一種基于g蛋白信號(hào)放大系統(tǒng)的細(xì)胞膜受體電化學(xué)型傳感器的制備方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種基于G蛋白信號(hào)放大系統(tǒng)的細(xì)胞膜受體電化學(xué)型傳感器的制備方法。本發(fā)明通過膜蛋白提取液提取雄性柞蠶蛾觸角上的性誘激素受體，并將其自組裝到豬味蕾組織的細(xì)胞膜上，然后進(jìn)行固定化，制成三明治式核微孔測(cè)定膜，最后將膜片固定到玻碳電極上，制成受體傳感電極。該電極可以通過三電極系統(tǒng)和電化學(xué)工作站進(jìn)行測(cè)定。利用循環(huán)伏安法、交流阻抗法表征電極組裝的各個(gè)階段，利用計(jì)時(shí)電流法進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果表明：此方法對(duì)柞蠶性誘激素的最低檢測(cè)限為：1×10?14mol/L，在1×10?14mol/L～1×10?3mol/L極寬的濃度范圍內(nèi)柞蠶性誘激素的響應(yīng)電流與其濃度呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系。
【專利說明】
一種基于G蛋白信號(hào)放大系統(tǒng)的細(xì)胞膜受體電化學(xué)型傳感器的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域
[0001]本發(fā)明涉及生物醫(yī)藥、細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)遞、嗅/味覺傳感、營(yíng)養(yǎng)傳感等電化學(xué)傳感器領(lǐng)域，特別是涉及測(cè)定受體和配基相互作用及其測(cè)定電化學(xué)生物傳感器的信號(hào)放大和制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002]G蛋白偶聯(lián)受體(GPCR)是一類七次跨膜蛋白，它廣泛分布在細(xì)胞表面，與其相互作用的分子稱為配基。GPCR介導(dǎo)多種重要的生理功能，與很多疾病密切相關(guān)，是最重要的現(xiàn)代藥物靶點(diǎn)家族。目前市場(chǎng)上40%以上的藥物是以GPCR為靶點(diǎn)篩選的，而且大部分嗅/味覺受體，性誘激素受體都是GPCRs。因此，GPCR分析方法和GPCR配體篩選方法的研究是當(dāng)今世界新藥研究的關(guān)鍵技術(shù)和熱點(diǎn)。
[0003]目前，研究受體與配體(基)相互作用的測(cè)定方法主要有放射性配基結(jié)合試驗(yàn)、酶聯(lián)免疫吸附法、液爍近鄰檢測(cè)、時(shí)間分辨熒光和熒光相關(guān)光譜學(xué)或者通過計(jì)算機(jī)軟件模擬等技術(shù)手段。這些方法雖然具有高效、可靠和微量化等特點(diǎn)，但昂貴的測(cè)定成本、復(fù)雜的操作方法限制了其具體的應(yīng)用。因此，研制出一種靈敏度高、操作簡(jiǎn)便、非標(biāo)記型檢測(cè)方法對(duì)研究受體-配體(基)間的相互作用有重要的價(jià)值。在生物傳感器的信號(hào)放大系統(tǒng)方面，目前主要通過納米技術(shù)、電子、熒光、化學(xué)發(fā)光、酶聯(lián)等方法，尚無(wú)將真核細(xì)胞G蛋白級(jí)聯(lián)信號(hào)放大系統(tǒng)作為GPCRs受體超家族與其配體(基)相互作用的信號(hào)放大系統(tǒng)，并用于電化學(xué)型傳感器的研制。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明的目的是為GPCRs超家族與其配體(基)相互作用提供一種新型的電化學(xué)型生物傳感器，與此同時(shí)，建立一個(gè)具有普適性的信號(hào)放大系統(tǒng)，亦即G蛋白級(jí)聯(lián)信號(hào)放大系統(tǒng)。
