本發(fā)明屬于薄層色譜領(lǐng)域，具體涉及一種關(guān)于甘草的薄層色譜鑒別方法及其應(yīng)用。
背景技術(shù)：
：甘草為豆科植物甘草、脹果甘草、光果甘草的干燥根和根莖。春秋二季采挖，除去須根，曬干所得。甘草具有補(bǔ)脾益氣，清熱解毒，祛痰止咳，緩急止痛，調(diào)和諸藥等作用，用于脾胃虛弱，倦怠乏力，心悸氣短，脘腹攣急疼痛，癰腫瘡毒，緩解藥物毒性、烈性，主要成分有甘草酸銨、甘草甙、甘草甜素、甘草次酸等。為了更有效地控制該產(chǎn)品質(zhì)量，保證臨床用藥效果，本文根據(jù)甘草的理化性質(zhì)甘草進(jìn)行了薄層色譜定性鑒別，確定了可行的質(zhì)量控制方法。薄層色譜鑒別方法是目前國(guó)家中藥制劑標(biāo)準(zhǔn)中最常見(jiàn)的鑒別方法，它具有所用設(shè)備簡(jiǎn)單，操作簡(jiǎn)便、快捷，專(zhuān)屬性強(qiáng)的特點(diǎn)，能在復(fù)雜成分中檢測(cè)出某單一成分，特別適用于中成藥制劑中某單一中藥或成分的確認(rèn)。中藥制劑大多缺乏質(zhì)量控制指標(biāo)，根據(jù)傳統(tǒng)中成藥成分多的特點(diǎn)，應(yīng)側(cè)重研究建立薄層色譜鑒別方法，以鑒別中成藥中比較明確的主要藥液成分或已知成分。由于中成藥成分復(fù)雜，應(yīng)選擇合適的薄層板、展開(kāi)劑及顯色方法等色譜條件，使用恰當(dāng)?shù)姆椒ㄌ崛〖兓瘷z測(cè)品，盡量把干擾成分減至最低程度，使所得圖譜達(dá)到清晰度高、分離度好、斑點(diǎn)明顯、重現(xiàn)性好的要求。為建立簡(jiǎn)便快速、專(zhuān)屬性強(qiáng)和重現(xiàn)好的薄層鑒別方法，本試驗(yàn)參考《中華人民共和國(guó)獸藥典》2010版第二部及相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道，對(duì)甘草的薄層鑒別方法進(jìn)行了研究和改進(jìn)，進(jìn)而建立甘草質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)控制的薄層鑒別方法。但是藥典方法采用乙醚處理樣品，乙醚易糊化于玻璃容器中，難以過(guò)濾；并且將提取后的濾液揮去乙醚，樣品中含有水，難以確定乙醚揮發(fā)的程度，從而影響到樣品后續(xù)的提取，且對(duì)樣品中成分提取不充分，同時(shí)乙醚對(duì)人體有一定的危害。改進(jìn)后的方法減去了樣品用乙醚處理的步驟并增強(qiáng)了分離效果，既沒(méi)有影響色譜斑點(diǎn)的檢出，又解決了樣品糊化黏附和過(guò)濾的問(wèn)題，減少了對(duì)人體的危害。所以亟需對(duì)現(xiàn)有的甘草薄層鑒別方法進(jìn)行研究和改進(jìn)，提供一種清晰度高、分離度好、斑點(diǎn)明顯、重現(xiàn)性好的甘草薄層色譜方法。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：有鑒于此，本發(fā)明的目的在于提供一種關(guān)于甘草的薄層色譜鑒別方法及其應(yīng)用。為達(dá)到上述目的，本發(fā)明提供如下技術(shù)方案：一種關(guān)于甘草的薄層色譜鑒別方法，操作方法如下：取1～2ul甘草檢測(cè)品、對(duì)照藥材及標(biāo)準(zhǔn)品溶液點(diǎn)樣于薄層板，在展開(kāi)缸中加入展開(kāi)劑，所述的展開(kāi)劑為氯仿、甲醇、甲酸和乙酸乙酯以體積比10:3:2:3混勻，待展開(kāi)劑飽和展開(kāi)缸后將點(diǎn)好樣的薄層板放置其中，展開(kāi)至13cm處取出薄層板晾干，噴10％硫酸乙醇溶液顯色，105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，在365nm紫外光下視檢。