專利名稱：一種羊血紅素肽及制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于功能食品和食品添加劑領(lǐng)域，具體涉及一種羊血紅素肽及其制備方法。
背景技術(shù)：
動物血液蛋白質(zhì)組成平衡，含有人體所需的8種必需氨基酸，為優(yōu)質(zhì)蛋白源，具有 較高的生物效價，同時含有豐富的有機鐵。但是目前動物血液，特別是羊血大部分被以污水 的形式排放或丟棄，導(dǎo)致大量寶貴營養(yǎng)資源流失，還給環(huán)境造成了嚴重污染。
血紅素鐵是高等動物血液、肌肉中的紅色色素，它的基本結(jié)構(gòu)成分是由吡咯組成 的卟吩(Porphin)，帶上側(cè)鏈后形成卟啉(Porphyrin)，再和一分子亞鐵構(gòu)成鐵卟啉化合物 即為血紅素鐵。在血紅蛋白及肌紅蛋白中，血紅素鐵約占3.8%，全血中血紅素鐵含量為 0. 5%左右。血紅素鐵是動物血液深加工的一個重要產(chǎn)品之一。血紅素的生產(chǎn)方法主要有 醋酸鈉法(周淡宜等.藥物生物技術(shù)，2002，9(2) :103-104 ;)、蒸餾法和羧甲基纖維素法。
專利申請《復(fù)合酶法水解豬血生產(chǎn)血肽素》(申請?zhí)枮?00910058656. 8)和《脫血 紅素豬血血紅蛋白酶解物及血紅素肽的制備方法》(申請?zhí)枮?00710031826.4)公開了有 關(guān)豬血血肽素或血紅素肽及其制備方法，但是到目前為止，還沒有發(fā)現(xiàn)有關(guān)羊血紅素肽的 報道，主要是由于羊血帶有膻味，難以作為食品添加劑應(yīng)用。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種無膻味的羊血紅素肽。本發(fā)明羊血紅素肽無不良風(fēng)味，
可直接添加于食品；本發(fā)明血紅素回收率高，血紅素含量高。 本發(fā)明另一 目的是提供上述羊血紅素肽的制備方法。 實現(xiàn)本發(fā)明的技術(shù)方案如下 本發(fā)明一種羊血紅素肽，按照如下方法制備 (1)預(yù)處理按照O. 3 0. 5%的重量百分比向羊血中加入檸檬酸三鈉，攪拌均勻， 然后在4000 6000g離心6 10min，分離為兩層溶液，上層為羊血漿蛋白溶液，下層為羊 血紅蛋白溶液，收集下層的羊血紅蛋白溶液； (2)將所得羊血紅蛋白溶液置于密閉容器中，然后用真空泵抽氣，當(dāng)真空度達到 0. 07 0. 09兆帕?xí)r，再加熱到60 7(TC抽氣3 5分鐘，得到無膻味的羊血紅蛋白溶液；
(3)用水將步驟(2)所得的羊血紅蛋白溶液稀釋至濃度為15 20X，調(diào)節(jié)其pH為 6. 5 7. 5，按照復(fù)合蛋白酶與血紅蛋白之間質(zhì)量比為1 : 50 100的比例向羊血紅蛋白 溶液中加入復(fù)合蛋白酶，然后在40 45°C、pH為6. 5 7. 5條件下進行水解反應(yīng)4 7h， 再在85 90。C下保溫2 4min滅酶，接著冷卻至20°C ，在5000 6000g離心5 10min， 收集沉淀，得沉淀物； (4)用1 2倍重量的蒸餾水洗滌步驟(3)所得的沉淀物，再在4000g 5000g離 心5min 10min，取沉淀物；按上述操作重復(fù)洗滌沉淀物2 3次；冷凍干燥，得羊血紅素肽。 上述羊血紅素肽步驟(3)中所述的復(fù)合蛋白酶由木瓜蛋白酶和中性蛋白酶組成， 它們之間的酶活比例為1:1。 上述羊血紅素肽步驟(1)中所述的羊血可以為新鮮羊血。 上述羊血紅素肽步驟(3)中所述的pH值用1摩爾濃度的鹽酸或氫氧化鈉溶液調(diào) 節(jié)。 所述的木瓜蛋白酶和中性蛋白酶皆可于市場購買。
上述羊血紅素肽的制備方法，包括如下步驟 (1)預(yù)處理按照O. 3 0. 5%的重量百分比向羊血中加入檸檬酸三鈉，攪拌均勻， 然后在4000 6000g離心6 10min，分離為兩層溶液，上層為羊血漿蛋白溶液，下層為羊 血紅蛋白溶液，收集下層的羊血紅蛋白溶液； (2)將所得羊血紅蛋白溶液置于密閉容器中，然后用真空泵抽氣，當(dāng)真空度達到 0. 07 0. 09兆帕?xí)r，再加熱到60 7(TC抽氣3 5分鐘，得到無膻味的羊血紅蛋白溶液；
