本發(fā)明涉及一種金納米團(tuán)簇探針的谷胱甘肽電致化學(xué)發(fā)光測(cè)定方法，屬于分析化學(xué)及納米技術(shù)領(lǐng)域。

背景技術(shù)：

谷胱甘肽是由谷氨酸、半胱氨酸和甘氨酸形成的三肽化合物，存在于幾乎身體的每一個(gè)細(xì)胞。正常的谷胱甘肽在人體的新陳代謝及能量運(yùn)輸?shù)确矫嫫鹬匾淖饔?，能幫助人體保持正常的免疫系統(tǒng)的功能。并且，在通常情況下，谷胱甘肽的異常表達(dá)是一些疾病的征兆，可作為疾病臨床診斷的依據(jù)。因此，在生物、臨床檢測(cè)等分析中，谷胱甘肽含量的測(cè)定具有重要的意義。

電致化學(xué)發(fā)光是將化學(xué)發(fā)光與電化學(xué)相結(jié)合而發(fā)展起來(lái)的一種新的分析技術(shù)。該技術(shù)同時(shí)具有化學(xué)發(fā)光技術(shù)與電化學(xué)技術(shù)的優(yōu)點(diǎn)，因而具有靈敏度高、選擇性好、背景信號(hào)低、線性范圍寬、檢出限低，以及反應(yīng)可控等特點(diǎn)，已被廣泛應(yīng)用于藥物、臨床治療與診斷、免疫、食品質(zhì)量、環(huán)境和安全及其它物質(zhì)的測(cè)定。尋找新的發(fā)光體，發(fā)展新的電致化學(xué)發(fā)光體系是電致化學(xué)發(fā)光分析的重要研究方向。量子或納米團(tuán)簇，因具有良好的光學(xué)和電學(xué)特性，在發(fā)光材料的研發(fā)、光敏傳感器的構(gòu)建等方面引起了越來(lái)越多的關(guān)注。近年來(lái)，基于量子點(diǎn)或納米團(tuán)簇的電致化學(xué)發(fā)光分析法，因具有背景信號(hào)低、靈敏度高、可控性好、試劑可以循環(huán)使用和分析測(cè)試范圍廣等優(yōu)點(diǎn)，已在生物、醫(yī)藥，和環(huán)境等領(lǐng)域得到了廣泛的應(yīng)用。金納米團(tuán)簇作為新型納米發(fā)光體，具有無(wú)毒、水溶性好、比表面積大、制備條件溫和、表面易修飾，且具有特殊光電性質(zhì)等特點(diǎn)，己在生物醫(yī)藥、臨床分析、傳感檢測(cè)和催化等領(lǐng)域廣泛應(yīng)用。

本發(fā)明以金納米團(tuán)簇為電致化學(xué)發(fā)光探針，建立了一種谷胱甘肽測(cè)定的新方法。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的在于提供一種以金納米團(tuán)簇為電致化學(xué)發(fā)光探針的谷胱甘肽測(cè)定方法。

為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用以下技術(shù)方案：

本發(fā)明所述的基于金納米團(tuán)簇探針的谷胱甘肽電致化學(xué)發(fā)光測(cè)定方法，其特征是以金納米團(tuán)簇探針為發(fā)光體，以過(guò)硫酸根離子為共反應(yīng)劑，將金納米團(tuán)簇探針修飾在玻碳電極上，并將其作為工作電極進(jìn)行電化學(xué)發(fā)光測(cè)試，利用谷胱甘肽對(duì)金納米團(tuán)簇探針-過(guò)硫酸根離子的電致化學(xué)發(fā)光體系發(fā)光強(qiáng)度的抑制作用，從而表現(xiàn)出電致化學(xué)發(fā)光強(qiáng)度的變化，能直接用于谷胱甘肽的含量測(cè)定。

