專利名稱：：一種宣木瓜組織培養(yǎng)快速繁殖的方法
技術領域：
：本發(fā)明屬林業(yè)中通過組織培養(yǎng)的植物再生
技術領域：
，具體涉及一種宣木瓜組織培養(yǎng)快速繁殖的方法。二
背景技術：
：宣木瓜(C7zaewo附e/Ms;ec/araNakai.)屬于薔4菱科，是落葉或半常纟錄灌木或小喬木，枝密多刺可作綠蘺。單葉互生，有短柄和托葉。花單生或簇生，萼片5,花瓣5,果實為梨果，種皮革質(zhì)，無胚乳。宣木瓜在各地也常見栽培，早春先花后葉，花色大紅、粉紅、乳白且有重瓣及半重瓣品種。宣木瓜為藥用之正品，是中國四大中藥材之一，距今已有兩千多年的栽培歷史。宣木瓜以安徽宣城所產(chǎn)宣木瓜最為著名，被載入《名醫(yī)別錄》，列為中品。宣木瓜被《本草綱目》收載于果部，引蘇頌語"木瓜處處有之，而宣城者為佳"。宣木瓜含有十九種氨基酸、十八種礦物微量元素，以及大量維生素C,同時還含有皂甙、黃酮、蘋果酸、齊墩果酸、枸櫞酸、檸檬酸、酒石酸、抗壞血酸、反丁烯二酸、鞣質(zhì)等，含有過氧化氫酶、酚氧化酶、氧化酶，特別富含超氧化物岐化酶(SOD)等。果千制后入藥，有驅(qū)風、舒筋、活絡、鎮(zhèn)痛、消腫、順氣之效。宣木瓜果實加工后能食用，可制成木瓜飲料、木瓜醋、木瓜酒等。由于生長在不同的環(huán)境中，不同種源的宣木瓜在性狀和藥物含量方面都存在一定的差異。有研究表明，宣木瓜有機酸和醇類的含量分別為普通皺皮木瓜的2倍和3倍。因此加強對不同種源皺皮木瓜的保護，可為未來培育藥用木瓜新品種提供豐富的遺傳資源。傳統(tǒng)宣木瓜的繁殖方式多采用的種子與扦插繁殖，繁殖效率較低，而植物組織能快速高效的完成植物的繁殖過程。植物組織培養(yǎng)是20世紀初，以植物生理學為基礎發(fā)展起來的一門新興技術。在Schleiden和Schwann創(chuàng)立的細胞學說基礎上，1902年，德國植物學家Haberlandt預言"植物細胞具有全能性，每個細胞都像胚胎細胞那樣，可以經(jīng)過體外培養(yǎng)成為一個完整的植抹"。1937年，法國植物學家Gautheret等人第一次用煙草的莖段形成層和胡蘿卜根的小塊組織，使細胞增殖并誘導愈傷組織，但沒誘導出器官。1958年，Steward等人在胡蘿卜細胞懸浮培養(yǎng)中成功地誘導形成了胚狀體，并由胚狀體發(fā)育形成完整植才朱。進入20世紀60年代以后，植物組織培養(yǎng)工作己經(jīng)遍及世界大多數(shù)國家，并獲得了突飛猛進的發(fā)展，組織和器官培養(yǎng)技術日趨成熟和完善，目前，植物組織培養(yǎng)技術已成為生物學科中的重要研究技術和手段之一。植物組織培養(yǎng)體系的建立，對于植物珍稀名貴品種的繁育與脫毒、種質(zhì)資源保存、體細胞突變體的誘發(fā)及篩選、人工種子制造、細胞次生代謝物的生產(chǎn)、細胞工程和基因工程等方面都具有重要的意義。植物組織培養(yǎng)技術進一步的研究和應用，將對傳統(tǒng)的植物生產(chǎn)模式產(chǎn)生深遠的影響。目前，植物組織培養(yǎng)技術主要有以下四種方法1.植物的離體快速繁殖植物離體快速繁殖是目前植物組織培養(yǎng)應用最多、最有效的一種方法。新育成或新引進的良種、選擇的優(yōu)良單抹、自然和人工誘變的有用突變體等遺傳材料。通過組織的離體快繁，可在短時間內(nèi)大量繁殖，一兩年內(nèi)即可在生產(chǎn)上廣泛應用。如自然條件下的芽變材料，人工誘變育種獲得的優(yōu)良遺傳材料等，通過組織培養(yǎng)可以大量繁殖，從而應用于生產(chǎn)。在植物離體快繁中，莖尖脫毒技術對提高一些經(jīng)濟作物的品質(zhì)有很重要的作用。