對(duì)原料奶中三聚 氰胺進(jìn)行定性和半定量檢測(cè)和快速篩查的目的。利用本發(fā)明的試劑盒進(jìn)行檢測(cè)，具備簡(jiǎn)便、 快速、靈敏、準(zhǔn)確、低成本等優(yōu)點(diǎn)，符合現(xiàn)代檢測(cè)技術(shù)的要求。對(duì)于維護(hù)奶制品安全，保護(hù)人 民的身體健康和消費(fèi)者的合法權(quán)益，促進(jìn)奶制品行業(yè)的健康快速發(fā)展均具有重要意義。


圖1為本發(fā)明試劑盒中納米金粒子的透射電鏡圖。圖2為納米金溶液加入不同濃度三聚氰胺后的顏色變化圖。圖3為三聚氰胺標(biāo)準(zhǔn)比色卡，色階所對(duì)應(yīng)的三聚氰胺濃度從左到右依次為Omg/L、 lmg/L、;3mg/L、15mg/L、30mg/L、60mg/L、120mg/L，均為換算后的實(shí)際樣品濃度。
具體實(shí)施例方式本發(fā)明的檢測(cè)原理在于由于三聚氰胺含有多個(gè)與納米金粒子結(jié)合的位點(diǎn)，能夠作為一種分子交聯(lián)劑，通 過(guò)氫鍵識(shí)別作用快速誘導(dǎo)未修飾的納米金粒子聚集，引起納米金光學(xué)性質(zhì)改變，表現(xiàn)為隨 著三聚氰胺濃度增大納米金溶液顏色由酒紅色向藍(lán)紫色變化，從而顯示受檢樣品中三聚氰 胺濃度，根據(jù)這一原理發(fā)明了簡(jiǎn)單、敏感的可視化檢測(cè)牛奶中三聚氰胺的方法并研發(fā)了相 應(yīng)的試劑盒。本發(fā)明技術(shù)方案本發(fā)明采用硼氫化鈉法制備納米金溶液，經(jīng)透射電鏡鑒定其中 納米金粒子粒徑為5 lOnm，條件優(yōu)化后建立了一種快速目視比色檢測(cè)三聚氰胺的方法并 研發(fā)出試劑盒。在實(shí)樣檢測(cè)時(shí)，對(duì)受檢樣品進(jìn)行簡(jiǎn)單前處理后加入納米金溶液中，顯色反應(yīng) Imin后即可與制備的三聚氰胺標(biāo)準(zhǔn)比色卡目視比對(duì)，得出檢測(cè)結(jié)果。以下的實(shí)施例便于更好的使本領(lǐng)域的技術(shù)人員理解本發(fā)明，但不以任何方式限制 本發(fā)明。實(shí)施例1快速目視比色檢測(cè)三聚氰胺的試劑盒，是用下述方法制成一、納米金溶液的制備和鑒定(1)制備納米金溶液使用的所有玻璃器皿都用新鮮配制的硌酸洗液浸泡24h后， 再用蒸餾水徹底沖洗干凈，烘干備用；(2)量取IOOmL質(zhì)量分?jǐn)?shù)0.01%氯金酸水溶液于清洗干凈的容器中，加入2mL質(zhì) 量分?jǐn)?shù)為1 %的檸檬酸三鈉水溶液，于室溫下磁力攪拌均勻后，快速加入3mL硼氫化鈉-檸 檬酸三鈉混合水溶液，所述混合水溶液中硼氫化鈉的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0. 075%，所述檸檬酸三鈉 的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為1 %，于室溫下在轉(zhuǎn)速為300轉(zhuǎn)/分鐘的條件下攪拌30min后得到桔紅色的納 米金溶液；(3)在步驟(2)制備的納米金溶液中加入ImL質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0. 02% NaN3水溶液，再 用0. 22 μ m濾器過(guò)濾后4°C避光保存；(4)將制備得到的納米金溶液用透射電鏡測(cè)定，平均粒徑約為5nm。(見(jiàn)圖1) 二、 三聚氰胺標(biāo)準(zhǔn)比色卡的制作
