專利名稱：通過軟骨酸性蛋白1 檢測(cè)腦梗塞的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及腦梗塞的檢查方法、腦梗塞治療或預(yù)防效果的評(píng)估方法、篩選腦梗塞的預(yù)防藥物或治療藥物的方法，和用于檢測(cè)腦梗塞、用于評(píng)估腦梗塞的治療效果或用于篩選腦梗塞預(yù)防/治療藥物候選化合物的試劑盒。
背景技術(shù)：
腦中風(fēng)是腦梗塞、腦出血、蛛網(wǎng)膜下腔出血等腦血管障礙的總稱。在這些腦中風(fēng)的疾病類型中，近年來腦梗塞是相對(duì)增加的。急性腦梗塞的藥物療法可使用溶栓法、抗凝固療法、抗血小板療法、施用護(hù)腦藥物等，對(duì)于重癥患者或發(fā)生出血性腦梗塞的患者可以實(shí)施外科手術(shù)。腦梗塞的癥狀在急性期最強(qiáng)，之后慢慢改善。這是由于陷入壞死的腦組織腫脹，壓迫、阻礙周圍的腦組織而造成的。在引起腫脹的同時(shí)，周圍組織的功能也逐步恢復(fù)，癥狀逐步固化。但是，由于自腦缺血部位釋放的自由基也具有引起周圍組織壞死的作用，因此即使已過急性期，為了提高功能預(yù)后，仍然需要繼續(xù)治療。腦梗塞的臨床疾病類型包括由腦內(nèi)微動(dòng)脈堵塞而發(fā)病的腔隙梗塞、由腦內(nèi)主動(dòng)脈粥樣硬化堵塞而發(fā)病的動(dòng)脈粥樣硬化性血栓性腦梗塞、由心臟內(nèi)的血栓成為栓子，堵塞腦內(nèi)動(dòng)脈而發(fā)病的心源性腦栓塞等。由于根據(jù)這些臨床疾病類型，在急性期和慢性期的合適療法不同，因此需要快速診斷腦梗塞患者的臨床疾病類型的方法。腦梗塞的臨床疾病類型的分類方法已公開了通過觀察臨床癥狀和實(shí)施心臟超聲波檢查、MR1、MRA、頸部血管超聲波檢查等，以TOAST分類為基準(zhǔn)的腦梗塞臨床診斷流程(非專利文獻(xiàn)I)等進(jìn)行分類的方法；使用了分子標(biāo)志物的方法等，具體而言，在腦梗塞發(fā)病的24小時(shí)內(nèi)同時(shí)測(cè)定了 CRP、D-Dimer、RAGE、MMP-9、SIOOB、BNP等分子標(biāo)志物的結(jié)果，利用BNP和D-Dimer設(shè)定特定的截止值，可以將心源性腦栓塞與其他疾病類型分類(非專利文獻(xiàn)2)，但仍然需要可以更迅速的診斷確切疾病類型的分子標(biāo)志物?？梢栽诎l(fā)病3個(gè)月后至I年后的時(shí)間，通過改良的Rankin量表(非專利文獻(xiàn)3)或巴塞爾指數(shù)(Barthel Index)(非專利文獻(xiàn)4)，評(píng)價(jià)日常生活中的動(dòng)作障礙程度，來判斷腦梗塞的預(yù)后。事先預(yù)測(cè)預(yù)后對(duì)于早期確定腦梗塞的治療方法是重要的。已公開了通過入院時(shí)測(cè)定的血漿中的BNP確定特定的截止值，從而可以預(yù)測(cè)死亡(非專利文獻(xiàn)5)，但仍需要可以預(yù)測(cè)存活時(shí)障礙程度的分子標(biāo)志物。腦梗塞癥狀的嚴(yán)重程度(重癥度)可以在腦梗塞剛發(fā)病后至發(fā)病后3個(gè)月后的過程中，通過美國(guó)國(guó)立衛(wèi)生研究院卒中量表(National Institute of Health Stroke Scale,NIHSS)評(píng)價(jià)意識(shí)障礙、運(yùn)動(dòng)障礙或高度功能障礙等來判斷。