本發(fā)明涉及一種基于分子印跡固相萃取技術(shù)的敵百蟲(chóng)和久效磷同時(shí)分離檢測(cè)的方法，屬于食品安全檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域，特別是一種敵百蟲(chóng)和久效磷的快速靈敏檢測(cè)方法。
背景技術(shù)：
敵百蟲(chóng)(trichlorphon，O,O-二甲基-(2,2,2-三氯-1-羥基乙基)磷酸酯)是一種有機(jī)磷光譜殺蟲(chóng)劑，久效磷(Monocrotophos，O,O-二甲基-2-甲基氨基甲?；?1-甲基乙烯基磷酸酯)一種高效內(nèi)吸性有機(jī)磷殺蟲(chóng)劑。
這兩種農(nóng)藥均具有高效、低毒、低殘留、水溶性好等特點(diǎn)，因此被廣泛應(yīng)用于農(nóng)林、園藝、畜牧、衛(wèi)生等方面。也正因?yàn)槠鋺?yīng)用廣泛，濫用現(xiàn)象日趨嚴(yán)重，其對(duì)動(dòng)物神經(jīng)系統(tǒng)的損害以及致癌性和致突變性也越來(lái)越引起人們的重視。GB 16319-1996規(guī)定食品中敵百蟲(chóng)最大殘留量不得高于0.1mg Kg-1，久效磷最大殘留量不得高于0.03mg Kg-1。
高效液相色譜法具有分離效能好、靈敏度高、檢測(cè)速度快及重現(xiàn)性好等特點(diǎn)，與氣相色譜比較，尤其適用于熱分解農(nóng)藥和水溶性農(nóng)藥的檢測(cè)。但高效液相色譜檢測(cè)限較高，所以在進(jìn)行液相色譜分析之前通常對(duì)樣品進(jìn)行富集，從而達(dá)到痕量檢測(cè)的要求。商品化的固相萃取材料通常為C18鍵合硅膠，選擇性較差，容易造成基質(zhì)干擾，因此制備具有高選擇性樣品前處理材料稱(chēng)謂當(dāng)務(wù)之急。我們的前期研究表明，將印跡聚合物作為固相萃取填充劑可以實(shí)現(xiàn)對(duì)敵百蟲(chóng)和久效磷的特異性吸附，改善富集效果進(jìn)而降低檢出限。因此將分子印跡技術(shù)的敵百蟲(chóng)和久效磷檢測(cè)方法用于檢測(cè)農(nóng)產(chǎn)品及食品中的敵百蟲(chóng)和久效磷，具有重要意義。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
本發(fā)明的目的在于克服傳統(tǒng)的單一聚合物只能對(duì)一種農(nóng)藥具有特異吸附性能以及選擇吸附性能低的缺陷，合成了混合模板的分子印跡聚合物并提高了聚合物的選擇吸附性能，提供了一種同時(shí)檢測(cè)敵百蟲(chóng)和久效磷的新方法。
本發(fā)明采取的技術(shù)方案是：
一種分子印跡固相萃取-液相色譜同時(shí)檢測(cè)敵百蟲(chóng)和久效磷方法，是按以下步驟完成的：
1.高吸附性能分子印跡聚合物MIL@MIP的制備
在3-10mL氯仿溶液中加入0.5-2.0mmol敵百蟲(chóng)、0.75-2.0mmol久效磷和2-4mmol甲基丙烯酸(MAA)充分?jǐn)嚢?-30min，再加入5-20.0mg金屬有機(jī)骨架材料MIL-101充分反應(yīng)30-60min，然后加入5-10mmol乙二醇二甲基丙烯酸酯(EDMA)和50-100mg偶氮二異丁腈(AIBN)引發(fā)熱聚合24h。待洗脫后得分子印跡聚合物MIL@MIP。
2.分子印跡固相萃取-高效液相色譜流程
取100-200mg步驟1)制備的高吸附性能MIL@MIP填充到空的分子印跡固相萃取柱中，活化后將100mL含有敵百蟲(chóng)和久效磷的混合標(biāo)準(zhǔn)水溶液以1.5-2.5mL min-1的速度通過(guò)分子印跡固相萃取柱，再用1.0-5.0mL甲醇冰乙酸混合溶液(甲醇：冰乙酸＝98：2，體積比)進(jìn)行洗脫，洗脫液氮吹后用1.0mL超純水復(fù)溶，經(jīng)0.22μm水相濾膜過(guò)濾后，進(jìn)液相色譜進(jìn)行分析。
3.配制含有不同濃度的敵百蟲(chóng)和久效磷混合標(biāo)準(zhǔn)溶液并重復(fù)步驟2)操作；以敵百蟲(chóng)和久效磷溶液濃度為橫坐標(biāo)，以色譜峰面積為縱坐標(biāo)，分別繪制敵百蟲(chóng)和久效磷標(biāo)準(zhǔn)曲線。