(1)配制濃度分別為 240mg/L、120mg/L、60mg/L、30mg/L、15mg/L、7. 5mg/L,3mg/L, lmg/L和Omg/L的三聚氰胺-牛奶溶液(2)取步驟(1)的各個(gè)濃度的三聚氰胺-牛奶溶液2. OmL分別放入5mL離心管中， 每個(gè)離心管中加入0. 2mL 200g/L的三氯乙酸水溶液，用手劇烈振蕩混勻，靜置3min，先用 濾紙過(guò)濾到另外的離心管中，用3M NaOH水溶液調(diào)節(jié)pH值至8，再用0. 22 μ m過(guò)濾器過(guò)濾， 得提取液；(3)將步驟⑵獲得的提取液各取0. 15mL分別加入到0.3mL納米金溶液中，混合 均勻，室溫顯色反應(yīng)1分鐘后用數(shù)碼相機(jī)記錄顯色結(jié)果，(見(jiàn)圖2~)采集圖片后，選用具有顏 色梯度的圖片組成標(biāo)準(zhǔn)色塊，將標(biāo)準(zhǔn)色塊按照三聚氰胺濃度高低進(jìn)行排列并在其下方標(biāo)注 相應(yīng)的三聚氰胺濃度制作成卡片。(見(jiàn)圖3)。三、組裝快速目視比色檢測(cè)三聚氰胺的試劑盒試劑盒包括A、納米金溶液平均粒徑約為5nm ；B、100 300g/L的三氯乙酸水溶液；C、3MNaOH 水溶液；D、離心管2mL 禾口 5mL ；E、過(guò)濾器0· 22μπι ；F、塑料吸管；G、三聚氰胺標(biāo)準(zhǔn)比色卡。實(shí)施例2快速目視比色檢測(cè)三聚氰胺的試劑盒，是用下述方法制成一、納米金溶液的制備和鑒定(1)制備納米金溶液使用的所有玻璃器皿都用新鮮配制的硌酸洗液浸泡24h后， 再用蒸餾水徹底沖洗干凈，烘干備用；(2)量取IOOmL質(zhì)量分?jǐn)?shù)0.01%氯金酸水溶液于清洗干凈的容器中，加入ImL質(zhì) 量分?jǐn)?shù)為1 %的檸檬酸三鈉水溶液，于室溫下磁力攪拌均勻后，快速加入2mL硼氫化鈉-檸 檬酸三鈉混合水溶液，所述混合水溶液中硼氫化鈉的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0. 075%，所述檸檬酸三鈉 的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為1 %，于室溫下在轉(zhuǎn)速為200轉(zhuǎn)/分鐘的條件下攪拌20min后得到桔紅色的納 米金溶液；(3)在步驟(2)制備的納米金溶液中加入ImL質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0. 02% NaN3水溶液，再 用0. 22 μ m濾器過(guò)濾后4°C避光保存；(4)將制備得到的納米金溶液用透射電鏡測(cè)定，平均粒徑約為6nm。二、三聚氰胺標(biāo)準(zhǔn)比色卡的制作(1)配制濃度分別為 240mg/L、120mg/L、60mg/L、30mg/L、15mg/L、7. 5mg/L,3mg/L, lmg/L和Omg/L的三聚氰胺-牛奶溶液(2)取步驟(1)的各個(gè)濃度的三聚氰胺-牛奶溶液2. OmL分別放入5mL離心管中， 每個(gè)離心管中加入0. ImL 300g/L的三氯乙酸水溶液，用手劇烈振蕩混勻，靜置2min，先用 濾紙過(guò)濾到另外的離心管中，用3M NaOH水溶液調(diào)節(jié)pH值至7，再用0. 22 μ m過(guò)濾器過(guò)濾， 得提取液；
