專利名稱：非特異性反應(yīng)抑制劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種用于免疫測定的非特異性反應(yīng)抑制劑。具體而言，本發(fā)明涉及仲胺和叔胺，所述胺在免疫測定中加入時，可通過明顯減少或消除非特異性相互作用，改善互補(bǔ)的免疫反應(yīng)體相互作用程度的定量測定的準(zhǔn)確度和可靠度。
免疫測定是抗原、抗體等的檢測和定量技術(shù)，并且是一種已知技術(shù)。在《免疫學(xué)實驗手冊》第1至4卷(Blackwell Scientific)描述了免疫測定，在此作為參考。敘述了免疫測定的美國專利包括4，203，724、4，590，156、4，716，123、4，772，550、4，851，329、4，960，692和5，100，805一并在此作為參考。
非標(biāo)記的免疫測定由于為了其檢測必須形成大量的抗原-抗體復(fù)合物，所以其靈敏度是有限的。非標(biāo)記的試劑測定的例子包括免疫沉淀法、凝集法和光散射技術(shù)。標(biāo)記的試劑免疫測定包括用放射性同位素，熒光團(tuán)等標(biāo)記的試劑。
免疫測定大致分為兩種觀測試劑的和觀測分析物的(見Ekins，R.，《八十年代的免疫測定》，University Press，Baltimore.MD，1981，在此作為參考)。在觀測試劑的免疫測定中，過量存在的待測分析物與輔助性免疫活性物放在一起。實例包括夾層分析等。在觀測分析物的免疫測定中，待測分析物被標(biāo)記并呈現(xiàn)過量。放射免疫分析(RIA)是這類測定的一種，其分析物被一種放射性同位素標(biāo)記。
酶免疫測定(EIAs)用酶反應(yīng)測定來檢測互補(bǔ)免疫反應(yīng)體(即抗原-抗體)的反應(yīng)。近來EIAs在醫(yī)學(xué)實驗室中的使用迅速增長，部分原因是不需要放射性同位素?，F(xiàn)在EIA方法包含無分離步驟的同種測定方法(因為隨著互補(bǔ)免疫反應(yīng)體的反應(yīng)產(chǎn)生了信號調(diào)制)。
當(dāng)免疫測定被一般地分類，基于這種分類，免疫反應(yīng)體(抗原或抗體)被測定，反應(yīng)物被使用競爭性或非競爭性方法標(biāo)記、結(jié)合的或自由的反應(yīng)體(如果有任何的)的分離方法被使用時，所有免疫測定最終依賴于至少一個互補(bǔ)免疫反應(yīng)體的免疫反應(yīng)體復(fù)合物的形成。
免疫測定被設(shè)計為檢測、監(jiān)測和/或定量這種復(fù)合物的形成，較好地是提供一個測定在樣品中靶物質(zhì)(target species)的量的方法。為了引起復(fù)合物的形成，通常使免疫反應(yīng)體結(jié)合在小球、盤等的表面，然后，這一表面與互補(bǔ)的免疫反應(yīng)體溶液相接觸。免疫反應(yīng)體在固體載體上的固定是公知的。并在例如《固定的親合性配位技術(shù)》(G.T.Hermanson.et.al，1992)和美國專利4，203，724、4，716，123、4，772，550、4，851，329、4，960，692和5，100，805中均有敘述，在此一并作為參考。