進(jìn)一步，點(diǎn)樣基線(xiàn)距底1.0cm，點(diǎn)間距離為大于1.2cm。進(jìn)一步，所述的甘草檢測(cè)品制備方法為：甘草粉碎過(guò)12目篩，所得粉末加甲醇回流1h，放至18～25℃過(guò)濾，濾液過(guò)中性氧化鋁柱，用甲醇洗脫，收集洗脫液并用水飽和正丁醇液提取，最后蒸干正丁醇液，再加甲醇制得甘草檢測(cè)品。進(jìn)一步，所述的甘草檢測(cè)品制備方法為：(1)甘草粉碎過(guò)12目篩，所得粉末加甲醇加熱回流1h，所述甘草粉末和甲醇質(zhì)量體積比(mg：ml)為1:10，放至18～25℃過(guò)濾，濾液過(guò)中性氧化鋁柱，再用與甘草粉末體積比(mg：ml)為1:10的40％甲醇洗脫，收集洗脫液；(2)將步驟(1)洗脫液蒸干，殘?jiān)铀盟柡驼〈家禾崛?次，每次體積為甘草粉末質(zhì)量的6倍，合并正丁醇液，用水洗滌2次，棄去水液，蒸干正丁醇液，殘?jiān)蛹状既芙?，所述水、甲醇和水飽和正丁醇液體積比為2:0.3:3。進(jìn)一步，以上所述的薄層色譜鑒別方法在甘草質(zhì)量鑒定中的應(yīng)用。本發(fā)明的有益效果在于：根據(jù)本發(fā)明提供的甘草薄層色譜鑒別方法鑒別甘草，確定更可靠的質(zhì)量控制方法，本發(fā)明提供的甘草薄層色譜鑒別方法所得圖譜清晰度高、分離度好、斑點(diǎn)明顯、重現(xiàn)性好。附圖說(shuō)明為了使本發(fā)明的目的、技術(shù)方案和有益效果更加清楚，本發(fā)明提供如下附圖進(jìn)行說(shuō)明：圖1為檢測(cè)品制備方法1、2、3、4、5所制備的甘草檢測(cè)品點(diǎn)樣后置于展開(kāi)劑1中所得到的圖片；圖2為檢測(cè)品制備方法1、2、3、4、5所制備的甘草檢測(cè)品點(diǎn)樣后置于展開(kāi)劑2中所得到的圖片；圖3為檢測(cè)品制備方法1、2、3、4、5所制備的甘草檢測(cè)品點(diǎn)樣后置于展開(kāi)劑3中所得到的圖片；圖4為檢測(cè)品制備方法1、2、3、4、5所制備的甘草檢測(cè)品點(diǎn)樣后置于展開(kāi)劑4中所得到的圖片；圖5為檢測(cè)品制備方法1、2、3、4、5所制備的甘草檢測(cè)品點(diǎn)樣后置于展開(kāi)劑5中所得到的圖片；圖6為檢測(cè)品制備方法1制備的甘草檢測(cè)品、對(duì)照藥材及標(biāo)準(zhǔn)品點(diǎn)樣后置于展開(kāi)劑1中所得圖片；圖7為檢測(cè)品制備方法1制備的甘草檢測(cè)品、對(duì)照藥材及標(biāo)準(zhǔn)品點(diǎn)樣后置于展開(kāi)劑2中所得圖片；圖8為檢測(cè)品制備方法1制備的甘草檢測(cè)品、對(duì)照藥材及標(biāo)準(zhǔn)品點(diǎn)樣后置于展開(kāi)劑3中所得圖片；圖9為檢測(cè)品制備方法1制備的甘草檢測(cè)品、對(duì)照藥材及標(biāo)準(zhǔn)品點(diǎn)樣后置于展開(kāi)劑5中所得圖片；圖10為檢測(cè)品制備方法2制備的甘草檢測(cè)品、對(duì)照藥材及標(biāo)準(zhǔn)品點(diǎn)樣后置于展開(kāi)劑1中所得圖片；圖11為檢測(cè)品制備方法2制備的甘草檢測(cè)品、對(duì)照藥材及標(biāo)準(zhǔn)品點(diǎn)樣后置于展開(kāi)劑2中所得圖片；圖12為檢測(cè)品制備方法2制備的甘草檢測(cè)品、對(duì)照藥材及標(biāo)準(zhǔn)品點(diǎn)樣后置于展開(kāi)劑3中所得圖片；圖13為檢測(cè)品制備方法2制備的甘草檢測(cè)品、對(duì)照藥材及標(biāo)準(zhǔn)品點(diǎn)樣后置于展開(kāi)劑5中所得圖片；圖14為檢測(cè)品制備方法4制備的甘草檢測(cè)品、對(duì)照藥材及標(biāo)準(zhǔn)品點(diǎn)樣后置于展開(kāi)劑1中所得圖片；