很多腦梗塞在入院期內(nèi)癥狀惡化，通過觀察NIHSS的變化，可以確定是否是進(jìn)行性腦梗塞。由于進(jìn)行性腦梗塞多發(fā)生預(yù)后不良，因此早期預(yù)測(cè)并充分治療是重要的。然而，尚未建立對(duì)進(jìn)行性腦梗塞進(jìn)行預(yù)測(cè)的方法，還需要進(jìn)行預(yù)測(cè)的分子標(biāo)志物。在專利文獻(xiàn)I中，記載了使用軟骨酸性蛋白I (Cartilage Acidic Proteinl)作為循環(huán)器官疾病、血液疾病、神經(jīng)疾病、呼吸器官疾病、消化器官疾病和泌尿器官疾病的標(biāo)志物。然而，僅在缺血/心肌梗塞的模式動(dòng)物中軟骨酸性蛋白I表現(xiàn)出表達(dá)量高，而沒有顯示軟骨酸性蛋白I可以用于診斷這些疾病的具體數(shù)據(jù)?，F(xiàn)有技術(shù)文獻(xiàn)專利文獻(xiàn)專利文獻(xiàn)I美國(guó)專利申請(qǐng)公開2010/0081136號(hào)說明書非專利文獻(xiàn)非專利文獻(xiàn)ILee, L.J.等人，Stroke, 1081-1089 (2000)非專利文獻(xiàn)2Montaner 等人，Stroke, 2280-2287 (2008)非專利文獻(xiàn)3van Swieten, J.C 等人，Stroke, 604-607 (1988)非專利文獻(xiàn)4Mahoney, F.L 等人，Maryland State Med J, 61-65 (1965)非專利文獻(xiàn)5Shibazaki，K 等人，Inter Med, 1601-1604(2009)非專利文獻(xiàn)6Brott T.等人，Stroke, 20，864 (1989)

發(fā)明內(nèi)容
鑒于上述問題，本發(fā)明的課題是提供使用腦梗塞患者等的血清或血漿等，迅速準(zhǔn)確的檢查腦梗塞的方法，以及評(píng)價(jià)腦梗塞治療效果的方法。本發(fā)明人等為了解決上述課題，深入研究，結(jié)果發(fā)現(xiàn):患者血漿中的軟骨酸性蛋白I蛋白質(zhì)在健康者、疾病類型不同或預(yù)后不同的患者之間的血漿中的濃度不同，軟骨酸性蛋白I蛋白質(zhì)的含量可作為用于檢查腦梗塞的有效指標(biāo)，從而完成了本發(fā)明。換言之，本發(fā)明的主旨是:[I]用于在動(dòng)物中診斷腦梗塞的檢查方法，其包括:對(duì)從待檢動(dòng)物中采集的血液樣品中的軟骨酸性蛋白I蛋白質(zhì)的量進(jìn)行測(cè)定的步驟，當(dāng)所述蛋白質(zhì)的量低于健康者時(shí)，判斷為腦梗塞。[2]根據(jù)[I]所述的用于診斷腦梗塞的檢查方法，其中，從待檢動(dòng)物中采集的血液樣品是在從腦梗塞樣癥狀剛發(fā)病后至發(fā)病后第20天之間的任意時(shí)間從待檢動(dòng)物中采集的血液樣品。[3]用于在動(dòng)物中診斷腦梗塞的疾病類型的檢查方法，其包括:對(duì)從待檢動(dòng)物中采集的血液樣品中的軟骨酸性蛋白I蛋白質(zhì)的量進(jìn)行測(cè)定的步驟。[4]根據(jù)[3]所述的檢查方法，所述疾病類型診斷是診斷下列中的任意:腔隙梗塞、動(dòng)脈粥樣硬化性血栓性、心源性腦栓塞、主動(dòng)脈源性腦栓塞、分支動(dòng)脈粥樣化病、動(dòng)脈夾層(動(dòng)脈解離)、不能分類。[5]用于在動(dòng)物中預(yù)測(cè)腦梗塞的預(yù)后的檢查方法，其包括:對(duì)從待檢動(dòng)物中采集的血液樣品中的軟骨酸性蛋白I蛋白質(zhì)的量進(jìn)行測(cè)定的步驟。