益心舒制劑的指紋圖譜檢測方法及其指紋圖譜的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種益心舒制劑的指紋圖譜檢測方法及其指紋圖譜，所述的指紋圖譜檢測方法是以五味子醇甲對照品為參照，采用高效液相色譜法測定其指紋圖譜。本發(fā)明所提供的方法建立的益心舒制劑HPLC指紋圖譜與對照圖譜的相似度均大于0.9，能有效的表征其質(zhì)量，有利于全面監(jiān)控產(chǎn)品的質(zhì)量；本發(fā)明建立了益心舒制劑HPLC特征指紋圖譜共有模式，標(biāo)定了15個共有峰，建立的指紋圖譜技術(shù)含量高，避免了益心舒制劑質(zhì)量控制的單一性和片面性，減少了人為處理產(chǎn)品質(zhì)量達(dá)標(biāo)的可能性。
【專利說明】益心舒制劑的指紋圖譜檢測方法及其指紋圖譜
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種益心舒制劑的指紋圖譜檢測方法及其指紋圖譜，屬于中藥檢測【技術(shù)領(lǐng)域】。
【背景技術(shù)】
[0002]心腦血管疾病是嚴(yán)重危害人類的常見疾病。近年來，由于社會的發(fā)展、工作、生活、飲食結(jié)構(gòu)及環(huán)境的變化，心腦血管疾病呈上升趨勢。對于心血管疾病的治療，雖然中藥單靶點的作用強(qiáng)度低于西藥，但其多途徑、多靶點、動態(tài)整體治療、毒副作用小的特點則遠(yuǎn)非西藥所能企及，療效確切的中成藥的綜合治療效果要超過西藥。益心舒制劑多用來治療心血管疾病，例如益心舒膠囊、益心舒顆粒、益心舒片、益心舒丸、益心舒注射制劑等。這些益心舒制劑(均含有人參、麥冬、五味子、黃芪、丹參等藥材)因其配方不同，或者配方比例不同，或者提取精制方法不同，或者劑型不同，治療效果也有所差異。另外由于這些益心舒制劑的質(zhì)量控制方法不夠全面，難以全面表征他們的物理化學(xué)特征。因此，對益心舒制劑的提取精制方法、質(zhì)量控制方法進(jìn)行改進(jìn)成為人們積極研究的課題。
[0003]目前，對益心舒制劑的鑒定，往往是選取益心舒制劑的一兩種中藥成分進(jìn)行鑒定，比如申請?zhí)枮?00910102647.4、名稱為“益心舒中藥制劑中麥冬的質(zhì)量控制方法”，公開了一種對益心舒中藥制劑中麥冬進(jìn)行鑒定的方法；申請?zhí)枮?00910102648.9、名稱為“益心舒中藥制劑中五味子的質(zhì)量控制方法”，公開了一種對益心舒中藥制劑中五味子進(jìn)行鑒定的方法；還有一些文獻(xiàn)公開了對益心舒中藥制劑中人參、丹參、川芎、黃芪、山楂中的一種或多種進(jìn)行鑒別的方法。
[0004]中藥指紋圖譜是指某種中藥材或中成藥中所共有的、具有特征性的某類或數(shù)類成分的色譜或光譜的圖譜。在現(xiàn)階段，中藥的有效成分絕大多數(shù)沒有明確的情況下，中藥指紋圖譜對于有效控制中藥材或中成藥的質(zhì)量具有重要的意義。日本漢方藥主要生產(chǎn)企業(yè)在20世紀(jì)80年代就已經(jīng)在企業(yè)內(nèi)部采用高效液相指紋圖譜控制質(zhì)量。德國、法國在對銀杏葉提取物聯(lián)合開發(fā)的過程中，發(fā)現(xiàn)銀杏葉提取物的醫(yī)療作用是提取物所得物質(zhì)群的整體作用結(jié)果，而對這一個整體的質(zhì)量控制，亦采用高效液相指紋圖譜方法。美國最近幾年也明確把指紋圖譜作為混合物群的質(zhì)量控制方法。隨著研究的深入，人們發(fā)現(xiàn)，作為中醫(yī)理論的實踐產(chǎn)物，中藥，尤其是復(fù)方中藥，其中所含的任一種成分都不能代表其整體療效。人們逐漸認(rèn)識至1J，現(xiàn)行的參照西藥(合成藥)質(zhì)量控制模式的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)不能恰當(dāng)?shù)姆从持兴巸?nèi)在的質(zhì)量。從先行的質(zhì)量控制模式向一種綜合的、宏觀的、可量化的鑒別與主要有效成分含量測定結(jié)合已是發(fā)展的趨勢。
