專利名稱：通過卵內(nèi)飼喂腸道調(diào)節(jié)劑增強(qiáng)卵生物種的發(fā)育的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及通過卵內(nèi)施用營(yíng)養(yǎng)物和/或腸道調(diào)節(jié)劑而增強(qiáng)卵生物種例如禽、爬行動(dòng)物和魚的發(fā)育和生長(zhǎng)的方法。
縮略語(yǔ)表HMB - β-羥基-β-丁酸甲酯IO- 卵內(nèi)飼喂LAP - 亮氨酸氨肽酶mm- 毫米mOsm - 毫滲量(milliosmoles)P - P-值R2- 可預(yù)測(cè)性SD- 標(biāo)準(zhǔn)差
背景技術(shù)：
當(dāng)胚胎卵黃被外源食物替代時(shí)，孵化后的禽的營(yíng)養(yǎng)來源發(fā)生改變。孵化的禽必須從基于卵黃營(yíng)養(yǎng)的食物(主要是脂肪)過渡到固體飼喂食物(主要是碳水化合物和蛋白)。孵化的胃腸道未發(fā)育完全的禽實(shí)際上仍有卵黃囊附著于其上。孵化后，胃腸道經(jīng)過快速的形態(tài)學(xué)、生化和細(xì)胞發(fā)育以吸收所攝入的營(yíng)養(yǎng)。由于腸是提供用于生長(zhǎng)的前體的器官，其發(fā)育對(duì)于動(dòng)物的生長(zhǎng)、體重增加、利用食物營(yíng)養(yǎng)和抵抗腸道疾病病原體方面的最終能力具有重要的作用。
所有卵生物種在孵化過程中其消化食物成分的能力均未發(fā)育完全；相應(yīng)地使得所孵化的禽的生長(zhǎng)和腸道疾病抗性受到了很大的抑制。這一消化能力在孵化后的發(fā)展通過將腸組織暴露于食物成分而受到促進(jìn)，但是通常受到影響孵化的各種環(huán)境因素的損害。期望能在孵化前增強(qiáng)所述動(dòng)物的消化能力，因?yàn)橹挥泻苌俚沫h(huán)境因素能在孵育過程中損害腸道發(fā)育。此外，由于在許多情形中觀察到了更短的孵化期和虛弱的孵化禽(例如當(dāng)通過年輕母雞產(chǎn)蛋時(shí))，仍然需要刺激孵化后的禽的腸道發(fā)育和生長(zhǎng)的新的途徑。
已經(jīng)過卵內(nèi)施用被導(dǎo)入到具有胚胎的家禽卵中的物質(zhì)的例子包括活培養(yǎng)物疫苗、抗生素、維生素和競(jìng)爭(zhēng)性排除培養(yǎng)基。主要參見被授予Hebrank的美國(guó)專利US 6,244,214。治療物質(zhì)的特定例子被描述于授予Sharma等的美國(guó)專利US 4,458,630，和授予Fredericksen等的美國(guó)專利US 5,028,421。也參見授予Sharma等的的美國(guó)專利US 4,458,630，授予Hebrank的美國(guó)專利US 4,681,063，和授予Sheeks等的美國(guó)專利US5,158,038。但是，卵內(nèi)導(dǎo)入治療物質(zhì)以增強(qiáng)動(dòng)物的腸道發(fā)育和全面生長(zhǎng)迄今為止還未被描述過。
發(fā)明概述鑒于前述，本發(fā)明的主題的第一方面是一種通過將營(yíng)養(yǎng)組合物卵內(nèi)飼喂給卵生動(dòng)物例如禽以促進(jìn)該動(dòng)物的生長(zhǎng)的方法。以促進(jìn)所述動(dòng)物的生長(zhǎng)的有效量施用該營(yíng)養(yǎng)組合物。在一個(gè)實(shí)施方式中，該動(dòng)物的生長(zhǎng)在孵化后被增強(qiáng)。在其它實(shí)施方式中，該動(dòng)物的生長(zhǎng)在孵化前被增強(qiáng)，而在其它實(shí)施方式中該動(dòng)物的生長(zhǎng)在孵化前和孵化后都被增強(qiáng)。所述營(yíng)養(yǎng)組合物主要包括至少一種選自以下一組的養(yǎng)分碳水化合物、蛋白、肽和氨基酸。任選地，所述營(yíng)養(yǎng)組合物可以包括礦物質(zhì)、維生素和其它營(yíng)養(yǎng)藥。在某些實(shí)施方式中，所述營(yíng)養(yǎng)組合物被卵內(nèi)施用至羊膜液中。
本發(fā)明的主題的第二方面是一種通過將腸道調(diào)節(jié)劑卵內(nèi)飼喂給卵生動(dòng)物例如禽以促進(jìn)該動(dòng)物的生長(zhǎng)的方法。以促進(jìn)所述動(dòng)物的腸道發(fā)育和/或生長(zhǎng)的有效量施用該腸道調(diào)節(jié)劑。在一個(gè)實(shí)施方式中，該動(dòng)物的腸道發(fā)育/或生長(zhǎng)在孵化后被增強(qiáng)。在其它實(shí)施方式中，該動(dòng)物的腸道發(fā)育和/或生長(zhǎng)在孵化前被增強(qiáng)，而在其它實(shí)施方式中該動(dòng)物的腸道發(fā)育和/或生長(zhǎng)在孵化前和孵化后都被增強(qiáng)。在某些實(shí)施方式中，所述腸道調(diào)節(jié)劑被卵內(nèi)施用到羊膜液中。在一個(gè)特定的實(shí)施方式中，所述腸道調(diào)節(jié)劑是β-羥基-β-丁酸甲酯(HMB)，或其可食用的鹽。
本發(fā)明的主題的第三方面是一種促進(jìn)禽的生長(zhǎng)的方法，該方法包括同時(shí)對(duì)所述禽卵內(nèi)施用(i)一種營(yíng)養(yǎng)組合物，和(ii)一種腸道調(diào)節(jié)劑。以促進(jìn)所述禽的腸道發(fā)育和/或生長(zhǎng)的有效量同時(shí)施用所述營(yíng)養(yǎng)組合物和腸道調(diào)節(jié)劑。在一個(gè)實(shí)施方式中，所述營(yíng)養(yǎng)組合物和腸道調(diào)節(jié)劑相互協(xié)作地促進(jìn)禽的生長(zhǎng)。在一個(gè)實(shí)施方式中，該動(dòng)物的腸道發(fā)育和/或生長(zhǎng)在孵化后被增強(qiáng)。在其它實(shí)施方式中，該動(dòng)物的腸道發(fā)育和/或生長(zhǎng)在孵化前被增強(qiáng)，而在其它實(shí)施方式中該動(dòng)物的腸道發(fā)育和/或生長(zhǎng)在孵化前和孵化后都被增強(qiáng)。所述營(yíng)養(yǎng)組合物主要包括至少一種選自以下一組的養(yǎng)分碳水化合物、蛋白、肽和氨基酸。任選地，所述營(yíng)養(yǎng)組合物可以包括礦物質(zhì)、維生素和其它營(yíng)養(yǎng)藥。在一個(gè)實(shí)施方式中，所述營(yíng)養(yǎng)組合物和腸道調(diào)節(jié)劑通過飼喂而施用。
本發(fā)明的另一方面是一種養(yǎng)分和一種腸道調(diào)節(jié)劑(分開或組合在一起)在制備如本申請(qǐng)所述的用于卵生動(dòng)物的卵內(nèi)飼喂的組合物中的用途。
相應(yīng)地，本發(fā)明的一個(gè)目的是提供一種促進(jìn)卵生動(dòng)物例如禽在孵化前和/或孵化后的腸道發(fā)育和/或生長(zhǎng)的方法，所述卵生動(dòng)物包括食用動(dòng)物和非食用動(dòng)物例如瀕臨滅絕的物種。