所述的金納米團(tuán)簇探針以金納米團(tuán)簇材料為前驅(qū)體，采用還原法制備得到；所述金納米團(tuán)簇材料為功能化修飾金納米團(tuán)簇，采用n-乙?；?l-半胱氨酸-金納米團(tuán)簇或牛血清白蛋白-金納米團(tuán)簇；所述的n-乙酰-l-半胱氨酸-金納米團(tuán)簇的水溶液由下述方法制備的：往4ml濃度為0.08mol/l的n-乙酰-l-半胱氨酸溶液中加入0.6ml濃度為0.5mol/l的氫氧化鈉與0.4ml濃度為20mg/ml氯金酸溶液，混勻后置于37℃恒溫水槽中孵育3小時(shí)，反應(yīng)結(jié)束后的反應(yīng)液用截留分子為3500的透析袋進(jìn)行透析純化處理，得到n-乙酰-l-半胱氨酸-金納米團(tuán)簇水溶液；金納米團(tuán)簇探針修飾玻碳電極由下述方法制備的：將直徑3mm的玻碳電極用1.0μm、0.3μm，0.05μm的al2o3粉末依次拋光，打磨，至光滑鏡面，再依次放入hno3溶液，無(wú)水乙醇，去離子水中超聲清洗3分鐘，n2吹干；取5μln-乙酰-l-半胱氨酸保護(hù)的金納米團(tuán)簇的水溶液滴加在處理好的玻碳電極表面，室溫干燥，得n-乙酰-l-半胱氨酸-金納米團(tuán)簇修飾玻碳電極，將n-乙酰-l-半胱氨酸-金納米團(tuán)簇修飾玻碳電極浸泡在0.1mol/l硼氫化鈉溶液中反應(yīng)5分鐘~1小時(shí)，得到金納米團(tuán)簇探針修飾玻碳電極。

所述的基于金納米團(tuán)簇探針的谷胱甘肽電致化學(xué)發(fā)光測(cè)定方法，其特征是以金納米團(tuán)簇探針修飾玻碳電極為工作電極，鉑絲電極為對(duì)電極，ag/agcl為參比電極，將上述電極插入0.1mol/lph7.4的磷酸鹽緩沖溶液中，施加-0.2v~-2v電壓，進(jìn)行恒電位還原，得到金納米團(tuán)簇探針。

所述的基于金納米團(tuán)簇探針的谷胱甘肽電致化學(xué)發(fā)光測(cè)定方法，其特征是將金納米團(tuán)簇探針修飾玻碳電極浸泡在0.1mol/l硼氫化鈉溶液中反應(yīng)5分鐘~1小時(shí)，得到金納米團(tuán)簇探針。

所述的基于金納米團(tuán)簇探針的谷胱甘肽電致化學(xué)發(fā)光測(cè)定方法，其特征是以金納米團(tuán)簇探針修飾玻碳電極為工作電極，以過(guò)硫酸根離子為共反應(yīng)劑，采用階躍脈沖法進(jìn)行電化學(xué)發(fā)光測(cè)試，初始電位為0v，脈沖時(shí)間為10s，終止電位為-2v，脈沖時(shí)間為1s。

所述的基于金納米團(tuán)簇探針的谷胱甘肽電致化學(xué)發(fā)光測(cè)定方法，其特征是采用三電極體系進(jìn)行測(cè)試，以金納米團(tuán)簇探針修飾玻碳電極為工作電極，鉑絲電極為對(duì)電極，ag/agcl為參比電極，緩沖溶液為磷酸鹽緩沖液或tris-hcl緩沖溶液，所用電解質(zhì)為kcl或kno3。

所述的基于金納米團(tuán)簇探針的谷胱甘肽電致化學(xué)發(fā)光測(cè)定方法，其特征是緩沖溶液ph值為7.4，過(guò)硫酸根濃度為0.1mol/l。

所述的基于金納米團(tuán)簇探針的谷胱甘肽電致化學(xué)發(fā)光測(cè)定方法，其特征是將金納米團(tuán)簇探針修飾玻碳電極，鉑絲電極，ag/agcl電極插入含有不同濃度谷胱甘肽的過(guò)硫酸根離子共反應(yīng)劑緩沖溶液中，采用階躍脈沖法進(jìn)行電化學(xué)發(fā)光測(cè)試，初始電位為0v，脈沖時(shí)間為10s，終止電位為-2v，脈沖時(shí)間為1s；電致化學(xué)發(fā)光強(qiáng)度值與谷胱甘肽濃度的對(duì)數(shù)值在1.0×10^-9mol/l~1.0×10^-5mol/l和1.0×10^-5mol/l~1.0×10^-1mol/l的范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系，檢測(cè)限為3.2×10^-10mol/l。