圖15為檢測(cè)品制備方法4制備的甘草檢測(cè)品、對(duì)照藥材及標(biāo)準(zhǔn)品點(diǎn)樣后置于展開(kāi)劑2中所得圖片；圖16為檢測(cè)品制備方法4制備的甘草檢測(cè)品、對(duì)照藥材及標(biāo)準(zhǔn)品點(diǎn)樣后置于展開(kāi)劑3中所得圖片；圖17為檢測(cè)品制備方法4制備的甘草檢測(cè)品、對(duì)照藥材及標(biāo)準(zhǔn)品點(diǎn)樣后置于展開(kāi)劑5中所得圖片；圖18為檢測(cè)品制備方法5制備的甘草檢測(cè)品、對(duì)照藥材及標(biāo)準(zhǔn)品點(diǎn)樣后置于展開(kāi)劑1中所得圖片；圖19為檢測(cè)品制備方法5制備的甘草檢測(cè)品、對(duì)照藥材及標(biāo)準(zhǔn)品點(diǎn)樣后置于展開(kāi)劑2中所得圖片；圖20為檢測(cè)品制備方法5制備的甘草檢測(cè)品、對(duì)照藥材及標(biāo)準(zhǔn)品點(diǎn)樣后置于展開(kāi)劑3中所得圖片；圖21為檢測(cè)品制備方法5制備的甘草檢測(cè)品、對(duì)照藥材及標(biāo)準(zhǔn)品點(diǎn)樣后置于展開(kāi)劑5中所得圖片；圖22為按照薄層色譜鑒別方法4-5專(zhuān)屬性考察結(jié)果圖片；其中：各照片中數(shù)字為對(duì)應(yīng)的檢測(cè)品制備方法所提取的甘草檢測(cè)品，S為標(biāo)準(zhǔn)品，P為對(duì)照藥材，B為空白溶劑。具體實(shí)施方式下面將結(jié)合附圖，對(duì)本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施例進(jìn)行詳細(xì)的描述。實(shí)施例1甘草薄層色譜鑒別方法用毛細(xì)管分別吸取1～2ul甘草檢測(cè)品、對(duì)照藥材及標(biāo)準(zhǔn)品溶液點(diǎn)樣于薄層板，點(diǎn)樣基線(xiàn)距底1.0cm，點(diǎn)間距離為大于1.2cm，在展開(kāi)缸中加入展開(kāi)劑，輕輕混勻，待展開(kāi)劑飽和展開(kāi)缸后將點(diǎn)好樣的薄層板輕輕放置其中，展開(kāi)至13cm處取出薄層板晾干，噴10％硫酸乙醇溶液顯色，在105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，在紫外光燈(365nm)下視檢。實(shí)施例2檢測(cè)品制備方法和展開(kāi)劑考察方案根據(jù)影響薄層色譜鑒定效果的檢測(cè)品溶液制備、展開(kāi)劑等兩個(gè)條件進(jìn)行考察，以確定最佳方案，甘草檢測(cè)品均重復(fù)3次。甘草檢測(cè)品的制備方法詳見(jiàn)表1，展開(kāi)劑的配方詳見(jiàn)表2，由不同檢測(cè)品制備方法和展開(kāi)劑組合的薄層色譜鑒別方法詳見(jiàn)表3，分別為1-1、1-2、1-3、1-4、1-5、2-1、2-2、2-3、2-4、2-5、3-1、3-2、3-3、3-4、3-5、4-1、4-2、4-3、4-4、4-5、5-1、5-2、5-3、5-4、5-5等25種方法，同時(shí)依據(jù)表4配制相關(guān)的對(duì)照藥材溶液，標(biāo)準(zhǔn)品溶液及采用相應(yīng)的顯色方法。表1甘草檢測(cè)品的制備方法表2薄層色譜展開(kāi)劑的配方展開(kāi)劑1乙酸乙酯-甲酸-冰醋酸-水(15:1:1:2)展開(kāi)劑2正己烷-乙酸乙酯-冰醋酸(10:2:0.5)展開(kāi)劑3氯仿-甲醇(10:1)展開(kāi)劑4正丁醇-冰醋酸-水(2:1:1)展開(kāi)劑5氯仿-甲醇-甲酸-乙酸乙酯(10:3:2:3)表3不同檢測(cè)品制備方法和展開(kāi)劑組合薄層色譜鑒別方法表4對(duì)照藥材溶液、標(biāo)準(zhǔn)品溶液的配制及顯色方法實(shí)施例3制備方法及展開(kāi)劑的初步篩選圖1-5為按照甘草檢測(cè)品制備方法1、2、3、4、5所制備的檢測(cè)品溶液和標(biāo)準(zhǔn)品點(diǎn)樣于同一預(yù)制薄層板上后分別置于展開(kāi)劑1、2、3、4、5號(hào)中所得到的圖片。