前面已經(jīng)描述了本發(fā)明的一個(gè)目的，且本發(fā)明對(duì)其進(jìn)行了完整或部分描述，當(dāng)參照本申請(qǐng)說明書和下述附圖時(shí)，本發(fā)明的其它目的將變得顯而易見。


圖1是表示卵內(nèi)飼喂碳水化合物(A)、碳水化合物和HMB(B)、僅HMB(D)和未注射的對(duì)照組(C)在孵育的第20天(孵化前一天)對(duì)雛雞空腸絨毛表面積(mm2)的影響的柱狀圖。柱狀圖每一柱表示的是10個(gè)受檢雞的平均值±SD。
圖2是表示卵內(nèi)飼喂碳水化合物(A)、碳水化合物和HMB(B)、僅HMB(D)和未注射的對(duì)照組(C)在孵育的第20天(孵化前一天)對(duì)胚腸中的空腸截面的組織觀測(cè)的組織學(xué)效應(yīng)的照片。組D和B(HMB處理組)顯示出比組C和A更發(fā)達(dá)的絨毛結(jié)構(gòu)。
圖3是表示卵內(nèi)飼喂碳水化合物(A)、碳水化合物和HMB(B)、僅HMB(D)和未注射的對(duì)照組(C)在孵化后的第4天對(duì)雛雞空腸絨毛表面積(mm2)的影響的柱狀圖。柱狀圖的每一柱表示的是10個(gè)受檢雞的平均值±SD。
圖4是表示卵內(nèi)飼喂碳水化合物(A)、碳水化合物和HMB(B)、僅HMB(D)和未注射的對(duì)照組(C)在孵化后的第4天對(duì)胚腸中的空腸截面的組織觀測(cè)的組織學(xué)效應(yīng)的照片。組D和B(HMB處理組)顯示出比組C和A更發(fā)達(dá)的絨毛結(jié)構(gòu)。
圖5是表示卵內(nèi)飼喂碳水化合物(A)、碳水化合物和HMB(B)、僅HMB(D)和未注射的對(duì)照組(C)在孵育的第18、19、20天、孵化時(shí)和4日齡時(shí)對(duì)雛雞每克肝組織的糖原含量的影響的柱狀圖。柱狀圖每一柱表示的是10個(gè)受檢雞的平均值±SD。
圖6是表示卵內(nèi)注射的HMB的量(0.1ml鹽溶液中的HMB的微克數(shù))在孵育的第24天對(duì)商品火雞幼雛的孵化率(孵化百分比)的影響的柱狀圖。
圖7是表示卵內(nèi)注射的HMB的量(0.1ml鹽溶液中的HMB的微克數(shù))在孵育的第24天對(duì)商品火雞幼雛的肝糖原濃度的影響的柱狀圖。
圖8是表示卵內(nèi)注射的HMB的量(0.1ml鹽溶液中的HMB的微克數(shù))在孵育的第24天對(duì)商品火雞幼雛的血漿葡萄糖濃度的影響的柱狀圖。
圖9是表示卵內(nèi)飼喂溶液的毫滲量(mOsm)對(duì)仔雞的孵化能力的影響的圖。
優(yōu)選實(shí)施方式的詳述本申請(qǐng)所提及的所有專利和文獻(xiàn)在本申請(qǐng)中通過引用以其整體被清楚地并入本發(fā)明。
可以通過本發(fā)明的方法處理的動(dòng)物概括地說是非-哺乳動(dòng)物卵生物種例如禽，或冷血?jiǎng)游锢缗佬袆?dòng)物、兩棲動(dòng)物和魚。在某些實(shí)施方式中，本申請(qǐng)所描述的方法被用于處理禽。禽的任何物種都可以通過本申請(qǐng)所描述的方法進(jìn)行處理，包括但不限于被用做食物的禽例如雞、火雞、鴨、鵝、鵪鶉、雉雞和鴕鳥。在其它實(shí)施方式中，本申請(qǐng)所描述的方法也可以與飼養(yǎng)瀕臨滅絕的物種例如美洲鶴一起使用以幫助努力保護(hù)那些物種。
本文所用術(shù)語(yǔ)“卵內(nèi)飼喂”或“IO”是指將化合物施用到胚胎羊膜中，所述化合物隨后通過口服的方式被胚胎所吸收并因此與消化道的組織相接觸。術(shù)語(yǔ)“卵內(nèi)飼喂”被用以描述本申請(qǐng)的方法，因?yàn)榉趸龅膭?dòng)物在孵化前通過口服攝入羊膜液。因此，將營(yíng)養(yǎng)物或腸道調(diào)節(jié)劑施用到胚胎羊膜中是在孵化前給胚胎主要飼喂外源食物。
如本申請(qǐng)中的方法中所使用的那樣，卵內(nèi)飼喂包括將營(yíng)養(yǎng)物的溶液或懸浮液施用到胚胎羊膜中，任選地一起或分開施用其它調(diào)節(jié)腸道發(fā)育的化合物，以改善孵化出的動(dòng)物在從胚胎營(yíng)養(yǎng)在過渡到適應(yīng)消化食物期間的營(yíng)養(yǎng)狀況。在這一關(guān)鍵時(shí)期的最佳營(yíng)養(yǎng)狀況對(duì)于消化、骨骼、肌肉和免疫系統(tǒng)發(fā)育非常關(guān)鍵，并有助于內(nèi)穩(wěn)態(tài)激素狀態(tài)正常化和維持平衡代謝。
本申請(qǐng)的方法的一個(gè)方面是在胚胎發(fā)育的最后1/4期間將營(yíng)養(yǎng)物和腸道調(diào)節(jié)劑卵內(nèi)輸送至胚胎羊膜中。這一方法是有利的，因?yàn)檠蚰け慌咛タ诜z入。因此，卵內(nèi)施用的飼喂溶液/懸浮液被胚胎所吸收并被呈遞給腸組織例如腸上皮細(xì)胞和腸粘膜的其它細(xì)胞。
在某些實(shí)施方式中，本申請(qǐng)所描述的卵內(nèi)飼喂技術(shù)用于增強(qiáng)晚期胚胎和孵化出的動(dòng)物的腸道發(fā)育，并增加孵化出的動(dòng)物在孵化前和孵化時(shí)以及孵化一段時(shí)間后(例如2周或3周)的體重(優(yōu)選增加存活率和疾病抗性)。
本申請(qǐng)所用術(shù)語(yǔ)“同時(shí)施用”是指兩種單獨(dú)的化合物或組合物間的施用時(shí)間非常接近(例如，同時(shí)或相繼)。同時(shí)施用可以任選地通過將這兩種化合物或組合物在共同的載體中進(jìn)行施用(例如，通過將一種腸道調(diào)節(jié)劑添加到食物組合物中，或?qū)⒁环N營(yíng)養(yǎng)組合物與一種腸道調(diào)節(jié)劑組合在一種合適的載體中)。
本申請(qǐng)所用術(shù)語(yǔ)“相互協(xié)作地”的意思是兩種單獨(dú)的活性劑(例如，一種營(yíng)養(yǎng)組合物和一種腸道調(diào)節(jié)劑)的組合效應(yīng)大于這兩種試劑單獨(dú)施用時(shí)將預(yù)期到的加和效應(yīng)。
本申請(qǐng)所用術(shù)語(yǔ)“生長(zhǎng)”主要是指以下效應(yīng)中的至少一種相對(duì)于沒有接受營(yíng)養(yǎng)組合物和/或腸道調(diào)節(jié)劑的卵內(nèi)施用的動(dòng)物，孵化后或孵化前的體重增加增強(qiáng)或提高，孵化時(shí)的孵化出的動(dòng)物更大，孵化后的食物利用效率提高，達(dá)到市場(chǎng)(消費(fèi))規(guī)模(即預(yù)定規(guī)模)的天數(shù)減少等等。
本申請(qǐng)所用術(shù)語(yǔ)“營(yíng)養(yǎng)物”是指其所飼喂的動(dòng)物生長(zhǎng)所必需的必需營(yíng)養(yǎng)化合物。營(yíng)養(yǎng)物包括(a)蛋白質(zhì)和蛋白質(zhì)片段(例如肽和氨基酸例如賴氨酸)；(b)碳水化合物(例如糖包括單糖、淀粉、糊精、右旋糖、寡糖和多糖)；(c)脂質(zhì)；和其它在本領(lǐng)域中被公認(rèn)為營(yíng)養(yǎng)物的化合物。
