本發(fā)明涉及生物技術領域，尤其是涉及一種快速檢測試紙條，本發(fā)明還涉及采用該試紙條檢測有機磷和氨基甲酸酯類農藥殘留的方法。

背景技術：

農藥作為防治病蟲害的重要工具,已逐漸成為農業(yè)生產的一個重要環(huán)節(jié)。但是出于監(jiān)管以及使用時的一些漏洞,農藥殘留問題已逐漸成為現(xiàn)代農業(yè)發(fā)展的障礙之一。有機磷類與氨基甲酸酯類殺農藥以其廣譜、高效、易降解、半衰期短等優(yōu)點廣泛應用在現(xiàn)代農業(yè)中,給人類帶了巨大的經(jīng)濟效益,但同時也產生了環(huán)境和食品污染等問題。近年來食品安全重大事件層出不斷,導致人們對于國內的食品安全普遍持懷疑態(tài)度,如何度過這場“信任危機”是我國食品行業(yè)急待解決的問題。

現(xiàn)行農藥的檢測方法主要包括儀器檢測和快速檢測,其中儀器檢測主要包括氣相色譜法、高效液相色譜法、氣相色譜一質譜聯(lián)用技術等在內的諸多儀器檢測方法；快速檢測主要包括比色法、酶片法及生物傳感器法。采用儀器檢測蔬菜農藥殘留時，因對檢測人員素質要求高、設備昂貴、檢驗分析周期長、檢驗費用多等特點，難于實現(xiàn)市場的快速檢測，可以作為檢測結果的最終判定檢測方法使用；快速檢測法操作簡便，不需要儀器設備和配制試劑，檢測人員不需培訓，是市場、車站、鄉(xiāng)鎮(zhèn)等對檢測靈敏度要求較低的場所使用的最佳檢測方法?，F(xiàn)有的農殘速測法與傳統(tǒng)的色譜法、光譜法比較,雖然更適用于大量樣品篩選及現(xiàn)場檢測，但缺點是準確度及靈敏度欠缺。為了保證食品的質量安全,促進我國農產品的對外出口貿易，研究有效的農藥殘留速測分析方法有著十分重要的意義。

可以看出，現(xiàn)有食品質量監(jiān)督體系普遍是建立在實驗室儀器分析技術的基礎上,食品的抽樣送檢過程,不僅耗時費力,且信息發(fā)布嚴重滯后,很難對消費者質疑的產品進行快速反應。同時,由于對監(jiān)管體制的不信任,越來越多的消費者期望能自己對產品進行快速定性檢測,尤其是對每日生活所必需的水果蔬菜。因此,迫切需要發(fā)展快速、靈敏、低成本的食品安全現(xiàn)場快測技術。

技術實現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的在于提供一種高靈敏、低成本、易操作的快速檢測試紙條，本發(fā)明還提供采用該試紙條檢測有機磷和氨基甲酸酯類農藥殘留的方法

為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明可采取下述技術方案：

本發(fā)明所述的快速檢測試紙條，包括支撐背板和貼附在所述支撐背板上的檢測膜，所述檢測膜包括其上設有檢測帶的硝酸纖維素膜，在所述硝酸纖維素膜左側的支撐背板上粘貼有與所述硝酸纖維素膜相搭接的吸水膜，在所述硝酸纖維素膜右側的支撐背板上依次搭接設置有底物墊、酶片和樣品墊；

具體制備方法包括下述步驟：

第一步，將重氮鹽配制成20~60mg/ml的溶液，劃線于硝酸纖維素膜上形成寬度1~2 mm的檢測帶；將劃過重氮鹽的硝酸纖維素膜剪成長10~20mm、寬3~5mm長條，室溫避光晾干；

第二步，將厚度0.2~0.5mm的玻璃纖維膜剪成長10~20mm、寬3~5mm的長條，浸泡在活性2000U/ml的乙酰膽堿酯酶溶液中30min，取出后于真空冷凍干燥機中抽干，制成酶片備用；

第三步，將厚度0.3~0.6mm的聚酯纖維膜剪成長10~20mm、寬3~5mm的長條，浸泡在100mM的吲哚乙酸酯的溶液中30min，取出后于真空冷凍干燥機中抽干，制成底物墊備用；

第四步，將厚度0.4~0.7mm的吸水紙剪成長10~20mm、寬3~5mm的長條狀，作為樣品墊；將厚度0.3~0.5mm的吸水紙剪成長10~20mm、寬3~5mm的長條狀，作為吸水膜；

第五步，將厚度0.3~0.7mm的聚氯乙烯塑料薄片剪切成長度60~100mm，寬度3~5mm的長條狀作為支撐背板，將第一步制備的長條狀硝酸纖維素膜粘貼于支撐背板的中部，在其左側粘貼吸水膜，在其右側依次粘貼底物墊、酶片和樣品墊；避光、干燥后，低溫保存。實際粘貼時，相鄰兩膜片之間的搭接長度為1~2mm。