(3)將步驟⑵獲得的提取液各取0. 15mL分別加入到0.3mL納米金溶液中，混合 均勻，室溫顯色反應(yīng)Imin后用數(shù)碼相機(jī)記錄顯色結(jié)果，采集圖片后，選用具有顏色梯度的 圖片組成標(biāo)準(zhǔn)色塊，將標(biāo)準(zhǔn)色塊按照三聚氰胺濃度高低進(jìn)行排列并在其下方標(biāo)注相應(yīng)的三 聚氰胺濃度，制作成卡片。三、組裝快速目視比色檢測(cè)三聚氰胺的試劑盒試劑盒包括A、納米金溶液平均粒徑約為5nm ；B、100 300g/L的三氯乙酸水溶液；C、3M NaOH 水溶液；D、離心管2mL 和 5mL ；E、過(guò)濾器0· 22μπι ；F、塑料吸管；G、三聚氰胺標(biāo)準(zhǔn)比色卡。實(shí)施例3快速目視比色檢測(cè)三聚氰胺的試劑盒，是用下述方法制成一、納米金溶液的制備和鑒定(1)制備納米金溶液使用的所有玻璃器皿都用新鮮配制的硌酸洗液浸泡24h后， 再用蒸餾水徹底沖洗干凈，烘干備用；(2)量取IOOmL質(zhì)量分?jǐn)?shù)0.01%氯金酸水溶液于清洗干凈的容器中，加入4mL質(zhì) 量分?jǐn)?shù)為1 %的檸檬酸三鈉水溶液，于室溫下磁力攪拌均勻后，快速加入4mL硼氫化鈉-檸 檬酸三鈉混合水溶液，所述混合水溶液中硼氫化鈉的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0. 075%，所述檸檬酸三鈉 的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為1 %，于室溫下在轉(zhuǎn)速為300轉(zhuǎn)/分鐘的條件下攪拌40min后得到桔紅色的納 米金溶液；(3)在步驟(2)制備的納米金溶液中加入ImL質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0. 02% NaN3水溶液，再 用0. 22 μ m濾器過(guò)濾后4°C避光保存；(4)將制備得到的納米金溶液用透射電鏡測(cè)定，平均粒徑約為8nm。二、三聚氰胺標(biāo)準(zhǔn)比色卡的制作(1)配制濃度分別為 240mg/L、120mg/L、60mg/L、30mg/L、15mg/L、7. 5mg/L,3mg/L, lmg/L和Omg/L的三聚氰胺-牛奶溶液(2)取步驟(1)的各個(gè)濃度的三聚氰胺-牛奶溶液2. OmL分別放入5mL離心管中， 每個(gè)離心管中加入0. 4mL 100g/L的三氯乙酸水溶液，用手劇烈振蕩混勻，靜置3min，先用 濾紙過(guò)濾到另外的離心管中，用3M NaOH水溶液調(diào)節(jié)pH值至8，再用0. 22 μ m過(guò)濾器過(guò)濾， 得提取液；(3)將步驟⑵獲得的提取液各取0. 15mL分別加入到0.3mL納米金溶液中，混合 均勻，室溫顯色反應(yīng)Imin后用數(shù)碼相機(jī)記錄顯色結(jié)果，采集圖片后，選用具有顏色梯度的 圖片組成標(biāo)準(zhǔn)色塊，將標(biāo)準(zhǔn)色塊按照三聚氰胺濃度高低進(jìn)行排列并在其下方標(biāo)注相應(yīng)的三 聚氰胺濃度，制作成卡片。三、組裝快速目視比色檢測(cè)三聚氰胺的試劑盒試劑盒包括