植物一旦感染病毒，輕則導致樹型衰退，產(chǎn)量銳減，品質(zhì)變劣，嚴重則將對感染的植抹產(chǎn)生毀滅性的傷害。以營養(yǎng)繁殖為主的植物種類如馬鈴薯、甘薯、大蒜、百合等，長期的無性繁殖使病毒在體內(nèi)積累，引發(fā)病毒病，嚴重影響果實的產(chǎn)量和品質(zhì)以及花和葉等的觀賞價值。但是，感病植林并非每個部位都帶有病毒。利用植物莖尖脫毒技術，可以獲得脫毒苗，從而大大提高植物的品質(zhì)和產(chǎn)量。早在1943年，White就發(fā)現(xiàn)植物生長點附近的病毒濃度很低甚至無病毒。莖尖沒有感染病毒主要原因是在莖尖部位植物生長速度較快，而病毒的轉(zhuǎn)移速度相對較慢。因此，截取植物健康的莖尖作為外植體，經(jīng)過培養(yǎng)就可以得到脫毒苗，再經(jīng)過快速繁殖即可以得到大量的脫毒苗。1960年，Morel第一個用莖尖培養(yǎng)法得到脫毒蘭花，此后在多種植物中獲得成功。2.單倍體、多倍體的繁殖單倍體植林是由具有單倍(單套)染色體的花粉或卯細胞誘導產(chǎn)生的植抹。單倍體育種具有高速、高效率、基因型純合等優(yōu)點。因此，通過花藥或花粉培養(yǎng)的單倍體育種，已經(jīng)作為一種嶄新的育種手段問世，并已培育形成大面積種植的作物新品種。Guha(1964)和Maheshiwari(1966)成功在曼陀羅的花藥培養(yǎng)中，由花粉誘導出單倍體植林。迄今為止，世界范圍內(nèi)已有75種以上的植物獲得單倍體植物。多倍體在自然界分布比較普遍，通常表現(xiàn)出花形較大，果實較大等多倍體植林特有的"巨型"特征。因此具有較高的觀賞價值和經(jīng)濟價值。通常通過以下兩種途徑獲得多倍體一是自然加倍；二是人工誘變，如添加適量的誘變劑(秋水仙素等)。如果將人工誘變和組織培養(yǎng)技術相結(jié)合，將大大提高多倍體育種的效率。組織培養(yǎng)技術和人工誘變相結(jié)合，使黃花菜(/^附^00〃&"7n力eBaroni.)力口倍、選擇和快速繁殖同步進行，從而縮短了育種的時間。利用此項技術，目前已在多種植物材料中成功誘導出多倍體。3.胚培養(yǎng)和胚乳培養(yǎng)植物離體胚培養(yǎng)能夠解決遠緣雜交的敗育問題，那些不能形成具有生活力種子的雜交組合可通過離體胚的培養(yǎng)獲得雜種植抹。在育種上，萊巴赫用胚培養(yǎng)技術解決宿根亞麻(丄/mw2L.)和奧地利亞麻的雜交種子不能萌發(fā)的問題，使它們成熟并得到雜種植;昧。萊巴赫的先驅(qū)工作為用培養(yǎng)離體胚的方法來克服雜交性的障礙奠定了基礎，從而開創(chuàng)了植物胚培養(yǎng)應用于生產(chǎn)實踐的時代。1990年，母錫金等利用胚拯救技術成功地得到美味獼猴桃x毛花獼猴桃的種間雜種植林。此后，離體胚培養(yǎng)在多種植物間展開。胚乳培養(yǎng)可以獲得三倍體植林，為誘導形成三倍體植物開辟了一條新途徑。Nakano等人從未成熟的水稻胚乳培養(yǎng)中分化得到2棵植林，證明禾谷類胚乳同樣具有分化植抹的潛能。利用柑桔胚乳離體培養(yǎng)可以獲得無核柑桔，且比2x與4x雜交獲得三倍體快得多。目前已用30多種植物的胚乳進行了離體培養(yǎng)。4.人工種子和離體種質(zhì)保存人工種子指具有良好發(fā)育的體細胞包裹人工胚乳和人工種皮而形成的一種繁殖結(jié)構(gòu)。由于人工種子不受時間限制，短時間內(nèi)可以大量繁殖無病毒材料，因此對于多年生植物和育性不良或是難以進行有性繁殖的植物，通過人工種子繁殖具有明顯的優(yōu)勢。