4.將待測(cè)物5.0g切碎，用30mL超純水超聲提取三次，合并三次提取液并定容至100mL，將定容后的提取液替換步驟2)中敵百蟲(chóng)和久效磷混合標(biāo)準(zhǔn)溶液并按照步驟2)的流程進(jìn)行檢測(cè)。帶入步驟3)繪制的標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出分析物中敵百蟲(chóng)和久效磷含量。
本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)和積極效果是：
1.本發(fā)明與以前的檢測(cè)方法相比，使用合成的材料不同，吸附性能更強(qiáng)。本發(fā)明將多孔性及大的比表面積的新型金屬框架材料MIL-101作為支持載體，大大提高了制備聚合物的吸附性能，而且對(duì)敵百蟲(chóng)和久效磷均具有較高的選擇性，可以代替單一聚合物在固相萃取中的應(yīng)用，提高分離富集效果。
2.該吸附功能材料由化學(xué)方法制備，具有較高的穩(wěn)定性、較長(zhǎng)的使用壽命和較強(qiáng)的抗惡劣環(huán)境的能力。
3.本發(fā)明將分子印跡技術(shù)與高效液相色譜技術(shù)聯(lián)用，建立對(duì)敵百蟲(chóng)和久效磷具有高靈敏度的檢測(cè)方法。該方法對(duì)敵百蟲(chóng)和久效磷最低檢出限分別為1.14μg L-1和1.47μg L-1，能夠滿足檢測(cè)需要，與以往檢測(cè)方法相比，效果非常顯著。
4.本發(fā)明制備的分子印跡聚合物可以重復(fù)使用20次左右，成本大大降低；實(shí)驗(yàn)操作簡(jiǎn)單，適用于各種食品中敵百蟲(chóng)和久效磷的快速檢測(cè)。
本發(fā)明與現(xiàn)有其他檢測(cè)方法的比較：
具體實(shí)施方式
下面結(jié)合實(shí)施例，對(duì)本發(fā)明進(jìn)一步說(shuō)明；下述實(shí)施例是說(shuō)明性的，不是限定性的，不能以下述實(shí)施例來(lái)限定本發(fā)明的保護(hù)范圍。
本發(fā)明使用混合模板分子印跡聚合物作為固相萃取吸附劑與高效液相色譜技術(shù)聯(lián)用，從而建立對(duì)敵百蟲(chóng)和久效磷具有高靈敏度的快速檢測(cè)方法。
實(shí)施例1：
1.高吸附性能的分子印跡聚合物MIL@MIP的制備
在100mL帶塞的圓底燒瓶中加入3mL氯仿溶液、0.5mmol敵百蟲(chóng)、0.75mmol久效磷和4mmol甲基丙烯酸(MAA)充分?jǐn)嚢?0min；再加入10.0mg MIL-101充分反應(yīng)60min，然后加入10mmol乙二醇二甲基丙烯酸酯(EDMA)和50mg偶氮二異丁腈(AIBN)引發(fā)熱聚合24h。待用120mL甲醇和40mL冰乙酸混合溶液作為萃取溶劑，連續(xù)洗脫48h后后得分子印跡聚合物MIL@MIP。
2.分子印跡固相萃取-高效液相色譜流程
準(zhǔn)確稱(chēng)取步驟1)制備的分子印跡聚合物MIL@MIP 200mg裝入一個(gè)空的固相萃取柱中。分別用甲醇和超純水潤(rùn)洗、活化裝好的萃取柱。將100mL 0.05mg L-1敵百蟲(chóng)和久效磷混合標(biāo)準(zhǔn)水溶液通過(guò)固相萃取柱，敵百蟲(chóng)和久效磷被選擇性吸附到MIL@MIP上。富集結(jié)束，用2.0mL甲醇/冰乙酸(98/2,V/V)混合溶液進(jìn)行洗脫，并且將洗脫液收集，氮?dú)獯蹈?，然后?.0mL超純水復(fù)溶，用0.22μm水相濾膜進(jìn)行過(guò)濾后，進(jìn)HPLC進(jìn)行分析。
3.分別配制濃度為0.05mg L-1、0.5mg L-1、1.0mg L-1、2.0mg L-1、5.0mg L-1、10mg L-1、20mg L-1敵百蟲(chóng)和久效磷混合標(biāo)準(zhǔn)溶液并重復(fù)步驟2操作；以敵百蟲(chóng)和久效磷溶液濃度為橫坐標(biāo)，以色譜峰面積為縱坐標(biāo)，分別繪制敵百蟲(chóng)和久效磷標(biāo)準(zhǔn)曲線。
4.準(zhǔn)確稱(chēng)取草莓5.0g切碎，用30mL超純水超聲提取三次，合并三次提取液并定容至100mL，定容后的提取液替換步驟2)中敵百蟲(chóng)和久效磷混合標(biāo)準(zhǔn)溶液并按照步驟2)的流程進(jìn)行檢測(cè)。帶入步驟3)繪制的標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出草莓中敵百蟲(chóng)含量為1.4mg kg-1，久效磷未檢出。