本發(fā)明所述的基于金納米團(tuán)簇探針測(cè)定尿液中谷胱甘肽的電致化學(xué)發(fā)光方法，其特征是取新鮮人尿液，用0.45μm膜過(guò)濾，12000rpm轉(zhuǎn)速下離心20分鐘，取上清液，用含有0.1mol/l過(guò)硫酸鉀和0.1mol/lkcl的0.1mol/lph7.4磷酸鹽緩沖溶液稀釋20倍；將金納米團(tuán)簇探針修飾玻碳電極，鉑絲電極，ag/agcl電極插入含有尿樣的緩沖溶液中，采用階躍脈沖法測(cè)定電致化學(xué)發(fā)光信號(hào)，初始電位為0v，脈沖時(shí)間為10s，終止電位為-2v，脈沖時(shí)間為1s；通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線進(jìn)行定量，獲得樣品中谷胱甘肽的含量；采用標(biāo)準(zhǔn)加入法得到本發(fā)明所述的方法檢測(cè)尿樣中谷胱甘肽的回收率為103.1%~107.7%。

所述的基于金納米團(tuán)簇探針測(cè)定尿液中谷胱甘肽的電致化學(xué)發(fā)光方法，其特征是金納米團(tuán)簇探針修飾玻碳電極的制備方法為：將直徑3mm的玻碳電極用1.0μm、0.3μm，0.05μm的al2o3粉末依次拋光，打磨，至光滑鏡面，再依次放入hno3溶液，無(wú)水乙醇，去離子水中超聲清洗3分鐘，n2吹干；取5μln-乙酰-l-半胱氨酸保護(hù)的金納米團(tuán)簇水溶液滴加在處理好的玻碳電極表面，室溫干燥，得n-乙酰-l-半胱氨酸-金納米團(tuán)簇修飾玻碳電極，將n-乙酰-l-半胱氨酸-金納米團(tuán)簇修飾玻碳電極浸泡在0.1mol/l硼氫化鈉溶液中反應(yīng)5分鐘~1小時(shí)，得到金納米團(tuán)簇探針。

具體地說(shuō)，本發(fā)明采用以下技術(shù)方案：

本發(fā)明所述的一種基于金納米團(tuán)簇為電致化學(xué)發(fā)光探針的谷胱甘肽測(cè)定方法，其特征是以金納米團(tuán)簇探針為發(fā)光體，以過(guò)硫酸根離子為共反應(yīng)劑，將金納米團(tuán)簇探針修飾在玻碳電極上，并將其作為工作電極進(jìn)行電化學(xué)發(fā)光測(cè)試。

上述金納米團(tuán)簇探針由以下方法制備：（1）電化學(xué)還原法：采用三電極體系進(jìn)行還原，以金納米團(tuán)簇修飾玻碳電極為工作電極，鉑絲電極為對(duì)電極，ag/agcl為參比電極，將上述電極插入緩沖溶液中，施加不同負(fù)電位電壓，進(jìn)行恒電位還原處理，得到電化學(xué)發(fā)光金納米團(tuán)簇探針；（2）化學(xué)還原法：將金納米團(tuán)簇溶液與一定濃度的硼氫化鈉溶液反應(yīng)一定時(shí)間，離心清洗，得到金納米團(tuán)簇探針，或?qū)⒔鸺{米團(tuán)簇修飾玻碳電極泡在一定濃度的硼氫化鈉溶液反應(yīng)一定時(shí)間，得到化學(xué)還原法制備的金納米團(tuán)簇探針修飾電極。

