用于促進(jìn)植物生長和提高產(chǎn)量的脂殼寡糖聯(lián)用組合物的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明描述了用于促進(jìn)豆科和非豆科植物中的植物生長和提高作物產(chǎn)量的組合物和方法。該組合物包括脂殼寡糖與殼多糖/脫乙酰殼多糖相組合，或與類黃酮化合物相組合，或與除草劑相組合。該方法包括將所述組合物同時(shí)或順序施用至種子和/或植株。
【專利說明】用于促進(jìn)植物生長和提高產(chǎn)量的脂殼寡糖聯(lián)用組合物
[0001]本分案申請(qǐng)是基于申請(qǐng)?zhí)枮?00880001967.4，申請(qǐng)日為2009年7月9日，發(fā)明名稱為“用于促進(jìn)植物生長和提高產(chǎn)量的脂殼寡糖聯(lián)用組合物”的原始中國專利申請(qǐng)的分案申請(qǐng)。
【背景技術(shù)】
[0002]在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中，通過將可獲得的大氣氮變成植物可利用的形式，固氮起著至關(guān)重要的作用。在豆科植物中，植物與根瘤菌科(根瘤菌)的固氮細(xì)菌之間的共生互作促進(jìn)植物生長和提高作物產(chǎn)量。當(dāng)植物釋放類黃酮化合物時(shí)引發(fā)該共生互作，所述類黃酮化合物刺激土壤中的根瘤菌產(chǎn)生“結(jié)瘤因子”。結(jié)瘤因子是誘發(fā)植物根部中的早期結(jié)瘤作用的信號(hào)化合物，其導(dǎo)致包含固氮根瘤菌的根瘤的形成。盡管該過程通常在豆科植物中隨著時(shí)間天然發(fā)生，但是農(nóng)業(yè)生產(chǎn)已經(jīng)發(fā)展至更早地啟動(dòng)該過程。該過程包括向種子或土壤提供固氮細(xì)菌，并且將結(jié)瘤因子于種植之前或種植時(shí)直接施用至種子或土壤。
[0003]通過不同于結(jié)瘤的方式，結(jié)瘤因子近年來已經(jīng)顯示出還促進(jìn)豆科和非豆科植物的發(fā)芽、生長和提高產(chǎn)量(US6, 979，664; Prithivaraj 等，Planta216:437-445，2003)。盡管結(jié)瘤因子對(duì)結(jié)瘤作用的作用已經(jīng)被廣泛研究并總結(jié)，例如Ferguson and Mathesius7J.PlantGrowth Regulation22:47-72, 2003，然而不依賴于結(jié)瘤作用的結(jié)瘤因子的作用機(jī)理還未充分公開。結(jié)瘤因子施用于豆科和非豆科植物的種子刺激作物和園藝植物品種的發(fā)芽、出苗、植物生長和產(chǎn)量，如US6，979，664和US5，922，316所描述。結(jié)瘤因子還顯示出促進(jìn)根部的發(fā)育(Olah, et al., The Plant Journal44:195-207, 2005)。還證實(shí)葉部施用結(jié)瘤因子促進(jìn)作物和園藝植物品種的光合作用(US7，250, 068)，以及結(jié)果和開花(W004/093，542)。
[0004]結(jié)瘤因子是脂殼寡糖化合物(LCO’ s)。該化合物由在非還原端具有N-連接的脂肪?；湹摩?1，4-連接的N-乙酰基-D-葡萄糖胺(“GlcNAc”)殘基的寡聚骨架組成。LCO’ s在骨架中的GIcNAc殘基數(shù)、脂肪酰鏈的長度和飽和度以及還原和非還原糖殘基的取代方面有所不同。LCO結(jié)構(gòu)是各根瘤菌種類所特有的，并且各菌株可以產(chǎn)生具有不同結(jié)構(gòu)的多種LC0’ S。在豆科植物的共生關(guān)系中，LCO’ s是宿主專一性的主要決定子(primarydeterminants) (Diaz, Spaink,和 Ki jne, Mol.Plant-Microbe Interactionsl3:268-276,2000)。