[0005]本發(fā)明一種基于G蛋白信號(hào)放大系統(tǒng)的細(xì)胞膜受體電化學(xué)型傳感器的制備方法，包括下述步驟:
[0006](I)收集雄性柞蠶觸角共225mg，于冰上剪碎后加入ImL裂解緩沖液(LysisBuffer)，混合倒入玻璃勻漿器勻漿50次，于冰上靜置5min，使用超聲波破碎儀破碎lOmin，將勾楽液轉(zhuǎn)移至預(yù)冷的離心管中離心，在4 0C，3000rmp條件下離心5min，取離心所得沉淀，加入200uL膜蛋白抽提專用緩沖液，渦旋振蕩30s混勻，于冰上靜置5min，反復(fù)5次后再次離心，在4°C，12000rmp，條件下離心lOmin，取上清液轉(zhuǎn)移至新管，即為雄性柞蠶蛾性誘激素受體粗提物；
[0007](2)將混合酶液:膠原酶(Collagenase) Π (lmg/mL):中性蛋白酶(Dispase) Π(3mg/mL)，放入培養(yǎng)箱中進(jìn)行提前預(yù)熱，在37°C，預(yù)熱15min，以便使酶活性達(dá)到最高;取新宰殺的豬舌頭，用醫(yī)用剪刀剪至葉狀乳頭邊緣處，用解剖液清洗洗凈舌頭表面的血跡，放入干凈的解剖液中；取提前預(yù)熱的0.3-0.5mL37°C的混合酶液注入豬舌上皮與其肌肉層之間，注射時(shí)注射器的針頭一直伸至舌尖部位，注射時(shí)注射器要慢慢向后抽出，完成后放入解剖液中室溫孵育6-8分鐘;然后用眼科鑷子將舌上皮與肌肉層輕輕剝離，將剝離的味蕾組織立即放入冰浴的解剖液中備用；
[0008](3)取出味蕾組織放入雄性柞蠶蛾性誘激素受體粗提物中，在4°C條件下自組裝0.5-lhr后取出，放入冰浴試管中備用；
[0009](4)將可溶性淀粉溶解于含I %戊二醛的水溶液中，80°C水浴加熱并攪拌30min，配成l-2g/100mL濃度的淀粉溶液;淀粉溶液室溫下放置過夜，使淀粉與戊二醛得到充分交聯(lián)，獲得醛基化淀粉膠溶液;醛基化淀粉膠溶液再與l_2g/100mL的海藻酸鈉溶液以1:1混合;取上述混合溶液10-20ul均勻涂抹于2張直徑為25mm、孔徑為0.22um的聚碳酸酯核微孔膜上，將準(zhǔn)備好的0.05?0.15g自組裝了雄性柞蠶性誘激素受體的味蕾上皮組織正面朝上放置于一張微孔膜的圓心上，然后將另一張微孔膜覆蓋其上制成三明治結(jié)構(gòu)核微孔測(cè)定膜;將制成的測(cè)定膜浸入質(zhì)量百分?jǐn)?shù)5%的CaCl2溶液中1s后取出，以使海藻酸鈉與CaCl2發(fā)生離子交換反應(yīng)，形成穩(wěn)定的螯合物，使海藻酸鈉溶液瞬時(shí)凝膠化，成為良好的固定劑;然后用PH=7的0.0lmol/L的磷酸緩沖液沖洗味蕾組織膜，去除膜上存留的Cl—、Ca2+，消除其帶來(lái)的測(cè)定誤差;最后，將膜的正面朝上使得味蕾組織與預(yù)處理完的玻碳電極芯重合，用皮套將膜固定在玻碳電極測(cè)定端的表面，自組裝柞蠶性誘激素受體豬味蕾組織傳感器制成。
[00?0] 所述中性酶Π與蛋白酶Π混合酶液用下述方法得到:膠原酶Π配成lmg/mL的溶液，中性蛋白酶Π配成3mg/mL的溶液，兩種溶液都用無(wú)Ca2+的臺(tái)式緩沖液液配制，1:1混合，4°C過夜;次日用孔徑為0.22um的一次性過濾除菌器過濾除菌后分裝，一 20°C保存?zhèn)溆?所用水為超純水18.2M Ω /cm。
[0011]所述每張聚碳酸酯微孔膜上海藻酸鈉-淀粉膠凝膠的用量為20ul。
[0012]臺(tái)式緩沖液的商品名為:Tyrode buffer，具體配方為:137mmol/L NaCl，2.8mmol/L KCl，I.0mmol/L MgCl2,12mmol/L NaHC03,0.4mmo 1/L Na2HP04，lOmmol/L輕乙基呢嘆乙硫磺酸，5.5mmol/L葡萄糖，0.35%牛血清白蛋白(w/v)。
