專利名稱：重組梅毒螺旋體表位抗原及多表位嵌合抗原的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及重組梅毒螺旋體表位抗原，還涉及重組梅毒螺旋體多表位嵌合抗原。
梅毒螺旋體是性病梅毒的病原體，最早報道是14世紀(jì)在歐洲，大約在16世紀(jì)傳入中國。自青霉素聞世后，該病得到了一定程度的控制，但仍遠未消滅。且近十多年來，隨著艾滋病的傳播，梅毒又有抬頭之勢，應(yīng)引起重視。目前還沒有針對梅毒的有效疫苗，因此，早期檢出病人，及時治療，控制血源，是有效控制疾病傳播的重要措施。
檢測梅毒螺旋體感染有多種方法，如用病灶組織可直接檢測病原體；用PCR法檢測螺旋體基因也有報道(Pietravalle M，et al.Diagnostic relevance ofpolymerase chain reaction technology for T.pallidum in subjects with syphilis indifferent phases of infection.New Microbiol 1999 Apr；22(2)99-104)但還不普遍。血清學(xué)反應(yīng)是目前最常用的檢測方法。早先常采用非特異類脂質(zhì)抗原(心磷脂)，檢測抗心磷脂抗體，如性病研究實驗室(VDRL)、不加熱血清反應(yīng)素試驗(USR)和快速血漿反應(yīng)素環(huán)狀試驗(RPR)等。這些方法較靈敏，但不特異，有假陽性反應(yīng)，因而常需作確認試驗。以梅毒螺旋體為抗原的特異性檢測方法，有梅毒熒光螺旋體抗體吸附試驗(FTA-ABS)和梅毒螺旋體血凝試驗(TPHA)，其特異性和靈敏度均較高。但由于梅毒螺旋體培養(yǎng)困難，試劑的成本較高，再由于梅毒螺旋體的抗原性較復(fù)雜，和其它病原體，尤其是類似的螺旋體病(如雅司)仍可有一定的非特異性反應(yīng)。鑒于以上情況，人們正在尋求用重組蛋白質(zhì)作抗原的途徑。近年來，梅毒全基因組序列都已得到了確定基因組全長約1,138,006bp，據(jù)推斷具有1041個編碼框(FraserCM et al，Complete Genome Sequence of Treponema pallidum，the SyphilisSpirochete.Science，1998；281375)。隨著基因克隆技術(shù)的發(fā)展，用梅毒重組蛋白質(zhì)為抗原的免疫測定方法已有不少研究，如免疫俘獲EIA(ICE)測定法(Young H.et al.Novel recombinant-antigen enzyme immunoassay forserological diagnosis of sphilis.J Clin Microbiol 1998 Apr；36(4)913)。據(jù)報道在特異性和靈敏度方面，均和FTA-ABS法相當(dāng)或更好。顯示這類酶免疫檢測試劑有著廣闊的發(fā)展前景。為了獲得良好的酶免疫檢測試劑，抗原的研究非常重要。早期用于血清學(xué)檢測的重組梅毒抗原有4D抗原(Radolf JD，et al.Serodiagnosis of syphilis by enzyme-linked immunosorbent assay with purifiedrecombinant Treponema pallidum antigen 4D.J Infect Dis 1986 Jun；153(6)1023)和TmpA(Ijsselmuiden OE，et al.Sensitivity and specificity of an enzyme-linkedimmunosorbent assay using the recombinant DNA-derived Treponema pallidumprotein TmpA for serodiagnosis of syphilis and the potential use of TmpA forassessing the effect of antibiotic therapy.J Clin Microbiol 1989 Jan；27(1)152-7)，據(jù)報道，后者對一期梅毒的檢測率為76％，二期為100％，對無癥狀梅毒也可達98％，與血凝法相當(dāng)。