[0005]在細(xì)菌生長期間，對(duì)于所給定的根瘤菌的屬和種而言，通過加入適宜的類黃酮可以刺激LCO合成。類黃酮分子與根瘤菌相結(jié)合，并且啟動(dòng)細(xì)菌基因以生產(chǎn)特定的LCO’S，所述的LCO’ s釋放到發(fā)酵培養(yǎng)基中。在自然界中，豆科植物釋放適當(dāng)?shù)念慄S酮，其與土壤根瘤菌相結(jié)合，啟動(dòng)用于LCO生產(chǎn)的基因。這些LCO’ s通過細(xì)菌釋放入土壤中，與豆科植物的根部相結(jié)合，并且引發(fā)植物基因表達(dá)的級(jí)聯(lián)(其刺激豆科植物根部上的固氮瘤結(jié)構(gòu)的形成)?？蛇x地，經(jīng)修飾的和合成的LCO分子可以通過基因工程或化學(xué)合成來生產(chǎn)。相同分子結(jié)構(gòu)的合成LCO’ s與植物相互作用，并且以與天然生產(chǎn)的分子相同的方式刺激結(jié)瘤作用。
[0006]殼多糖和脫乙酰殼多糖也由GlcNAc殘基組成，是真菌細(xì)胞壁和昆蟲和甲殼動(dòng)物類的外骨骼的主要成分。這些組分已經(jīng)被施用于廣譜的作物和園藝植物的種子、根和葉。殼多糖和脫乙酰殼多糖組分提高對(duì)抗植物病原體的保護(hù)作用，部分地，通過刺激植物產(chǎn)生殼多糖酶、降解殼多糖的酶(Collinge,等人，The Plant Journal3:31-40,1993)。
[0007]類黃酮是具有通過三個(gè)碳橋連接的兩個(gè)芳環(huán)的通式結(jié)構(gòu)的酚類化合物。類黃酮是由植物產(chǎn)生的，并且具有多種功能，例如有益信號(hào)分子，以及對(duì)抗昆蟲、動(dòng)物、真菌和細(xì)菌的保護(hù)作用。類黃酮的種類包括查耳酮、花色素、香豆素、黃酮、黃烷醇、黃酮醇、黃烷酮和異黃酮(Jain 和 Nainawatee，J.Plant Biochem.&Biotechnol.11:1-10, 2002; Shaw 等人,Environmental Microbiol.11:1867-1880,2006)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0008]本發(fā)明包括用于促進(jìn)植物生長和提高作物產(chǎn)量的方法和組合物。示例性組合物包含至少一種脂殼寡糖和至少一種殼多糖類化合物。另一種示例性組合物包含至少一種脂殼寡糖和至少一種選自下組的類黃酮化合物:黃酮、黃烷醇、黃酮醇、黃烷酮和異黃酮。進(jìn)一步的示例性組合物包含至少一種脂殼寡糖和至少一種除草劑。示例性方法包括將本發(fā)明的組合物以促進(jìn)植物生長或提高作物產(chǎn)量的有效量施于植株或種子。在另一個(gè)實(shí)施方式中，該方法包括用至少一種脂殼寡糖和至少一種殼多糖類化合物或至少一種選自下組的類黃酮化合物:黃酮、黃烷醇、黃酮醇、黃烷酮和異黃酮順序處理植株或種子。
[0009]本發(fā)明提供用于促進(jìn)植物生長和提高作物產(chǎn)量的組合物和方法，并來源于本文記載的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，其顯示當(dāng)施用于種子和/或葉片時(shí)，脂殼寡糖與殼多糖/脫乙酰殼多糖、類黃酮化合物或除草化合物相組合對(duì)植物生長和作物產(chǎn)量的改善作用。