本申請(qǐng)所用術(shù)語(yǔ)“營(yíng)養(yǎng)組合物”是指包含至少一種營(yíng)養(yǎng)物的食物組合物。在一些實(shí)施方式中，營(yíng)養(yǎng)組合物包含(a)至少一種蛋白質(zhì)或蛋白質(zhì)片段，和/或(b)至少一種碳水化合物。營(yíng)養(yǎng)組合物可以任選地包括礦物質(zhì)、維生素和本領(lǐng)域中已知的短肽。
該營(yíng)養(yǎng)組合物的總熱量組合物將隨著被處理的特定物種而變化，但典型地將在從約1/10、1、5或10卡路里至約20、40、100或200卡路里或更大的范圍內(nèi)變化。對(duì)于雞和火雞，營(yíng)養(yǎng)組合物的總熱量組合物通常在約0.5或1至約20或40卡路里的范圍內(nèi)變化。因?yàn)殡u卵的平均熱量含量為約70卡路里，卵內(nèi)飼喂溶液可以額外地補(bǔ)充雞卵的總卡路里的0.5％或1％至約10％。
該營(yíng)養(yǎng)組合物可以任何形式進(jìn)行施用，包括液體形式、固體形式及其組合形式。合適的形式的例子包括但不限于溶液、乳劑、懸浮液、混合物等等。在一個(gè)實(shí)施方式中，該營(yíng)養(yǎng)組合物包括至少一種蛋白質(zhì)、肽或氨基酸，且可以可選地或額外地包括至少一種碳水化合物(例如單糖或多糖)。在一個(gè)普通的實(shí)施方式中，該營(yíng)養(yǎng)組合物包含至少一種碳水化合物。在一個(gè)特定的實(shí)施方式中，該組合物中的單糖和/或多糖、和/或蛋白、和/或氨基酸貢獻(xiàn)了至少約1/10的總卡路里。
本申請(qǐng)所用術(shù)語(yǔ)“腸道調(diào)節(jié)劑”是指一種刺激消化系統(tǒng)的細(xì)胞的發(fā)育和/或代謝的化合物，這樣的細(xì)胞包括但不限于腸上皮細(xì)胞、杯狀細(xì)胞、腸淋巴細(xì)胞等。合適的腸道調(diào)節(jié)劑的例子包括但不限于β-羥基-β-丁酸甲酯(HMB)及其可食用的鹽、有機(jī)鋅復(fù)合物(例如Zn-氨基酸復(fù)合物、Zn-蛋白鹽、和Zn與碳水化合物或蛋白或有機(jī)酸的螯合物)、凝集素(例如伴刀豆凝集素A、商陸有絲分裂原、面筋抗原、大豆凝集素和來自微生物來源的凝集素)、谷氨酰胺或谷氨酸、精氨酸、肉毒堿、肌酸、維生素A、D或E、甜菜堿、膽堿、卵磷脂、S-腺苷甲硫氨酸、酪氨酸及其代謝衍生物(例如多巴胺、去甲腎上腺素、腎上腺素)、色氨酸及其代謝衍生物(例如五羥色胺、N乙酰5甲氧基色胺)、葡糖胺、脂肪酸衍生物(例如ω-3脂肪酸、共軛亞油酸和前列腺素)和抗氧化劑(例如生物類黃酮、抗壞血酸、蕓香苷、丁化羥基甲苯(BHT)、乙氧基喹啉、維生素、pyrroliquinoline、苯醌及其衍生物以及類胡蘿卜素)。
本申請(qǐng)所用術(shù)語(yǔ)β-羥基-β-丁酸甲酯(HMB)包括其可食用的鹽是已知的，并被記載于授予Nissen的美國(guó)專利US 5,028,440中?？墒秤玫腍MB鹽包括但不限于Ca-HMB。
腸道調(diào)節(jié)劑可以任何適當(dāng)?shù)牧渴┯糜诼?。?duì)于雞和火雞卵而言，適當(dāng)?shù)牧靠梢允菑?.01、0.05或0.1微克/卵至約1、2、3或5微克/卵的范圍。腸道調(diào)節(jié)劑可以以液體或固體溶液的形式而施用。在這一實(shí)施方式中，施用給動(dòng)物的腸道調(diào)節(jié)劑的量可以表達(dá)成所施用的溶液的百分比，該百分比可以是從約0.01％、0.02％、0.05％或0.1％的腸道調(diào)節(jié)劑至約1.0％、2.0％、5.0％或10.0％的腸道調(diào)節(jié)劑的范圍。
在某些實(shí)施方式中，可以將腸道調(diào)節(jié)劑和營(yíng)養(yǎng)組合物同時(shí)施用于動(dòng)物。在這樣的一個(gè)實(shí)施方式中，腸道調(diào)節(jié)劑可以作為與營(yíng)養(yǎng)組合物制劑分離的配制品進(jìn)行施用。在另一實(shí)施方式中，施用給動(dòng)物的腸道調(diào)節(jié)劑可以包含所述營(yíng)養(yǎng)組合物配制品的一部分。在另一實(shí)施方式中，腸道調(diào)節(jié)劑和營(yíng)養(yǎng)組合物可以在施用前被一起組合在載體中。
在一個(gè)實(shí)施方式中，所述施用給動(dòng)物的組合物或配制品的滲透壓不高于約800毫滲量(mOsm)，在特定的實(shí)施方式中所述組合物或配制品的滲透壓從約50、100、200或300毫滲量至約600或700毫滲量的范圍。
如上述，本發(fā)明可以在任何類型的卵上實(shí)施，包括雞、火雞、鴨、鵝、鵪鶉、雉雞和鴕鳥卵。雞和火雞卵(包括肉用型雞卵)被用于本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方式中。被本發(fā)明的方法處理的卵是受精卵，在某些實(shí)施方式中所述受精卵處于孵育的最后1/4期間。可以在孵育的約第15-19天對(duì)雞卵進(jìn)行處理，在某些實(shí)施方式中是在孵育的約第17或18天對(duì)其進(jìn)行處理?？梢栽诜跤募s第20-26天對(duì)火雞卵進(jìn)行處理，在某些實(shí)施方式中是在孵育的約第22、23或24天對(duì)其進(jìn)行處理。
營(yíng)養(yǎng)組合物和/或腸道調(diào)節(jié)劑的注射或施用位點(diǎn)可以是在氣室中，或是在羊膜所圈定的區(qū)域內(nèi)包括羊膜液、卵黃囊或胚胎自身。將所述營(yíng)養(yǎng)組合物和/或腸道調(diào)節(jié)劑卵內(nèi)飼喂于該禽，可以將所述營(yíng)養(yǎng)組合物施用到羊膜液中，然后所述禽可以口服攝入該營(yíng)養(yǎng)組合物。或者，可以將所述營(yíng)養(yǎng)組合物和/或腸道調(diào)節(jié)劑施用到氣室中，其中可以在內(nèi)部管道上被口服攝入所述組合物(或通過橫跨氣室膜進(jìn)行擴(kuò)散)。在另一個(gè)實(shí)施方式中，所述營(yíng)養(yǎng)組合物和/或腸道調(diào)節(jié)劑可以通過直接注入卵黃囊內(nèi)進(jìn)行施用。因此，在一個(gè)實(shí)施方式中，所述營(yíng)養(yǎng)組合物被沉積在羊膜液中；在另一個(gè)實(shí)施方式中，所述腸道調(diào)節(jié)劑被沉積在氣室中。所述營(yíng)養(yǎng)組合物和/或腸道調(diào)節(jié)劑的施用區(qū)域可以是相同的或不同的。例如，可以將所述營(yíng)養(yǎng)組合物施用到羊膜液中，可以將腸道調(diào)節(jié)劑施用到氣囊中，反之亦然。在一個(gè)實(shí)施方式中，將腸道調(diào)節(jié)劑和營(yíng)養(yǎng)組合物一起施用到同一區(qū)域例如羊膜液中。