所述的金納米團(tuán)簇材料為功能化修飾金納米團(tuán)簇，如：n-乙?；?l-半胱氨酸-金納米團(tuán)簇，牛血清白蛋白-金納米團(tuán)簇等。

所述的電致化學(xué)發(fā)光信號(hào)由以下方法采集：將玻碳電極用al2o3粉末依次拋光、打磨，至光滑鏡面，再依次放入hno3溶液、無(wú)水乙醇和去離子水中超聲清洗，n2吹干。再將金納米團(tuán)簇探針溶液滴加在處理好的玻碳電極表面，室溫干燥，即得金納米團(tuán)簇探針修飾玻碳電極。采用三電極體系進(jìn)行測(cè)試，以金納米團(tuán)簇探針修飾玻碳電極為工作電極，鉑絲電極為對(duì)電極，ag/agcl為參比電極，將上述電極插入含有共反應(yīng)劑的緩沖溶液中。采用階躍脈沖法，光電倍增管高壓設(shè)置為600v~800v，檢測(cè)工作電極表面產(chǎn)生的電致化學(xué)發(fā)光信號(hào)。

本發(fā)明所述的一種基于金納米團(tuán)簇為電致化學(xué)發(fā)光探針的谷胱甘肽測(cè)定方法，包括如下步驟：1）將玻碳電極用al2o3粉末依次拋光、打磨，至光滑鏡面，再依次放入hno3溶液、無(wú)水乙醇，和去離子水中超聲清洗，n2吹干；2）將金納米團(tuán)簇探針溶液滴加在處理好的玻碳電極表面，室溫干燥，即得金納米團(tuán)簇探針修飾玻碳電極；3）采用三電極體系進(jìn)行測(cè)試，以金納米團(tuán)簇探針修飾玻碳電極為工作電極，鉑絲電極為對(duì)電極，ag/agcl為參比電極，將上述電極插入含有谷胱甘肽和共反應(yīng)劑的緩沖溶液中。采用階躍脈沖法，光電倍增管高壓設(shè)置為600v~800v，檢測(cè)工作電極表面產(chǎn)生的電致化學(xué)發(fā)光信號(hào)；4）以電致化學(xué)發(fā)光信號(hào)對(duì)谷胱甘肽濃度的對(duì)數(shù)值作圖得到標(biāo)準(zhǔn)曲線，在谷胱甘肽濃度為1.0×10^-9mol/l~1.0×10^-5mol/l和1.0×10^-5mol/l~1.0×10^-1mol/l的范圍內(nèi)谷胱甘肽濃度的對(duì)數(shù)值與電致化學(xué)發(fā)光強(qiáng)度值呈良好的線性關(guān)系，檢測(cè)限為3.2×10^-10mol/l。

上述共反應(yīng)劑為過(guò)硫酸根離子，濃度范圍為0.01~1mol/l，優(yōu)選0.1mol/l。

所述緩沖溶液為磷酸鹽緩沖液或tris-hcl緩沖溶液，在緩沖溶液中所添加電解質(zhì)為kcl或kno3，濃度為0.01~1mol/l。

本發(fā)明采用的具體技術(shù)方案如下：

（一）n-乙酰-l-半胱氨酸-金納米團(tuán)簇的制備

n-乙酰-l-半胱氨酸-金納米團(tuán)簇合成步驟如下：將濃度為0.1~0.8mol/l的氫氧化鈉與濃度為0.01~0.1g/l氯金酸溶液加入到濃度為0.02~0.18mol/l的n-乙酰-l-半胱氨酸溶液中，混勻后置于20~70℃恒溫水浴恒溫反應(yīng)0~3.5小時(shí)。待反應(yīng)結(jié)束后透析純化處理，得到n-乙酰-l-半胱氨酸-金納米團(tuán)簇水溶液，冷凍干燥后可得到n-乙酰-l-半胱氨酸-金納米團(tuán)簇材料粉末。