[0010]對(duì)于本發(fā)明的目的而言，“脂殼寡糖”(“LC0”)是具有常規(guī)LCO結(jié)構(gòu)的化合物，即在非還原端具有N-連接的脂肪酰基鏈的β -1, 4-連接的N-乙?；?D-葡萄糖胺殘基的寡聚骨架，如在U.S.專利號(hào)5，549，718、U.S.專利號(hào)5，646，018、U.S.專利號(hào)5，175，149和U.S.專利號(hào)5，321，01 1中所描述。該基本結(jié)構(gòu)可以包含在天然產(chǎn)生的LCO’ s中所發(fā)現(xiàn)的修飾或取代結(jié)構(gòu)，例如在 Spaink, Critical Reviews in Plant Sciences54:257-288，2000^ Haeze 和 Holsters，Glycobiologyl2:79R_105R，2002 中所述的結(jié)構(gòu)。本發(fā)明還包括合成的LCO化合物，例如描述于W02005/063784的化合物，以及通過基因工程生產(chǎn)的LCO’s。用于構(gòu)建LCOs的前體寡糖分子也可以通過基因工程生物體來合成,例如在Samain等人，Carbohydrate Research302:35-42,1997 中所描述。
[0011]用于本發(fā)明實(shí)施方式中的LCO’s可以由產(chǎn)生LCO’s的根瘤菌科菌株來再生，例如固氮根瘤菌屬(Azorhizobium)、慢生根瘤菌屬(Bradyrhizobium)(包括慢生大豆根瘤菌)、中慢生根瘤菌屬(Mesorhizobium)、根瘤菌(Rhizobium)(包括大豆根瘤菌)、中華根瘤菌屬(Sinorhizobium)(包括苜蓿中華根瘤菌)的菌株，以及產(chǎn)生LCO’ s的基因工程的細(xì)菌菌株。這些方法在本領(lǐng)域中是已知的并且描述于例如U.S.專利號(hào)5，549，718和5，646，018中，這兩篇文獻(xiàn)通過引用并入本文。現(xiàn)有包含LCO’s的商品，例如OPTIMIZE? (EMD CropBioScience)。
[0012]LCO’ s可以以多種純度形式利用，并且可以單獨(dú)使用或與根瘤菌一起使用。僅提供LCO’s的方法包括從LCOs和根瘤菌的混合物中簡單地除去根瘤菌細(xì)胞，或采用LCO溶劑相分離然后進(jìn)行HPLC色譜來連續(xù)分離或純化LCO分子，如Lerouge等人(US5，549，718)所描述。通過重復(fù)HPLC可以提高純度，并且經(jīng)純化的LCO分子可以經(jīng)冷凍干燥長時(shí)間儲(chǔ)存。該方法可接受用于由所有的根瘤菌科的屬和種制備LCO’ S。
[0013]在豆科植物中，特定根瘤菌的屬和種顯現(xiàn)出與特定豆科植物宿主的共生固氮關(guān)系。這些植物宿主:根瘤菌的組合描述于Hungria and Stacey, Soil Biol.Biochem.29:819-830，1997中，其也列出了根瘤菌菌種的有效的類黃酮結(jié)瘤基因誘導(dǎo)劑，以及由不同根瘤菌菌種產(chǎn)生的特定LCO結(jié)構(gòu)。然而，LCO特異性只用于在豆科植物中建立結(jié)瘤作用。當(dāng)用LCO’s處理豆科或非豆科植物的種子或葉片時(shí)，不必將LCO’s和植物種類相匹配以刺激植物生長和/或作物產(chǎn)量。