A、納米金溶液平均粒徑約為IOnm ；B、100 300g/L的三氯乙酸水溶液；C、3M NaOH 水溶液；D、離心管2mL 禾口 5mL ；E、過(guò)濾器0· 22μπι ；F、塑料吸管；G、三聚氰胺標(biāo)準(zhǔn)比色卡。實(shí)施例4快速檢測(cè)三聚氰胺的方法，包括如下步驟(1)準(zhǔn)備實(shí)施例1的快速目視比色檢測(cè)三聚氰胺的試劑盒；(2)對(duì)被測(cè)液態(tài)奶進(jìn)行樣品前處理取2. OmL被測(cè)液態(tài)奶(含三聚氰胺濃度為10mg/L)至5mL離心管中，加入0. 2mL 200g/L的三氯乙酸水溶液，用手劇烈振蕩混勻，靜置3min，先用濾紙過(guò)濾到另一離心管中， 用3M NaOH水溶液調(diào)節(jié)pH值至8，再用0. 22 μ m過(guò)濾器過(guò)濾，得提取液；(3)樣品檢測(cè)取經(jīng)樣品前處理后的牛奶提取液0. 15mL加入到0. 3mL膠體金溶液中，在室溫下反 應(yīng)lmin，根據(jù)樣品呈現(xiàn)的不同顏色，與三聚氰胺標(biāo)準(zhǔn)比色卡比對(duì)后確定三聚氰胺的含量為 3 15mg/L。實(shí)施例5快速檢測(cè)三聚氰胺的方法，包括如下步驟(1)準(zhǔn)備實(shí)施例2的快速目視比色檢測(cè)三聚氰胺的試劑盒；(2)對(duì)被測(cè)液態(tài)奶進(jìn)行樣品前處理，取2. OmL被測(cè)液態(tài)奶(某企業(yè)生產(chǎn)的)至5mL離心管中，加入0. ImL 300g/L的三 氯乙酸水溶液，用手劇烈振蕩混勻，靜置aiiin，先用濾紙過(guò)濾到另一離心管中，用3M NaOH 水溶液調(diào)節(jié)PH值至7，再用0. 22 μ m過(guò)濾器過(guò)濾，得提取液；(3)樣品檢測(cè)取經(jīng)樣品前處理后的牛奶提取液0. 15mL加入到0. 3mL膠體金溶液中，在室溫下反 應(yīng)lmin，根據(jù)樣品呈現(xiàn)的不同顏色，與三聚氰胺標(biāo)準(zhǔn)比色卡比對(duì)結(jié)果為陰性。實(shí)施例6快速檢測(cè)三聚氰胺的方法，包括如下步驟(1)準(zhǔn)備實(shí)施例3的快速目視比色檢測(cè)三聚氰胺的試劑盒；(2)對(duì)被測(cè)液態(tài)奶進(jìn)行樣品前處理取2. OmL被測(cè)液態(tài)奶(含三聚氰胺濃度為50mg/L)至5mL離心管中，加入0. 4mL 100g/L的三氯乙酸水溶液，用手劇烈振蕩混勻，靜置2min，先用濾紙過(guò)濾到另一離心管中， 用3M NaOH水溶液調(diào)節(jié)pH值至8，再用0. 22 μ m過(guò)濾器過(guò)濾，得提取液；(3)樣品檢測(cè):取經(jīng)樣品前處理后的牛奶提取液0. 15mL加入到0. 3mL膠體金溶液中，在室溫下反 應(yīng)lmin，根據(jù)樣品呈現(xiàn)的不同顏色，與三聚氰胺標(biāo)準(zhǔn)比色卡比對(duì)后確定三聚氰胺的含量為 30 60mg/L。
實(shí)施例7快速檢測(cè)三聚氰胺的方法，包括如下步驟(1)同實(shí)施例4(2)對(duì)被測(cè)奶粉進(jìn)行樣品前處理；稱取0. 4g被測(cè)奶粉(含三聚氰胺濃度為10mg/kg)至5mL離心管中，先加入2. OmL 水，溶解后加入0. 4mL 200g/L的三氯乙酸水溶液，用手劇烈振蕩混勻，靜置!Min先用濾紙 過(guò)濾到另一離心管中，用3M NaOH水溶液調(diào)節(jié)pH值至8，再用0. 22 μ m過(guò)濾器過(guò)濾，得提取 液；(3)樣品檢測(cè)取經(jīng)樣品前處理后的奶粉提取液0. 15mL加入到0. 3mL膠體金溶液中，在室溫下反 應(yīng)lmin，根據(jù)樣品呈現(xiàn)的不同顏色，與三聚氰胺標(biāo)準(zhǔn)比色卡比對(duì)后確定三聚氰胺的含量為 3 15mg/L。實(shí)施例8快速檢測(cè)三聚氰胺的方法，包括如下步驟(1)同實(shí)施例5對(duì)被測(cè)奶粉進(jìn)行樣品前處理；(2)稱取0. 