[6]根據(jù)[5]所述的用于預(yù)測(cè)腦梗塞的預(yù)后的檢查方法，其中，從待檢動(dòng)物中采集的血液樣品是在腦梗塞發(fā)病第7天從待檢動(dòng)物中采集的血液樣品。[7]用于在動(dòng)物中預(yù)測(cè)腦梗塞的進(jìn)行性的檢查方法，其包括:對(duì)從待檢動(dòng)物中采集的血液樣品中的軟骨酸性蛋白I蛋白質(zhì)的量進(jìn)行測(cè)定的步驟。[8]根據(jù)[7]所述的用于預(yù)測(cè)腦梗塞的進(jìn)行性的檢查方法，其中，從待檢動(dòng)物中采集的血液樣品是在腦梗塞發(fā)病第7天從待檢動(dòng)物中采集的血液樣品。[9]評(píng)價(jià)動(dòng)物中的腦梗塞的預(yù)防或治療效果的方法，其包括:對(duì)從動(dòng)物中采集的血液樣品中的軟骨酸性蛋白I蛋白質(zhì)的量進(jìn)行測(cè)定的步驟，所述動(dòng)物是施用了腦梗塞的預(yù)防藥物或治療藥物的需要預(yù)防或治療腦梗塞的動(dòng)物。[10]篩選腦梗塞的預(yù)防藥物或治療藥物的方法，其包括:在使待檢個(gè)體與腦梗塞的預(yù)防藥物或治療藥物的候選化合物進(jìn)行接觸之后，對(duì)所述待檢個(gè)體中的軟骨酸性蛋白I蛋白質(zhì)的量進(jìn)行測(cè)定的步驟。[11]用于檢查腦梗塞、用于評(píng)價(jià)腦梗塞的治療效果，或用于篩選腦梗塞的預(yù)防/治療藥物的候選化合物的試劑盒，其包括:能夠?qū)浌撬嵝缘鞍譏蛋白質(zhì)的量進(jìn)行測(cè)定的試劑。本發(fā)明提供了腦梗塞患者的血漿中的濃度，與健康者不同、或在疾病類型不同的患者、預(yù)后不同的患者或進(jìn)行性不同的患者的血漿中其濃度不同的軟骨酸性蛋白I蛋白質(zhì)作為用于檢查腦梗塞的分子標(biāo)志物(在本說明書中稱為“CRTAC1蛋白標(biāo)志物”)。通過單獨(dú)使用CRTACl蛋白標(biāo)志物，或與其他腦梗塞分子標(biāo)志物組合使用，可以迅速、準(zhǔn)確的診斷腦梗塞，或進(jìn)行腦梗塞的疾病類型的分類或進(jìn)行預(yù)后預(yù)測(cè)。
具體實(shí)施例方式下面詳細(xì)的說明本發(fā)明的實(shí)施方式。(I)腦梗寒的檢杳方法本發(fā)明的第I個(gè)方面是在動(dòng)物中檢查腦梗塞的方法，包括對(duì)從待檢動(dòng)物中采集的血液樣品中的軟骨酸性蛋白I蛋白質(zhì)的量進(jìn)行測(cè)定的步驟。在本說明書中，“腦梗塞”指腦動(dòng)脈由于血栓或栓塞而成為堵塞的缺血狀態(tài)，使腦組織壞死和障礙的疾病，包括下述的任意疾病:腦內(nèi)微動(dòng)脈堵塞而發(fā)病的腔隙梗塞；腦內(nèi)主動(dòng)脈粥樣硬化堵塞而發(fā)病的動(dòng)脈粥樣硬化性血栓性腦梗塞；由于心臟內(nèi)的血栓成為栓子堵塞腦內(nèi)動(dòng)脈而發(fā)病的心源性腦栓塞；栓子從自上行性主動(dòng)脈至主動(dòng)脈弓部的粥樣硬化斑塊解離、堵塞腦內(nèi)動(dòng)脈而發(fā)病的栓塞癥，即主動(dòng)脈源性腦栓塞；在主動(dòng)脈上形成的斑塊堵塞穿支的入口部位而產(chǎn)生的穿支區(qū)域的梗塞，即“分支動(dòng)脈粥樣化病(Branch atheromatousdisease) ” (下文有時(shí)稱為“BAD”)；腦血管內(nèi)膜損傷、血液侵入動(dòng)脈壁內(nèi)使腦血管堵塞的動(dòng)脈夾層。