雖然免疫測定法的靈敏度使其成為測定分析物的普遍技術(shù)，但是，免疫測定以及如上所述的所期望的互補(bǔ)免疫反應(yīng)體的免疫反應(yīng)體反應(yīng)經(jīng)歷非特異性反應(yīng)，但所述非特異性反應(yīng)干擾測定分析物的存在和/或濃度的測定。這種非特異反應(yīng)是已知的。如在，L.M.Boscato，et.al，clin.chem，32/8，1986，H.C.Vaidya et.al clin.chem.，38/9，1992，C.Chang et.al.Clin.Chem.，33/6，1987中均有闡述，在此都作為參考。非特異反應(yīng)可能是由在被測樣品中存在的非分析物抗體結(jié)合物質(zhì)、標(biāo)記的或非標(biāo)記的分析物與固體免疫反應(yīng)體載體的相互作用等產(chǎn)生的。在過去，牛血清清蛋白等已用于使非特異性相互作用減至最低程度，然而非特異性反應(yīng)仍然是免疫測定技術(shù)中的問題。
本發(fā)明的一個目的是提供一種抑制和消除在免疫測定中發(fā)生的非特異性反應(yīng)的方法。
本發(fā)明的另一個目的是提供一種含有非特異性免疫反應(yīng)抑制劑的分析物溶液。
本發(fā)明的另一個目的是提供一種包含溶液、非特異反應(yīng)抑制劑和附著有免疫反應(yīng)體的固體載體的組合物。
本發(fā)明的另一個目的是提供一種表面被免疫反應(yīng)體和非特異性反應(yīng)抑制劑包裹的固體載體。
本發(fā)明的另一個目的是提供包含非特異性反應(yīng)抑制劑和免疫反應(yīng)體的診斷試劑盒。
當(dāng)充分理解了下面的詳細(xì)闡述后，就會獲得本發(fā)明、其目的和其帶來的許多進(jìn)步的更完整的評價。


圖1顯示了用凝集免疫測定法在不使用非特異反應(yīng)抑制劑的情況下測定地高新的結(jié)果。
圖2顯示了用凝集免疫測定法在使用本發(fā)明所述的一種非特異性反應(yīng)抑制劑的情況下測定地高新的數(shù)據(jù)分布，所使用的地高新樣品與測定圖1時使用的樣品一樣。
圖3顯示了本發(fā)明所述的一種非特異性反應(yīng)抑制劑對表現(xiàn)非特異性反應(yīng)的肝炎-b樣品的影響。
圖4顯示了在使用包裹有微盤的人血清清蛋白的免疫測定中利用本發(fā)明所述的一種非特異性反應(yīng)抑制劑致使非特異性反應(yīng)減少。
圖5顯示了在實施例4中用來確定非特異性反應(yīng)抑制能力的11種化合物的結(jié)構(gòu)式。
本發(fā)明所述的仲胺和叔胺非特異性反應(yīng)抑制劑的通式為 其中X是-NH-(CO)-NH-，-NH-(CS)-NH-， -或-N＝C＝N-，R1，R2可以相同或不同;是C1-C5直鏈或支鏈烷基，或R1與R2同氮原子一起為 或其N-甲-對-甲苯磺酸鹽Y可以相同或不同，是H，OH和鹵素(Br、Cl、F)中任意一個，R3是-NR1R2，-NH2、-CHY、環(huán)己基或H，m是0到5的整數(shù);
p是0到5的整數(shù);
n是0或1;
假如n＝1，m和p中至少一個為至少1，和假如m＝n＝p＝0時，R3是H或-CH2Y，和其酸加成鹽，特別是其鹽酸鹽、磷酸鹽和硫酸鹽。
這些仲胺和叔胺可以在任何位被取代或所有與H、OH和鹵素任意組合的m和p亞甲基可以被取代，包括m＝n＝p＝O和R3是例如H或甲基的化合物、m不是o、n和p可是可不是o和R3是H或-CH2Y等的化合物。
上述化合物中的幾個是在制備肽中有用的碳化二亞胺的水解產(chǎn)物。參見J.C.，et.al，J.Org.Chem.，26，2525，1961和Staros，J.V.et.al，Anal.Biochem.，156，220，1986。兩者一并在此作為參考。一種特別優(yōu)選的非特異性反應(yīng)抑制劑是1-乙基-3-(3-二甲氨丙基)尿素(EDU)，即按前面的通式R1＝R2＝甲基，Y＝H，m＝3，n＝1，p＝1和R3＝甲基的一種化合物。另一種是1-環(huán)己基-3-(2-嗎啉代乙基)碳化二亞胺N-甲-對-甲苯磺酸鹽(CMC)。這些化合物和它們的水解產(chǎn)物在免疫測定中對抑制非特異性反應(yīng)，尤其是在免疫反應(yīng)體與固體載體共價結(jié)合或吸附的免疫測定中是有用的。