根據(jù)圖1、圖4、圖5可以觀察到檢測(cè)品色譜中與對(duì)照品色譜中存在相應(yīng)的斑點(diǎn)，可知改變展開(kāi)劑，可能使檢測(cè)品和對(duì)照品目標(biāo)斑點(diǎn)更加明確。圖1、圖4色譜圖中在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，斑點(diǎn)不清晰，對(duì)應(yīng)位置不明確，顯示可疑斑點(diǎn)，分析認(rèn)為：在分離過(guò)程中，沒(méi)有將有效成分與其他成分很好的分離開(kāi)。圖2、圖3中沒(méi)有出現(xiàn)對(duì)照品色譜，但檢測(cè)品分離效果較好。圖1-5中提取方法3所對(duì)應(yīng)的條帶較不清晰，說(shuō)明其有效成分含量較低，不滿(mǎn)足試驗(yàn)條件，舍棄第3種提取方法。通過(guò)圖4可觀察到展開(kāi)劑4分離度較其它展開(kāi)劑較差，又因?yàn)檎归_(kāi)劑4展開(kāi)速度較慢，所需時(shí)間較長(zhǎng)，所以舍棄展開(kāi)劑4，在下面的試驗(yàn)過(guò)程中將針對(duì)展開(kāi)劑1、2、3、5篩選出最好的甘草薄層色譜鑒別條件。實(shí)施例4檢測(cè)品制備方法及展開(kāi)劑的再篩選1制備方法1取1g甘草粉末加乙醚40mL，加熱回流1h，濾液，藥渣加甲醇30mL，加熱回流1h，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)铀?0mL使溶解，用正丁醇提取3次，每次20mL，合并正丁醇液，用水洗滌3次，正丁醇液蒸干，殘?jiān)蛹状?mL溶解，作為檢測(cè)品。采用相同的方法制備對(duì)照藥材溶液，甘草酸銨加甲醇制成濃度為2mg/ml的甘草標(biāo)準(zhǔn)品溶液。用毛細(xì)管分別吸取1～2ul甘草檢測(cè)品、對(duì)照藥材及標(biāo)準(zhǔn)品溶液滴加至薄層板，在4個(gè)展開(kāi)缸中按表2分別配制展開(kāi)劑1號(hào)(乙酸乙酯-甲酸-冰醋酸-水按體積比15:1:1:2混合)，展開(kāi)劑2號(hào)(正己烷-乙酸乙酯-冰醋酸按體積比10:2:0.5混合)，展開(kāi)劑3號(hào)(氯仿-甲醇按體積比10:1混合)，展開(kāi)劑5號(hào)(氯仿-甲醇-甲酸-乙酸乙酯按體積比10:3:2:3混合)，輕輕混勻，待展開(kāi)劑飽和展開(kāi)缸后將點(diǎn)好樣的薄層板分別輕輕放置其中，展開(kāi)至13cm處取出薄層板晾干，噴10％硫酸乙醇溶液顯色，在105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，在紫外光燈(365nm)下視檢，由以上制備方法所得甘草檢測(cè)品、對(duì)照品和標(biāo)準(zhǔn)品在展開(kāi)劑1、2、3、5的條件下所得薄層色譜圖片見(jiàn)附圖6-9。由圖6、圖7、圖8比較可看出，方法1-1中檢測(cè)品及對(duì)照藥材分離度較好，但是與標(biāo)準(zhǔn)品相同位置上無(wú)對(duì)應(yīng)斑點(diǎn)，標(biāo)準(zhǔn)品斑點(diǎn)上移；方法1-2、方法1-3均沒(méi)有出現(xiàn)標(biāo)準(zhǔn)品，且邊緣效應(yīng)較明顯，和展開(kāi)劑有關(guān)。圖9中方法1-5分離度較好，與標(biāo)準(zhǔn)品相同的位置上出現(xiàn)斑點(diǎn)，但是不清晰，是因?yàn)橹苽涞臋z測(cè)品濃度較低所致。