一種荷葉中荷葉堿的測定方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種荷葉中荷葉堿的測定方法，包括以下步驟：步驟1：將荷葉粉碎后采用ASE萃取法萃取得到萃取液；步驟2：將萃取液稀釋離心后，得到上清液；步驟3：將上清液采用液相色譜法進行分析。本發(fā)明提供了一種荷葉中荷葉堿的測定方法，該方法操作簡單，檢測精度高。
【專利說明】
一種荷葉中荷葉堿的測定方法
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明涉及實驗室檢測領(lǐng)域，特別是一種荷葉中荷葉堿的測定方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 2015年藥典記錄了荷葉中的荷葉堿的提取方法:取本品粗粉約0.5g，精密稱定，置 具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50ml，稱定重量，加熱回流2.5小時，放冷，再稱定重量，用甲醇 補足減失的重量，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液5ml，置10ml量瓶中，加水至刻度，搖勻，即得。
[0003] 液相色譜檢測條件為：以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈一水一三乙胺 冰醋酸(27:70.6:1.6:0.78)為流動相;檢測波長為270nm。理論板數(shù)按荷葉堿峰計算應(yīng)不低 于2000。
[0004] 藥典的方法操作過程復(fù)雜，對操作人員的操作技能要求高。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明的目的是提供一種荷葉中荷葉堿的測定方法，該方法操作簡單，檢測精度 尚。
[0006] 本發(fā)明提供的技術(shù)方案為:一種荷葉中荷葉堿的測定方法，包括以下步驟：
[0007] 步驟1:將荷葉粉碎后米用ASE萃取法萃取得到萃取液；
[0008] 步驟2:將萃取液稀釋離心后，得到上清液；
[0009] 步驟3:將上清液采用液相色譜法進行分析；
[0010] 其中，液相色譜法的分析條件為：
[0011] a)儀器:雙三元液相色譜儀
[0012] b)色譜柱Cis 5wn 4.6X 150mm
[0013] c)柱溫:40°C
[0014] d)流速:0.5mL/min
[0015] e)流動相：乙腈-水-三乙胺-冰醋酸(27:70.6:1.6:0.78)
[0016] f)檢測波長：270nm
[0017] 在上述的荷葉中荷葉堿的測定方法中，所述的步驟1具體為：
[0018] S11:將荷葉粉碎后，過篩；
[0019] S12:稱取0.5重量份羅漢果粉，與0.5重量份硅藻土混合均勻待用；
[0020] S13:將S12中的混合物移入預(yù)先放好過濾膜的萃取池中，加入適量的硅藻土至達 到萃取池的池口；蓋上萃取池的蓋子進行靜態(tài)萃取;萃取結(jié)束后得到萃取液；
[0021] 萃取條件為：萃取溶劑為甲醇；萃取溫度90°C;靜態(tài)萃取時間5min;沖洗體積 100%;靜態(tài)循環(huán)次數(shù)2次。
[0022]在上述的荷葉中荷葉堿的測定方法中，所述的萃取池的體積為10ml。
[0023] 在上述的荷葉中荷葉堿的測定方法中，所述的靜態(tài)萃取的壓力為1500psi。
[0024] 在上述的荷葉中荷葉堿的測定方法中，所述的靜態(tài)萃取的吹掃時間為60s。
[0025]在上述的荷葉中荷葉堿的測定方法中，步驟2具體為：將萃取液用甲醇稀釋后在 15000r/min下離心5min，取上清液。
[0026]在上述的荷葉中荷葉堿的測定方法中，液相色譜分析所用的儀器為：Thermo U-3000雙三元液相色譜儀。
[0027]在上述的荷葉中荷葉堿的測定方法中，所述的ASE萃取法所采用的儀器為ASE350 快速溶劑萃取儀。
[0028]本發(fā)明在采用上述技術(shù)方案后，其具有的有益效果為：
[0029]本發(fā)明的檢測方法操作簡單，精度與藥典方法的精度一致，重復(fù)性好。
【附圖說明】
[0030] 圖1為本發(fā)明的色譜分析荷葉堿有效性驗證的直角坐標(biāo)圖；
[0031] 圖2為本發(fā)明的色譜圖。
【具體實施方式】
[0032]下面結(jié)合【具體實施方式】，對本發(fā)明的技術(shù)方案作進一步的詳細(xì)說明，但不構(gòu)成對 本發(fā)明的任何限制。
[0033] 實施例1:
[0034]將荷葉經(jīng)粉碎機粉碎，過三號篩，約0.5g，精密稱定，與0.5g硅藻土混合均勻，待 用，移入到預(yù)先放好過濾膜的ASE?L0ml萃取池中再加入適量硅藻土，輕輕振搖使之與池口 在同一水平線上，擰緊萃取池上蓋。萃取結(jié)束后，把萃取液轉(zhuǎn)移于25ml容量瓶中，用甲醇稀 釋至刻度，在15000r/min下離心5min，取上清液，進入LC測定。
[0035]萃取條件(見表1)為：
[0036]表1
[0039]分析方法為LC液相色譜法，液相色譜分析條件：
[0040] a)儀器:Thermo 雙三元液相(U-3000)
[0041 ] b)色譜柱Eclipse XDB(Cis 5wn 4.6X150mm，即碳 18色譜柱，直徑4.6mm，長度 150mm，粒徑 5ym)
[0042] c)柱溫:40°C
[0043] d)流速:0.5mL/min