[0013]所述預(yù)處理玻碳電極的方法為:將玻碳電極依次分別用1.ΟμπκΟ.3μηι、0.05μηι粒徑的Ct-Al2O3漿在麂皮上拋光三次，且每次拋光后在超聲水浴中清洗30s，最后依次用體積比I:1:1 (體積比)的HNO3、無(wú)水乙醇、超純水清洗;在111101/1 H2SO4溶液中用掃描范圍為1.0?一1.0V，掃描速度為100mV/S的循環(huán)伏安法活化電極，重復(fù)掃描直至出現(xiàn)穩(wěn)定的循環(huán)伏安曲線；上述穩(wěn)定的循環(huán)伏安曲線滿足下述要求:在實(shí)驗(yàn)室條件下預(yù)處理后電極的循環(huán)伏安曲線的峰電位差應(yīng)在64-80mV，最后置于氮?dú)猸h(huán)境中干燥待用。
[0014]所述的雌柞蠶性誘激素是指:順-6，反-11-十六碳烯醇醋酸酯((E，Z)_6，11-hexadecadienyIacetate)。
[0015]所述的測(cè)定雌柞蠶性誘激素是通過豬味蕾組織細(xì)胞上自組裝的雄性柞蠶性誘激素受體可以通過豬味蕾組織細(xì)胞內(nèi)G蛋白級(jí)聯(lián)放大系統(tǒng)相偶聯(lián)進(jìn)行的信號(hào)放大作用，該放大作用可以改變其細(xì)胞內(nèi)、外的電化學(xué)性質(zhì)，從而轉(zhuǎn)化為電化學(xué)信號(hào)。
[0016]所述的G蛋白級(jí)聯(lián)放大系統(tǒng)對(duì)不同來(lái)源的G蛋白偶聯(lián)受體(Guanosine-bindingProtein Coupled Receptor，GPCR)經(jīng)自組裝到細(xì)胞膜上以后具有通用性。
[0017]與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果是:
[0018]本發(fā)明的方法采取豬的味蕾組織作為信號(hào)放大系統(tǒng)，將取自雄性柞蠶觸角上的性誘激素受體進(jìn)行初步分離與純化，然后自組裝到豬味蕾組織上。通過固定化細(xì)胞的方法制成生物傳感電極，當(dāng)性誘激素和受體結(jié)合以后既可以激活味蕾組織中的G蛋白信號(hào)放大系統(tǒng)，改變細(xì)胞內(nèi)、外的電化學(xué)特性，從而轉(zhuǎn)化為傳感器可以檢測(cè)到的電化學(xué)信號(hào)。該傳感器靈敏度高、操作方便、無(wú)需放射性及熒光標(biāo)記、能夠?qū)崿F(xiàn)受體和配體(基)相互作用的快速定量化和動(dòng)力學(xué)檢測(cè)，該信號(hào)放大系統(tǒng)的最大特點(diǎn)是對(duì)GPCRs超家族的不同成員，甚至不同物種的GPCRs具有通用性。
【具體實(shí)施方式】
[0019]以下以豬味蕾組織的G蛋白信號(hào)放大系統(tǒng)制備柞蠶雄蠶娥觸角性誘激素受體的電化學(xué)型傳感器的制備方法為實(shí)施例進(jìn)行說明。
[0020]實(shí)施例1
[0021 ] 1、中性酶Π與蛋白酶Π混合酶液用下流方法得到:ColIagenase Π (膠原酶Π )配成lmg/mL的溶液，Dispase Π (中性蛋白酶Π )配成3mg/mL的溶液，兩種溶液都是用無(wú)Ca2+Tyrode液配制，1:1混合，4°C過夜。次日用孔徑為0.22um的一次性過濾除菌器過濾除菌后分裝，一20°C保存?zhèn)溆?。所用水均由Millipore Mill1-Q純水系統(tǒng)所制超純水(18.2ΜΩ/cm)。
[0022]2、將可溶性淀粉溶解于體積百分比濃度為I %的戊二醛溶液中，80°C水浴加熱并攪拌30min，配成質(zhì)量濃度為1%的淀粉溶液，室溫放置12小時(shí)以上，使淀粉與戊二醛充分交聯(lián)得到醛基化淀粉膠溶液。
[0023]3、醛基化淀粉膠溶液混合的海藻酸鈉溶液的質(zhì)量濃度為2%，所述醛基化淀粉膠溶液與質(zhì)量濃度為2%的海藻酸鈉溶液按體積比為1:1混合。