[0014]殼多糖類化合物包括:殼多糖(IUPAC:N-[5-[[3-乙酰基氨基_4，5_ 二羥基-6-(羥基甲基)嚙烷-2-基]甲氧基甲基]-2-[ [5-乙酰基氨基-4，6- 二羥基-2-(羥基甲基)嚙烷-3-基]甲氧基甲基]-4-羥基-6-(羥基甲基)嚙烷-3-基]乙酰胺)，以及脫乙酰殼多糖(IUPAC:5_氨基-6-[5-氨基-6-[5-氨基-4，6- 二羥基_2_(羥基甲基)碟燒-3-基]氧基-4:-羥基-2-(羥基甲基)魂燒-3-基]氧基-1 (羥基甲基)魂烷-3，4- 二醇)。這些化合物例如由Sigma-Aldrich商購可得，或由昆蟲、甲殼動(dòng)物貝殼或真菌細(xì)胞壁制得。用于制備殼多糖和脫乙酰殼多糖的方法是本領(lǐng)域已知的，并且描述于U.S.Pat.N0.4, 536, 207 (由甲殼動(dòng)物貝殼制得)，Pochanavanich and Suntornsuk, Lett.App1.Microbiol.35:17-21，2002 (由真菌細(xì)胞壁制得)和 U.S.Pat.N0.5，965，545 (由蟹殼和市售脫乙酰殼多糖的水解制得)。可以獲得范圍為低于35%至高于90%脫乙酰化的脫乙酰殼多糖和脫去乙?；臍ざ嗵牵涓采w寬范圍的分子量，例如低于15kD的低分子量的脫乙酰殼多糖低聚物以及0.5至2kD的殼多糖低聚物；具有分子量約150kD的“實(shí)驗(yàn)等級(jí)(practicalgrade)”的脫乙酰殼多糖；以及直至700kD的高分子量的脫乙酰殼多糖。配制用于植物和土壤處理的殼多糖和脫乙酰殼多糖組合物也是商購可得的。市售產(chǎn)品包括，例如ELEXA?-4PDB (Plant Defense Boosters, Inc.)和 BEYOND?(Agrihouse, Inc.)。
[0015]LCO’ s和殼多糖/脫乙酰殼多糖是結(jié)構(gòu)相關(guān)的。殼多糖和脫乙酰殼多糖可以刺激植物殼多糖酶的產(chǎn)生,并且已經(jīng)表明如同殼多糖化合物一樣,植物殼多糖酶可以使LCO，s和殼多糖化合物失活并且降解(Staehelin等人，P.N.A.S.USA91:2196-2200，1994 ；Ferguson and Mathesius, J.Plant Growth Regulation22:47-72, 2003))。此外，商購可得的脫乙酰殼多糖配制劑通常含有對(duì)根瘤菌具有毒性并且從而防止LCOs產(chǎn)生的重金屬。出于這些原因，以前將根瘤菌與殼多糖/脫乙酰殼多糖組合的使用表明是不合適的。然而，如以下實(shí)施例所示，現(xiàn)已證實(shí)LCO化合物和殼多糖/脫乙酰殼多糖順序或同時(shí)至植株或種子的施用誘導(dǎo)了植物生長和產(chǎn)量方面的有利應(yīng)答。雖然對(duì)于該作用的機(jī)理還未證實(shí)，但一種假說是LCO化合物與植株或種子上的特定受體相結(jié)合，并且通過產(chǎn)生殼多糖酶在LCO降解前引發(fā)這些有利應(yīng)答。此外，該新處理方法消除了重金屬對(duì)由根瘤菌產(chǎn)生的LCO的影響。
[0016]在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方式中，該組合物可以通過在農(nóng)業(yè)上適宜的溶劑中將脫乙酰殼多糖與一種或多種LCO相混合來制得。在第二個(gè)實(shí)施方式中，該組合物也可以包含殼多糖。脫乙酰殼多糖的濃度范圍可以為0.1至15%w/v，優(yōu)選3至12%。所包括的殼多糖可以為O至4%w/v。LCO的濃度范圍為10_5M至10_14M，優(yōu)選為10_6M至ΙΟ,Μ。LCO組分可以由純化的或部分純化的LC0、 或由LCO和產(chǎn)生LCO的根瘤菌的混合物組成。農(nóng)業(yè)上適宜的溶劑優(yōu)選水性溶劑，例如水。
