一種高效液相色譜法分離測定依折麥布及有關(guān)物質(zhì)的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于分析化學(xué)領(lǐng)域，具體涉及一種采用高效液相色譜法分離和測定依折麥 布及有關(guān)物質(zhì)的方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 依折麥布是降膽固醇藥物，可單獨(dú)或與HMG-CoA還原酶抑制劑(他汀類）聯(lián)合應(yīng) 用于治療原發(fā)性(雜合子家族性或非家族性）高膽固醇血癥，可降低總膽固醇、低密度脂蛋 白膽固醇、載脂蛋白、非高密度脂蛋白膽固醇；還可用于純合子家族性高膽固醇血癥的治 療。分子式為C 24H21F2NO3，化學(xué)名為1- (4-氟苯基）-3 (R) - [3- (4-氟苯基）-3 (S)-羥丙基]_ 4 (S)-(4-羥苯基）-2-吖丁啶（氮雜環(huán)丁烷）酮，其化學(xué)結(jié)構(gòu)式如下：
在依折麥布合成過程中，會產(chǎn)生一些相關(guān)的雜質(zhì)物質(zhì)如生產(chǎn)過程中產(chǎn)生的副產(chǎn)物或中 間體或降解產(chǎn)物等，這些雜質(zhì)可能會由于去除不完全而影響藥物的純度和質(zhì)量，目前，已知 的雜質(zhì)物質(zhì)有6種，分別為：有關(guān)物質(zhì)1 (副廣物雜質(zhì))、有關(guān)物質(zhì)2 (副廣物雜質(zhì))、有關(guān)物質(zhì) 3 (中間體雜質(zhì))、有關(guān)物質(zhì)4 (中間體雜質(zhì))、有關(guān)物質(zhì)5 (既是副產(chǎn)物又是降解雜質(zhì))和有關(guān) 物質(zhì)6 (降解雜質(zhì))，這6種雜質(zhì)物質(zhì)的結(jié)構(gòu)式如下：
對于依折麥布合成工藝中引入的上述副產(chǎn)物和中間體，在依折麥布原料藥中需要進(jìn)行 質(zhì)量控制，而依折麥布相關(guān)的降解雜質(zhì)需要在依折麥布原料藥及制劑中進(jìn)行質(zhì)量控制，因 此，實(shí)現(xiàn)依折麥布及有關(guān)物質(zhì)的分離和測定對依折麥布原料及制劑的生產(chǎn)和貯存具有重要 的意義。
[0003] 目前對于依折麥布有關(guān)物質(zhì)的分析檢測方法有進(jìn)口注冊標(biāo)準(zhǔn)（JX20070201 )，采用 十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以0. 〇5mol/L磷酸二氫鉀溶液：乙腈：四氫呋喃（65 :25 : 10)為流動相進(jìn)行等度洗脫，流速為I. 〇ml/min，檢測波長為232nm，柱溫為25°C，進(jìn)樣體積 為30 μ 1，檢測時間為主峰保留時間的2倍，但是，該標(biāo)準(zhǔn)的方法對上述的有關(guān)物質(zhì)3和有關(guān) 物質(zhì)4不能檢出；在堿降解試驗(yàn)中，有關(guān)物質(zhì)6和其他降解雜質(zhì)不能分離。
[0004] 另外，申請?zhí)枮?01210337025. 1的發(fā)明專利中公開了一種用液相色譜法分離測 定依折麥布有關(guān)物質(zhì)的方法，該方法以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料的色譜柱，以一定比 例的酸性水溶液-有機(jī)相為流動相，定量測定依折麥布及其有關(guān)物質(zhì)的含量，酸性水溶液 的酸為磷酸、碳酸、甲酸、乙酸中的一種，有機(jī)相為甲醇、乙腈、丙醇、異丙醇中的一種；申請 號為201410015689. 5的發(fā)明專利公開了一種用液相色譜法分離測定依折麥布中間體有關(guān) 物質(zhì)化學(xué)純度的方法，該方法以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料的色譜柱，以一定比例的磷 酸水溶液-有機(jī)相為流動相，定量測定依折麥布中間體及其有關(guān)物質(zhì)的含量，有機(jī)相為甲 醇、乙腈、丙醇、異丙醇中的一種；但是同樣，采用申請?zhí)枮?01210337025. 1的發(fā)明專利中 公開的方法和申請?zhí)枮?01410015689. 5的發(fā)明專利中公開的方法均不能完全分離檢測上 述雜質(zhì)，說明目前現(xiàn)有技術(shù)中公開的方法均不能同時適用于上述的6種雜質(zhì)的檢測。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 有鑒于此，本發(fā)明的目的在于提供一種高效液相色譜法分離測定依折麥布及有關(guān) 物質(zhì)的方法，該方法適用于上述6種有關(guān)物質(zhì)的分離和檢測，可同時實(shí)現(xiàn)上述6種有關(guān)物質(zhì) 的分離和檢測，提高了分離檢測的效率。