由于提取方法1對(duì)待測(cè)樣品中檢測(cè)成分沒(méi)有充分的提取或?qū)ζ渌煞痔崛∵^(guò)多，因此導(dǎo)致其出現(xiàn)邊緣效應(yīng)和目標(biāo)斑點(diǎn)不清晰的，所以對(duì)提取方法1進(jìn)行舍棄。2.制備方法2取甘草粉末5g，加8倍量95％乙醇加熱回流2次，1h/次，濾液回收乙醇，水浴蒸干，用甲醇定容至5ml，即為檢測(cè)品溶液。采用相同的方法制備對(duì)照藥材溶液，甘草酸銨加甲醇制成濃度為2mg/ml的甘草標(biāo)準(zhǔn)品溶液。用毛細(xì)管分別吸取1～2ul甘草檢測(cè)品、對(duì)照藥材及標(biāo)準(zhǔn)品溶液滴加至薄層板，在4個(gè)展開(kāi)缸中按表2分別配制展開(kāi)劑1號(hào)(乙酸乙酯-甲酸-冰醋酸-水按體積比15:1:1:2混合)，展開(kāi)劑2號(hào)(正己烷-乙酸乙酯-冰醋酸按體積比10:2:0.5混合)，展開(kāi)劑3號(hào)(氯仿-甲醇按體積比10:1混合)，展開(kāi)劑5號(hào)(氯仿-甲醇-甲酸-乙酸乙酯按體積比10:3:2:3混合)，輕輕混勻，待展開(kāi)劑飽和展開(kāi)缸后將點(diǎn)好樣的薄層板分別輕輕放置其中，展開(kāi)至13cm處取出薄層板晾干，噴10％硫酸乙醇溶液顯色，在105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，在紫外光燈(365nm)下視檢，由以上制備方法所得甘草檢測(cè)品、對(duì)照藥材和標(biāo)準(zhǔn)品在展開(kāi)劑1、2、3、5的條件下所得薄層色譜圖片見(jiàn)附圖10-13。由圖10、圖11、圖12、圖13比較可看出，分離度均較好，在與標(biāo)準(zhǔn)品相同的位置上圖13出現(xiàn)斑點(diǎn)，但比移值較??；圖10雖有斑點(diǎn)出現(xiàn)，但與標(biāo)準(zhǔn)品出現(xiàn)位置較不一致；圖11、圖12沒(méi)有出現(xiàn)標(biāo)準(zhǔn)品斑點(diǎn)，且圖12邊緣效應(yīng)明顯可能與點(diǎn)樣量過(guò)多有關(guān)。3.制備方法4取5g過(guò)12目篩的甘草粉末，加50ml甲醇加熱回流1h，放至18～25℃過(guò)濾，濾液加于中性氧化鋁柱上，用50ml40％甲醇洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘?jiān)铀?0ml，用水飽和的正丁醇液提取2次，每次30ml，合并正丁醇液，用水洗滌2次，每次20ml，棄去水液，蒸干正丁醇液，殘?jiān)?ml甲醇即制得檢測(cè)品溶液。采用相同的方法制備對(duì)照藥材溶液，甘草酸銨加甲醇制成濃度為2mg/ml的甘草標(biāo)準(zhǔn)品溶液。用毛細(xì)管分別吸取1～2ul甘草檢測(cè)品、對(duì)照藥材及標(biāo)準(zhǔn)品溶液滴加至薄層板，在4個(gè)展開(kāi)缸中按表2分別配制展開(kāi)劑1號(hào)(乙酸乙酯-甲酸-冰醋酸-水以體積比15:1:1:2混合)，展開(kāi)劑2號(hào)(正己烷-乙酸乙酯-冰醋酸以體積比10:2:0.5混合)，展開(kāi)劑3號(hào)(氯仿-甲醇以體積比10:1混合)，展開(kāi)劑5號(hào)(氯仿-甲醇-甲酸-乙酸乙酯以體積比10:3:2:3混合)，輕輕混勻，待展開(kāi)劑飽和展開(kāi)缸后將點(diǎn)好樣的薄層板分別輕輕放置其中，展開(kāi)至13cm處取出薄層板晾干，噴10％硫酸乙醇溶液顯色，在105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，在紫外光燈(365nm)下視檢，由以上制備方法所得甘草檢測(cè)品、對(duì)照藥材和標(biāo)準(zhǔn)品在展開(kāi)劑1、2、3、5的條件下所得薄層色譜圖片見(jiàn)附圖14-17。