本發(fā)明的非特異性反應(yīng)抑制劑可通過一般商業(yè)渠道獲得，可用本專業(yè)普通技術(shù)人員熟知的簡單有機(jī)化學(xué)反應(yīng)制得。在例如《有機(jī)化學(xué)入門》(A.Streitwieser and C.Heathcock，Macmillan，1976)、《有機(jī)合成試劑》(Feiser and Fieser，John Wiley and Sons，1967和以后的各卷;Survey of Orgamc Syntheses，John Wiley and Sons，第一卷和第二卷，1970)和《高等有機(jī)化學(xué)》(March，Wiley，1985)中有說明，所有這些在此都作為參考。例如尿素化合物(-NH-CO-NH-)可由水解碳化二亞胺(-N＝C＝N-)化合物來制備。
本發(fā)明所述的在前文中以通式表達(dá)的非特異性反應(yīng)抑制劑可以單獨或聯(lián)合使用，也可加入到被測樣品(即分析物)中或加入到以吸附或共價結(jié)合在固體載體上的或未結(jié)合在其上的已知免疫反應(yīng)物中使用。并且該非特異性反應(yīng)抑制劑可與普通的非特異性反應(yīng)抑制劑如牛血清蛋白聯(lián)合使用。
本發(fā)明特別優(yōu)選的一個實施方案是這樣一種實施方案，其中一種按照前文中通式的化合物用于抑制非特異性免疫測定反應(yīng)，在該非特異性免疫測定反應(yīng)中，免疫反應(yīng)物首先結(jié)合到使用碳化二亞胺試劑如1-乙基-3-(3-二甲氨丙基)-碳化二亞胺鹽酸化物(EDC)或CMC的基質(zhì)上。本發(fā)明另一個優(yōu)選實施方案是這樣一種實施方案，其中使用的非特異性反應(yīng)抑制劑是用于免疫反應(yīng)體與固體載體結(jié)合的碳化二亞胺的水解產(chǎn)物。
根據(jù)本發(fā)明，用于有效抑制非特異性免疫測定反應(yīng)的非特異性反應(yīng)抑制劑的量是從0.1至300mM，優(yōu)選的是0.5至50mM，更優(yōu)選的是1.25至25mM，上述量以總的免疫測定溶液體積、被測樣品溶液體積或懸浮在溶劑中的由免疫反應(yīng)體活化的固體支持物的溶液體積為基礎(chǔ)。
本發(fā)明的非特異性反應(yīng)抑制劑在復(fù)合物形成之前加入到免疫反應(yīng)體和待測分析物兩者或兩者之一中，當(dāng)加入到吸附或共價結(jié)合于固體載體上的免疫反應(yīng)體中時，在影響免疫反應(yīng)之前最好使其反應(yīng)1-20分鐘。
在本發(fā)明中免疫反應(yīng)體是指以共價等結(jié)合或未結(jié)合在其它諸如蛋白質(zhì)、合成或天然聚合物等的分子上的任何抗原或抗體，互補(bǔ)免疫反應(yīng)體是指以共價等結(jié)合或未結(jié)合在其它諸如合成或天然聚合物等的分子上并能特異地結(jié)合到免疫反應(yīng)體上的任何抗體或抗原。通常免疫反應(yīng)體是被檢出或被定量的物質(zhì)，互補(bǔ)免疫反應(yīng)體是已知的用來檢出或定量免疫反應(yīng)體的物質(zhì)。但某些免疫測定等可能不要求這種安排。然而，免疫反應(yīng)體與互補(bǔ)免疫反應(yīng)體的例子包括如下一些AFP α-胎蛋白β-2-小球蛋白CEA 癌胚抗原鐵蛋白CA19-9 糖類抗原19-9PAP 前列腺酸性磷酯酶PSA 前列腺特異性抗原CRP C-反應(yīng)性蛋白質(zhì)Mb 肌紅蛋白RF 類風(fēng)濕病因子ASO 抗鏈球菌溶血素-OFDP 血纖維蛋白降解產(chǎn)物抗凝血酶-Ⅲ血漿酶α-2-血漿酶抑制劑D-二聚體 血纖維蛋白降解產(chǎn)物D-片段二聚體IgG 免疫球蛋白GIgA 免疫球蛋白AIgM 免疫球蛋白MIgE 免疫球蛋白EC3 補(bǔ)體3C4 補(bǔ)體4