此外，腦梗塞也包括急性期、亞急性期、恢復(fù)期(慢性期)等中的任意。在本說明書中，軟骨酸性蛋白I蛋白質(zhì)(下文有時(shí)稱為“CRTAC1蛋白”)意指在本發(fā)明的檢查方法中，作為測(cè)定其在血液樣品中的含量的對(duì)象的軟骨酸性蛋白I蛋白質(zhì)，只要是源自待檢動(dòng)物的蛋白質(zhì)即可，具體而言，對(duì)于源自人的蛋白質(zhì)可示例如下述特定氨基酸序列所示的蛋白質(zhì)。進(jìn)一步還包括與其具有相同功能的蛋白質(zhì)片段、衍生物和變體。在上述檢查方法中，“待檢動(dòng)物”只要是具有發(fā)生腦梗塞的可能性的動(dòng)物即可，具體而言可列舉人、猴子或大鼠等嚙齒類等。其中，本發(fā)明的腦梗塞的檢查方法特別優(yōu)選在懷疑腦梗塞的人、或腦梗塞發(fā)病后的人等中進(jìn)行。此外，從上述待檢動(dòng)物中采集的“血液樣品”只要含有CRTACl蛋白、并可以測(cè)定其濃度即可，沒有特殊的限制，具體而言可以是EDTA血漿、檸檬酸血漿等血漿、血清、全血中的任意，其中，由于EDTA血漿可以方便的采集，易于保藏且采集量多，因此優(yōu)選使用EDTA血漿。用于從待檢動(dòng)物中采集所述血液樣品的采血時(shí)機(jī)可以是進(jìn)行腦梗塞診斷的任意時(shí)機(jī)。腦梗塞由于在發(fā)病后時(shí)刻發(fā)生癥狀或疾病狀態(tài)的變化，因此具體如下詳述。在本發(fā)明的檢查方法中，在人的情況下，作為測(cè)定其在從待檢動(dòng)物中采集的血液樣品中的含量的對(duì)象的軟骨酸性蛋白I蛋白質(zhì)是如UniProtKB的登錄名CRAC1_HUMAN所示氨基酸序列組成的蛋白質(zhì)。例如，可以在美國(guó)國(guó)立生物技術(shù)信息中心(NCBI)的數(shù)據(jù)庫(kù)等輸入上述登錄名，獲得序列信息。上述氨基酸序列是人的序列，在待檢動(dòng)物不同的情況下，以源自所述動(dòng)物的同源物蛋白質(zhì)作為測(cè)量對(duì)象蛋白質(zhì)。上述蛋白質(zhì)在血液樣品中的含量的測(cè)量方法只要是可以測(cè)量所述蛋白質(zhì)的含量的方法即可，沒有特殊的限制，可使用例如:使用了所述蛋白質(zhì)的抗體的現(xiàn)有免疫測(cè)量法；色譜技術(shù)和飛行時(shí)間質(zhì)譜分析(TOF-MS)的組合；一并測(cè)定在一定條件下色譜載體(例:陽離子交換載體、陰離子交換載體、疏水性色譜載體、金屬離子等)所捕獲的所有成分的質(zhì)量的方法；二維凝膠電泳法等。免疫測(cè)量法優(yōu)選通過根據(jù)酶免疫定量法的定量檢查方法；熒光免疫測(cè)定法；化學(xué)發(fā)光免疫測(cè)定法等進(jìn)行測(cè)量的方法等。酶免疫定量法是在標(biāo)記免疫測(cè)定法中，使用酶作為標(biāo)記物的檢查方法。此外，使用免疫溶劑，選用酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定(ELISA)法是特別優(yōu)選的。此外，可列舉ELISA中的夾心法，考慮其操作簡(jiǎn)單、經(jīng)濟(jì)便利，尤其是普遍適用于臨床檢查，是特別合適的測(cè)量形式之一。