[0017]適宜的類黃酮化合物包括選自下組的化合物:黃酮、黃烷醇、黃酮醇、黃烷酮和異黃酮。這類化合物可以包括，但不限于染料木黃酮、大豆黃素、芒柄花素、柚皮素、橙皮素、木犀草素和芳:菜素。類黃酮化合物是商購可得的，例如來自Natland International Corp.,Research Triangle Park, NC;MP Biomedicals, Irvine,CA;LC Laboratories, Woburn MA0類黃酮化合物可以從植株或種子中分離，例如如US5，702, 752、US5, 990, 291、US6, 146，668所描述的。類黃酮化合物也可以通過基因工程生物體如酵母制得，如在Ralston等人，PlantPhysiologyl37:1375-1388，2005 中所描述的。
[0018]在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方式中，該組合物可以通過在農(nóng)業(yè)上適宜的溶劑中將一種或多種類黃酮與一種或多種LCO相混合制得。組合物的“有效量”是當(dāng)與未用該組合物處理的植株或種子的生長或作物產(chǎn)量相比，促進(jìn)植物生長或提高作物產(chǎn)量的量。例如，組合物中的類黃酮的濃度范圍為20-800 μ m，優(yōu)選100-500 μ m。組合物中的LCO的濃度范圍為10_5M至10_14M，優(yōu)選10_6M至ΙΟ,Μ。LCO組分可以由純化的或部分純化的LC0、或由LCO和產(chǎn)生LCO的根瘤菌的混合物組成。農(nóng)業(yè)上適宜的溶劑優(yōu)選水性溶劑，例如水。
[0019]盡管以單一混合物的形式將類黃酮或殼多糖/脫乙酰殼多糖與LCO組分相組合和施用是有效的和便利的，然而在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方式中，類黃酮或殼多糖/脫乙酰殼多糖組分與LCO組分可以單獨(dú)和以任何順序先后施用?？梢酝瑫r(shí)或順序施用的其它添加劑包括肥料(如鈣、氮、鉀、磷)，微量營養(yǎng)物(如銅、鋁、鎂、錳和鋅離子)，以及農(nóng)藥(如殺真菌劑、殺昆蟲劑、除草劑和殺線蟲劑)
[0020]在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方式中，包含至少一種LCO和至少一種除草劑的組合物施用于植物葉片以促進(jìn)植物生長或提高作物產(chǎn)量。適宜的除草劑包括，但不限于滅草松、三氟羧草醚、氯嘧磺隆、乳氟禾草靈、異噁草酮、吡氟禾草靈、草銨膦、草甘膦、烯禾定、咪唑乙煙酸、甲氧咪草煙、氟磺胺草醚、氟烯草酸、咪唑喹啉酸和烯草酮。包含這些化合物的商品是容易獲得的。對(duì)于特定的除草劑而言，組合物中的除草劑濃度通常相應(yīng)于所標(biāo)注的用量。組合物中的LCO濃度范圍為10_5Μ至10_14Μ，優(yōu)選10_6Μ至ΙΟ,Μ。在待施用的組合物中所使用的農(nóng)業(yè)上適宜的溶劑優(yōu)選為水性溶劑，例如水。該組合物通常在任何適宜于雜草防治的時(shí)間施用于植物，優(yōu)選苗后施用。
[0021]在一個(gè)實(shí)施方式中，該組合物包含至少一種具有基于草甘膦除草劑的LC0，并且處理包括將該組合物施用于植物，所述植物是為獲得針對(duì)草甘膦的抗性而經(jīng)基因修飾的。
[0022]本文所使用的術(shù)語“植物”包括塊莖、根、莖、葉、花和果實(shí)。組合物可以直接施用于種子或植株，或可以在種植前或種植時(shí)，施于種子或植物附近的土壤中。在優(yōu)選的實(shí)施方式中，將該組合物噴霧于種子、塊莖或葉片上。可以處理幼苗以及更成熟的植株。還可以通過噴霧處理花和果實(shí)?？梢詫⒁浦仓参锏母诜N植前進(jìn)行噴霧或浸在組合物中。
[0023]組合物的“有效量”是當(dāng)與未用該組合物處理的植株或種子的生長或作物產(chǎn)量相t匕，促進(jìn)植物生長或提高作物產(chǎn)量的量。