4g被測(cè)奶粉(含三聚氰胺濃度為50mg/kg)至5mL離心管中，先加入 2. OmL水，溶解后加入0. 2mL 300g/L的三氯乙酸水溶液，用手劇烈振蕩混勻，靜置;3min先用 濾紙過(guò)濾到另一離心管中，用3M NaOH水溶液調(diào)節(jié)pH值至8，再用0. 22 μ m過(guò)濾器過(guò)濾，得 提取液；(3)樣品檢測(cè)取經(jīng)樣品前處理后的奶粉提取液0. 15mL加入到0. 3mL膠體金溶液中，在室溫下反 應(yīng)lmin，根據(jù)樣品呈現(xiàn)的不同顏色，與三聚氰胺標(biāo)準(zhǔn)比色卡比對(duì)后確定三聚氰胺的含量為 30 60mg/L。實(shí)施例9快速檢測(cè)三聚氰胺的方法，包括如下步驟(1)同實(shí)施例6(2)對(duì)被測(cè)奶粉進(jìn)行樣品前處理；稱取0.4g被測(cè)奶粉(某品牌奶粉)至5mL離心管中，先加入2.0mL水，溶解后加 入0.6mL 100g/L的三氯乙酸水溶液，用手劇烈振蕩混勻，靜置aiiin先用濾紙過(guò)濾到另一離 心管中，用3M NaOH水溶液調(diào)節(jié)pH值至7，再用0. 22 μ m過(guò)濾器過(guò)濾，得提取液；(3)樣品檢測(cè)取經(jīng)樣品前處理后的奶粉提取液0. 15mL加入到0. 3mL膠體金溶液中，在室溫下反 應(yīng)lmin，根據(jù)樣品呈現(xiàn)的不同顏色，與三聚氰胺標(biāo)準(zhǔn)比色卡比對(duì)結(jié)果為陰性。
權(quán)利要求
1.快速目視比色檢測(cè)三聚氰胺的試劑盒，其特征是所述試劑盒包括A、納米金溶液粒徑為5 IOnm ；BUOO 300g/L的三氯乙酸水溶液；C、3MNaOH水溶液；D、離心管:2mL禾口5mL ；E、過(guò)濾器0.22μπι；F、塑料吸管；G、三聚氰胺標(biāo)準(zhǔn)比色卡；所述納米金溶液是用下述方法制成量取IOOmL質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0. 01%的氯金酸水溶液于 容器中，加入1 4mL質(zhì)量分?jǐn)?shù)為1 %的檸檬酸三鈉水溶液，于室溫下磁力攪拌均勻后，加 入2 4mL硼氫化鈉-檸檬酸三鈉混合水溶液，所述混合水溶液中硼氫化鈉的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為 0. 075%，所述檸檬酸三鈉的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為1%，于室溫下，在轉(zhuǎn)速為200 300轉(zhuǎn)/分鐘的條 件下攪拌20-40min，得到桔紅色的納米金溶液，加入ImL質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0. 02% NaN3水溶液， 再用0. 22 μ m過(guò)濾器過(guò)濾后4°C避光保存；三聚氰胺標(biāo)準(zhǔn)比色卡是用下述方法制成(1)配制濃度分別為240mg/L、120mg/L、60mg/L、30mg/L、15mg/L、7. 5mg/L,3mg/LUmg/ L和Omg/L的三聚氰胺-牛奶溶液(2)取步驟⑴的各個(gè)濃度的三聚氰胺-牛奶溶液2.OmL分別放入5mL離心管中，每個(gè) 離心管中加入0. 1 0. 4mL 100-300g/L的三氯乙酸水溶液，用手劇烈振蕩混勻，靜置2 3min,先用濾紙過(guò)濾到另外的離心管中，用3M NaOH水溶液調(diào)節(jié)pH值至7 8，再用0. 