但根據(jù)最近研究顯示，在梅毒基因編碼的眾多抗原中，除TmpA(也稱TpN42)外，還有TpN17，TpN15，Tpm47具有較高的抗原性，其中又以TpN17的抗原活性最高(Fujimura K，et al.Reactivity ofrecombinant Treponema pallidum(r-Tp)antigens with anti-Tp antibodies inhuman syphilitic sera evaluated by ELISA.J Clin Lab Anal 1997；11(6)315.和Sato NS，et al.Analysis of Treponema pallidum recombinant antigens fordiagnosis of syphilis by Western blotting technique.Rev Inst Med Trop Sao Paulo1999 Mar-Apr；41(2)115)。但有報道認為TpN17，TpN15，TpN47三種抗原聯(lián)用，檢測靈敏度又較任何一種抗原單用為高(Gerber A，RecombinantTreponema pallidum antigens in syphilis serology.Immunobiology1996-97；196(5)535)。重組蛋白質(zhì)作抗原的試劑一般非特異反應(yīng)較低，但使用大片段的重組抗原，也有報道可有一定的非特異反應(yīng)性，如4D抗原，可和大部分雅司病人血清發(fā)生交叉反應(yīng)(Radolf JD，et al.Serodiagnosis ofsyphilis by enzyme-linked immunosorbent assay with purified recombinantTreponema pallidum antigen 4D.J Infect Dis 1986 Jun；153(6)1023)。也已經(jīng)發(fā)現(xiàn)在TpN47中有一段序列(411PGTEYT416)和人纖維粘連蛋白(fibronectin)存在著較高的同源性，這可能和某些自身免疫性疾病，可與梅毒檢測試劑發(fā)生交叉反應(yīng)性有關(guān)(Baughn RE，et al.Molecular mimicry between animmunodominant amino acid motif on the 47-kDa lipoprotein of Treponemapallidum(Tpp47)and multiple repeats of analogous sequences in fibronectin.JImmunol 1996 Jul 15；157(2)720)，這種同源性和交叉反應(yīng)性，在其它的梅毒抗原中也是可能存在的。因此，如能應(yīng)用小片段的表位抗原，而不用大片段的重組蛋白，應(yīng)可進一步提高檢測的特異性。但目前文獻上，除TpN42已有用重疊肽研究其主要抗原表位的報道外(Antoni G，et al.Detection of antigenicdeterminants in the Treponema pallidum membrane protein TmpA usingoverlapping synthetic peptides.J Immunol Methods 1996 Jan 16；189(1)137-40)，還未見其它報道。
本發(fā)明的一個目的是提供一些單片段的重組梅毒表位抗原。
本發(fā)明的另一目的是提供一個融合各抗原表位的多表位嵌合抗原。
根據(jù)本發(fā)明的一個方面，單片段重組梅毒螺旋體表位抗原的氨基酸序列為ARRGEKEAVYDYQHKEGRFKSQDADYHRV或SVLSKQETEDSRGRKKWEYETDPSV。
根據(jù)本發(fā)明的另一個方面，重組梅毒螺旋體多表位嵌合抗原包含上述單片段表位抗原。
本發(fā)明的重組梅毒螺旋體多表位嵌合抗原優(yōu)選為上述單片段表位抗原與TpN17的第22至156位氨基酸和TpN42的第23至41位氨基酸的融合，其氨基酸序列為ARRGEKEAVYDYQHKEGRFKSQDADYHRVSGGGSSGGGSVLSKQETEDSRGRKKWEYETDPSGGGSSGGGSASGAKEEAEKKAAEQRALLSGGGSSGGGSCVSCTTVCPHAGKAKAEKVECALKGGIFRGTLPAADCPGIDTTVTFNADGTAQKVELALEKKSAPSPLTYRGTWMVREDGIVELSLVSSEQSKAPHEKELYELIDSNSVRYMGAPGAGKPSKEMAPFYVLKKTKK。