這些測(cè)量方法可以根據(jù)例如新生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)講座(新生化學(xué)実験講座)(日本生化學(xué)會(huì)編；東京化學(xué)同人)、Molecular Cloning, A Laboratory Manual (T.Maniatis 等人，Cold Spring HarborLaboratory (2001))、Antibodies-A Laboratory Manual (E.Harlow,等人，ColdSpringHarbor Laboratory(1988))等一般實(shí)驗(yàn)書中記載的方法或基于上述方法進(jìn)行?？梢酝ㄟ^公知的方法，以對(duì)象的CRTACl蛋白作為抗原，獲得進(jìn)行上述測(cè)定時(shí)所使用的抗體等(包括抗體片段)。但是，以對(duì)象的CRTACl蛋白作為抗原來制備不是必需的，只要是至少與所述蛋白質(zhì)表現(xiàn)出交叉反應(yīng)性，能夠測(cè)量其含量即可。這樣的免疫測(cè)量法及其使用的抗體優(yōu)選使用例如R&D公司生產(chǎn)的抗人CRTACl抗體(貨號(hào)AF5234)等。本發(fā)明的方法中使用的血液樣品優(yōu)選將剛從待檢動(dòng)物中采集的血液樣品用于上述測(cè)量，也可以使用保藏的血液樣品。血液樣品的保藏方法只要是用于檢查腦梗塞的分子標(biāo)志物量不變的條件即可，沒有特殊的限制，例如優(yōu)選是在o-1o°c下不冷凍水平的低溫條件、黑暗條件和不振動(dòng)的條件。在不得不冷凍的情況下，優(yōu)選深度冷凍等能夠避免標(biāo)志物分子分解或氧化反應(yīng)等的方法。在本發(fā)明的檢查方法中，可以測(cè)量從待檢動(dòng)物中采集的血液樣品(在本說明書中，有時(shí)將其稱為“檢查材料”)中的上述CRTACl蛋白標(biāo)志物的含量，并以此為指標(biāo)來檢查腦梗塞。此外，可以使用組合CRP或D-Dimer等現(xiàn)有腦梗塞標(biāo)志物在檢查材料中的含量，或關(guān)聯(lián)臨床癥狀觀察結(jié)果和心臟超聲波檢查、MR1、MRA、頸部血管超聲波檢查等結(jié)果的復(fù)合指標(biāo)來更準(zhǔn)確的檢查。在上述以用于檢查腦梗塞的分子標(biāo)志物在檢查材料中的含量為指標(biāo)檢查上述腦梗塞的情況下，可以是比較用于檢查腦梗塞的分子標(biāo)志物在檢查材料中的含量的絕對(duì)值與健康者(健康動(dòng)物)的值，也可以是規(guī)定恰當(dāng)閾值進(jìn)行檢查的方法。從預(yù)先臨床上確定沒有腦梗塞的健康者中采集血液，與從待檢動(dòng)物中采集的血液進(jìn)行相同的處理和測(cè)量，可定量健康者的上述用于檢查腦梗塞的標(biāo)志物在血液樣品中的含量。臨床上確定各種腦梗塞的方法沒有特殊的限制，可列舉例如通過頭部X射線CT、頭部MR1、MRA、腦血管造影、頸部血管超聲波檢查等機(jī)器診斷方法等來進(jìn)行確定的方法等。閾值是指著眼于某種物質(zhì)，在對(duì)目標(biāo)疾病群體和非疾病群體(除目標(biāo)疾病以外的群體)進(jìn)行判定的情況下確定的值。在對(duì)目標(biāo)疾病和非疾病進(jìn)行判斷的情況下，可以將閾值以下視為陰性，閾值以上視為陽性；或?qū)㈤撝狄韵乱暈殛栃?，閾值以上視為陰性，來判斷疾?金井正光編，臨床檢查法提要金原出版株式會(huì)社)。以評(píng)價(jià)閾值的臨床有效性為目的而使用的指標(biāo)可列舉靈敏度和特異性。