施用的具體機(jī)制不是實(shí)施本發(fā)明的方法的關(guān)鍵，但是期望該施用方法不過度損傷所述胚胎的組織和器官，這樣所述處理將不會(huì)顯著地降低孵化能力和/或孵化率。配有約22號(hào)或23號(hào)規(guī)格的針頭的注射器適用于該目的，不過其它大小的針頭和其它的輸送方法同樣是有用的。對(duì)于注入羊膜液中的情形，所述針頭被插入到所述卵中。在插入所述針頭前，可任選地打出一導(dǎo)向孔或?qū)⑵浯┻^外殼以防止針頭損傷或變鈍。如果需要，可以在注射后用密封材料例如蠟或類似物質(zhì)將所述卵密封以防止此后進(jìn)入不希望有的細(xì)菌。
用于禽類胚胎的高速、自動(dòng)化注射系統(tǒng)特別適用于本發(fā)明。典型的高速、自動(dòng)化注射系統(tǒng)包括但不限于那些在授予Miller的US 4,040,388和US 4,469,047，以及授予Miller和Sheeks的US 4,593,646中所記載的系統(tǒng)。有用于本發(fā)明的方法的其它系統(tǒng)被記載于授予Hebrank的兩篇專利US 4,903,635和US 4,681,063中。有用的注射系統(tǒng)可以從Embrex Inc.，Research Triangle Park，North Carolina，USA.商購(gòu)獲得。
施用所述營(yíng)養(yǎng)組合物和/或腸道調(diào)節(jié)劑后，將卵孵育至孵化。然后給活著的動(dòng)物飼喂一種合適的飼料組合物并如上述進(jìn)行生長(zhǎng)，典型地生長(zhǎng)至少1-2周的一段時(shí)期，這取決于特定的物種和該物種的最終用途。所述營(yíng)養(yǎng)組合物和/或腸道調(diào)節(jié)劑的施用所導(dǎo)致的孵化后生長(zhǎng)的增強(qiáng)也可以在所產(chǎn)生的整個(gè)動(dòng)物群體中觀測(cè)到。所述營(yíng)養(yǎng)組合物和/或腸道調(diào)節(jié)劑的施用所導(dǎo)致的孵化前生長(zhǎng)的增強(qiáng)也可以在所產(chǎn)生的整個(gè)動(dòng)物群體中觀測(cè)到。
如上述，本發(fā)明的技術(shù)的一個(gè)方面涉及用于本申請(qǐng)的動(dòng)物卵內(nèi)飼喂的組合物和這種組合物的用途。這種組合物可以通過將上述的一種或多種營(yíng)養(yǎng)物以上述的量進(jìn)行組合，和/或通過將如本申請(qǐng)所述的腸道調(diào)節(jié)劑組合在一種合適的用于施用的載體中來而制備。在一個(gè)實(shí)施方式中，所述載體適于注射施用。在一個(gè)特定的實(shí)施方式中，所述組合物是一種適于是注射到卵黃囊內(nèi)的乳劑。適合的載體包括但不限于水和鹽溶液。所述組合物將通常具有上述的滲透壓。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方式中，所述組合物是無菌的。所述組合物可以如上述被制備成單位劑量的形式或用于以合適的注射工具進(jìn)行注射的一次注射量的形式。
以下的非限制性實(shí)施例被包括在內(nèi)以舉例說明本發(fā)明的優(yōu)選的具體實(shí)施方式
。以下實(shí)施例的某些方面是按照本申請(qǐng)的發(fā)明人所建立或預(yù)期能很好地實(shí)施本發(fā)明的技術(shù)和程序進(jìn)行描述。這些實(shí)施例通過使用本申請(qǐng)發(fā)明人的標(biāo)準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)室程序進(jìn)行例證。根據(jù)本發(fā)明所做公開和本領(lǐng)域的普通技術(shù)水平，本領(lǐng)域技術(shù)人員將認(rèn)識(shí)到以下實(shí)施例僅用于例證，在不偏離本發(fā)明的精神和范圍的情況下可以對(duì)其應(yīng)用眾多的變形、修飾和改變。
實(shí)施例1-4的實(shí)驗(yàn)方法和材料用腸道調(diào)節(jié)劑HMB卵內(nèi)飼喂肉雞正在孵化的肉仔雞卵來自39-40周齡的商品Ross種群，它們是根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)孵化程序和條件進(jìn)行孵育的。在孵育的第18天，將含有活的胚胎的卵進(jìn)行稱重，并將其分為4個(gè)處理組，每組100枚卵。平均卵重為55克，然后根據(jù)相似的重量頻率分布將這些卵分為不同的處理組。然后用23號(hào)規(guī)格的針頭將4組卵內(nèi)飼喂處理溶液中的其中一組(每枚卵1ml)注射到每組100枚卵的羊膜中。4種卵內(nèi)飼喂處理包括A)于0.5％NaCl鹽溶液中的20％糊精+3％麥芽糖；B)于0.5％NaCl鹽溶液中的20％糊精+3％麥芽糖+0.1％Ca-HMB；C)未注射的對(duì)照組；和D)于0.5％NaCl鹽溶液中的0.1％Ca-HMB。自Metabolic Technologies，Inc.，Ames，Iowa，USA獲得Ca-HMB。注射后，將所有卵放置于孵化籃中使得每一處理平均分布到孵化器的每個(gè)區(qū)域。
在孵育的第19和第20天、孵化時(shí)和孵化后的第4天對(duì)每一處理組取樣10枚卵以測(cè)定肝糖原濃度和空腸絨毛表面積。于孵化時(shí)和10日齡時(shí)測(cè)定每一處理組的10只禽的相對(duì)的胸肉大小。在孵化時(shí)和在10日齡時(shí)進(jìn)行稱重(每處理組約70只禽)。
實(shí)施例1腸道調(diào)節(jié)劑對(duì)肉雞體重的影響上述卵內(nèi)處理對(duì)體重的影響的結(jié)果示于表1。
表1卵內(nèi)飼喂碳水化合物(A)、碳水化合物和HMB(B)、僅HMB(D)和未注射的對(duì)照組(C)在孵化時(shí)和孵化后第10天后對(duì)肉雞體重的影響。1

1每個(gè)平均值表示每一處理組約70只仔雞的平均值。
2括號(hào)內(nèi)表示相對(duì)于對(duì)照組增加的百分比。
a，b同一列中具有不同的字母上標(biāo)的平均值具有顯著的差異(P＜0.05)。
所有3種卵內(nèi)飼喂處理顯著地(P＜0.05)將孵化時(shí)的體重相對(duì)于對(duì)照組處理增加了3％。在10日齡，所有卵內(nèi)飼喂處理仍然具有較重的體重，但是只有含HMB和碳水化合物的卵內(nèi)飼喂處理(處理B)相對(duì)于對(duì)照組體重顯著(P＜0.05)增加了4.8％。這些結(jié)果表明，直至孵化后10天，腸道調(diào)節(jié)劑HMB加強(qiáng)和幫助維持碳水化合物卵內(nèi)飼喂溶液的效應(yīng)。