本發(fā)明的上述抗原表位和多表位嵌合抗原可通過以下技術(shù)方案得到。
在眾多梅毒基因編碼的蛋白質(zhì)中，目前已知能用于診斷試劑的蛋白質(zhì)主要有TpN17、TpN15、TpN42和TpN47四種。為了選擇各蛋白質(zhì)的主要抗原表位，首先從網(wǎng)上(Gene-Bank)獲得以上四種蛋白質(zhì)的氨基酸全序列；用計算機軟件Gold-Key分析各抗原的抗原表位(也稱抗原決定簇)，并從中選擇主要的抗原表位加于重組表達，進一步加于組合連接。
抗原基因的合成可用PCR方法，從梅毒基因中擴增獲得，也可用化學(xué)合成法，前者對大基因片段的獲取較為有利，后者適合小基因片段的合成?？紤]我們要合成的基因片段都不長，擬采用化學(xué)合成法?；瘜W(xué)合成基因可省去提取模板基因的操作，方便快速；另一優(yōu)點是可以選擇在大腸桿菌的偏性密碼子，這樣可有利于在E.coli中獲得高效的表達。所以我們選用化學(xué)合成法，也并不直接選用文獻報道的梅毒基因序列的密碼子，而是根據(jù)抗原表位的肽序列，和大腸桿菌中高表達的偏性密碼子，推斷出核苷酸序列加以合成?；瘜W(xué)法合成基因一次能合成的長度有限，一般不超過60堿基。對TpN15，TpN47和TpN42，可先合成兩條3’端有一段互補重疊的基因片段，將二者退火后用聚合酶延伸，獲得正負雙鏈DNA基因。但要合成全長135氨基酸TpN17基因，合成兩條基因片段是遠遠不夠的，所以共合成了九條有部分序列重疊的基因片段，從中間向兩端逐步延伸合成。
為了便于基因間的相互連接，并在連接后可獲得較好的抗原活性，在抗原表位間需有一連接臂，我們在表位的上下游分別加上G-G-G-S和S-G-G-G，所以在合成基因時應(yīng)加上相應(yīng)的基因。最后為了便于合成的基因克隆到表達載體，還合成了兩條和連接臂相配的通用引物，引入兩個酶切位點XhoI和XbaI，以適合表達載體pBVIL1。
載體pBVIL1是在我們以前構(gòu)建的白介素1表達質(zhì)粒pBV220/IL-1β(郭甫坤，凌世淦等，IL-1β及其突變體克隆、表達與活性研究，軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院院刊，1999，23(3)238-9)的基礎(chǔ)了上構(gòu)建而成的。即選擇IL-1β分子表面g-環(huán)處，插入的可供基因克隆的酶切位點為XhoI和XbaI，最終構(gòu)建成表達載體pBVIL1。該載體已于2000年1月27日進行夠保藏，保藏機構(gòu)和編號為CGMCC NO0437。其構(gòu)建方法已于2000年1月28日申請中國專利，專利申請?zhí)枮?0100695.9，在此一并列為本發(fā)明的參考資料。
上述已提到合成的基因的兩端已引入酶切位點XhoI和XbaI，這和載體pBVIL1是相符的。所以各基因片段均可方便地用雙酶切法插入載體pBVIL1中，構(gòu)建成相應(yīng)的表達質(zhì)粒。構(gòu)建的表達質(zhì)粒需用PCR法鑒定，以證明各基因片段已獲正確地插入。
多表位嵌合抗原表達質(zhì)粒是在各梅毒表位抗原表達質(zhì)粒的基礎(chǔ)上構(gòu)建而成的。把其中一個質(zhì)粒作為載體；另一含有基因TpN15的質(zhì)粒作為模板，用含有SpeI的通用引物及含有BamHI的原IL-1基因3’端引物，擴增出含有TpN15和部分IL-1的基因片段，插入用XhoI和BamHI雙切的TpN47基因的后面，獲得含有TpN47和TpN15兩個基因的質(zhì)粒。由于新質(zhì)粒中，TpN47和TpN15基因間的連接是由互補酶XbaI和SpeI之間的相連，連接后酶切位點不復(fù)存在，因此，新質(zhì)粒又可成為新的載體，而另一含有TpN42質(zhì)粒，可作為模板，擴增出含有TpN42的基因片段，連接在TpN47-15的后面，獲得質(zhì)粒pBVIL1/TpN47-15-42。同理，進一步可獲得質(zhì)粒pBVIL1/TpN47-15-42-17。多表位嵌合質(zhì)粒，也要經(jīng)PCR鑒定，證明可以擴增出相應(yīng)的融合基因片段。