由圖14、圖15、圖16、圖17可看出，該提取方法在展開(kāi)劑1、2、3、5中均有較好的分離度，無(wú)拖尾現(xiàn)象，圖15、16中沒(méi)有標(biāo)準(zhǔn)品斑點(diǎn)出現(xiàn)；圖14、17肉眼下觀看，在與標(biāo)準(zhǔn)品相同的位置上出現(xiàn)橙色斑點(diǎn)，但圖14中標(biāo)準(zhǔn)品與之對(duì)應(yīng)的位置不明確，圖17中標(biāo)準(zhǔn)品斑點(diǎn)及檢測(cè)品斑點(diǎn)均比較清晰。本提取方法利用水飽和的正丁醇溶液來(lái)增加正丁醇的溶解度使檢測(cè)成分能夠更多的溶解在溶劑中，同時(shí)利用中性氧化鋁柱對(duì)甘草檢測(cè)品進(jìn)行處理，利用其吸附解吸附原理將樣品中成分進(jìn)行粗分離，另展開(kāi)劑5號(hào)可以更好的溶解樣品，且與其極性大小相接近，所以圖17顯示甘草檢測(cè)品分離效果好、斑點(diǎn)清晰。4.制備方法5取6g甘草加飽和正丁醇30ml，超聲20min，濾過(guò)，濾液蒸干，加3ml甲醇即制得檢測(cè)品溶液。采用相同的方法制備對(duì)照藥材溶液，甘草酸銨加甲醇制成濃度為2mg/ml的甘草標(biāo)準(zhǔn)品溶液。用毛細(xì)管分別吸取1～2ul甘草檢測(cè)品、對(duì)照藥材及標(biāo)準(zhǔn)品溶液滴加至薄層板，在4個(gè)展開(kāi)缸中按表2分別配制展開(kāi)劑1號(hào)(乙酸乙酯-甲酸-冰醋酸-水以體積比15:1:1:2混合)，展開(kāi)劑2號(hào)(正己烷-乙酸乙酯-冰醋酸以體積比10:2:0.5混合)，展開(kāi)劑3號(hào)(氯仿-甲醇以體積比10:1混合)，展開(kāi)劑5號(hào)(氯仿-甲醇-甲酸-乙酸乙酯以體積比10:3:2:3混合)，輕輕混勻，待展開(kāi)劑飽和展開(kāi)缸后將點(diǎn)好樣的薄層板分別輕輕放置其中，展開(kāi)至13cm處取出薄層板晾干，噴10％硫酸乙醇溶液顯色，在105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，在紫外光燈(365nm)下視檢，由以上制備方法所得甘草檢測(cè)品、對(duì)照藥材和標(biāo)準(zhǔn)品在展開(kāi)劑1、2、3、5的條件下所得薄層色譜圖片見(jiàn)附圖18-21。由圖18、19、20、21可觀察到，圖18、19、21檢測(cè)品條帶分離度較好，但圖19與標(biāo)準(zhǔn)品斑點(diǎn)相同的位置上沒(méi)有出現(xiàn)相似的斑點(diǎn)，圖18、21中出現(xiàn)標(biāo)準(zhǔn)品斑點(diǎn)，與圖18相比圖21中斑點(diǎn)位置與標(biāo)準(zhǔn)品斑點(diǎn)出現(xiàn)位置更加一致，圖20中有拖尾現(xiàn)象。由以上試驗(yàn)結(jié)果可得出薄層色譜鑒別方法4-5在點(diǎn)樣量為1-2ul，以10％硫酸乙醇溶液為顯色劑，顯色后在105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，紫外光燈(365nm)下視檢所得甘草色譜圖分離效果良好，斑點(diǎn)顯色清晰，重復(fù)性好，精密度高。且檢測(cè)品制備方法為過(guò)12目篩的5g甘草粉末，加50ml甲醇加熱回流1h，放至18～25℃過(guò)濾，濾液加于中性氧化鋁柱上，用50ml質(zhì)量分?jǐn)?shù)為40％甲醇洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘?jiān)铀?0ml，用水飽和的正丁醇提取2次，每次30ml，合并正丁醇液，用水洗滌2次，每次20ml，棄去水液，蒸干正丁醇液，殘?jiān)?ml甲醇得甘草檢測(cè)品，再以氯仿-甲醇-甲酸-乙酸乙酯體積比為10:3:2:3混合為展開(kāi)劑，可得到分離度高、重復(fù)性好的清晰斑點(diǎn)，可用于甘草中甘草的薄層色譜鑒別。