使用閾值判斷某親代群體，在疾病患者中，判斷為陽性的用a(真陽性)表示；屬于疾病患者，但判斷為陰性的用b (假陰性)表示；不是疾病患者，但判斷為陽性的用c (假陽性)表示；不是疾病患者，且判斷為陰性的用d(真陰性)表示；可以用a/(a+b)所示的值表示靈敏度(真陽性率)；用d/(c+d)所示的值表示特異性(真陰性率)。目標(biāo)疾病群體和非疾病群體的測(cè)量值分布通常是部分重復(fù)的。因此，通過增減閾值，可以改變靈敏度和特異性。降低閾值可以提高靈敏度、減少特異性；增加閾值可以減少靈敏度、提高特異性。就判斷方法而言，靈敏度和特異性兩者的值越高，越優(yōu)選。此外，靈敏度和特異性的值不大于0.5的判斷方法不認(rèn)為是有效的。設(shè)定閾值的方法可列舉包括非疾病群體分布的95%，并設(shè)定中央距兩端中的任一端點(diǎn)的值為閾值的方法；在非疾病群體的分布顯示正態(tài)分布的情況下，設(shè)定平均值+2倍標(biāo)準(zhǔn)差(SD)或平均值-2SD為閾值的方法等。此外，由于如上所述，靈敏度和特異性隨設(shè)定的閾值而改變，一般為了判斷診斷方法是否有效，與單純以某一閾值下的靈敏度和特異性進(jìn)行評(píng)價(jià)相比，期望當(dāng)增減閾值時(shí)保持靈敏度或特異性高的指標(biāo)，例如用ROC曲線的AUC值進(jìn)行評(píng)價(jià)。當(dāng)靈敏度和特異性都以100%閾值存在時(shí)，ROC曲線的AUC值為1，診斷性能不好時(shí)接近0.5。因此，用ROC曲線的AUC值判斷時(shí)，某診斷方法的性能如果在0.7以上，則可以評(píng)價(jià)所述方法作為診斷方法是恰當(dāng)?shù)?。由于?duì)于記載在本發(fā)明中的CRTACl蛋白標(biāo)志物，ROC曲線的AUC值在0.7以上，因此可用于后述腦梗塞檢查方法中。(1-1)使用了軟骨酸性蛋白I(CRTACl)蛋白質(zhì)標(biāo)志物的檢查腦梗塞的方法使用了本發(fā)明的CRTACl蛋白標(biāo)志物檢查腦梗塞的方法的具體方法可列舉用于區(qū)別健康者和腦梗塞患者的檢查方法，即可列舉特征是測(cè)量從待檢動(dòng)物采集的血液樣品中的CRTACl蛋白的量，當(dāng)CRTACl蛋白的量低于健康者時(shí)判斷為腦梗塞的檢查方法。在此情況下，獲得檢查材料的時(shí)機(jī)是從腦梗塞樣癥狀剛發(fā)病后起即可，沒有特殊的限制，優(yōu)選意指剛發(fā)病后至發(fā)病后第20天之間進(jìn)行診斷。特別優(yōu)選的時(shí)機(jī)是剛發(fā)病后 發(fā)病后第9天之間?？梢允菧y(cè)定采集的檢查材料中的上述CRTACl蛋白標(biāo)志物的含量，比較它的絕對(duì)值與健康者(健康動(dòng)物)的值，也可以是通過上述方法規(guī)定恰當(dāng)閾值進(jìn)行檢查的方法。從被懷疑為腦梗塞的待檢者采集的血液樣品中的CRTACl蛋白標(biāo)志物的含量的絕對(duì)值高于健康者(健康動(dòng)物)的值時(shí)，越高于閾值，則越可以判斷所述待檢者是腦梗塞患者。健康者的上述用于檢查腦梗塞的標(biāo)志物在血液樣品中的含量可以如下定量獲得:從預(yù)先臨床上確定沒有腦梗塞的健康者采集血液，與從待檢動(dòng)物采集的血液進(jìn)行相同的處理和測(cè)量。臨床上確定各種腦梗塞的方法沒有特殊的限制，可列舉根據(jù)例如頭部X射線CT、頭部MR1、MRA、腦血管造影、頸部血管超聲波檢查等機(jī)器診斷方法等確定的方法等。