[0024]該組合物可以施用至單子葉或雙子葉植物，以及豆科植物和非豆科植物。在一個(gè)實(shí)施方式中，將該組合物施用至大田生長植物。在另一個(gè)實(shí)施方式中，將組合物施用至溫室生長植物。例如，該組合物可以施用至豆科植物如大豆、豌豆、鷹嘴豆、菜豆、花生、三葉草、苜蓿，以及非豆科植物如玉米、棉花、稻、西紅柿、油菜、小麥、大麥、甜菜和禾本科植物的種子或葉片。通常，對(duì)于種子處理而言，將該組合物以單次施用的方式施用至種子，并且所述種子可以立即種植或在種植前儲(chǔ)存。該組合物可以施用至葉片。葉片施用通常包括在生長期期間，將組合物一次或多次噴霧至植物葉片上。此外，若先后施用類黃酮化合物和LCO，則類黃酮化合物可以施用至種子，并且LCO施用至葉片。
實(shí)施例
[0025]1、用1X0+殼多糖/月兌乙酉先殼多糖處理.大.豆(Northrup King S24_k4) 葉片
[0026]進(jìn)行大豆大田試驗(yàn)以評(píng)價(jià)當(dāng)單獨(dú)或組合施用至葉片時(shí)，LCO和兩種市售脫乙酰殼多糖產(chǎn)品對(duì)谷物產(chǎn)量的作用。在該試驗(yàn)中所使用的兩種市售脫乙酰殼多糖產(chǎn)品為BEYOND? (Agr1-House Inc., 307ffelch Ave, Berthoud, CO)和 ELEXA !V—4PDB (Plant
Defense Boosters, 235Harrison St, Syracuse, NY)。BEYOND? 中的殼多糖 / 脫乙酸殼多糖的精確濃度未知，但估算范圍為6-12%w/v的脫乙酰殼多糖和0-3%w/v殼多糖，基于U.S.申
請(qǐng)?zhí)?，193，988。ELEXA?-4PDB中的脫乙酰殼多糖的濃度為4%w/v。ELEXA?_4PDB
不包含殼多糖。在ELEXA?-4PDB中脫乙酰殼多糖的濃度為4%w/v。lco產(chǎn)品是通過蠶豆根瘤菌(Rhizobium leguminosarum bv viceae)制得的，并且包含大約 1x10—8M 的 LC0。大田試驗(yàn)位于Whitewater，WI附近，特征為Milford粉砂質(zhì)粘壤土的場(chǎng)地。土壤pH值為6.6，有機(jī)物質(zhì)含量為4.8%，并且磷和鉀的含量分別為41ppm和131ppm。[0027]在該研究中所使用的大豆種子為Northrup King變種S24-K4。通過在4葉生長階段噴霧至葉片進(jìn)行LCO處理(參見Soybean Growth and Development, 1wa StateUniversity Extension Bulletin PM1945，2004 年 5 月)，其用量為在 25 加侖水中 I 夸脫 /
英畝。將BEYOND?在水中稀釋至濃度為0.132%w/v，并且ELEXA_?-4PDB稀釋至2.5%w/v。
通過以在25加侖水中I夸脫/英畝的用量將各產(chǎn)品噴霧施用至葉片。當(dāng)施用LCO-殼多糖/脫乙酰殼多糖組合物時(shí)，使用與當(dāng)單獨(dú)施用各產(chǎn)品時(shí)相同濃度的LCO和殼多糖/脫乙酰殼多糖產(chǎn)品。
[0028]以隨機(jī)完全區(qū)組設(shè)計(jì)(a randomized complete block design)來進(jìn)行研究，試驗(yàn)地塊尺寸為10英尺X50英尺，30英寸的行距。重復(fù)4次。利用John Deere750NT谷物條播機(jī)，以I英寸的深度、播種量為175，000粒種子/英畝來種植種子。
[0029]研究結(jié)果示于表1。當(dāng)以單獨(dú)處理的方式施用至葉片時(shí)(p=0.1)，LCO、BEYOND?