實(shí)施例5專(zhuān)屬性考察取甘草粉末適量，按照薄層色譜鑒別方法4-5進(jìn)行檢測(cè)品溶液和展開(kāi)劑的配制，點(diǎn)樣，展開(kāi)和顯色，考察此方法的專(zhuān)屬性。檢測(cè)品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的橙黃色熒光斑點(diǎn)，試驗(yàn)結(jié)果如圖22所示。由圖22測(cè)量原點(diǎn)中心至斑點(diǎn)中心的距離(s1)和原點(diǎn)中心至展開(kāi)前沿的距離(s2)，用s1/s2計(jì)算可得：甘草酸銨組分比移值Rf＝0.275±0.06(n＝9)。分離度(R)的計(jì)算公式為：R＝2(d2-d1)/(W1+W2)，式中d2為相鄰兩斑點(diǎn)中后一斑點(diǎn)與原點(diǎn)的距離，d1為相鄰兩斑點(diǎn)中前一斑點(diǎn)與原點(diǎn)的距離，W1及W2為相鄰兩斑點(diǎn)各自的斑點(diǎn)寬。圖22測(cè)量分離度R＝3.674±0.361(n＝9)，符合薄層色譜鑒別方法對(duì)0.2＜Rf＜0.8，R＞1的要求。實(shí)施例6重復(fù)性考察按制備方法4配制3份檢測(cè)品溶液，點(diǎn)樣、展開(kāi)和顯色，每個(gè)檢測(cè)品做3個(gè)重復(fù)，對(duì)9個(gè)試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行評(píng)價(jià)，考察此法的重復(fù)性，試驗(yàn)結(jié)果數(shù)據(jù)參見(jiàn)表5。表5重復(fù)性試驗(yàn)結(jié)果由表5可知，制備方法4配制的3份檢測(cè)品溶液平均比移值為0.246，標(biāo)準(zhǔn)差為0.041；平均分離度為3.503，標(biāo)準(zhǔn)差為0.154，標(biāo)準(zhǔn)差均較小，說(shuō)明制備方法4配制的檢測(cè)品溶液有較好的重復(fù)性。實(shí)施例7耐用性考察在試驗(yàn)方法基礎(chǔ)上，對(duì)其相應(yīng)色譜條件進(jìn)行改變，對(duì)測(cè)定結(jié)果的色譜圖中目標(biāo)組分的比移至、分離度進(jìn)行測(cè)評(píng)，考察此方法的耐用性，改變條件及結(jié)果見(jiàn)表6。表6耐用性試驗(yàn)結(jié)果根據(jù)表6可知，將制備方法4中加熱回流1h此處理?xiàng)l件分別改為超聲處理1h，加熱回流30min或超聲處理40min后，平均比移值、分離度分別為0.242、3.312，標(biāo)準(zhǔn)差分別為0.042、0.114；將展開(kāi)溫度由室溫分別改為10℃、20℃、30℃，其平均比移值、分離度分別為0.212、3.232，標(biāo)準(zhǔn)差分別為0.038、0.412。根據(jù)以上結(jié)果可知不管是改變樣品處理時(shí)間或展開(kāi)溫度其標(biāo)準(zhǔn)差均較小，說(shuō)明制備方法4有較好的耐用性。最后說(shuō)明的是，以上優(yōu)選實(shí)施例僅用以說(shuō)明本發(fā)明的技術(shù)方案而非限制，盡管通過(guò)上述優(yōu)選實(shí)施例已經(jīng)對(duì)本發(fā)明進(jìn)行了詳細(xì)的描述，但本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解，可以在形式上和細(xì)節(jié)上對(duì)其作出各種各樣的改變，而不偏離本發(fā)明權(quán)利要求書(shū)所限定的范圍。當(dāng)前第1頁(yè)1 2 3