為方便保存、運輸和使用，制備好的快速檢測試紙條可放置在扁平薄殼狀的透明檢測卡體中（支撐背板粘貼在卡體底部），在檢測卡體的上表面開設有檢測窗孔和加樣孔，置于檢測卡體內的試紙條的樣品墊正對加樣孔，硝酸纖維素膜上的檢測帶正對檢測窗孔。

采用本發(fā)明快速檢測試紙條檢測有機磷和氨基甲酸酯類農藥殘留的方法為：

第一步，將待測的蔬菜樣品剪成1cm左右見方碎片，取1g放入小燒杯中，加入5mL緩沖溶液，振蕩1min~2min，倒出樣品提取液，靜置3min~5min待用；

其中所用緩沖溶液為：分別取11.9g無水磷酸氫二鉀與3.2g磷酸二氫鉀，用1L蒸餾水溶解既得；

第二步，將得到的樣品提取液滴入到樣品墊上，由于虹吸作用原理，樣品液經(jīng)過酶片到達底物墊，然后向硝酸纖維素膜上擴散，與固定在硝酸纖維素膜上的檢測帶發(fā)生偶合反應；

第三步，25℃條件下，5~15分鐘內肉眼觀察檢測帶的顏色變化，反應結果有以下兩種情況：

a、當檢測帶顯示出棕紅色或藍色印記帶，表示檢測結果為陰性，說明被檢測樣品農藥殘留不超標；

b、當檢測帶不顯示顏色或淡黃色，表示檢測結果為陽性，說明被檢測樣品農藥殘留超標。

本發(fā)明的優(yōu)點在于首次利用偶合反應原理制作用于有機磷和氨基甲酸酯類農藥殘留的快速檢測試紙條，試劑條結構簡單，制作快捷，檢測時操作方便，不需要專用儀器設備，無需配制試劑，檢測人員不需專業(yè)培訓，通過觀察檢測帶的顏色即可直接看出樣品中有無農藥殘留的存在，非常直觀。

附圖說明

圖1是本發(fā)明的結構示意圖。

圖2是放置本發(fā)明制備的快速檢測試紙條的透明檢測卡體的結構圖。

具體實施方式

如圖1所示，本發(fā)明所述的快速檢測試紙條，包括支撐背板1和貼附在支撐背板上的檢測膜，檢測膜包括其上設有檢測帶2的硝酸纖維素膜3，在硝酸纖維素膜3左側的支撐背板上粘貼有與硝酸纖維素膜相搭接的吸水膜4，在硝酸纖維素膜右側的支撐背板上依次搭接設置有底物墊5、酶片6和樣品墊7；

其具體制備方法包括下述步驟：

第一步，將重氮鹽（固紅、固藍等）配制成50mg/ml的溶液，劃線于硝酸纖維素膜3上形成寬度2mm的檢測帶2；將劃過重氮鹽的硝酸纖維素膜剪成長20mm、寬4mm長條，室溫避光晾干；

第二步，將厚度0.5mm的玻璃纖維膜剪成長10mm、寬4mm的長條，浸泡在活性2000U/ml的乙酰膽堿酯酶溶液中30min，取出后于真空冷凍干燥機中抽干，制成酶片6備用；

第三步，將厚度0.6mm的聚酯纖維膜剪成長10mm、寬4mm的長條，浸泡在100mM的吲哚乙酸酯的溶液中30min，取出后于真空冷凍干燥機中抽干（5min分鐘即可），制成底物墊5備用；與玻璃纖維膜和吸水紙相比，聚酯纖維膜的樣品溶液擴散性較好，能促進試紙條的層析作用，且顯色效果良好，是底物固定化材料的最佳選擇；

第四步，將厚度0.4mm的吸水紙剪成長10mm、寬4mm的長條狀，作為樣品墊7；將厚度0.5mm的吸水紙剪成長10mm、寬4mm的長條狀，作為吸水膜4；

第五步，將厚度0.7mm的聚氯乙烯塑料薄片剪切成長度80mm，寬度4mm的長條狀作為支撐背板1，將第一步制備的長條狀硝酸纖維素膜3粘貼于支撐背板1的中部，在其左側粘貼吸水膜4，在其右側依次粘貼底物墊5、酶片6和樣品墊7，相鄰兩膜片之間的搭接長度為1~2mm；避光、干燥后，低溫保存。

在檢測卡體8的上表面開設有檢測窗孔9和加樣孔10，置于檢測卡體8內的試紙條的樣品墊7正對加樣孔10，硝酸纖維素膜3上的檢測帶2正對檢測窗孔9。檢測卡體8的結構見圖2。

采用本發(fā)明制備的快速檢測試紙條檢測有機磷和氨基甲酸酯類農藥殘留的方法，其特征在于包括下述步驟：

第一步，將待測的蔬菜樣品剪成1cm左右見方碎片，取1g放入小燒杯中，加入5mL緩沖溶液，振蕩1min~2min，倒出樣品提取液，靜置3min~5min待用；

其中所用緩沖溶液為：分別取11.9g無水磷酸氫二鉀與3.2g磷酸二氫鉀，用1L蒸餾水溶解既得；

第二步，將得到的樣品提取液滴入到樣品墊7上，由于虹吸作用原理，樣品液經(jīng)過酶片6到達底物墊5，然后向硝酸纖維素膜3上擴散，與固定在硝酸纖維素膜3上的檢測帶2發(fā)生偶合反應；