實(shí)施例2腸道調(diào)節(jié)劑對(duì)肉雞胸肉重的影響除了對(duì)體重的積極作用以外，卵內(nèi)飼喂還顯著提高了相對(duì)于體重的胸肌重量(表2)。在孵化時(shí)，相對(duì)于對(duì)照處理組，單獨(dú)卵內(nèi)飼喂HMB增加的相對(duì)胸肉大小(體重的百分比)為15.1％。盡管相對(duì)于對(duì)照組卵內(nèi)飼喂碳水化合物溶液在孵化時(shí)僅增加了3.6％的胸肉大小，將HMB添加到碳水化合物卵內(nèi)溶液中將該效應(yīng)增大至7.3％。到第10日齡，與對(duì)照組處理相比，所有的卵內(nèi)飼喂處理都顯著增加了相對(duì)胸肉大小。10日齡時(shí)，各卵內(nèi)飼喂處理間沒有顯著的差異。
肉雞的經(jīng)濟(jì)價(jià)值在很大程度上與其胸肉產(chǎn)量相關(guān)。胸肉產(chǎn)量潛力在胚胎發(fā)育的最后一階段和孵化后的頭幾天期間被建立起來。孵化后頭10天期間所觀測(cè)到的胸肉產(chǎn)量上的任何增加可以維持至上市日齡。這些結(jié)果表明卵內(nèi)飼喂增強(qiáng)了早期肌肉發(fā)育，尤其是如果卵內(nèi)飼喂溶液含有HMB時(shí)。
表2卵內(nèi)(IO)飼喂碳水化合物(A)、碳水化合物和HMB(B)、僅HMB(D)和未注射的對(duì)照組(C)在孵化時(shí)和孵化后第10天后對(duì)肉雞的相對(duì)胸肉重的影響。1

1每個(gè)平均值表示每一處理組約70只仔雞的平均值。
2括號(hào)內(nèi)表示相對(duì)于對(duì)照組增加的百分比。
a，b同一列中具有不同的字母上標(biāo)的平均值具有顯著的差異(P＜0.05)。
實(shí)施例3腸道調(diào)節(jié)劑對(duì)腸吸收表面積的影響卵內(nèi)飼喂處理對(duì)體重和早期肌肉發(fā)育的許多正效應(yīng)與腸道發(fā)育和吸收營(yíng)養(yǎng)的能力的增強(qiáng)有關(guān)。吸收營(yíng)養(yǎng)的能力與吸收表面積成正比。在卵內(nèi)飼喂后兩天(孵育的第20天)，卵內(nèi)飼喂處理顯著地增加了腸(空腸)絨毛的表面積(圖1)。碳水化合物溶液的卵內(nèi)飼喂(處理A)相對(duì)于對(duì)照組的絨毛表面積增加了50％，而單獨(dú)卵內(nèi)飼喂HMB導(dǎo)致相對(duì)于對(duì)照組的絨毛表面積增加了超過140％。此外，HMB顯著地增強(qiáng)了卵內(nèi)飼喂碳水化合物溶液的正效應(yīng)。在孵育的第20天進(jìn)行的組織學(xué)觀測(cè)也顯示出了顯著的卵內(nèi)處理的處理效應(yīng)(圖2)。在對(duì)照組處理中(組C)，觀測(cè)到絨毛處于發(fā)育的兩個(gè)不同的階段一半絨毛出現(xiàn)了絨毛芽，而另一半是更大的發(fā)育的絨毛結(jié)構(gòu)。此外，所述絨毛下的黏膜結(jié)構(gòu)的發(fā)育和有序性均明顯不如在卵內(nèi)飼喂處理組所觀測(cè)的那樣。
在接受了碳水化合物卵內(nèi)飼喂溶液(處理A)的20-日齡胚胎的平均絨毛大小大于對(duì)照組，但兩個(gè)發(fā)育期的絨毛階段仍很明顯。相反，接受了HMB的胚胎(處理B和D)明顯地具有更大的絨毛結(jié)構(gòu)，并且既便存在如在處理C和A的胚胎中觀測(cè)到的小絨毛芽，也是極少的。絨毛表面積測(cè)量和組織學(xué)觀測(cè)清楚地表明了卵內(nèi)飼喂增強(qiáng)了腸道發(fā)育并增加了吸收的表面積，尤其是當(dāng)包含了HMB時(shí)。這些觀測(cè)結(jié)果表明當(dāng)將HMB卵內(nèi)施用到胚胎羊膜中時(shí)，其增強(qiáng)或促進(jìn)了腸道發(fā)育。
在孵化的第4天，接受了卵內(nèi)飼喂處理的仔雞繼續(xù)呈現(xiàn)出顯著更大的空腸絨毛的表面積(圖3)。單獨(dú)卵內(nèi)飼喂了HMB的仔雞(處理D)相對(duì)于對(duì)照組仔雞其空腸絨毛的表面積大40％，這表明卵內(nèi)飼喂HMB的益處持續(xù)到了孵化后的最初的幾天。盡管在孵化后第4天，碳水化合物卵內(nèi)飼喂溶液(處理A)相對(duì)于對(duì)照組增加了約30％絨毛表面積，將HMB添加到碳水化合物卵內(nèi)溶液中(處理B)未導(dǎo)致任何可觀測(cè)到的有益效果。
孵化后4天所進(jìn)行的組織學(xué)觀測(cè)也揭示相對(duì)于碳水化合物處理對(duì)照而言，HMB卵內(nèi)飼喂的禽具有增加的絨毛長(zhǎng)度和均勻度(圖4)。在圖4中，組D和B(HMB處理)顯示出較組C和組A更為發(fā)達(dá)的絨毛結(jié)構(gòu)。
實(shí)施例4腸道調(diào)節(jié)劑對(duì)肉雞肝糖原水平的影響肝糖原含量是幼仔雞的能量狀態(tài)的指示劑。糖原是激發(fā)孵化過程和維持所述仔雞直至建立起正常采食之前所需的最初能力供給。高肝糖原含量，尤其是正好在孵化前和剛孵化后的高肝糖原含量，是激發(fā)早期發(fā)育所必需的良好能量水平的指示劑。
圖5表明了卵內(nèi)飼喂處理對(duì)肝糖原含量的影響根據(jù)胚胎或仔雞的年齡而不同。如期望的那樣，在孵育的第18天沒有處理效應(yīng)，因?yàn)檫@是處于在施用卵內(nèi)處理之前。在孵育的第19天(卵內(nèi)飼喂24小時(shí)后)，單獨(dú)卵內(nèi)飼喂了碳水化合物溶液的胚胎(處理1)相對(duì)于經(jīng)過其他處理飼喂的胚胎的肝糖原含量顯著更高。到孵育的第20天，單獨(dú)卵內(nèi)飼喂了HMB(處理D)的胚胎顯著增加了肝糖原含量，該含量持續(xù)至孵化時(shí)和孵化后4天。在孵化時(shí)，所有的卵內(nèi)飼喂處理都具有增加的肝糖原，最高達(dá)到相對(duì)于對(duì)照組處理的6倍。
實(shí)施例5卵內(nèi)腸道調(diào)節(jié)劑和蛋白質(zhì)對(duì)于從年輕母雞孵化出的肉雞的影響實(shí)施例1-4舉例說明了卵內(nèi)飼喂HMB對(duì)于小雞的早期生長(zhǎng)和發(fā)育有著積極的影響，無論卵內(nèi)飼喂溶液是否包含碳水化合物。在這一實(shí)施例中，將HMB作為腸道調(diào)節(jié)劑添加到所有含有蛋白質(zhì)和/或碳水化合物的卵內(nèi)飼喂溶液中，具體如下孵化的肉仔雞卵是來自30周齡商品Ross種群，它們是按照標(biāo)準(zhǔn)的孵化程序和條件孵育的。在孵育的第十八天，對(duì)含有活的胚胎的卵進(jìn)行稱重并把它們分為四個(gè)處理組，每組100枚卵。平均每枚卵重48克，然后根據(jù)相似的重量頻率分布將這些卵分為不同處理組。每個(gè)處理組中的100枚卵都是用23號(hào)的標(biāo)準(zhǔn)針頭將四種卵內(nèi)飼喂溶液中的一種注射到羊膜中(每枚卵1毫升)。四種卵內(nèi)處理包括P)于0.5％NaCl鹽溶液中的0.1％Ca-HMB+24％卵白蛋白；PS)于0.5％NaCl鹽溶液中的0.1％Ca-HMB+8％卵白蛋白+12％糊精+6％麥芽糖；C)未注射的對(duì)照組；和S)于0.5％NaCl鹽溶液中的0.1％Ca-HMB+12％糊精+6％麥芽糖。所有的卵注射完后，把它們放在孵化籃中使得每個(gè)處理平均地位于孵化器的每個(gè)區(qū)域。在孵化時(shí)、10日齡和28日齡時(shí)稱重(每個(gè)處理組約70枚)。