22 μ m 過(guò)濾器過(guò)濾，得提取液；(3)將步驟(2)獲得的提取液各取0.15mL分別加入到0. 3mL納米金溶液中，混合均勻， 室溫顯色反應(yīng)Imin后用數(shù)碼相機(jī)記錄顯色結(jié)果，采集圖片后，用具有顏色梯度的圖片組成 標(biāo)準(zhǔn)色塊，將標(biāo)準(zhǔn)色塊按照三聚氰胺濃度高低進(jìn)行排列并在其下方標(biāo)注相應(yīng)的三聚氰胺濃 度，制作成卡片。
2.快速檢測(cè)三聚氰胺的方法，其特征是包括如下步驟(1)準(zhǔn)備權(quán)利要求1所述試劑盒；(2)對(duì)被測(cè)液態(tài)奶樣品或被測(cè)奶粉樣品進(jìn)行前處理所述液態(tài)奶樣品前處理為取2.01^液態(tài)奶至51^離心管中，加入0.1 0.41^ 100 300g/L的三氯乙酸水溶液，用手劇烈振蕩混勻，靜置2 3min，先用濾紙過(guò)濾到另一離心管 中，用3M NaOH水溶液調(diào)節(jié)pH值至7 8，再用0. 22 μ m過(guò)濾器過(guò)濾，得提取液；所述奶粉樣品前處理為稱取0. 4g奶粉至5mL離心管管中，先加入2. OmL水，溶解后加 入0. 2 0. 6mL 100-300g/L的三氯乙酸水溶液，用手劇烈振蕩混勻，靜置2 ^iin先用濾 紙過(guò)濾到另一離心管中，用3M NaOH水溶液調(diào)節(jié)pH值至7 8，再用0. 22 μ m過(guò)濾器過(guò)濾， 得提取液；(3)樣品檢測(cè)取經(jīng)樣品前處理后的提取液0. 15mL加入到0. 3mL納米金溶液中，在室溫下反應(yīng)lmin， 根據(jù)樣品呈現(xiàn)的不同顏色，與三聚氰胺標(biāo)準(zhǔn)比色卡比對(duì)后確定是否含有三聚氰胺或三聚氰 胺的含量。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種快速目視比色檢測(cè)三聚氰胺的試劑盒及檢測(cè)方法，試劑盒包括A、納米金溶液粒徑為5～10nm；B、100～300g/L的三氯乙酸水溶液；C、3M NaOH水溶液；D、離心管2mL和5mL；E、過(guò)濾器0.22μm；F、塑料吸管；G、三聚氰胺標(biāo)準(zhǔn)比色卡；本發(fā)明的試劑盒結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單、成本低廉，靈敏度高；本發(fā)明的檢測(cè)方法對(duì)樣品基質(zhì)效應(yīng)抗干擾能力強(qiáng)，簡(jiǎn)化后的前處理不僅提高了效率，縮短了檢測(cè)周期，而且不需要離心機(jī)及專(zhuān)業(yè)的技術(shù)人員，易于實(shí)施；不憑借光譜儀等任何儀器，直接通過(guò)肉眼比色即可判斷是否含有三聚氰胺及其含量范圍，檢測(cè)成本低，攜帶方便；檢測(cè)時(shí)間短。
文檔編號(hào)G01N21/78GK102109469SQ201110062369
公開(kāi)日2011年6月29日 申請(qǐng)日期2011年3月15日 優(yōu)先權(quán)日2011年3月15日
發(fā)明者劉楠, 周青青, 寧保安, 柳明, 王紅勇, 高志賢 申請(qǐng)人:中國(guó)人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院衛(wèi)生學(xué)環(huán)境醫(yī)學(xué)研究所