一種桑黃的薄層色譜鑒定方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及生物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種桑黃的薄層色譜鑒定方法。
【背景技術(shù)】
[0002]桑黃(Inonotus Sang Huang)，又名桑耳，桑臣，以寄生于桑樹(shù)上面而得名。桑黃作為一種珍貴的藥用真菌，具有提高機(jī)體免疫力，抗腫瘤，抵抗細(xì)胞突變，抗菌，抑制肝纖維化，止血活血降血糖、抑菌消炎，治療癌癥、肝炎等作用。大量科學(xué)研究發(fā)現(xiàn)桑黃有抑制癌細(xì)胞生長(zhǎng)作用，抗癌率高達(dá)96.7%，為目前國(guó)際公認(rèn)的生物抗癌領(lǐng)域中藥效最好的藥用真菌。桑黃因其極高的保健功效，被譽(yù)為“森林黃金”。
[0003]然而目前市場(chǎng)上桑黃種類繁多，很多商家以次充好，甚至魚(yú)目混珠，急需制定一種鑒別桑黃的方法。桑黃在已經(jīng)被大家熟知的抗癌菌類中作用是最明顯的，人們慢慢了解到桑黃的抗癌原理，深層栽培的技術(shù)逐漸成熟，應(yīng)用前景非常樂(lè)觀。韓國(guó)桑黃的子實(shí)體的售價(jià)已達(dá)到2300美元，相當(dāng)于非常珍貴的藥材的價(jià)格了，根據(jù)經(jīng)濟(jì)學(xué)的定價(jià)理論，珍貴藥材桑黃的藥用前景十分明朗，因此桑黃的鑒別對(duì)于桑黃的應(yīng)用有十分重大的意義。在桑黃使用的過(guò)程中如果出現(xiàn)了不同種的桑黃錯(cuò)誤使用，濫用，這會(huì)損害到接下來(lái)的研發(fā)食品。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]發(fā)明目的:本發(fā)明要解決的是市場(chǎng)流通與銷(xiāo)售的桑黃品種優(yōu)劣難于分真?zhèn)蔚募夹g(shù)問(wèn)題。本發(fā)明的目的是提供一種桑黃的薄層色譜鑒定方法。
[0005]技術(shù)方案:為了解決上述技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明提供了一種桑黃的薄層色譜鑒定方法，具體步驟如下:
[0006]I)首先將桑黃研磨為粉末，用稱量天平精確稱取該粉末2g，加入50mL乙醇，加熱回流，3h后，過(guò)濾，然后將濾液蒸干，殘?jiān)偌?mL甲醇使桑黃殘?jiān)浞秩芙夂?，乙酸乙酯萃取兩次，每?0mL，蒸干萃取液，加入甲醇使之溶解，這個(gè)作為供試樣；
[0007]2)吸取5 yL上述溶液各于同一薄板上點(diǎn)上，同一展開(kāi)劑，先展開(kāi)，再取出，再晾干，置紫外光燈365nm下檢視，最后拍照，在薄板上可以很穩(wěn)定的顯示出清晰條帶，且樣品中條帶呈現(xiàn)出規(guī)律的一致性，在3小時(shí)內(nèi)熒光顯色較為穩(wěn)定，即可判斷為桑黃。
[0008]其中，上述乙醇為100%乙醇或者70%乙醇。
[0009]其中，上述薄板為硅膠G板或聚酰胺薄板。
[0010]其中，上述展開(kāi)劑為甲苯、乙酸乙酯和甲酸，其中，甲苯:乙酸乙酯:甲酸為5:4:1。
[0011]其中，上述展開(kāi)劑為正己烷、乙酸乙酯和乙酸，其中，正己烷:乙酸乙酯:乙酸為
10:1:1ο
[0012]有益效果:本發(fā)明具有以下優(yōu)點(diǎn):本發(fā)明提供了一種準(zhǔn)確、穩(wěn)定而又快速的鑒別桑黃的方法，從得到桑黃樣品到得到鑒定結(jié)果僅需要8個(gè)小時(shí)。
【附圖說(shuō)明】
[0013]圖1是不同桑黃提取液上樣量對(duì)薄層層析的影響(I號(hào)泳道:上樣量為I μ L ;2號(hào)泳道:上樣量為3 μ L ;3號(hào)泳道:上樣量為5 μ L);
[0014]圖2為考察不同樣品方法對(duì)薄層層析的影響；1號(hào)泳道代表:100%乙醇回流提取桑黃樣品；2號(hào)泳道代表:70%乙醇回流提取桑黃樣品；3號(hào)泳道代表:100%乙醇回流提取另一桑黃樣品；4號(hào)泳道代表:70%乙醇回流提取另一桑黃樣品；
[0015]圖3十二種不同來(lái)源桑黃樣品在娃膠G板中展開(kāi)圖(展開(kāi)劑:正己燒:乙酸乙酯:乙酸=10:1:1)；