生產(chǎn)人工種子首先需要大量的胚狀體，目前，能大量產(chǎn)生胚狀體的植物約有43科，100余種。人工種子的應用前景取決于生產(chǎn)成本，人工種子高昂的生產(chǎn)成本是其發(fā)展的最大障礙。利用傳統(tǒng)的方法保存種質(zhì)資源需要耗費大量的人力與財力，而且難以長期保存。超低溫保存的過程是將無菌材料如無菌芽、體細胞胚等，經(jīng)過冷凍防護處理后，存放于-196°液氮中保存。當需要種質(zhì)材料時，可經(jīng)過解凍、再培養(yǎng)誘導器官分化和植物再生獲得。由于超低溫保存具有節(jié)約資源和種質(zhì)材料等優(yōu)點，因此為種質(zhì)保存開辟了一條新的途徑。近幾年來，國外用玻璃化超低溫保存法成功保存的園藝作物品種有櫻桃、甜櫻桃、梨、蘋果等幾十余種，國內(nèi)在該領域也取得了一定的進展。迄今為止，通過組織培養(yǎng)器官發(fā)生方式產(chǎn)生再生植林是最成功的林木離體培養(yǎng)繁殖方式，在許多植物中已經(jīng)取得了成功。植物的組織培養(yǎng)有三種再生途徑，即胚狀體再生、愈傷組織再生和直接誘導成芽。植物組織培養(yǎng)中的器官發(fā)生再生植林途徑，需要經(jīng)歷相互分開的芽誘導期和根誘導期。器官發(fā)生有間接和直接兩種方式。在間接方式下，不定芽是從愈傷組織上誘導出的。在直接方式下，再生的芽是從已經(jīng)存在的芽上誘導出的。當芽是從那些本不該產(chǎn)生芽的部位誘導出時，這種芽稱為不定芽，而當芽是從通常會產(chǎn)生芽的部位上再生出時，這種芽稱為側(cè)芽和腋芽。根的形成是植物組織培養(yǎng)中出現(xiàn)頻率最高的器官發(fā)生方式。有兩種不同的根離體分化形式，一種是已經(jīng)形成的芽在培養(yǎng)中生根，從而形成再生苗，稱為生根。另一種則是由愈傷組織中的類分生組織分化成根的原基并進一步發(fā)育形成根，稱為根發(fā)生。通過組織培養(yǎng)先誘導不定芽，然后再在其基部分化出根，是一種常見的離體器官發(fā)生方式。在這種情況下，芽的分化和發(fā)育顯然會改變組織中內(nèi)源激素的成份和比例，從而對根的形成產(chǎn)生影響，這種由不定芽經(jīng)生根而獲得再生植抹的過程也是利用組織培養(yǎng)進行無性系繁殖的重要途徑之一。愈傷組織中的根發(fā)生現(xiàn)象往往不如生根那樣普遍和容易獲得，而且愈傷組織根的分化能力會隨著繼代次數(shù)的增加而逐漸減弱以至喪失。目前，宣木瓜組織培養(yǎng)方面的研究資料較少。1993年，吳國梁等對貼梗海裳莖段進行離體培養(yǎng)和快繁的研究，發(fā)現(xiàn)BA對木瓜不定芽有良好的促進作用，而添加水解酪蛋白(CH)對不定芽的繁殖和生長有負作用。2004年，范義蓮等進行了貼梗海裳莖段愈傷組織誘導和再生的相關研究。另據(jù)報道，利用貼梗海裳的嫩莖段進行快速繁殖方面的研究，表明嫩莖芽的萌動率為0%~22%,萌動率相對較低；另外，還有利用貼梗海棠品種——云錦的幼葉和莖段進行再生方面的研究，表明愈傷組織誘導率雖都達到100%,但再生率較低，一般為2%~10%。迄今為止，有關植物組織培養(yǎng)技術的各類文獻資料中，除日本有對同屬相近種貼梗木瓜(C/zae朋we/^/agewan')提取物的相關專利技術報導外，尚未見在宣木瓜上進行組培的成套技術發(fā)表。對宣木瓜快速繁殖的研究將為具有優(yōu)良性狀的宣木瓜品種短期內(nèi)大量繁殖奠定理論基礎，從而有助于將研究成果轉(zhuǎn)變?yōu)樯a(chǎn)力，對宣木瓜生產(chǎn)實踐具有重要的應用價值。