一種柱前衍生化高效液相色譜法測定西洋參中擬人參皂苷f11的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種柱前衍生化高效液相色譜法測定擬人參皂苷Fll的方法，屬于分 析化學(xué)領(lǐng)域。
【背景技術(shù)】
[0002] 西洋參為五加科植物西洋參L.)的干燥根，具有補氣養(yǎng) 精、鎮(zhèn)靜解熱之效，可用于氣虛陰虧，虛熱煩倦，咳喘痰血，內(nèi)熱消渴，口燥咽干等證，近年來 深受大家的青睞。
[0003] 人參為五加科植物人參（C. A. Mey.)的干燥根和根莖，具有大補 元氣、固脫生津的功效。人參主產(chǎn)于我國東北地區(qū)，價格相對便宜。西洋參主產(chǎn)于美國和加 拿大，價格昂貴，且由于西洋參與人參在性狀及其化學(xué)成分上都極其相似，所以近年來以人 參冒充西洋參或在西洋參中摻雜人參的現(xiàn)象屢見不鮮。但二者藥理作用卻相差甚遠，西洋 參滋補降火，人參提氣助火，效用相反。為了保證西洋參的品質(zhì)，確?；颊叩挠盟幇踩瑢ξ?洋參的質(zhì)量品質(zhì)研究十分必要。
[0004] 西洋參與人參的主要活性成分都是人參皂苷，另外還含有大量多糖、氨基酸及聚 乙炔等其它成分。研究表明，人參皂苷具有保護心腦血管系統(tǒng)，提高免疫功能，抗衰老和抗 疲勞，調(diào)節(jié)中樞神經(jīng)系統(tǒng)，調(diào)節(jié)內(nèi)分泌系統(tǒng)，抗腫瘤等藥理作用。
[0005] 人參皂苷按結(jié)構(gòu)分類，包括原人參二醇型皂苷，如：人參皂苷Rbl，人參皂苷Rb2， 人參皂苷Rc，人參皂苷Rd等；原人參三醇型皂苷，如：人參皂苷Re，人參皂苷Rgl等；齊墩 果酸型皂苷，如：人參皂苷R〇,人參皂苷R3,人參皂苷R4等；其他類型人參皂苷，如：人參皂 苷Rh3,人參皂苷Rg5,人參皂苷F4等。西洋參中還包括一類特有皂苷成分一奧克梯隆型皂 苷，包括擬人參阜苷Fll等，該成分是區(qū)別西洋參與人參的特征成分。
[0006] 目前對西洋參真?zhèn)蔚难芯糠椒ㄖ饕行誀铊b別、顯微鑒別、薄層鑒別、熒光鑒別、 蛋白電泳鑒別及DNA鑒別等。而利用其化學(xué)成分上的區(qū)別進行品質(zhì)保證的方法很少見。
[0007] 擬人參皂苷Fll是區(qū)別西洋參與人參的特征成分，因此對擬人參皂苷Fll測定的 研究對西洋參的品質(zhì)保證具有非常重要的意義。由于擬人參皂苷Fll結(jié)構(gòu)中無發(fā)色團， 沒有紫外吸收，因此不能采用紫外檢測器檢測。目前發(fā)明專利中，羅國安等人在專利CN 101685089 B中公開了一種通過超高效液相色譜-四級桿-飛行時間質(zhì)譜聯(lián)用測定擬人參 皂苷Fll和人參皂苷Rf來快速檢測西洋參及其制劑質(zhì)量真?zhèn)蔚姆椒?，文獻報道測定西洋參 中擬人參皂苷Fll含量的方法主要集中在HPLC-ELSD上。對于柱前衍生化技術(shù)，李章萬等 人利用柱前衍生化高效液相色譜法測定了紅參及生脈飲注射液中人參二醇和人參三醇的 含量，石李梁等人利用柱前衍生化高效液相色譜法測定了人參中人參二醇的含量。目前暫 無利用柱前衍生化技術(shù)測定西洋參中擬人參皂苷Fll的含量報道。
[0008] 該發(fā)明采用柱前衍生化技術(shù)將擬人參皂苷Fll進行柱前衍生化，引入具有紫外吸 收的苯甲?；梢岳米贤鈾z測器進行檢測，方法簡便、穩(wěn)定，為進一步完善西洋參的質(zhì) 量評價提供了新的思路。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0009] 本發(fā)明所述的柱前衍生化高效液相色譜法測定西洋參中擬人參皂苷Fll的方法， 采用高效液相色譜儀紫外檢測器進行測定，并用外標法進行定量。