尿白蛋白hCG 人絨毛膜促性腺激素hPL 人胎盤催乳激素胰島素HBs抗原肝炎-B表面抗原HBs抗體抗-肝炎-B核心抗原抗體HBc抗體抗-肝炎-B核心抗原抗體HCV抗體 抗-肝炎-C病毒抗體密螺旋體 抗-梅素螺旋體抗體TSH 甲狀腺促進(jìn)激素LH 促黃體激素FSH 濾泡興奮激素地高新 異羥基毛地黃毒苷毛地黃毒苷奎尼丁普魯卡因酰胺NAPA N-乙?；蒸斂ㄒ蝓０凡鑹A苯妥英苯巴比妥酰胺咪嗪2-丙基戊酸乙基琥珀酰亞胺慶大霉素托普霉素氨基羥丁基卡那霉素A萬古霉素環(huán)孢菌素-AB12 維生素B12葉酸T3 三碘甲狀腺原氨酸T4 甲狀腺素雌激素免疫反應(yīng)體、互補(bǔ)免疫反應(yīng)體兩者之一或兩者均可以被吸附或共價結(jié)合到或者兩均可以不結(jié)合到固體載體上，實際上，所有上述物質(zhì)都可以根據(jù)它在免疫反應(yīng)中起的作用被稱為免疫反應(yīng)體或互補(bǔ)的免疫反應(yīng)體。配對是重要的，而名字并不重要。這里僅指本文提到的上述物質(zhì)和類似的已知物質(zhì)。自然，所有對上述列舉的那些互補(bǔ)的免疫反應(yīng)體也包括在本發(fā)明中。表面附著免疫反應(yīng)體等的固體載體等叫做活化的固體載體。如果不用固體載體，含有已知免疫反應(yīng)體的溶液叫做活化的溶液。
當(dāng)前已知的所有免疫測定都可使用以上描述的非特異性反應(yīng)抑制劑而得到改進(jìn)。尤其是諸如血凝反應(yīng)或膠乳凝集反應(yīng)試驗的免疫凝集反應(yīng)測試，固相吸附免疫測試法或標(biāo)記抗原/抗體固相免疫測試，如放射免疫測定(RIAs)、酶免疫測定(EIAs)和熒光免疫測定(FIAs)等均可通過使用本發(fā)明的非特異性反應(yīng)抑制劑得到改進(jìn)。對其它有用的免疫測定包括化學(xué)發(fā)光試驗、免疫色譜法、免疫指示法和免疫繞射光柵法等。
下述實施例說明本發(fā)明，但應(yīng)明確這些實施例不以任何方式限制本發(fā)明。
實施例1地高新微粒試劑的制備用.T.W.Smith et.al，在《生物化學(xué)》9，331(1970)記載的方法(在此一并作為參考)由地高新-人血清清蛋白(地高新-HSA)共軛物制備地高新顆粒試劑。地高新試劑與直徑為0.292μm的羧基改性膠乳微粒結(jié)合，首先令膠乳微粒在混合床離子交換樹脂(Bio Rad AG 501-X8)中進(jìn)行離子交換，室溫攪拌2小時。離子交換后，膠乳微粒過濾，準(zhǔn)備用于結(jié)合。
于50ml聚碳酸酯離心管中加入50ml 0.1M碳酸氫鹽緩沖液(pH8.0)，和5ml 10wt.%的上述微粒的膠乳微粒懸浮液。反應(yīng)前，微粒在37℃攪拌保溫10分鐘。其次在混合物中加入5ml 88mg/ml的新溶于水的1-乙基-3-(3-二甲氨丙基)-碳化二亞胺鹽酸化物(EDC)，靜置10分鐘。然后在劇烈攪拌中加入2.5ml 10mg/ml的地高新-HSA共軛物并保溫10分鐘。加入5ml 500mM的氨基乙酸緩沖液pH8.5來停止結(jié)合。再經(jīng)10分鐘保溫以確保反應(yīng)完全終止。
結(jié)合地高新-HSA共軛物的膠乳在26000×g條件下離心20分鐘。棄去上層清液，微粒中加入25ml水。微粒在劇烈攪拌下再懸浮。洗滌重復(fù)4次，在最后的再懸浮液洗滌步驟用0.05%鈉疊氮化物溶液作為儲存介質(zhì)。最后膠乳懸浮液用聲處理并稀釋至所需要濃度(一般為0.1-0.4wt.%)。