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的是進行宣木瓜快速繁殖方法的研究，尋找適用于宣木瓜組織培養(yǎng)從再生到快速增殖的成套技術方法，從而加速宣木瓜優(yōu)良品種的選育及推廣。本發(fā)明的技術解決方案為一種用MS作基本培養(yǎng)基，分別通過芽誘導和根誘導進行宣木瓜組織培養(yǎng)快速繁殖的方法，其特征在于采用宣木瓜種子子葉或宣木瓜種子胚進行組織培養(yǎng)。當采用宣木瓜種子子葉進行組織培養(yǎng)時，誘導不定芽的最佳培養(yǎng)基配方是MS+NAA0.5mg/L+TDZ1.0mg/L;誘導生根的最佳培養(yǎng)基配方是1/2MS+IBA0.2mg/L。當采用宣木瓜種子胚進行組織培養(yǎng)時，誘導不定芽的最佳培養(yǎng)基配方是MS+BA0.5mg/L+NAA0.2mg/L;謙導生根的最佳培養(yǎng)基配方是l/2MS+NAA0.2mg/L。MSi咅養(yǎng)基(MurashingandSkoogmedium)的才示準配方i口下NH4N031650mg/LKN031900mg/LCaCl22H20440mg/LMgSCH7H20370mg/LKH2PO4170mg/LKI0.83mg/LH3BO36.2mg/LMnS04H2O16.9mg/LZnSCH7H208.6mg/LNa2Mo042H200.25mg/LCuS045H200.025mg/LC0CI26H2O0.025mg/LFeS047H2027.8mg/LNa2-EDTA37.3mg/L肌醇100mg/L煙酸0.5mg/L鹽酸硫胺素0.1mg/L鹽酸吡眵醇0.5mg/L甘氨酸2mg/LMS/2，即大量元素含量減半的MS培養(yǎng)基；MS/4，即大量元素含量為四分之一的MS培養(yǎng)基。四1子葉誘導生成的不定芽2發(fā)生于子葉基部的叢生狀不定芽3萌動胚幼莖不定芽的誘導4不定芽的增殖5不定芽誘導生根五具體實施例方式實施例1:采用宣木瓜種子子葉進行組織培養(yǎng)a.培養(yǎng)基的組合、滅菌和培養(yǎng)條件MS為基本培養(yǎng)基，添加TDZ和NAA，將不同類型組合的生長調(diào)節(jié)植物以不同的濃度添加到基本培養(yǎng)基中，并添加蔗糖30g/L、瓊脂6.5g/L,調(diào)節(jié)培養(yǎng)基pH5.8~6.0，分裝于100ml的玻璃三角燒瓶中，每瓶大約40ml。培養(yǎng)基及培養(yǎng)容器的滅菌采用高壓濕熱消毒法。將分裝好的培養(yǎng)基和包扎好的培養(yǎng)容器、鑷子、解剖刀等實驗用具置于高壓滅菌鍋內(nèi)，121°C,1.1kg/cm3滅菌20分鐘。b.外植體的消毒剝除宣木瓜種子內(nèi)外種皮，將種子在超凈工作臺上用70%酒精消毒5~10分鐘，無菌蒸餾水沖洗l遍。然后用0.P/?；?.15。/。HgCl2(添加一滴吐溫-80)消毒5-15分鐘，無菌蒸餾水沖洗45遍，最后從消毒種子中取出子葉。c.接種將經(jīng)過消毒處理的子葉接種到以下含有不同生長調(diào)節(jié)物質(zhì)的MS培養(yǎng)基中。經(jīng)過40天培養(yǎng)后觀察并記錄結(jié)果，如下表表1不同生長調(diào)節(jié)物質(zhì)對子葉誘導不定芽的影響PGR(mg/1)成苗誘導率NAA0.1+TDZ110%NAA0.5+TDZ125%NAA1+TDZ0.10NAA1+TDZ0.510%NAA1+TDZ10NAA1+TDZ220%注PGR——植物生長調(diào)節(jié)物質(zhì)，以下同。培養(yǎng)條件光照時間為8-16h/天，光照強度100030001x,溫度24土3。