和ELEXA'?-4PDB產(chǎn)品分別各自顯著地提高了 3.5、6.6和5.0bu/英畝的谷物產(chǎn)量。將ELEXA?-4PDB與lco組合施用相比單獨(dú)施用lco統(tǒng)計(jì)學(xué)上提高了 6.2bu/英畝的產(chǎn)量，相比單獨(dú)施用ELEXA?-4PDB提高4.7bu/英畝的產(chǎn)量。將beyond?與lco組合施用相
比單獨(dú)施用LCO統(tǒng)計(jì)學(xué)上提高了 5.3bu/英畝的產(chǎn)量，相比單獨(dú)施用BEYOND?數(shù)值上提高了
2.2bu/英畝的產(chǎn)量。
[0030]相比對(duì)照，用lco+ ELEXA?-4PDB的處理提高了 9.7bu/英畝的產(chǎn)量，與單獨(dú)用lco或ELEXA?-4PDB的處理相比，顯示了該組合物的出人意料的增效作用。
[0031]表1[0032]
【權(quán)利要求】
1.一種用于促進(jìn)植物生長和提高作物產(chǎn)量的組合物，其包含 a)至少一種脂殼寡糖 b)和包含一種或多種殼多糖類化合物的第一組分，其選自殼多糖和脫乙酰殼多糖， 或 b')包含一種或多種類黃酮化合物的第二組分，其選自黃酮、黃燒醇、黃酮醇、黃燒酮和異黃酮，以20 μ m至800 μ m的濃度存在， 或 b/ / )包含除草劑的第三組分，其包含至少一種除草的化合物。
2.根據(jù)權(quán)利要求1的組合物,其中脂殼寡糖由選自下組的細(xì)菌種類產(chǎn)生:慢生根瘤菌屬(Bradyrhizobium)、根瘤菌(Rhizobium)、中華根瘤菌屬(Sinorhizobium)和中慢生根瘤菌屬(Mesorhizobium) 或 其中脂殼寡糖是至少部分由基因修飾的細(xì)胞或生物體產(chǎn)生的。
3.根據(jù)權(quán)利要求1的組合物，其中脂殼寡糖是通過化學(xué)合成來產(chǎn)生的。
4.根據(jù)權(quán)利要求1的組合物，其中脂殼寡糖以10_5M至10_14M，優(yōu)選10_6M至ΙΟ,Μ的濃度存在。
5.根據(jù)權(quán)利要求1的組合物，其進(jìn)一步包含產(chǎn)生LCO的細(xì)菌。
6.根據(jù)權(quán)利要求1的組合物，其中所述第一組分包含以0.1至15% w/v，優(yōu)選3至12%w/v的濃度存在的殼多糖類化合物。
7.根據(jù)權(quán)利要求1的組合物，其中所述第二組分包含至少一種選自下組的類黃酮化合物:染料木黃酮、大豆黃素、芒柄花素、柚皮素、橙皮素、木犀草素和芹菜素。
8.根據(jù)權(quán)利要求7的組合物，其中類黃酮化合物以100μ π!至500 μ m的濃度存在。
9.根據(jù)權(quán)利要求1的組合物，其中所述除草化合物選自下組:滅草松、三氟羧草醚、氯嘧磺隆、乳氟禾草靈、異噁草酮、吡氟禾草靈、草銨膦、草甘膦、烯禾定、咪唑乙煙酸、甲氧咪草煙、氟磺胺草醚、氟烯草酸、咪唑喹啉酸和烯草酮。
10.一種促進(jìn)植物生長或提高作物產(chǎn)量的方法，該方法包括將權(quán)利要求1的組合物以促進(jìn)植物生長或提高作物產(chǎn)量的有效量施于植物或種子。
11.根據(jù)權(quán)利要求10的方法，其中所述植物是豆科或非豆科植物。
12.根據(jù)權(quán)利要求11的方法，其中所述植物選自下組:大豆、豌豆、鷹嘴豆、菜豆、花生、三葉草、苜蓿、玉米、棉花、稻、西紅柿、油菜、小麥、大麥、甜菜和禾本科植物。
13.根據(jù)權(quán)利要求10的方法，其中所述組合物是通過將所述組合物施用至葉片、種子或緊鄰植物或種子的土壤來施于的。