（二）金納米團(tuán)簇修飾電極的制備

將玻碳電極用1.0μm、0.3μm，0.05μm的al2o3粉末依次拋光、打磨，至光滑鏡面，再依次放入hno3溶液（1:1）、無(wú)水乙醇，和去離子水中超聲清洗3分鐘，n2吹干。取5μl金納米團(tuán)簇水溶液滴加在處理好的玻碳電極表面，室溫干燥，即得金納米團(tuán)簇修飾玻碳電極。

（三）金納米團(tuán)簇探針制備

（1）電化學(xué)還原法制備金納米團(tuán)簇探針：采用三電極體系進(jìn)行還原，以金納米團(tuán)簇修飾玻碳電極為工作電極，鉑絲電極為對(duì)電極，ag/agcl為參比電極，將上述電極插入0.1mol/lph7.4磷酸鹽緩沖溶液中，施加不同負(fù)電位電壓（-0.2v~-2v范圍內(nèi)），進(jìn)行恒電位還原處理，得到電化學(xué)發(fā)光金納米團(tuán)簇探針。

（2）化學(xué)還原法制備金納米團(tuán)簇探針：將金納米團(tuán)簇溶液與0.1mol/l硼氫化鈉溶液反應(yīng)5分鐘~1小時(shí)，離心清洗，得到金納米團(tuán)簇探針?；?qū)⒔鸺{米團(tuán)簇修飾玻碳電極泡在0.1mol/l硼氫化鈉溶液反應(yīng)5分鐘~1小時(shí)，得到化學(xué)還原法制備的金納米團(tuán)簇探針修飾電極。

（四）金納米團(tuán)簇探針電致化學(xué)發(fā)光信號(hào)的產(chǎn)生和檢測(cè)

采用三電極體系進(jìn)行測(cè)試，以金納米團(tuán)簇探針修飾玻碳電極為工作電極，鉑絲電極為對(duì)電極，ag/agcl為參比電極，將上述電極插入含有共反應(yīng)劑的緩沖溶液中。采用階躍脈沖法，初始電位為0v，脈沖時(shí)間為10s，終止電位為-2v，脈沖時(shí)間為1s。光電倍增管高壓設(shè)置為600v~800v，檢測(cè)工作電極表面產(chǎn)生的電致化學(xué)發(fā)光信號(hào)。

（五）谷胱甘肽的測(cè)定

向緩沖溶液中加入不同濃度的谷胱甘肽溶液，混合均勻后按步驟（四）所述方法測(cè)定電化學(xué)發(fā)光信號(hào)，繪制工作曲線。

本發(fā)明所述的以金納米團(tuán)簇為電致化學(xué)發(fā)光探針的谷胱甘肽測(cè)定方法，包括如下步驟：取新鮮人尿液，用含0.1mol/l過(guò)硫酸鉀和0.1mol/lkcl的0.1mol/lph7.4磷酸鹽緩沖溶液稀釋10~20倍。將上述三電極體系插入該樣品溶液，測(cè)定電致化學(xué)發(fā)光信號(hào)值，通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線進(jìn)行定量，獲得尿樣中的谷胱甘肽含量。

本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)是：

（1）本發(fā)明以高量子產(chǎn)率金納米團(tuán)簇探針為電致化學(xué)發(fā)光材料，利用谷胱甘肽對(duì)金納米團(tuán)簇-過(guò)硫酸根電致化學(xué)發(fā)光體系發(fā)光強(qiáng)度的抑制作用，構(gòu)建高靈敏度的谷胱甘肽傳感器。

（2）本發(fā)明所得到的金納米團(tuán)簇探針制備方法簡(jiǎn)單，綠色環(huán)保，重現(xiàn)性好，電致化學(xué)發(fā)光強(qiáng)度大，穩(wěn)定性好。對(duì)谷胱甘肽檢測(cè)線性范圍寬，檢測(cè)限低。