此外，可以使用組合CRP或D-Dimer等現(xiàn)有腦梗塞標(biāo)志物在檢查材料中的含量，或關(guān)聯(lián)臨床癥狀觀察結(jié)果和心臟超聲波檢查、MR1、MRA、頸部血管超聲波檢查等結(jié)果的復(fù)合指標(biāo)來更準(zhǔn)確的檢查。(1-2)使用了 CRTACl蛋白標(biāo)志物的檢查腦梗塞疾病類型的方法使用了本發(fā)明的CRTACl蛋白標(biāo)志物檢查腦梗塞的方法的具體方法可列舉用于區(qū)別腦梗塞疾病類型的檢查方法。疾病類型是指本身已知在臨床上有區(qū)別的疾病類型，具體而言，可列舉“腔隙梗塞”(本說明書中有時(shí)稱為“l(fā)acunar”)；“動(dòng)脈粥樣硬化性血栓性腦梗塞”(本說明書中有時(shí)稱為“動(dòng)脈粥樣硬化性血栓性”)；“心源性腦栓塞”(本說明書中有時(shí)稱為“心源性腦栓塞”)；栓子從自上行性主動(dòng)脈至主動(dòng)脈弓部的粥狀硬化斑塊解離、堵塞腦內(nèi)動(dòng)脈而發(fā)病的栓塞癥，即“主動(dòng)脈源性腦栓塞”;在主動(dòng)脈上形成的斑塊堵塞穿支的入口部位而產(chǎn)生的穿支區(qū)域的梗塞，即“分支動(dòng)脈粥樣化病”(下文稱為“BAD”)；腦血管內(nèi)膜損傷、血液侵入動(dòng)脈壁內(nèi)使腦血管堵塞的動(dòng)脈夾層；或不符合其中任一項(xiàng)的疾病類型(下文有時(shí)稱為“不能分類型”)。為了通過測(cè)量包含在檢查材料中的CRTACl蛋白質(zhì)的量來區(qū)別腦梗塞的疾病類型，首先，通過上述方法確定能夠區(qū)別各種疾病類型的血液樣品中的CRTACl蛋白質(zhì)的量的閾值，將檢查材料中的CRTACl蛋白質(zhì)的量與所述閾值比較，判斷歸入哪一種疾病類型群體。通過包含在本發(fā)明的血液樣品中的CRTACl蛋白質(zhì)的量能夠區(qū)別的疾病類型只要是能夠設(shè)定在兩種疾病類型群體之間使CRTACl蛋白質(zhì)的含量相互區(qū)別的閾值即可，沒有特殊的限制，具體而言可列舉例如表I所示的“動(dòng)脈粥樣硬化性血栓性腦梗塞”和“動(dòng)脈夾層”、“心源性腦栓塞”和“動(dòng)脈夾層”、“腔隙梗塞”和“BAD”、“腔隙梗塞”和“動(dòng)脈夾層”、“主動(dòng)脈源性腦栓塞”和“BAD”、“主動(dòng)脈源性腦栓塞”和“動(dòng)脈夾層”、“BAD”和“動(dòng)脈夾層”、“BAD”和“不能分類型”、“動(dòng)脈粥樣硬化性血栓性腦梗塞”和“腔隙梗塞”、“心源性腦栓塞”和“腔隙梗塞”、“心源性腦栓塞”和“BAD”、“動(dòng)脈粥樣硬化性血栓性腦梗塞”和“BAD”、“動(dòng)脈夾層”和除此以外的疾病類型、“BAD”和除此以外的疾病類型等。當(dāng)進(jìn)行上述測(cè)量時(shí)，獲得檢查材料的時(shí)機(jī)是在腦梗塞樣癥狀剛發(fā)病后即可，沒有特殊的限制，表I中顯示了優(yōu)選的時(shí)機(jī)。
權(quán)利要求
1.用于在動(dòng)物中診斷腦梗塞的檢查方法，其包括: 對(duì)從待檢動(dòng)物中采集的血液樣品中的軟骨酸性蛋白I蛋白質(zhì)的量進(jìn)行測(cè)定的步驟， 其中當(dāng)所述蛋白質(zhì)的量低于健康者時(shí)，判斷為腦梗塞。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用于診斷腦梗塞的檢查方法，其中，從待檢動(dòng)物中采集的血液樣品是在從腦梗塞樣癥狀剛發(fā)病后至發(fā)病后第20天之間的任意時(shí)間從待檢動(dòng)物中采集的血液樣品。