[0016]圖4十二種不同來(lái)源桑黃樣品在聚酰胺板中展開(kāi)圖；(展開(kāi)劑:甲苯:乙酸乙酯:甲酸=5:4:1)；
[0017]圖5各個(gè)樣品在娃膠G板中圖(展開(kāi)劑:甲苯:乙酸乙酯:甲酸=5:4:1) ;1號(hào)泳道代表:桑都仿生桑黃樣品；2號(hào)泳道代表:樺樹(shù)桑黃樣品；3號(hào)泳道代表:千島湖野生桑黃樣品；4號(hào)泳道代表:楊樹(shù)桑黃樣品；5號(hào)泳道代表:云南野生桑黃樣品；6號(hào)泳道代表:榆林柳桑黃樣品；7號(hào)泳道代表:臭松樹(shù)桑黃樣品；8號(hào)泳道代表:暴馬子樹(shù)桑黃樣品；9-11號(hào)泳道代表:桑都仿生桑黃樣品(四批樣品)；
[0018]圖6考查了十批桑黃十批樣品在硅膠G板中的展開(kāi)情況；
[0019]圖7考查了硅膠G板放置3小時(shí)后365nm處熒光圖。
【具體實(shí)施方式】
[0020]下面結(jié)合具體實(shí)施例進(jìn)一步說(shuō)明本發(fā)明的技術(shù)方案，以下結(jié)合實(shí)例進(jìn)一步說(shuō)明本發(fā)明，但這些實(shí)例并不用來(lái)限制本發(fā)明。
[0021 ] 本發(fā)明的實(shí)驗(yàn)方法及參數(shù):
[0022]1.主要材料:桑黃(浙江千島湖桑都食用菌合作社人工袋料栽培桑黃已獲得成功，共收集10批樣品進(jìn)行實(shí)驗(yàn)研究);朽木、泥沙或培養(yǎng)基質(zhì)；冰箱；
[0023]2.主要試劑:無(wú)水乙醇，甲醇，石蠟，乙酸乙酯，硅膠G薄層板、聚酰胺薄板，甲苯-乙酸乙酯-甲酸，蒸餾水，硫酸，苯酚，90%乙醇溶液，葡萄糖等；
[0024]3.主要儀器:紅外光譜檢測(cè)儀；高溫烘箱；計(jì)算機(jī)圖像分析系統(tǒng)；紫外分光光度計(jì)；倒置式顯微鏡；電子天平。
[0025]實(shí)施例1薄層色譜法鑒定桑黃
[0026]用稱量天平精確稱取該粉末2g，加入50mL無(wú)水乙醇，加熱回流，3h后，過(guò)濾，然后將濾液蒸干，殘?jiān)偌?mL甲醇使桑黃殘?jiān)浞秩芙?，乙酸乙酯萃取兩次，每?0mL。蒸干萃取液，加入甲醇使之溶解，這個(gè)作為供試樣。按照薄層色譜法(《中國(guó)藥典》2010年版一部附錄VIB)試驗(yàn)，吸取1、3、5 μ L上述溶液各于同一薄板上點(diǎn)上，同一展開(kāi)劑，先展開(kāi)，再取出，再晾干，置紫外光燈(365nm)下檢視，最后拍照?？疾炝瞬煌蠘恿繉?duì)薄層層析的影響，結(jié)果表明:盡管I μ L、3 μ L的上樣量能跑出清晰的條帶，但對(duì)于一些含量較少的條帶并不能很好的顯示，因此實(shí)驗(yàn)選用上樣量為5 μ L。參見(jiàn)圖1。
[0027]實(shí)施例2
[0028]考查100%乙醇和70%乙醇溶液回流提取對(duì)薄層層析的影響的影響以及顯色的穩(wěn)定性，其他步驟同實(shí)施例1。結(jié)果如圖2所示。由圖可知，100%乙醇的提取物的薄層效果較佳。而應(yīng)用70%乙醇回流提取兩樣品產(chǎn)物會(huì)造成樣品中某些產(chǎn)物的缺失，故實(shí)驗(yàn)選用100%乙醇回流提取的方法處理樣品。
[0029]實(shí)施例3
[0030]考查不同材質(zhì)薄板對(duì)薄層層析的影響是其他方面相同，分別在硅膠G板和聚酰胺薄板中展開(kāi)，其他步驟同實(shí)施例1。參見(jiàn)圖4、5。由圖可以看出，圖5中的硅膠G板中的樣品能夠顯示出很明顯的條帶，而圖4中聚酰胺薄板樣品各成成不能夠很好的分離，故實(shí)驗(yàn)選取硅膠G板作為實(shí)驗(yàn)用板。
[0031]實(shí)施例4
[0032]考查不同展開(kāi)劑對(duì)薄層層析的影響以及顯色的穩(wěn)定性是其他方面相同，一個(gè)是以甲苯:乙酸乙酯:甲酸=5:4:1為展開(kāi)劑，一個(gè)是以正己烷:乙酸乙酯:乙酸=10:1:1為展開(kāi)劑，其他步驟同實(shí)施例1。參見(jiàn)圖3和圖5。由圖3看出展開(kāi)劑:正己烷:乙酸乙酯:乙酸=10:1:1并不能很好的將樣品中的成分分開(kāi)，故選用的展開(kāi)劑為甲苯:乙酸乙酯:甲酸=5:4:1。
[0033]實(shí)施例5