含有碳水化合物+HMB的卵內(nèi)飼喂溶液(處理S)顯著地增加孵化體重超過對(duì)照組3％，并且這種效應(yīng)一直持續(xù)到28日齡(表3)。在同時(shí)卵內(nèi)注射HMB以及蛋白質(zhì)和碳水化合物的組合(處理PS)的仔雞中也觀測(cè)到類似的或略好的體重情況。但同時(shí)卵內(nèi)注射蛋白質(zhì)和HMB在孵化時(shí)及隨后并沒有顯著地增加體重，就如實(shí)施例1中描述的那樣。
表3.卵內(nèi)飼喂蛋白質(zhì)+HMB卵內(nèi)飼喂溶液(P)，蛋白質(zhì)+碳水化合物+HMB(PS)，和碳水化合物+HMB(S)相對(duì)于未注射的對(duì)照組(C)以及該對(duì)照組本身對(duì)孵化時(shí)、孵化后第10天、孵化后第28天的肉雞體重的影響。1

1每個(gè)平均值表示每一處理組約70只仔雞的平均值。
2括號(hào)內(nèi)表示相對(duì)于對(duì)照組增加的百分比。
a，b同一列中具有不同的字母上標(biāo)的平均值具有顯著的差異(P＜0.05)。
本實(shí)施例和實(shí)施例1的結(jié)果之間的主要區(qū)別是產(chǎn)這些孵化卵的種群的年齡。在本實(shí)施例中，所使用的卵比實(shí)施例1的要小，并相對(duì)于在實(shí)施例1的實(shí)驗(yàn)中所使用的卵而言來自更年輕的母雞。盡管本發(fā)明不被某種特定的理論所束縛，來自年輕種雞的胚胎比更老的種雞的胚胎的卵內(nèi)資源更少，且相對(duì)于更老的種雞的胚胎它們對(duì)蛋白質(zhì)和碳水化合物的應(yīng)答更明顯。在本實(shí)施例中所提供的體重?cái)?shù)據(jù)證明了HMB有助于包括或不包括蛋白質(zhì)的碳水化合物卵內(nèi)飼喂的積極效果維持直到28日齡。
用于實(shí)施例6-9的實(shí)驗(yàn)方法和材料給火雞卵內(nèi)飼喂腸道調(diào)節(jié)劑孵化的火雞卵是來自35周齡商品雜交種群，它們是按照標(biāo)準(zhǔn)孵化所的程序和條件孵化的。在孵育的第23天，對(duì)含有活胚胎的卵稱重，并把它們分成四個(gè)處理組，每個(gè)處理100枚卵。平均卵重75克。然后根據(jù)相似的重量頻率分布，將這些卵分為不同處理組。每個(gè)處理組中的100枚卵都是用22號(hào)的標(biāo)準(zhǔn)針頭將四種卵內(nèi)飼喂溶液中的一種注射到羊膜中(每枚卵注射2毫升)。五種卵內(nèi)處理包括A)于0.4％NaCl鹽溶液中的18％卵白蛋白；B)于0.4％NaCl鹽溶液中的18％卵白蛋白+0.1％Ca-HMB；C)未注射的對(duì)照組；D)于0.4％NaCl鹽溶液中的0.1％Ca-HMB，和S)于0.4％NaCl鹽溶液中的20％糊精+3％麥芽糖。在注射完所有的卵后，然后把它們放在孵化籃中使得每個(gè)處理平均地位于孵化器的每個(gè)區(qū)域。在孵化時(shí)、3日齡和7日齡稱重(每個(gè)處理組約70只禽)。在孵化后的第一天和第七天抽取每個(gè)處理組的10枚卵，測(cè)量它們相對(duì)的胸肌重，肝臟和胸肌中的糖原總量，以及每克腸的亮氨酸氨肽酶(LPA)和麥芽糖酶的活性。
實(shí)施例6腸道調(diào)節(jié)劑對(duì)火雞體重的影響表4中顯示不同的卵內(nèi)飼喂溶液處理對(duì)體重和早期生長(zhǎng)的影響。表4.卵內(nèi)飼喂蛋白(A)，蛋白+HMB(B)，HMB(D)，和碳水化合物(S)相對(duì)于未注射的對(duì)照組(C)以及該對(duì)照組本身對(duì)火雞孵化后1，3和7日齡的體重的影響1。

1每個(gè)平均值表示每一處理組約70只仔雞的平均值。
2括號(hào)內(nèi)表示相對(duì)于對(duì)照組增加的百分比。
a，b，c同一列中具有不同的字母上標(biāo)的平均值具有顯著的差異(P＜0.05)。
與對(duì)照組處理相比，所有的卵內(nèi)飼喂溶液都顯著地提高了孵化時(shí)的體重(P＜0.05)。接受碳水化合物或蛋白質(zhì)的卵內(nèi)飼喂溶液的幼禽都可以觀測(cè)到孵化時(shí)的最大體重。僅接受HMB卵內(nèi)飼喂溶液對(duì)孵化時(shí)的體重產(chǎn)生積極應(yīng)答，但是降低了卵內(nèi)飼喂蛋白質(zhì)的正效應(yīng)，很可能因?yàn)槟芰渴谴龠M(jìn)早期生長(zhǎng)的限制因素。盡管蛋白質(zhì)和碳水化合物兩者對(duì)孵化時(shí)的體重的影響最大，但是他們的效應(yīng)沒有持續(xù)至3日齡和7日齡。相反，那些單獨(dú)注射HMB或者和蛋白質(zhì)一起注射的幼禽，它們不僅保留了相對(duì)于對(duì)照組在體重方面的優(yōu)勢(shì)，而且這一優(yōu)勢(shì)隨著所述禽的生長(zhǎng)而增加。因?yàn)镠MB在早期發(fā)育時(shí)期用于增強(qiáng)腸道發(fā)育，所以幼禽能夠在孵化后的第一周更有效的利用食物營(yíng)養(yǎng)以激發(fā)更迅速的生長(zhǎng)。
實(shí)施例7腸道調(diào)節(jié)劑對(duì)火雞胸肉重量的影響卵內(nèi)飼喂對(duì)早期生長(zhǎng)的影響與孵化時(shí)和7日齡的胸肉大小的增加有非常大地的關(guān)系。在孵化時(shí)僅卵內(nèi)飼喂蛋白質(zhì)溶液的幼禽比對(duì)照組幼禽的肌肉重22％，但是這一優(yōu)勢(shì)沒有持續(xù)到7日齡(表5)。同樣，在孵化時(shí)觀測(cè)到卵內(nèi)飼喂碳水化合物溶液的幼禽比對(duì)照組幼禽胸肉大10％，但沒有持續(xù)到7日齡。在孵化時(shí)，卵內(nèi)飼喂HMB的幼禽的胸肉重比對(duì)照組顯著的高(14％)，但當(dāng)HMB與蛋白質(zhì)聯(lián)合進(jìn)行卵內(nèi)飼喂溶液沒有觀測(cè)到這一HMB效應(yīng)。HMB與蛋白質(zhì)對(duì)孵化的這種明顯的負(fù)相互作用可能與促進(jìn)蛋白質(zhì)同化作用的熱能有限這一因素有關(guān)。然而，以HMB單獨(dú)卵內(nèi)飼喂或者和蛋白質(zhì)一起進(jìn)行卵內(nèi)飼喂的幼禽，在第7日齡分別使胸肉重提高8.6％和6.5％。這些數(shù)據(jù)表明HBM是刺激和維持關(guān)鍵組織的早期生長(zhǎng)的重要因素。
表5.卵內(nèi)飼喂蛋白質(zhì)(A)，蛋白質(zhì)+HMB(B)，HMB(D)，和碳水化合物(S)相對(duì)于未注射的對(duì)照組(C)以及該對(duì)照組本身對(duì)孵化后第1和7日齡的胸肉重量的影響，胸肉重量被表示為其占火雞體重的百分比1。

1每個(gè)平均值表示每一處理組約10只仔雞的平均值。
2括號(hào)內(nèi)表示相對(duì)于對(duì)照組增加的百分比。
a，b同一列中具有不同的字母上標(biāo)的平均值具有顯著的差異(P＜0.05)。