（3）本發(fā)明對(duì)樣品的處理要求低，尿液僅需過(guò)濾、離心、稀釋即可進(jìn)行測(cè)定。

附圖說(shuō)明

圖1為金納米團(tuán)簇探針修飾玻碳電極的電致化學(xué)發(fā)光-時(shí)間曲線圖。

圖2為加入谷胱甘肽后金納米團(tuán)簇探針修飾玻碳電極的電致化學(xué)發(fā)光-時(shí)間曲線圖。

圖3為電致化學(xué)發(fā)光強(qiáng)度變化與緩沖溶液ph之間的關(guān)系圖。

圖4為電致化學(xué)發(fā)光強(qiáng)度變化與共反應(yīng)劑過(guò)硫酸鉀濃度之間的關(guān)系圖。

圖5為電致化學(xué)發(fā)光強(qiáng)度變化與谷胱甘肽濃度對(duì)數(shù)值之間的線性關(guān)系圖。

具體實(shí)施方式

下面結(jié)合附圖和具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步闡述，本發(fā)明并不限于此。

實(shí)施例1

往4ml濃度為0.08mol/l的n-乙酰-l-半胱氨酸溶液中加入0.6ml濃度為0.5mol/l的氫氧化鈉與0.4ml濃度為20mg/ml氯金酸溶液，混勻后置于37℃恒溫水槽中孵育3小時(shí)。反應(yīng)結(jié)束后的反應(yīng)液用截留分子為3500的透析袋進(jìn)行透析純化處理，得到n-乙酰-l-半胱氨酸-金納米團(tuán)簇水溶液，冷凍干燥后得到n-乙酰-l-半胱氨酸-金納米團(tuán)簇粉末。

實(shí)施例2

將直徑3mm的玻碳電極用1.0μm、0.3μm，0.05μm的al2o3粉末依次拋光，打磨，至光滑鏡面，再依次放入hno3溶液（濃硝酸與水體積比為1:1），無(wú)水乙醇，去離子水中超聲清洗3分鐘，n2吹干。取5μl實(shí)施例1制備的n-乙酰-l-半胱氨酸-金納米團(tuán)簇溶液滴加在處理好的玻碳電極表面，室溫干燥，得n-乙酰-l-半胱氨酸-金納米團(tuán)簇修飾玻碳電極。將n-乙酰-l-半胱氨酸-金納米團(tuán)簇修飾玻碳電極浸泡在0.1mol/l硼氫化鈉溶液中反應(yīng)5分鐘，得到金納米團(tuán)簇探針修飾電極。

實(shí)施例3

將實(shí)施例2制備的金納米團(tuán)簇探針修飾電極為工作電極，鉑絲為對(duì)電極，ag/agcl電極為參比電極，插入含有0.1mol/l過(guò)硫酸鉀和0.1mol/lkcl的0.1mol/lph7.4磷酸鹽緩沖溶液中。采用階躍脈沖法，初始電位為0v，脈沖時(shí)間為10s，終止電位為-2v，脈沖時(shí)間為1s。光電倍增管高壓設(shè)置為600v，檢測(cè)工作電極表面產(chǎn)生的電致化學(xué)發(fā)光信號(hào)，得到電化學(xué)發(fā)光信號(hào)（見(jiàn)圖1）。

實(shí)施例4

將實(shí)施例2制備的金納米團(tuán)簇探針修飾電極為工作電極，鉑絲為對(duì)電極，ag/agcl電極為參比電極，插入含有1.0×10^-6mol/l谷胱甘肽、0.1mol/l過(guò)硫酸鉀和0.1mol/lkcl的0.1mol/l、ph7.4磷酸鹽緩沖溶液中。采用階躍脈沖法，初始電位為0v，脈沖時(shí)間為10s，終止電位為-2v，脈沖時(shí)間為1s。光電倍增管高壓設(shè)置為600v，檢測(cè)工作電極表面產(chǎn)生的電致化學(xué)發(fā)光信號(hào)，得到的電化學(xué)發(fā)光信號(hào)比未加谷胱甘肽的溶液明顯減?。ㄒ?jiàn)圖2）。