[0034]考查了十批桑黃十批樣品在硅膠G板中的展開(kāi)情況，結(jié)果如圖6所示。由圖可知，選用100%乙醇回流提取的方法，展開(kāi)劑選用甲苯:乙酸乙酯:甲酸=5:4:1，在硅膠G板上可以很穩(wěn)定的顯示出清晰條帶，且樣品中條帶呈現(xiàn)出規(guī)律的一致性。
[0035]實(shí)施例6
[0036]考查了娃膠G板放置3小時(shí)后365nm處焚光圖，結(jié)果如圖7所不，由圖可知，選用100%乙醇回流提取的方法，展開(kāi)劑選用甲苯:乙酸乙酯:甲酸=5:4:1，在硅膠G板上可以很穩(wěn)定的顯示出清晰條帶，且樣品中條帶呈現(xiàn)出規(guī)律的一致性，在3小時(shí)內(nèi)熒光顯色較為穩(wěn)定，該方法較為適應(yīng)于桑黃鑒定。
[0037]以上所述僅是本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方式，應(yīng)當(dāng)指出:對(duì)于本技術(shù)領(lǐng)域的技術(shù)人員來(lái)說(shuō)，在不脫離本發(fā)明原理的前提下，還可以做出若干改進(jìn)和潤(rùn)飾，這些改進(jìn)和潤(rùn)飾也應(yīng)視為本發(fā)明的保護(hù)范圍。
【主權(quán)項(xiàng)】
1.一種桑黃的薄層色譜鑒定方法，其特征在于，具體步驟如下: 1)首先將桑黃研磨為粉末，用稱量天平精確稱取該粉末2g，加入50mL乙醇，加熱回流，3h后，過(guò)濾，然后將濾液蒸干，殘?jiān)偌?mL甲醇使桑黃殘?jiān)浞秩芙夂?，乙酸乙酯萃取兩次，每?0mL，蒸干萃取液，加入甲醇使之溶解，這個(gè)作為供試樣； 2)吸取5yL上述供試樣溶液各于同一薄板上點(diǎn)上，同一展開(kāi)劑，先展開(kāi)，再取出，再晾干，置紫外光燈365nm下檢視，最后拍照，在薄板上可以很穩(wěn)定的顯示出清晰條帶，且樣品中條帶呈現(xiàn)出規(guī)律的一致性，在3小時(shí)內(nèi)熒光顯色較為穩(wěn)定，即可判斷為桑黃。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種桑黃的薄層色譜鑒定方法，其特征在于，所述乙醇為100%乙醇或者70%乙醇。3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種桑黃的薄層色譜鑒定方法，其特征在于，所述薄板為硅膠G板或聚酰胺薄板。4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種桑黃的薄層色譜鑒定方法，其特征在于，所述展開(kāi)劑為甲苯、乙酸乙酯和甲酸，其中，甲苯:乙酸乙酯:甲酸為5:4:1。5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種桑黃的薄層色譜鑒定方法，其特征在于，所述展開(kāi)劑為正己烷、乙酸乙酯和乙酸，其中，正己烷:乙酸乙酯:乙酸為10:1:1。
【專利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了一種桑黃的薄層色譜鑒定方法，具體步驟如下：首先將桑黃研磨為粉末，用稱量天平精確稱取該粉末2g，加入50mL乙醇，加熱回流，3h后，過(guò)濾，然后將濾液蒸干，殘?jiān)偌?mL甲醇能讓使桑黃殘?jiān)浞秩芙猓┰嚻啡芤河靡宜嵋阴ポ腿纱?，每?0mL，蒸干萃取液，加入甲醇使之溶解，這個(gè)作為供試樣；吸取5μL上述供試樣溶液各于同一薄板上點(diǎn)上，同一展開(kāi)劑，先展開(kāi)，再取出，再晾干，置紫外光燈365nm下檢視，最后拍照，在薄板上可以很穩(wěn)定的顯示出清晰條帶，且樣品中條帶呈現(xiàn)出規(guī)律的一致性，在3小時(shí)內(nèi)熒光顯色較為穩(wěn)定，即可判斷為桑黃。且在3小時(shí)內(nèi)熒光顯色較為穩(wěn)定，該法簡(jiǎn)便，高效，可用于快速鑒定桑黃。
【IPC分類】G01N30/90
【公開(kāi)號(hào)】CN105044271
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510471217
【發(fā)明人】聞燕, 張攀杰, 季娟, 徐安捷, 李曉彤
【申請(qǐng)人】江蘇科技大學(xué)
【公開(kāi)日】2015年11月11日
【申請(qǐng)日】2015年8月4日