實(shí)施例8腸道調(diào)節(jié)劑對(duì)火雞糖原水平的影響肝臟和肌肉中的糖原含量是孵化的禽的代謝上可利用的能量狀態(tài)的狀態(tài)指示劑。因?yàn)榭偺窃瓋?chǔ)量的增加，孵化的禽承受壓力階段的能力也提高，禽類更有可能通過重重苦難存活下來。在孵化時(shí)，蛋白質(zhì)的卵內(nèi)飼喂使得的肝臟中糖原總量顯著的增加，這表明蛋白質(zhì)的卵內(nèi)飼喂能真正地促進(jìn)糖原異生(表6)。相反，碳水化合物的卵內(nèi)飼喂可以抑制糖原異生，即使卵內(nèi)飼喂額外的卡路里能被轉(zhuǎn)化為糖原。HMB的卵內(nèi)飼喂也能顯著地提高孵化時(shí)的肝糖原總量，但是這一積極效應(yīng)當(dāng)HMB和蛋白質(zhì)聯(lián)合卵內(nèi)飼喂時(shí)就消失了，這是因?yàn)槟芰刻邢抟灾劣诓荒芡耆玫鞍踪|(zhì)和/或HMB。但是，在7日齡之前，HMB和蛋白質(zhì)的聯(lián)合卵內(nèi)飼喂使得肝糖原總量最高，可能這是因?yàn)閺氖澄飦碓磧?chǔ)存了足夠的卡路里。同樣，單獨(dú)的蛋白質(zhì)或碳水化合物的卵內(nèi)飼喂在7日齡時(shí)產(chǎn)生了較好的能量狀況，如由肝糖原總量所指示的那樣。
表6.卵內(nèi)飼喂蛋白質(zhì)(A)，蛋白質(zhì)+HMB(B)，HMB(D)，和碳水化合物(S)相對(duì)于未注射的對(duì)照組(C)以及該對(duì)照組本身對(duì)孵化后1日齡和7日齡的火雞的肝糖原總量的影響1。

1每個(gè)平均值表示每一處理組約10只仔雞的平均值。
2括號(hào)內(nèi)表示相對(duì)于對(duì)照組增加的百分比。
a，b同一列中具有不同的字母上標(biāo)的平均值具有顯著的差異(P＜0.05)。
卵內(nèi)飼養(yǎng)對(duì)火雞幼禽的肌糖原的影響示于表7中。肌糖原是孵化過程中和孵化后的最初幾天的首次碳水化合物儲(chǔ)備之一。實(shí)際上，肌糖原和肌蛋白儲(chǔ)量可以被用于構(gòu)造肝糖原儲(chǔ)量以對(duì)在初生動(dòng)物中經(jīng)常發(fā)生的應(yīng)激事件的有所準(zhǔn)備。因此，降低的肌糖原常常與提高的肝糖原相關(guān)。盡管單獨(dú)卵內(nèi)飼喂蛋白質(zhì)增加了總肝糖原，其帶來的損失是孵化時(shí)的肌糖原顯著降低。HMB能提高蛋白質(zhì)卵內(nèi)飼喂的幼禽的肌糖原水平，不過其仍顯著低于對(duì)照組。相反，單獨(dú)卵內(nèi)飼喂HMB導(dǎo)致肌糖原含量相對(duì)于對(duì)照組的增加＞25％。因此，HMB提高了肝臟和胸肉兩者中的糖原總量，且這一正向效應(yīng)在肌肉中一直持續(xù)到第7日齡。碳水化合物的卵內(nèi)飼喂也增加了孵化時(shí)的肌糖原，且該效應(yīng)持續(xù)到直至7日齡。
表7.卵內(nèi)飼喂蛋白質(zhì)(A)、蛋白質(zhì)+HMB(B)、HMB(D)，和碳水化合物(S)與未注射的對(duì)照組相比及該對(duì)照組(C)在孵化后第1天和第7天對(duì)火雞的胸肉的糖原含量的影響。1

1每個(gè)平均值表示每一處理組約10只仔雞的平均值。
2括號(hào)內(nèi)表示相對(duì)于對(duì)照組增加的百分比。
a，b，c，d同一列中具有不同的字母上標(biāo)的平均值具有顯著的差異(P＜0.05)。
實(shí)施例9腸道調(diào)節(jié)劑對(duì)火雞麥芽糖酶和LAP活性的影響麥芽糖酶和亮氨酸氨肽酶(LAP)是腸刷狀緣酶，它們涉及到在簡(jiǎn)單的單糖和氨基酸和二肽被轉(zhuǎn)運(yùn)橫跨腸細(xì)胞膜之前碳水化合物和蛋白質(zhì)的最終消化。表8和表9顯示了證明不同的卵內(nèi)飼喂溶液對(duì)麥芽糖酶和LAP活性的影響的數(shù)據(jù)。
HMB被發(fā)現(xiàn)對(duì)于這些消化酶沒有顯著的影響，這表明HMB的效應(yīng)與腸組織的生長(zhǎng)和發(fā)育的調(diào)節(jié)而非蛋白質(zhì)或碳水化合物的消化嚴(yán)格相關(guān)。相對(duì)于對(duì)照組，蛋白質(zhì)的卵內(nèi)飼喂明顯地降低了麥芽糖酶活性(碳水化合物消化的一種指示劑)，但是卵內(nèi)飼喂碳水化合物在孵化時(shí)和第7日齡增加了麥芽糖酶的活性(表8)。
相反，孵化中的LAP活性通過蛋白質(zhì)的卵內(nèi)飼喂而被顯著地降低，但當(dāng)HMB包括在基于蛋白質(zhì)的卵內(nèi)飼喂溶液中時(shí)，這一效應(yīng)發(fā)生了逆轉(zhuǎn)。到7日齡，LAP活性通過蛋白質(zhì)的卵內(nèi)飼喂得到顯著增加，通過卵內(nèi)飼喂碳水化合物該LAP活性甚至增加得更多。蛋白質(zhì)和碳水化合物酶活性顯然是受到卵內(nèi)飼喂物質(zhì)的最大影響，而不是腸道生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑例如HMB。
表8.卵內(nèi)飼喂蛋白質(zhì)(A)、蛋白質(zhì)+HMB(B)、HMB(D)，和碳水化合物(S)與未注射的對(duì)照組相比及該對(duì)照組(C)在孵化后第1天和第7天對(duì)火雞的腸刷毛寄生型麥芽糖酶活性的影響。1

1每個(gè)平均值表示每一處理組約10只仔雞的平均值。
2括號(hào)內(nèi)表示相對(duì)于對(duì)照組增加的百分比。
a，b同一列中具有不同的字母上標(biāo)的平均值具有顯著的差異(P＜0.05)。
表9.卵內(nèi)飼喂蛋白質(zhì)(A)、蛋白質(zhì)+HMB(B)、HMB(D)，和碳水化合物(S)與未注射的對(duì)照組相比及該對(duì)照組(C)在孵化后第1天和第7天對(duì)火雞的腸刷毛寄生型亮氨酸氨肽酶(LAP)活性的影響。1

1每個(gè)平均值表示每一處理組約10只仔雞的平均值。
2括號(hào)內(nèi)表示相對(duì)于對(duì)照組增加的百分比。
a，b同一列中具有不同的字母上標(biāo)的平均值具有顯著的差異(P＜0.05)。
實(shí)施例10腸道調(diào)節(jié)劑的劑量在火雞中的效應(yīng)300只商品火雞卵在一冷卻器中于55°F貯藏3周，然后將其放置于一孵卵器中。孵育24天后，通過透光檢測(cè)鑒定為受精的卵被隨機(jī)分為5組，每組50枚卵。用含有0、0.1、1.0、10.0和100.0微克的Ca-HMB的0.1ml鹽(0.89％NaCl)溶液以0.25英寸的深度注射到每一組的50枚卵的氣室中。
注射后，將所述卵放置在孵化籃中使得各處理平均分布到該孵卵器的每個(gè)位置。在孵育的第28天，從孵卵器中匯總孵化的幼禽，記錄每一處理組所孵化的幼禽。然后將所孵化的幼禽屠宰，并根據(jù)已知技術(shù)(參見Donaldson and Christensen，Comp.Biochem.Physiol.98A，347-350(1991))對(duì)血液葡萄糖進(jìn)行測(cè)定。摘除肝臟并通過已知技術(shù)(參見Dreilinget al.，Meat Sci.20，167-177(1987))對(duì)各肝臟的糖原含量進(jìn)行測(cè)定。