實(shí)施例5

將實(shí)施例2制備的金納米團(tuán)簇探針修飾電極為工作電極，鉑絲為對(duì)電極，ag/agcl電極為參比電極，插入含有1.0×10^-4mol/l谷胱甘肽，0.1mol/l過(guò)硫酸鉀和0.1mol/lkcl的0.1mol/l磷酸鹽緩沖溶液中。采用階躍脈沖法，初始電位為0v，脈沖時(shí)間為10s，終止電位為-2v，脈沖時(shí)間為1s。光電倍增管高壓設(shè)置為600v，在磷酸鹽緩沖溶液的ph值為5.0，6.0，7.0，7.4，8.0，9.0和10.0的條件下分別檢測(cè)工作電極表面產(chǎn)生的電致化學(xué)發(fā)光信號(hào)，得到最優(yōu)ph值為7.4（見(jiàn)圖3）。

實(shí)施例6

將實(shí)施例2制備的金納米團(tuán)簇探針修飾電極為工作電極，鉑絲為對(duì)電極，ag/agcl電極為參比電極，插入含有1.0×10^-4mol/l谷胱甘肽，不同濃度過(guò)硫酸鉀和0.1mol/lkcl的0.1mol/l、ph7.4的磷酸鹽緩沖溶液中。采用階躍脈沖法，初始電位為0v，脈沖時(shí)間為10s，終止電位為-2v，脈沖時(shí)間為1s。光電倍增管高壓設(shè)置為600v，在過(guò)硫酸鉀濃度分別為0.02，0.04，0.06，0.08，0.10，0.12，0.14和0.16mol/l的條件下分別檢測(cè)工作電極表面產(chǎn)生的電致化學(xué)發(fā)光信號(hào)，得到最佳過(guò)硫酸鉀濃度為0.10mol/l（見(jiàn)圖4）。

實(shí)施例7

將實(shí)施例2制備的金納米團(tuán)簇探針修飾電極為工作電極，鉑絲為對(duì)電極，ag/agcl電極為參比電極，插入含有不同濃度谷胱甘肽，0.1mol/l過(guò)硫酸鉀和0.1mol/lkcl的0.1mol/l、ph7.4的磷酸鹽緩沖溶液中。采用階躍脈沖法，初始電位為0v，脈沖時(shí)間為10s，終止電位為-2v，脈沖時(shí)間為1s。光電倍增管高壓設(shè)置為600v，在緩沖溶液中加入不同濃度谷胱甘肽存在的條件下分別檢測(cè)工作電極表面產(chǎn)生的電致化學(xué)發(fā)光信號(hào)。在谷胱甘肽濃度為1.0×10^-9mol/l~1.0×10^-5mol/l和1.0×10^-5mol/l~1.0×10^-1mol/l的范圍內(nèi)谷胱甘肽濃度的對(duì)數(shù)值與電致化學(xué)發(fā)光強(qiáng)度值呈良好的線性關(guān)系，檢測(cè)限為3.2×10^-10mol/l（見(jiàn)圖5）。

實(shí)施例8

取新鮮人尿液，用0.45μm膜過(guò)濾，12000rpm轉(zhuǎn)速下離心20分鐘，取上清液，用含有0.1mol/l過(guò)硫酸鉀和0.1mol/lkcl的0.1mol/lph7.4磷酸鹽緩沖溶液稀釋20倍。將實(shí)施例2制備的金納米團(tuán)簇探針修飾電極為工作電極，鉑絲為對(duì)電極，ag/agcl電極為參比電極，插入上述含有尿樣的緩沖溶液中。采用階躍脈沖法，初始電位為0v，脈沖時(shí)間為10s，終止電位為-2v，脈沖時(shí)間為1s。光電倍增管高壓設(shè)置為600v，分別檢測(cè)不同樣品溶液中各工作電極表面產(chǎn)生的電致化學(xué)發(fā)光信號(hào)，通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線進(jìn)行定量，獲得樣品中谷胱甘肽的含量。采用標(biāo)準(zhǔn)加入法得到本發(fā)明所述的方法檢測(cè)尿樣中谷胱甘肽的回收率為103.1%~107.7%。

以上所述僅為本發(fā)明的典型實(shí)施例而已，并不用以限制本發(fā)明，凡在本發(fā)明的精神和原則之內(nèi)所作的任何修改，等同替換和改進(jìn)等，均應(yīng)包含在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。