C;其中，當采用MS+NAA0.5mg/L+TDZ1.Omg/L的培養(yǎng)基時可得到最理想的結(jié)果。d.不定芽的增殖待不定芽高度長至3cm左右時，將其切下，接種于增殖培養(yǎng)基MS+BA0.5mg/L+NAA0.2mg/L中，不定芽能快速增殖。e.生根與移栽1/2MS為基本培養(yǎng)基，添加不同的生長調(diào)節(jié)物質(zhì)BA、IBA、NAA,組合形成四種類型IBA、NAA、BA+IBA、BA+NAA,再添加蔗糖30g/1、瓊脂6.5g/1,調(diào)節(jié)培養(yǎng)基pH至5.8~6.0,分裝于100ml的玻璃三角燒瓶中，每瓶大約40ml。當增殖培養(yǎng)基中的不定芽高度達2cm時，切取不定芽接種于以上生根培養(yǎng)基中，40d后觀察結(jié)果并記錄數(shù)據(jù)，結(jié)果如下_表2不同生長調(diào)節(jié)物質(zhì)對不定芽生根的影響_PGR(mg/L)_接種數(shù)誘導率生根總數(shù)<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>培養(yǎng)條件光照時間為8~16h/天，光照強度1000~30001x,溫度24士3。C;其中，當采用1/2MS+IBA0.2mg/L的培養(yǎng)基時可得到最理想的結(jié)果。待不定根數(shù)量達3-4條，長度達到4cm時，按照常規(guī)方法移栽試管苗，即逐步打開封口膜室內(nèi)煉苗一周，隨后在室溫條件下，將幼苗移栽到含有泥炭土蛭石=1:1的塑料盆中。煉苗初期用塑料簿膜封口，一周后除去薄膜，使組培苗逐步適應外界的溫度變化，提高移栽幼苗的成活率。移栽成活率可達80%。宣木瓜子葉接種到MS+NAA0.5mg/L+TDZ1.0mg/L的培養(yǎng)基中，可以獲得高達25%的誘導率。子葉誘導不定芽，其不定芽的發(fā)生位置位于基部，而且只有在基部有不定芽形成，在子葉的切口和其它部位都未見有不定芽的生成。根據(jù)實驗的結(jié)果可知，TDZ對宣木瓜子葉不定芽的誘導有很好的效果，而且一定濃度的TDZ對成功誘導不定芽是必要的。TDZ誘導的不定芽之間有較大差異，有的不定芽生長過分旺盛而呈現(xiàn)玻璃化現(xiàn)象，有的不定芽生長緩慢、莖段較短，還有的不定芽呈叢生狀。TDZ濃度和所誘導的不定芽類型之間的相關性不明顯。利用宣木瓜子葉作為外植體時，BA并沒有表現(xiàn)出很高的活性。2,4-D在不定芽的誘導過程具有阻礙作用，在TDZ與NAA的多個組合中宣木瓜子葉均能誘導出不定芽，而當TDZ與2,4-D組合時則沒有任何一種組合能誘導出不定芽。從不定芽誘導的生長調(diào)節(jié)物質(zhì)的組合中可以看出，由于在TDZ和2,4-D中沒有不定芽發(fā)生，因此認為NAA的存在對不定芽的產(chǎn)生也是必需的，但是NAA的濃度對不定芽誘導的影響則相對較小。實施例2:采用宣木瓜種子胚進行組織培養(yǎng)a.培養(yǎng)基的組合、滅菌和培養(yǎng)條件剝除宣木瓜種子內(nèi)外種皮，將種子在超凈工作臺上用70%酒精消毒10分鐘，無菌蒸餾水沖洗l遍，用0.15。/。HgCl2(添加一滴吐溫-80)消毒15分鐘，無菌蒸餾水沖洗5遍，將消毒后種子接種到MS+BA0.2mg/L的萌發(fā)培養(yǎng)基中。b.不定芽增殖MS、1/2MS或1/4MS為基本培養(yǎng)基，不同生長調(diào)節(jié)物質(zhì)組合形成七種類型TDZ+IBA、TDZ+NAA、BA+IBA、BA+NAA、BA+IBA+NAA、KT+IBA、KT+NAA,將上述組合中的生長調(diào)節(jié)物質(zhì)以不同的濃度添加到基本培養(yǎng)基中，并添加蔗糖30g/L、瓊脂6.5g/L,調(diào)節(jié)培養(yǎng)基pH至5.8-6.0。