各表位抗原及多表位嵌合抗原表達質(zhì)粒，轉(zhuǎn)化E.coli HB101后，通過熱誘導(dǎo)培養(yǎng)，取全菌液進行SDS-PAGE鑒定，證明各表達質(zhì)粒均已獲得了高效的表達。再經(jīng)離子交換柱及凝膠過濾純化，均可獲得電泳純的梅毒表位抗原和多表位嵌合抗原的純品。
實驗證明，本發(fā)明的不同的表位抗原均有一定的活性，其中以TpN17的檢率最高，而多表位嵌合抗原的活性更高，而且我們的抗原只需一個嵌合抗原，生產(chǎn)成本低，又只是表位抗原，應(yīng)有更高的特異性。
下面結(jié)合附圖對本發(fā)明作進一步詳細地描述，這些實施例僅用于解釋、而不以任何方式限制本發(fā)明。


圖1為TpN17分子及抗原表位分析圖(a.TpN17分子的氨基酸序列；b.抗原表位分析圖示，橫座標(biāo)為氨基酸位置，縱座標(biāo)為抗原性)。
圖2為TpN15分子抗原表位分析(a.TpN15分子的氨基酸序列；b.抗原表位分析圖；c.選擇的抗原表位在分子中位置和氨基酸序列)。
圖3為TpN47分子抗原表位分析圖(a.TpN47分子的氨基酸序列；b.抗原表位分析圖；c.選擇的抗原表位在分子中位置和氨基酸序列)。
圖4為TpN42分子抗原表位分析圖(a.TpN42分子的氨基酸序列；b.抗原表位分析圖；c.選擇的抗原表位在分子中位置和氨基酸序列)。
圖5為四種主要表位抗原的氨基酸序列及其推斷的基因序列。
圖6是為了合成四種梅毒表位抗原基因，需合成的基因片段及通用引物。
圖7為TpN17基因分步合成示意圖。
圖8為梅毒表位抗原表達質(zhì)粒的構(gòu)建示意圖，圖中TpNx代表任一的表位抗原。
圖9為表位抗原間連接及多表位抗原表達質(zhì)粒構(gòu)建示意圖。
圖10為各種重組梅毒抗原純品的SDS-PAGE鑒定結(jié)果圖(1.TpN47，2.TpN42，3.TpN17，4.TpN15，5.TpN47+15，6.TpN47+15+42，7.TpN47+15+42+17，8.蛋白標(biāo)準(zhǔn))。
實施例1重組梅毒抗原表位的選擇1.TpN17抗原表位的選擇TpN17的全序列如
圖1a所示，有156氨基酸，用Gold-Key軟件分析抗原決定簇，如
圖1b所示，其中N端為疏水信號肽序列，沒有明確的抗原表位，在分子的其它部分存在著多個抗原表位。由于TpN17在各抗原中活性是最高的，所以我們選了除N-端21個氨基酸以外的其它部分，即22～156(135氨基酸)。
2.TpN15抗原表位的選擇TpN15的全序列如圖2a所示，全序列共有124氨基酸，用Gold-Key軟件分析抗原表位，如圖3b所示，在TpN15中有2個主要的抗原表位，一是在中段(第41～60氨基酸)，再是在C-末端(113～120氨基酸)。所以我們選了這兩個表位，然后再加以連接，所以，擬合成的抗原表位組合的氨基酸序列如圖2c所示。
3.TpN47抗原表位的選擇TpN47的全序列如圖3a所示，全序列有415氨基酸，用Gold-Key軟件分析抗原決定簇，如圖3b所示，在TpN47分子中雖有數(shù)個抗原表位，但較強的抗原表位只有1個，主要是在分子的82～97位，我們也只選擇這一表位，同時考慮了前后序列可能對表位三維結(jié)構(gòu)的影響，適當(dāng)加于延長，最后選擇第78～101氨基酸，如圖3c所示。
4.TpN42抗原表位的選擇TpN42的全序列如圖4a所示，全序列有405氨基酸，用Gold-Key軟件分析抗原決定簇，如圖4b所示，在TpN42分子中雖有數(shù)個抗原表位，但較強的抗原表位也只有1個，主要是在分子N端25-37氨基酸，并適當(dāng)向前后延伸，最后選擇序列為23～41位，這和文獻上用重疊肽研究的抗原表位是一致的。同時也避開了文獻報道和fibronectin可能有交叉免疫反應(yīng)性的區(qū)段。
實施例2.梅毒表位抗原及多表位嵌合抗原的克隆與表達1.含表位抗原及多表位嵌合抗原表達質(zhì)粒的構(gòu)建1.1.合成基因片段的設(shè)計與合成根據(jù)各合成基因的需要，設(shè)計了如圖6已提到的基因片段?；蚱涡蛄性O(shè)計后均委托上海生工生物技術(shù)服務(wù)有限公司合成。