[0005]益心舒制劑是由人參、麥冬、五味子等制成的，臨床上用于治療氣陰兩虛、心悸脈結(jié)代、胸悶不舒、胸痛及冠心病、心絞痛等癥，其治療效果已經(jīng)得到臨床的驗證，而是否能夠保證藥物的質(zhì)量以及益心舒制劑中有效成分含量，是決定益心舒制劑療效的基礎(chǔ)。如果用一兩種人參或五味子等的活性成分來說明益心舒制劑的內(nèi)在質(zhì)量，具有一定的片面性，更不用說無藥效的指標(biāo)成分了。要控制益心舒制劑的功效，只針對其一兩個化學(xué)成分進(jìn)行表征和控制是不夠的，必須對它的物質(zhì)群整體予以控制。所以，除了“微觀分析”外，還應(yīng)該用某種“宏觀分析”方法，從整體上有效的表征中藥質(zhì)量。指紋圖譜作為中草藥及其提取物的質(zhì)量控制方法，目前已經(jīng)成為國際共識?，F(xiàn)在對五味子中活性成分如無五味子醇甲、五味子醇乙等的測定方法較多，對丹參中活性成分如丹參酮、丹參素等的測定方法較多，但如何能從更宏觀的角度以益心舒制劑中化學(xué)成分為指標(biāo)建立宏觀指紋圖譜的方法卻未見報道。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006]本發(fā)明的目的在于，提供一種益心舒制劑的指紋圖譜檢測方法及其指紋圖譜，通過此方法可以保證益心舒制劑的質(zhì)量穩(wěn)定性、一致性和可控性，從而確保益心舒制劑的安全性和有效性。
[0007]本發(fā)明中所述的益心舒制劑由人參200g，麥冬200g，五味子133g，黃芪200g，丹參267g，川芎133g和山楂200g制備而成。具體的制備方法為:稱取上述重量的人參，粉碎成細(xì)粉，備用；稱取上述重量的五味子和丹參，用85%乙醇回流提取兩次，第一次3小時，第二次1.5小時，濾過，合并濾液，減壓回收乙醇并濃縮為80°C的相對密度為1.25?1.30的浸膏；其余四味藥材加水煎煮兩次，第一次2.5小時，第二次1.5小時，濾過，合并濾液，濾液濃縮為80°C的相對密度為1.10?1.15的浸膏；加入一倍量的85%乙醇，混勻，靜置，濾過，濾液回收乙醇并濃縮至適量，與上述的五味子和丹參的提取物合并同時加入上述的人參細(xì)粉，混勻，干燥，加入適量輔料，按照常規(guī)方法制備成相應(yīng)的益心舒制劑。
[0008]為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明采用如下的技術(shù)方案:一種益心舒制劑的指紋圖譜檢測方法，以五味子醇甲對照品為參照，采用高效液相色譜法測定其指紋圖譜。
[0009]具體的，所述的益心舒制劑的指紋圖譜檢測方法包括以下步驟:
[0010](I)供試品溶液的制備:取益心舒制劑或其內(nèi)容物2g，精密稱定，置于25ml容量瓶中，加甲醇15?25ml,超聲提取20?40min,放冷,加甲醇至刻度,搖勻，過濾,取續(xù)濾液,作為供試品溶液；
[0011](2)對照品溶液的制備:取五味子醇甲對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每Iml含0.3mg的溶液，作為對照品溶液；
[0012](3)測定:分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各5?15 μ 1，注入高效液相色譜儀，記錄120分鐘內(nèi)的色譜圖，用指紋圖譜軟件對圖譜進(jìn)行處理，即得益心舒制劑的指紋圖譜。
[0013]前述方法中，所述高效液相色譜測定的色譜條件為:以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以乙腈為流動相Α，以0.005%磷酸水溶液為流動相B，梯度洗脫，流速0.5?1.5ml.η?η-1,柱溫28?42°C,檢測波長185?240nm ;理論塔板數(shù)按五味子醇甲峰計算應(yīng)不低于2000。
[0014]優(yōu)選的，所述的益心舒制劑的指紋圖譜檢測方法，包括以下步驟:
[0015](I)供試品溶液的制備:取益心舒制劑或其內(nèi)容物2g，精密稱定，置于25ml容量瓶中，加甲醇20ml，超聲提取30min，放冷，加甲醇至刻度，搖勻，過0.22 μ m的微孔濾膜，取續(xù)濾液作為供試品溶液；
[0016](2)對照品溶液的制備:取五味子醇甲對照品3mg，精密稱定，置于IOml容量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度，制成濃度為0.3mg/mL的溶液，過0.22 μ m的微孔濾膜，取續(xù)濾液作為對照品溶液；
[0017](3)測定:分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10 μ 1，注入高效液相色譜儀，記錄120分鐘內(nèi)的色譜圖，用指紋圖譜軟件對圖譜進(jìn)行處理，即得益心舒制劑的指紋圖
-1'TfeP曰。
[0018]所述高效液相色譜測定的色譜條件優(yōu)選為:以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以乙腈為流動相A，以0.005%磷酸水溶液為流動相B，梯度洗脫，流速1.0ml.mirT1，柱溫30，1:檢測波長210nm，理論塔板數(shù)按五味子醇甲峰計算應(yīng)不低于2000。