當萌發(fā)培養(yǎng)基中的幼苗苗高達到2~3cm時，切取無菌苗莖段接種于上述增殖培養(yǎng)基中，培養(yǎng)40d后觀察結(jié)果如下。表3不同生長調(diào)節(jié)物質(zhì)對不定芽增殖的影響PGR(mg/L)接種數(shù)存活率增殖數(shù)增殖系數(shù)BAO.l~1.0+IBA0.1~1.020100%783.90BAO,l~1.0+NAA0.1~1,033100%1484.48BAO.l~1.0+IBAO.l~1.0+NAA0.1'-1.021100%693.29KTO,l-1.0+IBAO.l~1.020100%231.15KTO.l-1.0+NAA0.1~1.023100%261.13TDZO.l~1.0+IBAO.l~1.039100%631.62TDZO.l~1.0+NAA0.1~1.022100%391.77培養(yǎng)條件光照時間為816h/天，光照強度100030001x,溫度24士3。C。其中，當采用MS+BA0.5mg/L+NAA0.2mg/L的培養(yǎng)基時可得到最理想的結(jié)果。c.不定芽誘導生根1/2MS為基本培養(yǎng)基，添加不同的生長調(diào)節(jié)物質(zhì)BA、IBA、NAA,組合形成四種類型IBA、NAA、BA+IBA、BA+NAA,再添加蔗糖30g/1、瓊脂6.5g/1,調(diào)節(jié)培養(yǎng)基pH至5.8~6.0，分裝于100ml的玻璃三角燒瓶中，每瓶大約40ml。當增殖培養(yǎng)基中的不定芽高度達3cm時，切取不定芽接種于以上生根培養(yǎng)基中，40d后觀察結(jié)果并記錄數(shù)據(jù)，結(jié)果如下_表4不同生長調(diào)節(jié)物質(zhì)對不定芽生根的影響_<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>培養(yǎng)條件光照時間為816h/天，光照強度100030001x，溫度24士3。C;其中，當采用1/2MS+NAA0.2mg/L的培養(yǎng)基時可得到最理想的結(jié)果。d.煉苗及移栽不定根長度超過4cm、不定根的數(shù)量34根時，開瓶煉苗一周，然后按照常規(guī)方法移栽試管苗，移栽成活率可達85%以上。由于采用了種子作為最初的實驗材料，因此整個實驗過程不受到植物生長節(jié)律的影響，能提高宣木瓜雜交育種的效率，加速優(yōu)良品種選育和推廣。采用了種子萌發(fā)后的莖段作為實驗材料，接種的外植體存活率為100%,而且最高增殖系數(shù)為4.48,按照實驗過程40d為一個繁殖周期，一年內(nèi)一個不定芽最高可以增殖形成70多萬個不定芽。因此，宣木瓜快速增殖，相對于傳統(tǒng)的植物增殖方式具有更高的效率。在不定芽增殖過程中，本實驗選取五種生長調(diào)節(jié)物質(zhì)，從實驗觀察得出，BA和KT誘導的不定芽，無論是不定芽的增殖部位還是幼芽時期的生長狀態(tài)均無很大的差異。而當添加TDZ誘導不定芽時，則與前兩者存在較大的差異。說明TDZ的活性或作用方式可能與BA和KT存在不同，但就宣木瓜不定芽快速繁殖而言，BA的效果好于TDZ。其中MS+BA0.5mg/L+NAA0.2mg/L組合的培養(yǎng)效果最好，其增殖系數(shù)可達4.48。