3.用于在動(dòng)物中診斷腦梗塞的疾病類型的檢查方法，其包括: 對(duì)從待檢動(dòng)物中采集的血液樣品中的軟骨酸性蛋白I蛋白質(zhì)的量進(jìn)行測(cè)定的步驟。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的檢查方法，所述疾病類型診斷是診斷下列中的任意:腔隙梗塞、動(dòng)脈粥樣硬化性血栓性、心源性腦栓塞、主動(dòng)脈源性腦栓塞、分支動(dòng)脈粥樣化病、動(dòng)脈夾層、不能分類。
5.用于在動(dòng)物中預(yù)測(cè)腦梗塞的預(yù)后的檢查方法，其包括: 對(duì)從待檢動(dòng)物中采集的血液樣品中的軟骨酸性蛋白I蛋白質(zhì)的量進(jìn)行測(cè)定的步驟。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的用于預(yù)測(cè)腦梗塞的預(yù)后的檢查方法，其中，從待檢動(dòng)物中采集的血液樣品是在腦梗塞發(fā)病第7天從待檢動(dòng)物中采集的血液樣品。
7.用于在動(dòng)物中預(yù)測(cè)腦梗塞的進(jìn)行性的檢查方法，其包括: 對(duì)從待檢動(dòng)物中采集的血液樣品中的軟骨酸性蛋白I蛋白質(zhì)的量進(jìn)行測(cè)定的步驟。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的用于預(yù)測(cè)腦梗塞的進(jìn)行性的檢查方法，其中，從待檢動(dòng)物中采集的血液樣品是在腦梗塞發(fā)病第7天從待檢動(dòng)物中采集的血液樣品。
9.評(píng)價(jià)動(dòng)物中的腦梗塞的預(yù)防或治療效果的方法，其包括: 對(duì)從動(dòng)物中采集的血液樣品中的軟骨酸性蛋白I蛋白質(zhì)的量進(jìn)行測(cè)定的步驟，所述動(dòng)物是施用了腦梗塞的預(yù)防藥物或治療藥物的需要預(yù)防或治療腦梗塞的動(dòng)物。
10.篩選腦梗塞的預(yù)防藥物或治療藥物的方法，其包括: 在使待檢個(gè)體與腦梗塞的預(yù)防藥物或治療藥物的候選化合物進(jìn)行接觸之后，對(duì)所述待檢個(gè)體中的軟骨酸性蛋白I蛋白質(zhì)的量進(jìn)行測(cè)定的步驟。
11.用于檢查腦梗塞、用于評(píng)價(jià)腦梗塞的治療效果，或用于篩選腦梗塞的預(yù)防或治療藥物的候選化合物的試劑盒，其包括: 能夠?qū)浌撬嵝缘鞍譏蛋白質(zhì)的量進(jìn)行測(cè)定的試劑。
全文摘要
本發(fā)明涉及用于在動(dòng)物中診斷腦梗塞的檢查方法、用于診斷腦梗塞的疾病類型的檢查方法，和用于預(yù)測(cè)腦梗塞預(yù)后的檢查方法，其包括對(duì)從待檢動(dòng)物采集的血液樣品中的軟骨酸性蛋白1蛋白質(zhì)的含量進(jìn)行測(cè)定的步驟。
文檔編號(hào)G01N33/50GK103210312SQ20118005511
公開日2013年7月17日 申請(qǐng)日期2011年11月16日 優(yōu)先權(quán)日2010年11月16日
發(fā)明者北園孝成, 鴨打正浩, 吾鄉(xiāng)哲朗, 桑城貴弘, 清原裕, 秦淳, 粟野秀人, 小林輝章 申請(qǐng)人:三菱化學(xué)株式會(huì)社, 國(guó)立大學(xué)法人九州大學(xué), 公益社團(tuán)法人久山生活習(xí)慣病研究所