14.一種促進(jìn)植物生長或提高作物產(chǎn)量的方法，該方法包括將包含 a)至少一種脂殼寡糖，其以10_5M至10_14M的濃度存在 和 b)包含至少一種以促進(jìn)植物生長或提高作物產(chǎn)量的有效量的殼多糖類化合物的第一組分，其選自殼多糖和脫乙酰殼多糖， 或 b/ )包含至少一種類黃酮化合物的第二組分，其選自黃酮、黃烷醇、黃酮醇、黃烷酮和異黃酮，以20 μ m至800 μ m的濃度存在以促進(jìn)植物生長或提高作物產(chǎn)量， 或 b/ ')包含至少一種除草的化合物的第三組分。
15.根據(jù)權(quán)利要求14的方法，其中所述第二組分包含至少一種選自下組的類黃酮化合物:染料木黃酮、大豆黃素、芒柄花素、柚皮素、橙皮素、木犀草素和芹菜素。
16.根據(jù)權(quán)利要求14的方法，其中所述第一組分包含以0.1至15%濃度存在的殼多糖類化合物。
17.一種促進(jìn)植物生長或提高作物產(chǎn)量的方法，該方法包括將以促進(jìn)植物生長或提高作物產(chǎn)量的有效量包含至少一種脂殼寡糖的第一組合物，和以促進(jìn)植物生長或提高作物產(chǎn)量的有效量包含至少一種殼多糖類化合物的第二組合物以任何順序先后施于植物或種子，其中殼多糖類化合物選自殼多糖和脫乙酰殼多糖。
18.根據(jù)權(quán)利 要求17的方法，在第一組合物中脂殼寡糖以IO-5M至KT14M的濃度存在。
19.根據(jù)權(quán)利要求17的方法，在第一組合物中脂殼寡糖以IO-6M至ΙΟ,Μ的濃度存在。
20.根據(jù)權(quán)利要求17的方法，其中殼多糖類化合物以0.1至15% w/v的濃度存在。
21.根據(jù)權(quán)利要求17的方法，其中殼多糖類化合物以3至12%w/v的濃度存在。
22.根據(jù)權(quán)利要求17的方法，還包括施用除草劑于植物。
23.根據(jù)權(quán)利要求22的方法，其中所述除草劑選自下組:滅草松、三氟羧草醚、氯嘧磺隆、乳氟禾草靈、異噁草酮、吡氟禾草靈、草銨膦、草甘膦、烯禾定、咪唑乙煙酸、甲氧咪草煙、氟磺胺草醚、氟烯草酸、咪唑喹啉酸和烯草酮。
24.根據(jù)權(quán)利要求22的方法，其中所述植物是為獲得針對(duì)該除草劑的抗性而經(jīng)基因修飾的植物。
25.根據(jù)權(quán)利要求17的方法，其中所述殼多糖類化合物是殼多糖。
26.根據(jù)權(quán)利要求17的方法，其中所述殼多糖類化合物是脫乙酰殼多糖。
27.根據(jù)權(quán)利要求17的方法，其中所述植物或種子是豆科的。
28.根據(jù)權(quán)利要求17的方法，其中所述植物或種子是非豆科的。
29.根據(jù)權(quán)利要求17的方法，其中所述植物選自下組:大豆、豌豆、鷹嘴豆、菜豆、花生、三葉草、苜蓿、玉米、棉花、稻、西紅柿、油菜、小麥、大麥、甜菜和禾本科植物。
30.一種促進(jìn)植物生長或提高作物產(chǎn)量的方法，該方法包括將以促進(jìn)植物生長或提高作物產(chǎn)量的有效量包含至少一種脂殼寡糖的第一組合物，和以促進(jìn)植物生長或提高作物產(chǎn)量的有效量包含至少一種選自黃酮、黃燒醇、黃酮醇、黃燒酮和異黃酮的類黃酮化合物的第二組合物以任何順序先后施于植物或種子。
31.根據(jù)權(quán)利要求30的方法，其中類黃酮化合物選自下組:染料木黃酮、大豆黃素、芒柄花素、柚皮素、橙皮素、木犀草素和芹菜素。
32.根據(jù)權(quán)利要求根據(jù)權(quán)利要求10或14的方法，其中所述組合物包含至少一種脂殼寡糖和至少一種除草劑，其中所述組合物施用至植物，所述植物是為獲得針對(duì)該除草劑的抗性而經(jīng)基因修飾的植物。
【文檔編號(hào)】A01N57/20GK103461385SQ201310365298
【公開日】2013年12月25日 申請(qǐng)日期:2008年1月8日 優(yōu)先權(quán)日:2007年1月9日
【發(fā)明者】R·S·史密斯, R·M·奧斯本 申請(qǐng)人:默克專利股份有限公司