1.2.PCR法獲得TpNs基因TpN15，Tpn47和TpN42的基因合成方法，除所用合成基因片段不同外，均用兩步PCR合成法
第一步在PCR擴增管中，依次加入H2O 41μl，10×PCR Buffer 5μl，分別加入各自基因的合成的一對基因片段(20pmole/μl)R、F(圖6)各1μl，10mmol/L 4 dNTP 1μl，2U/μl的Taq DNA聚合酶1μl，混勻，1000rpm離心30”，然后放入PCR擴增儀(GeneAmp PCR System 2400)中擴增。PCR反應(yīng)條件為94℃ 1分鐘，94℃ 1分鐘，55℃ 1分鐘，72℃ 1分，5個循環(huán)。
第二步以第一步的PCR產(chǎn)物為模板進行擴增。即在PCR擴增管中，依次加入H2O 40μl，10×PCR Buffer 5μl，20pmole/μl通用引物R1、F1各1μl(圖6)，1/10的第一步PCR產(chǎn)物1μl，10mmol/L 4 dNTP 1μl，2U/μl的Taq DNA聚合酶1μl，混勻，1000rpm離心30”，然后放入PCR擴增儀中擴增。PCR反應(yīng)條件為94℃ 3分后，94℃ 1分鐘，55℃ 1分鐘，72℃ 1分，30個循環(huán)后再72℃延伸5分。
對于TpN17的分六步合成(圖7)1)先用TpN17引物F5，R6以上述第一步方法擴增。2)以后均以上一次擴增產(chǎn)物為模板，分別以F4和R7，F(xiàn)3和R8，F(xiàn)2和R9，F(xiàn)1和R9，以及通用引物F1和R1為引物，按上述第二步方法擴增。
PCR產(chǎn)物的純化用上海華舜生物工程有限公司生產(chǎn)的“小量PCR產(chǎn)物純化”試劑盒進行純化，即于PCR產(chǎn)物中加入PB 0.25ml，全量移入吸附柱，然后按說明書方法進行清洗和洗脫，然后電泳鑒定。
1.3表達質(zhì)粒的構(gòu)建1.3.1 PCR產(chǎn)物及表達載體pBVIL1雙酶切取以上純化的PCR產(chǎn)物及pBVIL1表達載體各30ul分別放于Eeppendorf離心管中，各加入10×buffer(H)4ul、XbaI(10u/ul)和XhoI(12u/ul)各1ul，加滅菌蒸餾水至40ul，置37℃水浴酶切過夜。
酶切產(chǎn)物的瓊脂糖凝膠電泳純化和回收PCR產(chǎn)物及載體pBVIL1經(jīng)雙酶切后，用1.2％瓊脂糖凝膠進行純化，具體方法按《分子克隆》(科學(xué)出版社，第二版)的方法進行。純化基因再用上海華舜生物工程有限公司生產(chǎn)的小量膠回收試劑盒回收即在紫外燈下分別切下含質(zhì)粒和目的基因的瓊脂糖，放于Eeppendorf離心管中，各加入S1液，置55℃水浴10分鐘使膠溶解，加入等量異丙醇，混勻，55℃溫浴1分鐘，然后分別移入吸附柱后，按試劑盒說明書進行純化。
1.3.2連接于滅菌Eeppendorf離心管中加入上述酶切后的載體及目的基因各1ul、10×T4 DNA Ligase buffer 1ul、T4 DNA Ligase(12u/ul)1ul，加滅菌蒸餾水至10ul，置16℃過夜。
1.3.3轉(zhuǎn)化在超凈工作臺中，用無菌吸頭取100μl感受態(tài)細胞(感受態(tài)細胞按《分子克隆》(科學(xué)出版社，第二版)的方法進行)懸液于Eppendorfl中，加入上述連接物5μl，輕輕旋轉(zhuǎn)混勻，冰浴30分。立即轉(zhuǎn)移到42℃水浴中放置2分鐘，每管加入0.5ml LB培養(yǎng)基(不加抗生素)，30℃水浴搖床培養(yǎng)60分鐘后，各取0.2ml分別涂于LB瓊脂培養(yǎng)基平皿上(含抗生素)，室溫晾干后，置37℃恒溫箱倒置培養(yǎng)過夜。挑選數(shù)個菌落，分別接種于LB中(5ml/管)，培養(yǎng)過夜，次日各取0.1ml轉(zhuǎn)移到LB中(2ml/管)，32℃培養(yǎng)3小時，42℃水浴搖床中誘導(dǎo)培養(yǎng)4h，收菌，用SDS-PAGE鑒定，選擇目的基因獲得高表達菌株，作進一步鑒定。
1.3.4質(zhì)粒提取及鑒定取上述SDS-PAGE鑒定證明目的基因獲得高表達的菌株，按《分子克隆》(科學(xué)出版社，第二版)方法提取質(zhì)粒。以質(zhì)粒為模板，用各基因的F1引物和通用引R2進行PCR擴增(方法同上述第二步)，然后用瓊脂糖凝膠電泳進行鑒定。