[0010] 具體步驟包括： 1. 對照品的制備：精密稱取50mg擬人參皂苷Fll對照品于IOmL棕色容量瓶中，用甲 醇溶解，超聲，放至室溫后定容，搖勻，備用； 2. 樣品的處理：稱取l_2g樣品粉末，加入15-20mL甲醇超聲提取20-30min，放冷過濾， 收集濾液，重復(fù)提取二到三遍，最后一遍過濾后殘渣用少量甲醇沖洗3次并過濾，合并濾液 濃縮。濃縮后殘渣分別用甲醇轉(zhuǎn)移到IOmL棕色容量瓶中，定容，搖勻，備用； 3. 衍生化反應(yīng)條件：擬人參皂苷Fll對照品衍生化反應(yīng)條件為：精密吸取吡啶 0. 8-1. 5mL，分別加入擬人參皂苷Fll對照品溶液0. 5-1. 5mL、苯甲酰氯4-8mL，渦旋混合 10-20min，用甲醇定容到一定體積，備用； 4. 色譜條件：使用十八烷基硅烷鍵合硅膠填料色譜柱，檢測器為紫外-可見光檢測器。 以水為A相，65%-80%乙腈或甲醇水溶液（V/V)為B相進行梯度洗脫，流速為0. 8-1. 2mL/ min，檢測波長為220-250nm，柱溫25-35°C，進樣量為1〇-2〇μL ; 梯度程序：
5. 標準曲線的繪制：取步驟1中配制的擬人參皂苷Fll對照品，用甲醇分別配制擬人 參阜苷Fll濃度為5mg/mL, 4mg/mL, 3mg/mL, 2mg/mL, lmg/mL的溶液，按步驟3中的衍生 化反應(yīng)條件操作，按步驟4的色譜條件進行分析測定，以對照品濃度（μ g/mL)為橫坐標，峰 面積（A)為縱坐標做標準曲線，得到回歸方程式； 6.樣品的測定：按步驟2的方法制備樣品溶液，按步驟3衍生化步驟處理樣品，液相方 法同步驟4,測定擬人參皂苷Fll色譜峰面積。根據(jù)步驟5中回歸方程計算擬人參皂苷Fll 濃度，進而根據(jù)樣品溶液配制方法計算得出擬人參皂苷Fll的含量。
【附圖說明】
[0011] 附圖1為擬人參皂苷Fl 1對照品的高效液相色譜圖。
[0012] 附圖2為西洋參樣品的高效液相色譜圖。
【具體實施方式】
[0013] 實施例1 : 1. 對照品的制備：精密稱取擬人參皂苷Fll對照品（純度為97. 5%)51. 431mg于IOmL棕 色容量瓶中，用甲醇溶解，超聲，放至室溫后定容，搖勻，備用，對照品溶液濃度為5. 0145mg/ mL ； 2. 樣品的處理：分別精密稱取西洋參根粉末I. 021g，I. 015g，I. 023g于50mL錐形瓶 中，分別加入20mL甲醇超聲提取30min，放至室溫后過濾至250mL圓底燒瓶中，重復(fù)提取三 次，最后一遍過濾后殘渣用少量甲醇沖洗3次并過濾，每次15mL，合并濾液濃縮。濃縮后殘 渣分別用甲醇轉(zhuǎn)移到IOmL棕色容量瓶中，定容，搖勻，備用； 3. 色譜條件：使用C18色譜柱，檢測器為紫外-可見光檢測器。以水為A相，75%乙腈 水溶液（V/V)為B相進行梯度洗脫，流速為1.0 mL/min，檢測波長為230nm，柱溫30°C，進樣 量為2〇μL ; 4. 衍生化反應(yīng)：取5個IOmL棕色容量瓶，分別精密加入吡啶1.0 mL，再分別加入5種不 同濃度擬人參皂苷Fll對照品溶液1.0 mU苯甲酰氯5. OmL，渦旋混合IOmin后，用甲醇定容 到10mL，過0. 45 μ m濾膜。取3個IOmL棕色容量瓶，對3個樣品溶液進行同樣的衍生化反 應(yīng)，備用； 5. 標準曲線的繪制：取擬人參皂苷Fll對照品，用甲醇分別配制擬人參皂苷Fll濃度 為 5.0145mg/mL, 4.0116mg/mL, 3.0087mg/mL, 2.0058mg/mL, 1.0029mg/mL 的溶液。根據(jù) 步驟3的色譜條