[0024]4、每張所述聚碳酸酯微孔膜上海藻酸鈉-淀粉膠凝膠的用量為20ul，每張所述聚碳酸酯微孔膜的直徑為5cm、孔徑為0.22um，每張所述測(cè)定膜上自組裝了雄性柞蠶性誘激素受體的味蕾上皮組織的量為0.05?0.15g。
[0025]5、玻碳電極的預(yù)處理方法為:將玻碳電極依次分別用1.ΟμπκΟ.3μπι、0.05μπι粒徑的Q-Al2O3漿在麂皮上拋光三次，且每次拋光后在超聲水浴中清洗30s，最后依次用1:1的ΗΝ03、無(wú)水乙醇、超純水清洗;在Imo 1/L H2SO4溶液中用掃描范圍為1.0?一 1.0V，掃描速度為100mV/S的循環(huán)伏安法活化電極，重復(fù)掃描直至出現(xiàn)穩(wěn)定的循環(huán)伏安曲線;上述的穩(wěn)定的循環(huán)伏安曲線滿足下述要求:在實(shí)驗(yàn)室條件下預(yù)處理后的電極的循環(huán)伏安曲線的峰電位差應(yīng)在SOmV以下，并盡可能的接近64mV，電極方能使用，最后置于氮?dú)猸h(huán)境中干燥待用。
[0026]6、豬味蕾組織的G蛋白信號(hào)放大系統(tǒng)制備柞蠶雄蠶娥觸角性誘激素受體的電化學(xué)型傳感器的組裝:
[0027](I)收集雄性柞蠶觸角共225mg，于冰上剪碎后加入ImL Lysis Buffer，混合倒入玻璃勻漿器勻漿50次，于冰上靜置5min，使用超聲波破碎儀破碎1min，將勻漿液轉(zhuǎn)移至預(yù)冷的離心管中離心(4°C，3000rmp，5min)，取離心所得沉淀，加入200uL膜蛋白抽提專用Buffer，禍旋振蕩30s混勾，于冰上靜置5min，反復(fù)5次后離心(4°C，12000rmp, 1min)，取上清轉(zhuǎn)移至新管，即為雄性柞蠶蛾性誘激素受體粗提物。
[0028](2)將用于混合酶液(Collagenase Π (lmg/mL):Dispase Π (3mg/mL))放入培養(yǎng)箱中進(jìn)行提前預(yù)熱，37°C，15min，以便使酶活性達(dá)到最高。取新宰殺的豬舌頭，用醫(yī)用剪刀剪至葉狀乳頭邊緣處，用解剖液清洗洗凈舌頭表面的血跡，放入干凈的解剖液中。取提前預(yù)熱的0.3-0.5mL37°C的混合酶液注入豬舌上皮與其肌肉層之間，注射時(shí)注射器的針頭一直伸至舌尖部位，注射時(shí)注射器要慢慢向后抽出，完成后放入解剖液中室溫孵育6-8分鐘。然后用眼科鑷子將舌上皮與肌肉層輕輕剝離，將剝離的味蕾組織立即放入冰浴的解剖液中備用。
[0029](3)取出味蕾組織放入雄性柞蠶蛾性誘激素受體粗提物中，在4°C條件下自組裝
0.5-lhr后取出，放入冰浴試管中備用。
[0030](4)將可溶性淀粉溶解于含I %戊二醛的水溶液中，80 °C水浴加熱并攪拌30min，配成l-2g/100mL濃度的淀粉溶液。淀粉溶液室溫下放置過夜，使淀粉與戊二醛得到充分交聯(lián)，獲得醛基化淀粉膠溶液。醛基化淀粉膠溶液再與l_2g/100mL的海藻酸鈉溶液以1:1混合。取上述溶液1ul均勻涂抹于2張直徑為25mm、孔徑為0.22um的聚碳酸酯核微孔膜上，將準(zhǔn)備好的3mm自組裝了雄性柞蠶性誘激素受體的味蕾上皮組織正面朝上放置于一張微孔膜的圓心上，然后將另一張(作為正面)覆蓋其上制成三明治結(jié)構(gòu)核微孔測(cè)定膜。將制成的測(cè)定膜浸入5% (質(zhì)量分?jǐn)?shù))的CaCl2溶液中1s后取出，以使海藻酸鈉與5%的CaCl溶液發(fā)生離子交換反應(yīng)，形成穩(wěn)定的螯合物，使海藻酸鈉溶液瞬時(shí)凝膠化，成為良好的固定劑。然后用pH = 7，
0.0lmol/L的磷酸緩沖液沖洗(去除膜上存留的Cl—、Ca2+等，消除其帶來(lái)的測(cè)定誤差)味蕾組織膜。最后，將膜的正面朝上使得味蕾組織與表征完的電極芯重合，用皮套將膜固定在玻碳電極測(cè)定端的表面，自組裝柞蠶性誘激素受體豬味蕾組織傳感器制成。
[0031]實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證:
[0032]1、將柞蠶性誘激素(順-6，反-1 1-十六碳烯醇醋酸酯((E，Z )_6，11-hexadecadienyl acetate))用75%乙醇配成摩爾濃度的梯度溶液，用電化學(xué)工作站和三電極系統(tǒng)進(jìn)行測(cè)定。用電流一時(shí)間曲線法檢測(cè)其響應(yīng)電流，當(dāng)測(cè)試底液的響應(yīng)電流值與柞蠶性誘激素溶液的響應(yīng)電流值之差接近于零時(shí)，此時(shí)的柞蠶性誘激素濃度為姜辣素的最低檢測(cè)限。之后，再進(jìn)一步細(xì)分配制柞蠶性誘激素的濃度梯度，以柞蠶性誘激素的濃度及其電流的變化率作圖，分析姜辣素與其受體之間的作用規(guī)律。
[0033]結(jié)果表明此方法對(duì)柞蠶性誘激素的最低檢測(cè)限為IX 10—14mol/L，在I X 10—14mol/L?I X 10—3mol/L極寬的濃度范圍內(nèi)柞蠶性誘激素的響應(yīng)電流與其濃度呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系O
[0034]2、傳感器的穩(wěn)定性及重現(xiàn)性:將制成的傳感器在同一濃度的辣椒堿溶液中連續(xù)測(cè)定10次，結(jié)果相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差R.S.D.為7.34 %，表明該味覺組織傳感器穩(wěn)定性能良好。在I3BS緩沖液上方4 °C保存該組織傳感器，每天對(duì)同一濃度的辣椒堿溶液進(jìn)行測(cè)定，前2天該傳感器響應(yīng)電流變化率基本恒定，第3天其電流變化率是初始電流變化率的94.3%,第4天其電流變化率僅為初始電流變化率的76 %以上。表明該味覺組織傳感器至少可穩(wěn)定保存3天。
【主權(quán)項(xiàng)】
1.一種基于G蛋白信號(hào)放大系統(tǒng)的細(xì)胞膜受體電化學(xué)型傳感器的制備方法，其特征在于，包括下述步驟: (1)收集雄性柞蠶觸角共225mg，于冰上剪碎后加入ImL裂解緩沖液，混合倒入玻璃勻漿器勻漿50次，于冰上靜置5min，使用超聲波破碎儀破碎1min，將勻漿液轉(zhuǎn)移至預(yù)冷的離心管中離心，在4°C，3000rmp條件下離心5min，取離心所得沉淀，加入200uL膜蛋白抽提專用緩沖液，渦旋振蕩30s混勻，于冰上靜置5min，反復(fù)5次后再次離心，在4°C，12000rmp，條件下離心1min，取上清液轉(zhuǎn)移至新管，即為雄性柞蠶蛾性誘激素受體粗提物； (2)將中性酶Π與蛋白酶Π混合酶液:即lmg/mL的膠原酶Π與3mg/mL的中性蛋白酶Π，1:1混合，放入培養(yǎng)箱中進(jìn)行提前預(yù)熱，在37°C，預(yù)熱15min，以便使酶活性達(dá)到最高;取新宰殺的豬舌頭，用醫(yī)用剪刀剪至葉狀乳頭邊緣處，用解剖液清洗洗凈舌頭表面的血跡，放入干凈的解剖液中；取提前預(yù)熱的0.3-0.5mL37°C的混合酶液注入豬舌上皮與其肌肉層之間，注射時(shí)注射器的針頭一直伸至舌尖部位，注射時(shí)注射器要慢慢向后抽出，完成后放入解剖液中室溫孵育6-8分鐘;然后用眼科鑷子將舌上皮與肌肉層輕輕剝離，將剝離的味蕾組織立即放入冰浴的解剖液中備用； (3)取出味蕾組織放入雄性柞蠶蛾性誘激素受體粗提物中，在4°C條件下自組裝0.5-1hr后取出，放入冰浴試管中備用； (4)將可溶性淀粉溶解于含1%戊二醛的水溶液中，80°C水浴加熱并攪拌30min，配成1-2g/100mL濃度的淀粉溶液;淀粉溶液室溫下放置過夜，使淀粉與戊二醛得到充分交聯(lián)，獲得醛基化淀粉膠溶液;醛基化淀粉膠溶液再與l_2g/100mL的海藻酸鈉溶液以1:1混合;取上述混合溶液10-20ul均勻涂抹于2張直徑為25mm、孔徑為0.22um的聚碳酸酯核微孔膜上，將準(zhǔn)備好的0.05?0.15g自組裝