2.表位抗原及多表位嵌合抗原的表達與純化2.1表達菌株的培養(yǎng)取-70℃保存的表達菌株20ul接種于LB培養(yǎng)基中(100ml LB/500ml三角瓶)，30℃空氣搖床培養(yǎng)過夜，次日按5％的比例轉(zhuǎn)種于LB培養(yǎng)基(同上)，30℃空氣搖床培養(yǎng)約3小時，當(dāng)OD600值達到0.7時，立即將培養(yǎng)瓶轉(zhuǎn)到42℃水浴搖床中，誘導(dǎo)培養(yǎng)4小時。將菌液合并，6000rpm離心20分鐘，棄上清，收集沉淀部分。
2.2提取包涵體將沉淀稱濕重，用10倍體積的20mmol/L pH8.0TE緩沖液將沉淀懸起，加入溶菌酶(1mg/ml懸液)，在室溫下磁力攪拌10分鐘。在冰浴中超聲波破碎菌，每次超30秒鐘，間隔30秒鐘，共超10次。8℃，12000rpm，離心20分鐘，棄上清，沉淀用1mol/L NaCl(用TE配制)洗一次，再用TE洗2次，收集沉淀。沉淀用8M脲(用PH8.0TE配制)溶解，加1％β-巰基乙醇。再于20℃，12000rpm，離心10分鐘，去沉淀取上清。
2.3純化將上述溶解的包涵體溶液過Q-Sepharose FF陰離子交換柱，用平衡液(pH8.0，20mmol/L TE含6mol/L脲，0.1％β-巰基乙醇)洗，收集未結(jié)合部分，再過S-Sepharose FF陽離子交換柱，用平衡液清洗后，用不同濃度的NaCl(用平衡液配制)洗脫，收集各洗脫峰，經(jīng)SDS-PAGE鑒定，收集0.1mol/L NaCl洗脫峰。再過Sephardex G-50凝膠過濾柱，收集第一洗脫峰。各種純化重組表位抗原及多表位嵌合抗原均用SDS-PAGE鑒定(
圖10)。
3.梅毒表位抗原活性鑒定將純化的梅毒表位抗原及多表位融合抗原，用pH9.5的碳酸鹽緩沖液稀釋到2.0ug/ml，包被ELISA測定板，經(jīng)封閉后，對中國紅十字會北京血站提供的122份梅毒陽性血清，進行了測定。并和日本TPHA試劑盒以及用進口的梅毒抗原(重組TpN17，TpN15，pN47三種抗原組合)組裝的試劑盒進行比較測定，結(jié)果如表1所示。
表1.表位抗原、多表位嵌合抗原對122份梅毒陽性血清測定結(jié)果試劑盒(抗原名稱)陽性份數(shù) 陰性份數(shù)15 70 5217 91 3142 88 3447 64 58融合 94 28日本(TPHA) 91 31WK(進口抗原) 92 30
權(quán)利要求
1.重組梅毒螺旋體表位抗原，其特征在于其氨基酸序列為ARRGEKEAVYDYQHKEGRFKSQDADYHRV或SVLSKQETEDSRGRKKWEYETDPSV。
2.梅毒螺旋體多表位嵌合抗原，其特征在于其氨基酸序列包含權(quán)利要求1所述表位抗原。
3.權(quán)利要求2所述的梅毒螺旋體多表位嵌合抗原，其特征在于其氨基酸序列為ARRGEKEAVYDYQHKEGRFKSQDADYHRVSGGGSSGGGSVLSKQETEDSRGRKKWEYETDPSGGGSSGGGSASGAKEEAEKKAAEQRALLSGGGSSGGGSCVSCTTVCPHAGKAKAEKVECALKGGIFRGTLPAADCPGIDTTVTFNADGTAQKVELALEKKSAPSPLTYRGTWMVREDGIVELSLVSSEQSKAPHEKELYELIDSNSVRYMGAPGAGKPSKEMAPFYVLKKTKK。
全文摘要
本發(fā)明涉及單片段重組梅毒螺旋體表位抗原,其氨基酸序列為ARRGEKEAVYD YQHKEGRFKSQDADYHRV或SVLSKQETEDSRGRKKWEYETDPSV。本發(fā)明還涉及包含上述表位抗原的多表位嵌合抗原。本發(fā)明的表位抗原活性高,多表位嵌合抗原特異性高、生產(chǎn)成本低。
文檔編號C12P21/02GK1370782SQ0110442
公開日2002年9月25日 申請日期2001年2月26日 優(yōu)先權(quán)日2001年2月26日
發(fā)明者凌世淦, 張賀秋, 宋曉國, 馬賢凱 申請人:中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)研究所