[0006] 為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明的技術(shù)方案為： 一種高效液相色譜法分離測定依折麥布及有關(guān)物質(zhì)的方法，所述高效液相色譜法分析 過程中采用的色譜柱是以苯基硅烷鍵合硅膠為填料，以溶液A和有機(jī)溶劑B按一定比例混 合為流動相進(jìn)行洗脫；所述的溶液A為酸的水溶液、乙腈和甲醇的混合溶液。
[0007] 本發(fā)明所述的方法適用于上述的6種雜質(zhì)的分離和測定，可用于單獨(dú)檢測某一種 雜質(zhì)，也可同時分離和檢測這6種雜質(zhì)，與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的方法更快捷，提高了效 率，具有顯著的進(jìn)步性。
[0008] 上述的方法中，所述酸為磷酸、甲酸、乙酸、檸檬酸和三氟乙酸中的一種或多種，優(yōu) 選為磷酸。
[0009] 上述的方法中，所述酸的水溶液的體積百分濃度為0. 05-0. 15%，優(yōu)選為0. 1%。
[0010] 上述的方法中，所述有機(jī)溶劑B為乙腈和/或甲醇，優(yōu)選為乙腈。
[0011] 本發(fā)明所述的高效液相色譜方法為反相液相色譜法，采用的色譜柱是以苯基硅烷 鍵合硅膠為填料，所述苯基硅烷鍵合硅膠顆粒粒徑為3-5 μ m，優(yōu)選粒徑為5 μ m。所述的 苯基硅烷鍵合硅膠色譜柱柱長為150-250mm，優(yōu)選為250mm。采用所述的色譜柱進(jìn)行分離 時，色譜柱適用的柱溫范圍為20-40°C，優(yōu)選為30°C。在本發(fā)明的一個【具體實(shí)施方式】中， 色譜柱為苯基硅烷鍵合硅膠為填充劑的色譜柱（Phenomenex Luna Phenyl Hexyl,型號為 250mmX4. 6mm,5 μ m)〇
[0012] 優(yōu)選的，本發(fā)明所述的一種高效液相色譜法分離測定依折麥布及有關(guān)物質(zhì)的方 法，當(dāng)采用所述流動相進(jìn)行洗脫時，流動相的流速為0. 5-1. 5ml/min，優(yōu)選為1.0 ml/min。
[0013] 上述方法中，優(yōu)選的，所述溶液A中酸的水溶液、乙腈和甲醇的體積比為 40-55:35-50:10,更優(yōu)選的，所述溶液A中酸的水溶液、乙腈和甲醇的體積比為48:42:10。
[0014] 上述的方法中，以溶液A和有機(jī)溶劑B按一定比例混合為流動相進(jìn)行梯度洗脫，所 述梯度比例為： Omin，溶液A與有機(jī)溶劑B的體積比為100:0 ; 25min，溶液A與有機(jī)溶劑B的體積比為100:0 ; 35min，溶液A與有機(jī)溶劑B的體積比為55:45 ; 45min，溶液A與有機(jī)溶劑B的體積比為55:45 ; 46min，溶液A與有機(jī)溶劑B的體積比為100:0 ; 55min，溶液A與有機(jī)溶劑B的體積比為100:0。
[0015] 洗脫時，流動相的流速為0· 5-1. 5ml/min，優(yōu)選為1.0 ml/min。
[0016] 洗脫后采用紫外檢測器進(jìn)行檢測，DAD檢測器和VWD均適用，檢測波長為232nm。
[0017] 本發(fā)明所述的一種高效液相色譜法分離測定依折麥布及有關(guān)物質(zhì)的方法，在進(jìn)行 高效液相色譜法分析之前，對照品或待測樣品均需先溶解，在本發(fā)明中，采用所述的溶液A 溶解對照品或待測樣品。
[0018] 本發(fā)明所述的方法，在一個【具體實(shí)施方式】中，按照以下方法實(shí)現(xiàn)： 取依折麥布、有關(guān)物質(zhì)1、有關(guān)物質(zhì)2、有關(guān)物質(zhì)3、有關(guān)物質(zhì)4、有關(guān)物質(zhì)5、有關(guān)物質(zhì)6 對照品各適量，用〇. 1%磷酸溶液-乙腈-甲醇（48:42:10 )溶解，配制成每1ml含依折麥布 200 μ g、有關(guān)物質(zhì)1、有關(guān)物質(zhì)2、有關(guān)物質(zhì)3、有關(guān)物質(zhì)4、有關(guān)物質(zhì)5和有關(guān)物質(zhì)6各2 μ g 的系統(tǒng)適用性溶液。
[0019] 取依折麥布對照品，用0. 1%磷酸溶液-乙腈-甲醇（48:42:10)溶解，配制成每1ml 含〇. 2 μ g的對照品溶液。
[0020] 取待測樣品（依折麥布或含依折麥布藥物組合物）適量，用0.1%磷酸溶液-乙 腈-甲醇（48:42:10)溶解，配制成每1ml含依折麥布200 μ g的供試品溶液，分別取系統(tǒng) 適用性溶液、供試品溶液和對照品溶液，注入液相色譜儀，按本發(fā)明色譜條件(色譜柱填料 為苯基硅烷鍵合硅膠，柱長為250mm，檢測波長為232nm，以0· 1%磷酸溶液-乙腈-甲醇 (48:42:10)和乙腈為流動相進(jìn)行梯度洗脫，梯度洗脫的比例如表1所示，流動相的流速為 1.0 ml/min，色譜柱柱溫箱溫度為30°C，進(jìn)樣體積為30 μ 1)進(jìn)行測定，按帶校正因子的對照 品外標(biāo)法計算供試品中各已知雜質(zhì)的含量，按對照品外標(biāo)法計算供試品中其他單個雜質(zhì)的 含量,總雜質(zhì)為各已知雜質(zhì)與其他單個雜質(zhì)之和。
[0021] 本發(fā)明的方法還可對依折麥布堿降解雜