發(fā)明人從上述兩個實施例以外的實驗中還得到以下結(jié)論一、MS大量元素對不定芽增殖的影響植物生長需要豐富的營養(yǎng)元素，因為一方面營養(yǎng)元素是植物體組成成分，另一方面，營養(yǎng)元素的濃度也對植物的生長具有一定的調(diào)節(jié)作用，因此合適的營養(yǎng)元素濃度對植物健康生長是必不可少的。從實驗結(jié)果可知，不同濃度的大量元素對宣木瓜快速繁殖具有一定的影響，應用MS培養(yǎng)基時，不定芽生長正常且增殖系數(shù)高；而應用1/2MS培養(yǎng)基時，宣木瓜的增殖系數(shù)降低，但幼芽的外部形態(tài)并未出現(xiàn)很明顯的差異；當大量元素降低到l/4時，幼芽葉片變黃，生長緩慢，植抹矮小。二、生根培養(yǎng)基的優(yōu)化植物離體生根是一個相對較容易的過程，一些植物的不定芽在無生長調(diào)節(jié)物質(zhì)的培養(yǎng)基中即可生根。實驗結(jié)果表明，宣木瓜不定芽的生根培養(yǎng)基需要添加生長素類調(diào)節(jié)物質(zhì)，否則不定芽不能生根。NAA、IBA誘導宣木瓜不定芽生根的效果相近，IBA生根較整齊，而且生根相對較多，因此具有較好的效果；NAA誘導的根較粗。宣木瓜不定芽在無生長調(diào)節(jié)物質(zhì)的培養(yǎng)基中無法生根，添加BA對生根具有抑制作用。高濃度的生長素類調(diào)節(jié)物質(zhì)促進不定芽基部形成愈傷組織，但不能誘導不定根的發(fā)生，因此在生根培養(yǎng)基中不能添加較高濃度的生長調(diào)節(jié)物質(zhì)。有益效果采用本發(fā)明所提供的宣木瓜組織培養(yǎng)快速繁殖的方法，不僅可在優(yōu)良家系選擇的基礎上快速、高效地進行宣木瓜的多目標育種研究，還可在林業(yè)生產(chǎn)中為宣木瓜的大規(guī)模種植提供一種周期短、繁殖率高、成本低廉的育苗方法。權利要求1.一種用MS作基本培養(yǎng)基，分別通過芽誘導和根誘導進行宣木瓜組織培養(yǎng)快速繁殖的方法，其特征在于采用宣木瓜種子子葉或宣木瓜種子胚進行組織培養(yǎng)。2.如權利要求l所述的宣木瓜組織培養(yǎng)快速繁殖的方法，其特征在于當采用宣木瓜種子子葉進行組織培養(yǎng)時，誘導不定芽的最佳培養(yǎng)基配方是MS+NAA0.5mg/L+TDZ1.0mg/L;誘導生根的最佳培養(yǎng)基配方是l/2MS+IBA0.2mg/L。3.如權利要求l所述的宣木瓜組織培養(yǎng)快速繁殖的方法，其特征在于當采用宣木瓜種子胚進行組織培養(yǎng)時，誘導不定芽的最佳培養(yǎng)基配方是MS+BA0.5mg/L+NAA0.2mg/L;誘導生根的最佳培養(yǎng)基配方是l/2MS+NAA0.2mg/L。全文摘要一種用MS作基本培養(yǎng)基，分別通過芽和根誘導進行宣木瓜組織培養(yǎng)快速繁殖的方法，其特征在于采用宣木瓜種子子葉或種子胚進行組織培養(yǎng)。當采用種子子葉進行組織培養(yǎng)時，誘導不定芽的最佳培養(yǎng)基配方是MS+NAA0.5mg/L+TDZ1.0mg/L，誘導生根的最佳培養(yǎng)基配方是1/2MS+IBA0.2mg/L；當采用種子胚進行組織培養(yǎng)時，誘導不定芽的最佳培養(yǎng)基配方是MS+BA0.5mg/L+NAA0.2mg/L，誘導生根的最佳培養(yǎng)基配方是1/2MS+NAA0.2mg/L。文檔編號A01H4/00GK101268758SQ20081009888公開日2008年9月24日申請日期2008年5月9日優(yōu)先權日2008年5月9日發(fā)明者何禎祥,葉建偉,尹增芳,張巧平,趙治芬申請人:南京林業(yè)大學