[0044] e)流動相：乙腈-水-三乙胺-冰醋酸(體積比27:70.6:1.6:0.78)
[0045] f)檢測波長：270nm [0046] 色譜分析有效性驗證：
[0047] 取荷葉堿對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每lml含16yg的溶液，即得。
[0048] 取荷葉堿對照品溶液(濃度:0.1587mg/ml)，分別精密吸取該溶液lyl、2yl、4yl、5y 1、10yl進入LC測定，并依照上述方法測定，結(jié)果詳見表2。以絕對進樣量(yg)-平均峰面積進 行線性回歸，求得回歸方程:7 = 5.7934義-0.0315，1?2 = 0.9997。荷葉堿在0.1587~0.9122噸 范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系，該線性關(guān)系的直角坐標(biāo)圖見圖1。荷葉堿對照品的采用上述的液 相色譜法分析得到的色譜圖，詳見圖2中的標(biāo)號為S-1所對應(yīng)的圖譜。
[0049] 表2荷葉堿線性關(guān)系
[00511實施例1的萃取方法的重現(xiàn)性驗證：
[0052]取相同批號的樣品（批號：150820)0.5g，共6份，精密稱定，按ASE提取方法提取供 試品溶液，進樣量為如1，以上述的色譜條件平行試驗，測得樣品中荷葉堿的含量見表2，RSD 為3.5 %，試驗表明ASE提取方法重復(fù)性良好，結(jié)果詳見表3。
[0053]表 3
[0055] 實施例1的萃取方法的精確度測試
[0056] 采用實施例1的ASE萃取方法和藥典的萃取方法對荷葉進行萃取，荷葉為4批，批號 分別為 1512008,20150501,150820,1508144;
[0057]實施例1的ASE萃取方法對同一批次的荷葉采用相同型號規(guī)格但是不同的機器進 行平行測試兩次，分別為ASE1和ASE2表示。
[0058]圖2中標(biāo)號114-2-1所對應(yīng)的圖譜為樣品1508144按照藥典所記載的方法得到的色 譜圖；
[0059]圖2中標(biāo)號為正交8-1所對應(yīng)的圖譜為樣品1508144按照實施例1所記載的方法得 到的色譜圖。
[0060] 具體測試結(jié)果見下表4;
[0061] 表 4
[0063]以上所述的僅為本發(fā)明的較佳實施例，凡在本發(fā)明的精神和原則范圍內(nèi)所作的任 何修改、等同替換和改進等，均應(yīng)包含在本發(fā)明的保護范圍之內(nèi)。
【主權(quán)項】
1. 一種荷葉中荷葉堿的測定方法，其特征在于，包括以下步驟： 步驟1:將荷葉粉碎后米用ASE萃取法萃取得到萃取液； 步驟2:將萃取液稀釋離心后，得到上清液； 步驟3:將上清液采用液相色譜法進行分析； 其中，液相色譜法的分析條件為： a) 儀器:雙三元液相色譜儀 b) 色譜柱Cis 5ym 4.6X1 50mm (：)柱溫:40°〇 d) 流速:0 · 5mL/min e) 流動相：乙腈-水-三乙胺-冰醋酸(27:70.6:1.6:0.78) f) 檢測波長：270nm 〇2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的荷葉中荷葉堿的測定方法，其特征在于，所述的步驟1具體為： Sl 1:將荷葉粉碎后，過篩； S12:稱取0.5重量份羅漢果粉，與0.5重量份硅藻土混合均勻待用； S13:將S12中的混合物移入預(yù)先放好過濾膜的萃取池中，加入適量的硅藻土至達到萃 取池的池口；蓋上萃取池的蓋子進行靜態(tài)萃取;萃取結(jié)束后得到萃取液； 萃取條件為:萃取溶劑為甲醇；萃取溫度90°C;靜態(tài)萃取時間5min;沖洗體積100%;靜 態(tài)循環(huán)次數(shù)2次。3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的荷葉中荷葉堿的測定方法，其特征在于，所述的萃取池的體積 為10ml。4. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的荷葉中荷葉堿的測定方法，其特征在于，所述的靜態(tài)萃取的壓 力為 1500psi。5. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的荷葉中荷葉堿的測定方法，其特征在于，所述的靜態(tài)萃取的吹 掃時間為60s。6. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的荷葉中荷葉堿的測定方法，其特征在于，步驟2具體為:將萃取 液用甲醇稀釋后在15000r/min下離心5min，取上清液。7. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的荷葉中荷葉堿的測定方法，其特征在于，液相色譜分析所用的 儀器為:Thermo U-3000雙三元液相色譜儀。8. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的荷葉中荷葉堿的測定方法，其特征在于，所述的ASE萃取法所 采用的儀器為ASE350快速溶劑萃取儀。
【文檔編號】G01N30/06GK105911174SQ201610234643
【公開日】2016年8月31日
【申請日】2016年4月15日
【發(fā)明人】陳學(xué)松, 王麗麗, 韋濤, 梁美艷, 黃新惠
【申請人】廣西壯族自治區(qū)梧州食品藥品檢驗所