了雄性柞蠶性誘激素受體的味蕾上皮組織正面朝上放置于一張微孔膜的圓心上，然后將另一張微孔膜覆蓋其上制成三明治結(jié)構(gòu)核微孔測(cè)定膜;將制成的測(cè)定膜浸入質(zhì)量百分?jǐn)?shù)5%的CaCl2溶液中1s后取出，以使海藻酸鈉與CaCl2發(fā)生離子交換反應(yīng)，形成穩(wěn)定的螯合物，使海藻酸鈉溶液瞬時(shí)凝膠化，成為良好的固定劑;然后用pH=7的0.0lmol/L的磷酸緩沖液沖洗味蕾組織膜，去除膜上存留的Cl—、Ca2+，消除其帶來(lái)的測(cè)定誤差;最后，將膜的正面朝上使得味蕾組織與預(yù)處理完的玻碳電極芯重合，用皮套將膜固定在玻碳電極測(cè)定端的表面，自組裝柞蠶性誘激素受體豬味蕾組織傳感器制成。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的基于G蛋白信號(hào)放大系統(tǒng)的細(xì)胞膜受體電化學(xué)型傳感器的制備方法，其特征在于，中性酶Π與蛋白酶Π混合酶液用下述方法得到:膠原酶Π配成lmg/mL的溶液，中性蛋白酶Π配成3mg/mL的溶液，兩種溶液都用無(wú)Ca2+的臺(tái)式緩沖液配制，1:1混合，4°C過夜;次日用孔徑為0.22um的一次性過濾除菌器過濾除菌后分裝，一 20°C保存?zhèn)溆?；所用水為超純?8.2ΜΩ /cm。3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的基于G蛋白信號(hào)放大系統(tǒng)的細(xì)胞膜受體電化學(xué)型傳感器的制備方法，其特征在于，所述臺(tái)式緩沖液的商品名為:Tyrode buffer，具體配方為:137mmo 1/LNaCl，2.8mmol/L KCl ,1.0mmo 1/L MgC12，12mmol/L NaHCO3，0.4mmo 1/L Na2HPO4 ,1mmo 1/L羥乙基哌嗪乙硫磺酸，5.5mmo I /L葡萄糖，0.3 5 %牛血清白蛋白。4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的基于G蛋白信號(hào)放大系統(tǒng)的細(xì)胞膜受體電化學(xué)型傳感器的制備方法，其特征在于，所述每張聚碳酸酯微孔膜上海藻酸鈉-淀粉膠凝膠的用量為20ul。5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的基于G蛋白信號(hào)放大系統(tǒng)的細(xì)胞膜受體電化學(xué)型傳感器的制備方法，其特征在于，所述預(yù)處理玻碳電極的方法為:將玻碳電極依次分別用1.0μπι、0.3μπι、0.05μπι粒徑的Ct-Al2O3漿在麂皮上拋光三次，且每次拋光后在超聲水浴中清洗30s，最后依次用體積比1: 1:1(體積比)的HN03、無(wú)水乙醇、超純水清洗;在lmol/L H2SO4溶液中用掃描范圍為1.0?一 1.0V，掃描速度為100mV/S的循環(huán)伏安法活化電極，重復(fù)掃描直至出現(xiàn)穩(wěn)定的循環(huán)伏安曲線;上述穩(wěn)定的循環(huán)伏安曲線滿足下述要求:在實(shí)驗(yàn)室條件下預(yù)處理后電極的循環(huán)伏安曲線的峰電位差應(yīng)在64-80mV，最后置于氮?dú)猸h(huán)境中干燥待用。6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的基于G蛋白信號(hào)放大系統(tǒng)的細(xì)胞膜受體電化學(xué)型傳感器的制備方法，其特征在于，所述的雌柞蠶性誘激素是指:順-6，反-1 1-十六碳烯醇醋酸酯。
【文檔編號(hào)】G01N27/26GK105866202SQ201610186031
【公開日】2016年8月17日
【申請(qǐng)日】2016年3月29日
【發(fā)明人】龐廣昌
【申請(qǐng)人】天津商業(yè)大學(xué)