圖6圖解了注射到24日齡的火雞胚胎的卵中的HMB的量的效應(yīng)。對(duì)照處理(0微克HMB)的孵化率很低，這是在置于孵卵器中之前存放了3周的產(chǎn)蛋后期的火雞卵的特征。但是，當(dāng)將0.1和1.0微克的HMB注射到處于孵育第24天的卵中時(shí)，孵化率從72.3％提高至81.6％。當(dāng)所注射的HMB水平提高到1.0微克以上時(shí)，孵化率降低。當(dāng)卵內(nèi)注射的HMB的水平提高時(shí)，存在著顯著的二次劑量應(yīng)答(P＜0.05)。
卵內(nèi)注射的HMB劑量對(duì)火雞幼禽中的肝糖原含量的影響圖解于圖表7。與對(duì)照組相比較，所有HMB劑量水平使肝糖原含量增加了約40％。當(dāng)卵內(nèi)注射的HMB的水平提高時(shí)，存在著顯著的二次劑量應(yīng)答(P＜0.5)。孵化率與孵化前火雞和仔雞的胚胎的肝糖原含量呈正相關(guān)。
圖8圖解了僅0.1微克的HMB劑量導(dǎo)致了顯著增加的血漿葡萄糖濃度。與對(duì)照組相比，其它HMB劑量水平對(duì)于血漿葡萄糖沒有顯著的影響。這些結(jié)果表明0.1微克的HMB劑量水平可能不是影響幼禽的血漿葡萄糖水平的最低功能性劑量。
總而言之，將0.1-1.0微克的HMB卵內(nèi)注射到24日齡的火雞胚胎中顯著增加了孵化率，這顯然是歸因于肝糖原儲(chǔ)量的增加。
實(shí)施例11卵內(nèi)飼喂溶液的毫滲量對(duì)于孵化能力的重要性將各種毫滲量程度的溶液卵內(nèi)注射到受精的肉仔雞孵化卵的羊膜中。記錄受精卵的孵化百分比。結(jié)果示于圖9中。
圖9圖示了卵內(nèi)飼喂溶液的毫滲量對(duì)于仔雞孵化能力的重要性。當(dāng)用具有低于800mOsm的溶液進(jìn)行注射時(shí)觀測(cè)到了滿意的仔雞的孵化能力，在約400-600mOsm處觀測(cè)到最佳孵化能力。當(dāng)卵內(nèi)飼喂溶液超過800mOsm時(shí)，觀測(cè)到了不滿意的孵化率。卵內(nèi)飼喂溶液的同滲容摩對(duì)孵化能力的影響通過一數(shù)學(xué)模型是高度可預(yù)測(cè)的(R2＝0.97)。
將能理解本發(fā)明的各細(xì)節(jié)可以在不偏離本發(fā)明的范圍內(nèi)進(jìn)行改變。此外，上述的描述僅用于舉例說明而非對(duì)本發(fā)明的限制，本發(fā)明由所附權(quán)利要求書所限定。
權(quán)利要求
1.一種促進(jìn)禽的生長(zhǎng)的方法，該方法包括以有效促進(jìn)該禽生長(zhǎng)的量將一種腸道調(diào)節(jié)劑卵內(nèi)施用于該禽。
2.權(quán)利要求1的方法，其中在孵化前促進(jìn)所述禽的生長(zhǎng)。
3.權(quán)利要求1的方法，其中在孵化后促進(jìn)所述禽的生長(zhǎng)。
4.權(quán)利要求1的方法，其中在孵化前和孵化后促進(jìn)所述禽的生長(zhǎng)。
5.權(quán)利要求1的方法，其中所述腸道調(diào)節(jié)劑的施用進(jìn)一步在孵化前促進(jìn)所述禽的腸道發(fā)育。
6.權(quán)利要求1的方法，其中所述禽選自以下一組雞、火雞、鴨、鵝、鵪鶉、雉雞和鴕鳥。
7.權(quán)利要求1的方法，其中所述腸道調(diào)節(jié)劑選自以下一組β-羥基-β-丁酸甲酯(HMB)及其可食用的鹽、有機(jī)鋅復(fù)合物、凝集素、谷氨酰胺、谷氨酸、精氨酸、肉毒堿、肌酸、維生素A、維生素D、維生素E、甜菜堿、膽堿、卵磷脂、S-腺苷甲硫氨酸、酪氨酸及其代謝衍生物、色氨酸及其代謝衍生物、葡糖胺、脂肪酸衍生物和抗氧化劑。
8.權(quán)利要求7的方法，其中所述腸道調(diào)節(jié)劑是HMB或Ca-HMB。
9.權(quán)利要求7的方法，其中腸道調(diào)節(jié)劑是一種有機(jī)鋅復(fù)合物。
10.權(quán)利要求7的方法，其中所述腸道調(diào)節(jié)劑是一種凝集素。
11.權(quán)利要求1的方法，其中的施用步驟在卵內(nèi)孵育的最后1/4期間進(jìn)行。
12.權(quán)利要求1的方法，該方法進(jìn)一步包括將所述禽孵育至孵化的步驟。
13.權(quán)利要求1的方法，其中所述腸道調(diào)節(jié)劑以介于約0.05微克/禽和1.0微克/禽之間的量卵內(nèi)施用到所述禽中。
14.權(quán)利要求1的方法，其中所述腸道調(diào)節(jié)劑以約0.1微克/禽的量卵內(nèi)施用到所述禽中。
15.權(quán)利要求1的方法，其中所述腸道調(diào)節(jié)劑以包含該腸道調(diào)節(jié)劑和一種可食用的載體的組合物的形式而施用。
16.權(quán)利要求15的方法，其中所述組合物是包含約0.05％到1.0％之間的腸道調(diào)節(jié)劑的一種溶液。
17.權(quán)利要求16的方法，其中所述溶液包含約0.1％的腸道調(diào)節(jié)劑。
18.權(quán)利要求15的方法，其中所述組合物進(jìn)一步包含至少一種碳水化合物。
19.權(quán)利要求15的方法，其中所述組合物進(jìn)一步包含至少一種蛋白質(zhì)。
20.權(quán)利要求15的方法，其中所述組合物的滲透壓不高于800毫滲量。
21.權(quán)利要求1的方法，其中所述施用通過注射到所述禽的羊膜液中進(jìn)行。
22.權(quán)利要求1的方法，其中所述施用通過注射到所述禽的卵黃囊中進(jìn)行。
23.權(quán)利要求1的方法，其中所述腸道調(diào)節(jié)劑與一種營(yíng)養(yǎng)組合物同時(shí)施用。
24.權(quán)利要求23的方法，其中所述腸道調(diào)節(jié)劑和營(yíng)養(yǎng)組合物在施用前被共同組合在一載體中。
25.權(quán)利要求23的方法，其中所述營(yíng)養(yǎng)組合物包含至少一種碳水化合物和至少一種蛋白質(zhì)。
全文摘要
本發(fā)明涉及通過卵內(nèi)施用腸道調(diào)節(jié)劑例如HMB而增強(qiáng)卵生物種例如禽的發(fā)育和生長(zhǎng)。該腸道調(diào)節(jié)劑被施用到羊膜內(nèi)，然后被受試者口服攝入。該腸道調(diào)節(jié)劑增強(qiáng)了所述受試者在孵化前的腸道發(fā)育，并在孵化前或孵化后增強(qiáng)了該動(dòng)物的生長(zhǎng)。
文檔編號(hào)A01K45/00GK1816354SQ200480018721
公開日2006年8月9日 申請(qǐng)日期2004年6月29日 優(yōu)先權(quán)日2003年6月30日
發(fā)明者澤哈瓦·尤尼, 彼得·菲爾基特 申請(qǐng)人:北卡羅來納州大學(xué), 耶路撒冷希伯來大學(xué)依蘇姆研究發(fā)展公司