抗地高新抗體緩沖試劑的組成
EDU溶液由溶解2M的EDC于水中，水解并在水解完全后按下述劑量加入所述試劑來制備。
抗地高新抗體試劑為溶解下列物質(zhì)于水中并用鹽酸調(diào)節(jié)pH值來制備。
3.68% NaCl200mM 三-(羥基)-氨基甲烷，pH7.51.2% 葡聚糖硫酸鈉8.0% 膽堿鹽酸鹽25mM EDU1mg/ml HSA(人血清清蛋白)0.05% 鈉疊氮化物1∶120000 稀釋抗地高新單克隆抗體(由Beckman得到，最好最后加入)樣品測定的試驗條件用LPIA-100儀器(測定濁度作為時間的函數(shù)的免疫測定分析儀器，由Mitsubishi Kasei公司制造)在下述條件下進(jìn)行試驗。首先用含有0，1，2，3和5ng/ml地高新的校準(zhǔn)樣品建立標(biāo)準(zhǔn)曲線(Roche特征系統(tǒng))。然后用LPIA-100儀器測定已用放射免疫測定法(RIA.Din-abbott公司，日本)估測并已確定濃度大約從0至3ng/ml的200地高新血清樣品，從LPIA儀器得到的刻度數(shù)據(jù)對含和不含EDU(25mM)的已知地高新溶液的濃度(RIA測定)繪圖，并將該圖與標(biāo)準(zhǔn)曲線比較。
波長650nm樣品體積 10μl推進(jìn)緩沖劑 50μl
抗體試劑 200μl膠乳試劑 40μl測定結(jié)果如圖1a-e和圖2a-e所示，比較1a與2a，1b與2b等，加入EDU的結(jié)果是顯著改進(jìn)了LPIA-100數(shù)據(jù)分布;在EDU存在的情況下樣品數(shù)據(jù)的分布變得更為精確和可靠。尤其是消除了嚴(yán)重的偏移并提高了樣品測定結(jié)果的精確度和可信度。五張圖a-e用來代表200個點-每圖40個點-每個點隨機(jī)分布，以便更好顯示所有數(shù)據(jù)并避免重疊。
實施例2為了說明本發(fā)明所述的非特異性反應(yīng)抑制劑在消除或減少非特異性反應(yīng)時對特異性互補(bǔ)免疫反應(yīng)體的免疫反應(yīng)體反應(yīng)不影響或只產(chǎn)生微小影響，下面的實驗將對此做出驗證。
制備抗-HBs抗體F(ab′)2包裹的膠乳微粒試劑用胃蛋白酶水解抗肝炎-B表面抗原抗體的免疫球蛋白成分，然后用Sephacryl S-200凝膠過濾柱色譜純化，可得抗體的F(ab′)2碎片。
該F(ab′)2與聚苯乙烯膠乳微粒在0.1M緩血酸胺緩沖液pH8中混合，然后對該混合物進(jìn)行離心處理，用牛血清清蛋白更換上層清液以使微粒穩(wěn)定。
經(jīng)過數(shù)次離心循環(huán)洗滌，微粒顆粒最后在儲存介質(zhì)中再懸浮和聲處理，然后可用作抗-HBs抗體膠乳微粒試劑。
樣品測定的試驗條件上述微粒用實施例1所用的LPIA-100儀器進(jìn)行如下測定試驗，只是用緩血酸胺-鹽水緩沖液(pH8.2)代替抗體試劑并且波長改為950nm。
試驗1.篩選非特異性凝集樣品一些已被單獨用RIA證實同HBs抗原在一起時為陰性的普通血清樣品在不加EDU時用LPIA測試表現(xiàn)出有非特異性反應(yīng)的樣品(即樣品呈現(xiàn)假性陽性結(jié)果;樣品2，8，11和14)被選擇出來。
這些被選擇的假性陽性的樣品(即有非特異性反應(yīng)的樣品)在0.50，100mM EDU存在條件下反應(yīng)后，再用LPIA分析核對。結(jié)果如圖3所示。
最后，EDU對免疫測定反應(yīng)性的影響與HBs表面抗原校準(zhǔn)物核對，用以確定EDU是否特異性抑制非特異性反應(yīng)或是否簡單降低試劑反應(yīng)性。