第三步，25℃條件下，5~15分鐘內肉眼觀察檢測帶2的顏色變化，反應結果有以下兩種情況：

a、當檢測帶2顯示出棕紅色或藍色印記帶，表示檢測結果為陰性，說明被檢測樣品農藥殘留不超標；

b、當檢測帶2不顯示顏色或淡黃色，表示檢測結果為陽性，說明被檢測樣品農藥殘留超標。

下面選擇三種常用的農藥馬拉硫磷、甲胺磷和氧化樂果樣品按本發(fā)明方法進行檢測試驗

檢測實例1

第一步，分別將0.01mg/L、0.1mg/L、1mg/L的馬拉硫磷噴灑在青菜葉片上，24~48h后，擦拭表面泥土，剪成1cm左右見方碎片，分別取樣品1g，放入小燒杯中，加入5mL緩沖溶液，振蕩1min-2min，倒出提取液，靜置3min~5min待用。

第二步，分別將對照PBS和待檢測的樣品液從加樣孔10中滴入到樣品墊7上，由于虹吸作用原理，樣品液經(jīng)過酶墊6到達底物墊5，向硝酸纖維素膜3擴散，與固定在硝酸纖維素膜3上的固紅試劑（檢測帶2）發(fā)生偶合反應。

第三步，25℃條件下，5~15分鐘內肉眼觀察檢測孔9中顏色變化并與檢測對照孔進行比對。檢測結果顯示：

a、當馬拉硫磷濃度為0.01mg/L、0.1mg/L時，所述檢測帶2顯示出棕紅色印記帶，表示檢測結果為陰性，說明被檢測樣品農藥殘留不超標；

b、當馬拉硫磷濃度為1mg/L時，檢測帶2不顯示顏色，表示檢測結果為陽性，說明被檢測樣品農藥殘留超標。

檢測實例2

第一步，分別將0.03mg/L、0.3mg/L、1mg/L的甲胺磷噴灑在青菜葉片上，24~48h后，擦拭表面泥土，剪成1cm左右見方碎片，分別取樣品1g，放入小燒杯中，加入5mL緩沖溶液，振蕩1min-2min，倒出提取液，靜置3min-5min待用。

第二步，分別將對照PBS和待檢測的樣品液從加樣孔10中滴入到樣品墊7上，由于虹吸作用原理，樣品液經(jīng)過酶墊6到達底物墊5，向硝酸纖維素膜3擴散，與固定在硝酸纖維素膜3上的固紅試劑（檢測帶2）發(fā)生偶合反應。

第三步，25℃條件下，5~15分鐘內肉眼觀察檢測孔中顏色變化并與檢測對照孔進行比對。結果顯示：

a、當甲胺磷濃度為0.03mg/L時，檢測帶2顯示出棕紅色印記帶，表示檢測結果為陰性，說明被檢測樣品農藥殘留不超標；

b、當甲胺磷濃度為0. 3mg/L時，檢測帶2不顯示顏色；當甲胺磷濃度為1mg/L時，檢測帶2顯示淡黃色。表示甲胺磷濃度為0. 3mg/L和1mg/L時檢測結果為陽性，說明被檢測樣品農藥殘留超標。

檢測實例3

第一步，分別將0.05mg/L、0.5mg/L、2.0mg/L的氧化樂果噴灑在青菜葉片上，24~48h后，擦拭表面泥土，剪成1cm左右見方碎片，分別取樣品1g，放入小燒杯中，加入5mL緩沖溶液，振蕩1min-2min，倒出提取液，靜置3min-5min待用。

第二步，分別將對照PBS和檢測的樣品液從加樣孔10中滴入到試紙條的樣品墊7上，由于虹吸作用原理，樣品液經(jīng)過酶墊6到達底物墊5，向硝酸纖維素膜3擴散，與固定在硝酸纖維素膜3上的固藍試劑（檢測帶2）發(fā)生偶合反應。

第三步，25℃條件下，5~15分鐘內肉眼觀察檢測孔中顏色變化并與檢測對照孔進行比對。結果顯示：

a、當氧化樂果濃度為0.05mg/L時，檢測帶2顯示出藍色印記帶，表示檢測結果為陰性，說明被檢測樣品農藥殘留不超標；

b、當氧化樂果濃度為0. 5mg/L時，檢測帶2不顯示顏色；當氧化樂果濃度為2mg/L時，檢測帶顯示顏色為淡黃色，表示氧化樂果濃度為0. 5mg/L和2mg/L時，檢測結果為陽性，說明被檢測樣品農藥殘留超標。

將待檢測的農藥馬拉硫磷、甲胺磷和氧化樂果與以GB/T 5009.199－2003中規(guī)定的速測卡檢出限進行對比，其結果見下表。

結果顯示，本發(fā)明制備的快速檢測試紙條的檢出限明顯低于國標規(guī)定的速測卡的檢出限。說明本發(fā)明試紙條在沒有儀器設備的條件下，可用于肉眼直接檢測有機磷農藥殘留，具有很高的實用價值。