[0019]前述的益心舒制劑的指紋圖譜檢測方法中，梯度洗脫過程中，流動相A、B的比例變化為:0 ~30min, A相 20%, B 相 80% ；30 ~60min, A相 20%_43%，B 相 80%-57% ；60 ~70min,A 相 43%-53%，B 相 57%-47% ；70 ~85min, A 相 53%, B 相 47% ；85 ~IOOmin, A 相 53%_70%，B相47%-30% ；100~120min, A相70%_90%，B相30%-10% ;即梯度洗脫程序如下表:
[0020]表1
[0021]
【權(quán)利要求】
1.一種益心舒制劑的指紋圖譜檢測方法，其特征在于，以五味子醇甲對照品為參照，采用高效液相色譜法測定其指紋圖譜。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的益心舒制劑的指紋圖譜檢測方法，其特征在于:包括以下步驟: (1)供試品溶液的制備:取益心舒制劑或其內(nèi)容物2g，精密稱定，置于25ml容量瓶中，加甲醇15?25ml,超聲提取20?40min,放冷,加甲醇至刻度,搖勻，過濾,取續(xù)濾液,作為供試品溶液； (2)對照品溶液的制備:取五味子醇甲對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每Iml含0.3mg的溶液，作為對照品溶液； (3)測定:分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各5?15μ 1，注入高效液相色譜儀，記錄120分鐘內(nèi)的色譜圖，用指紋圖譜軟件對圖譜進(jìn)行處理，即得益心舒制劑的指紋圖譜。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的益心舒制劑的指紋圖譜檢測方法，其特征在于，所述高效液相色譜測定的色譜條件為:以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以乙腈為流動相Α，以0.005%磷酸水溶液為流動相B，梯度洗脫，流速0.5?1.5ml.mirT1，柱溫28?42°C，檢測波長185?240nm ;理論塔板數(shù)按五味子醇甲峰計算應(yīng)不低于2000。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的益心舒制劑的指紋圖譜檢測方法，其特征在于:包括以下步驟: (1)供試品溶液的制備:取益心舒制劑或其內(nèi)容物2g，精密稱定，置于25ml容量瓶中，加甲醇20ml，超聲提取30min，放冷，加甲醇至刻度，搖勻，過0.22 μ m的微孔濾膜，取續(xù)濾液作為供試品溶液； (2)對照品溶液的制備:取五味子醇甲對照品3mg，精密稱定，置于IOml容量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度，制成濃度為0.3mg/mL的溶液，過0.22 μ m的微孔濾膜，取續(xù)濾液作為對照品溶液； (3)測定:分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μ 1，注入高效液相色譜儀，記錄120分鐘內(nèi)的色譜圖，用指紋圖譜軟件對圖譜進(jìn)行處理，即得益心舒制劑的指紋圖譜。
5.根據(jù)權(quán)利要求3或4所述的益心舒制劑的指紋圖譜檢測方法，其特征在于:所述高效液相色譜測定的色譜條件為:以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以乙腈為流動相Α，以0.005%磷酸水溶液為流動相B，梯度洗脫，流速1.0ml.mirT1，柱溫30，1:檢測波長210nm，理論塔板數(shù)按五味子醇甲峰計算應(yīng)不低于2000。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的益心舒制劑的指紋圖譜檢測方法，其特征在于:梯度洗脫過程中，流動相A、B的比例變化為:0?30min，A相20%，B相80% ；30?60min，A相20%_43%，B 相 80%-57% ；60 ?70min, A 相 43%_53%，B 相 57%-47% ；70 ?85min, A 相 53%, B 相 47% ；85 ?IOOmin, A 相 53%_70%，B 相 47%-30% ；100 ?120min, A 相 70%_90%，B 相 30%_10%。
7.如權(quán)利要求1?6中任一項所述益心舒制劑的指紋圖譜檢測方法得到的益心舒制劑指紋圖譜，其特征在于:所述圖譜中有15個共有峰。
【文檔編號】G01N30/88GK103604898SQ201310560887
【公開日】2014年2月26日 申請日期:2013年11月12日 優(yōu)先權(quán)日:2013年11月12日
【發(fā)明者】張觀福 申請人:貴州信邦制藥股份有限公司