測定含已知總量的HBs表面抗原和不同濃度EDU的樣品，并與無EDU的標(biāo)準(zhǔn)曲線對照。即使在有100mM EDU的情況下，只看到反應(yīng)性下降15%。
基于上述試驗可表明EDU對非特異性凝集有強(qiáng)的防止作用，并且對特異性互補(bǔ)免疫反應(yīng)體的免疫反應(yīng)體相互作用不影響或只產(chǎn)生很小影響。
實施例3人血清清蛋白(HSA)包裹的微盤的制備以本領(lǐng)域已知的方法，使用EDC用HSA使經(jīng)羧化物改良的微盤(Sumitomo Bakelite)活化。
估價加入EDU的影響的試驗系統(tǒng)在實施例1中描述的六個從地高新非特異性反應(yīng)篩選(未加EDU)中篩選的表現(xiàn)非特異性反應(yīng)的偏離樣品(樣品5，7，18，38，46，65)和兩個普通(非分離物)樣品(NC1和NC2)進(jìn)行如下測定30倍稀釋的血清樣品與微盤反應(yīng)60分鐘，經(jīng)數(shù)次洗滌后盤與3000倍稀釋的家兔抗人免疫球蛋白抗體反應(yīng)60分鐘。盤再經(jīng)數(shù)次洗滌，然后與堿性磷酸酯酶標(biāo)記的山羊抗家兔免疫球蛋白反應(yīng)60分鐘。
在最后洗滌之后，將可產(chǎn)生堿性磷酸酯酶的底物的顏色溶液加入盤中，通過測定顏色的強(qiáng)度來測定人球蛋白的存在及其總量。用含50mM EDU的稀釋劑稀釋的樣品測定加入EUD產(chǎn)生的影響。
結(jié)論如圖4所示，EDU的加入明顯降低了相應(yīng)的高免疫球蛋白在分離物樣品(非特異性反應(yīng)樣品)存在時對微盤的附著。普通樣品在無EDU時表現(xiàn)出的對免疫球蛋白結(jié)合的降低程度與有EDU存在時并無什么大變化。這樣EDU的存在明顯降低了免疫球蛋白在固體盤狀載體上的非特異結(jié)合，減少了假性陽性結(jié)果。如此便論證了本發(fā)明所述的物質(zhì)對諸如微盤酶免疫試驗等的影響。
實施例4圖5所示的11種化合物加入到3種表現(xiàn)出非特異性反應(yīng)的樣品(HR1，HR2，HR3)(即實施例1中的分離物樣品)中，如實施例1那樣在LPIA-100系統(tǒng)上測定。結(jié)果見表1。表中的數(shù)字用%值表示相對的反應(yīng)性，其中100%相應(yīng)于以圖1和圖2的標(biāo)準(zhǔn)曲線為基準(zhǔn)的預(yù)期的反應(yīng)性。
表1的結(jié)果可表明本發(fā)明所述的仲胺和叔胺可減少非特異性反應(yīng)而伯胺的效果則差得很遠(yuǎn)。
表1
表1(續(xù)) 很明顯，基于上述技術(shù)的啟發(fā)，本發(fā)明還可能有很多改變和變化。應(yīng)當(dāng)認(rèn)識到在所附權(quán)利要求的范圍里本發(fā)明可以通過除在此特別闡述的方法以外的形式得以實施。
權(quán)利要求
1.一種組合物，包括一種用免疫反應(yīng)體活化的固體載體和一種用下面通式表達(dá)的非特異性反應(yīng)抑制劑， 其中X是-NH-(CO)-NH-，-NH-(CS)-NH-， 或-N=C=N-，R1與R2可以相同，也可不同，R1與R2是C1-C5的直鏈或支鏈烷基，或R1與R2與氮原子一起為 或是其N-甲基-對-甲苯磺酸鹽，Y可以相同或不同，是H、OH和鹵素中任意一個，R3是-NR1R2、-NH2，-CHY，環(huán)己基或H，m是0至5的整數(shù)，p是0至5的整數(shù)，n是0或1假如當(dāng)n=1，m與p中至少有一個是至少1或假如m=n=p=0時，R3是H或-CH2Y和其酸加成鹽。
2.如權(quán)利要求1所述的組合物，其特征在于還包括一含水溶劑。
3.如權(quán)利要求1所述的組合物，其特征在于還包括與所述免疫反應(yīng)體特異性結(jié)合的互補(bǔ)免疫反應(yīng)體。
4.如權(quán)利要求2所述的組合物，其特征在于所述的非特異性反應(yīng)抑制劑的含量以含水溶劑的體積為基礎(chǔ)，從0.1至300mM。
5.如權(quán)利要求1所述的組合物，其特征在于所述的固體載體是一種膠乳微粒，所述的免疫反應(yīng)體與所述的膠乳顆粒靠1-乙基-3-(3-二甲氨丙基)碳化二亞胺連結(jié)，所述的非特異性反應(yīng)抑制劑是1-乙基-3-(3-二甲氨丙基)尿素。
6.如權(quán)利要求1所述的組合物，其特征在于所述的非特異性反應(yīng)抑制劑是1-乙基-3-(3-二甲氨丙基)尿素或1-環(huán)己基-3-3(2-嗎啉代乙基)尿素N-甲-對-甲苯磺酸鹽
7.如權(quán)利要求1所述的組合物，其特征在于所述非特異性反應(yīng)抑制劑從下列化合物中選擇二甲胺、二乙胺、二丙胺、N-N-二甲乙胺、3-二甲氨基丙胺、3-二乙氨基丙胺、二甲氨基氯化丙烷和1，3-雙(二甲氨基)-2-丙醇
8.一種試劑盒，包括第一和第二試劑包，所述第一試劑包包括一種由免疫反應(yīng)體活化的固體載體，所述第二試劑包包括一種具有下列通式的非特異性反應(yīng)抑制劑， 其中X是-NH-(CO)-NH-，-NH-(CS)-NH-， N＝C＝N 或-N＝C＝N-R1與R2可以相同，也可以不同R1與R2是C1-C5的直鏈或支鏈烷基，或R1與R2與氮原子一起是 或是其N-甲基-對-甲苯磺酸鹽Y可以相同或不同，是H、OH和鹵素中任意一個R3是-NR1R2，-NH2，-CHY，環(huán)己基或Hm是0至5的整數(shù)p是0至5的整數(shù)n是0或1假如n＝1，m與p中至少有一個是至少1和假如m＝n＝p＝0時，R3是H或-CH2Y和其酸加成鹽。
9.一種免疫測定方法，包括加入一種非特異性反應(yīng)抑制劑到待測的樣品，到以免疫反應(yīng)體活化的固體載體，或到待測的樣品和以免疫反應(yīng)體活化的固體載體兩者中的步驟，該非特異性反應(yīng)抑制劑的通式為 其中X是-NH-(CO)-NH-，-NH-(CS)-NH-， N＝C＝N 或-N＝C＝N-;R1與R2可以相同，也可以不同R1與R2是C1-C5的直鏈或支鏈烷基，或R1與R2與氮原子一起是 或是其N-甲基-對-甲苯磺酸鹽Y可以相同或不同，是H，OH和鹵素(Br，Cl，F(xiàn))中任意一個R3是-NR1R2，-NH2，-CHY，環(huán)己基或Hm是0至5的整數(shù)p是0至5的整數(shù)n是0或1假如n＝1，m與p至少有一個是至少1和假如m＝n＝p＝0時，R3是H或-CH2Y，和其酸加成鹽。
10.權(quán)利要求9所述的方法，其特征在于所述免疫測定方法為凝聚測定法。
11.權(quán)利要求10所述的方法，其特征在于所述非特異性反應(yīng)抑制到是1-乙基-3-(3-二甲氨丙基尿素)。
12.權(quán)利要求9所述的方法、其特征在于非特異性反應(yīng)抑制劑選自如下化合物二甲胺、二乙胺、二丙胺、N，N-二甲乙胺、3-二甲氨基丙胺，3-二乙氨基丙胺、二甲氨基氯代丙烷、1，3-雙(二甲氨基)-2-丙醇。
全文摘要
一種用于免疫測定的非特異性反應(yīng)抑制劑，具有下面的通式其中R
文檔編號G01N33/531GK1111016SQ9510279
公開日1995年11月1日 申請日期1995年2月8日 優(yōu)先權(quán)日1994年2月9日
發(fā)明者伊藤道雄, 須川聰, 柳田厚司 申請人:三菱化學(xué)株式會社