(3)用水將步驟(2)所得的羊血紅蛋白溶液稀釋至濃度為15 20X，調(diào)節(jié)pH為 6. 5 7. 5，按照復(fù)合蛋白酶與血紅蛋白之間質(zhì)量比為1 : 50 100的比例向羊血紅蛋白 溶液中加入復(fù)合蛋白酶，然后在40 45°C、 pH6. 5 7. 5條件下進行水解反應(yīng)4 7h，再 在85 90。C下保溫2 4min滅酶，接著冷卻至20°C ，在5000 6000g離心5 10min，收 集沉淀，得沉淀物； (4)用1 2倍重量的蒸餾水洗滌步驟(3)所得的沉淀物，再在4000g 5000g離 心5min 10min，取沉淀物；按上述操作重復(fù)洗滌沉淀物2 3次；冷凍干燥，得羊血紅素 肽。 上述制備方法步驟(3)中所述的復(fù)合蛋白酶由木瓜蛋白酶和中性蛋白酶組成，它 們之間的酶活比例為1:1。 上述制備方法步驟(1)中所述的羊血可以為新鮮羊血。 上述制備方法步驟(3)中所述的pH值用1摩爾濃度的鹽酸或氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)。 所述的木瓜蛋白酶和中性蛋白酶皆可于市場上購買。 本發(fā)明羊血紅素肽可作為功能食品或食品添加劑添加于食品中。 本發(fā)明具有的優(yōu)點(1)、本發(fā)明羊血紅素?zé)o膻味，采用真空抽氣法，能脫除其中
95%的膻味，使其風(fēng)味能被消費者所接受。(2)、本發(fā)明采用食品級蛋白酶(木瓜蛋白酶和
中性蛋白酶)經(jīng)在溫和條件下酶解制備血羊紅素肽，其安全性高，無副作用。(3)、本發(fā)明羊
紅素肽，吸收率高，食用后無不良反應(yīng)。(4)本發(fā)明血紅素回收率高，可達到95%以上，血紅
素含量高，可達到28 32%。
(4)、本發(fā)明制備方法簡便易行，成本低。
具體實施例方式
實施例1羊血紅素肽的制備
按照如下方法進行 (1)、向500g羊血液中加入濃度為20%的檸檬酸三鈉溶液10g，攪拌均勻，然后在 5000g離心6min，分離得到兩層溶液，上層為羊血漿蛋白溶液，下層為羊血紅蛋白溶液，收 集羊血紅蛋白溶液(325g)。
(2)、將所得血紅蛋白溶液置于密封容器中，然后用真空泵抽氣，當(dāng)真空度達到 0. 085兆帕?xí)r，再加熱到65t:，抽氣3分鐘，得到無膻味的羊血紅蛋白溶液。
(3)、用水將步驟(2)所得羊血紅蛋白溶液稀釋至濃度為15X，調(diào)節(jié)pH為6.8，加 入復(fù)合蛋白酶(木瓜蛋白酶(廣西南寧杰沃利生物制品有限公司生產(chǎn))與中性蛋白酶(北 京東華強盛生物技術(shù)有限公司生產(chǎn))按酶活l : 1的比例)0.8g，在42t:、pH為6.8條件下 進行水解反應(yīng)5h，然后在9(TC下保溫2分鐘，冷卻到2(TC，在5500g離心8min，收集沉淀， 得到沉淀物15g ; (4)、用15g蒸餾水洗滌步驟(3)所得沉淀物，在4500g離心9分鐘，取沉淀物，重 復(fù)上述洗滌沉淀物操作3次，再將所得沉淀物冷凍干燥(FD-1PF，北京德天佑科技發(fā)展有限 公司)12小時，得羊血紅素肽7g。 采用硫氰酸鉀比色法測定血紅素肽中鐵的含量，結(jié)果血紅素肽中鐵的含量為 7. 2%。 實施例2羊血紅素肽的制備 (1)、向1000g羊血液中加入濃度為20X的檸檬酸三鈉溶液18g，攪拌均勻，然后在 5000g離心(TGL-16A離心機，長沙平凡儀器儀表有限公司)7min，分離得到兩層溶液，下層 為羊血紅蛋白溶液(660g)，上層為羊血漿蛋白溶液，收集下層的羊血紅蛋白溶液(660g)。
(2)、將所得羊血紅蛋白溶液置于密閉容器中，然后用真空泵抽氣，當(dāng)真空度達到 0. 087兆帕?xí)r，再加熱到64t:，抽氣4分鐘，得到無膻味的羊血紅蛋白溶液。
(3)、用水將步驟(2)所得羊血紅蛋白溶液稀釋至濃度為17X，調(diào)節(jié)pH為7.0，加 入復(fù)合蛋白酶(木瓜蛋白酶與中性蛋白酶按酶活1 : 1的比例，來源同實施例1)1.3g，在 43°C 、 pH7. 0條件下進行水解反應(yīng)5. 5h，然后在85。C下保溫3分鐘，冷卻到20°C ，在6000g 離心8min，收集沉淀，得到沉淀物31g。 (4)、用40g蒸餾水洗滌步驟(3)所得的沉淀物，然后在5000g離心8分鐘，取沉淀 物；重復(fù)上述洗滌沉淀物操作2次，最后將沉淀物冷凍干燥(FD-1PF，北京德天佑科技發(fā)展 有限公司)15小時，得血紅素肽15g。 采用硫氰酸鉀比色法測定血紅素肽中鐵的含量，結(jié)果血紅素肽中鐵的含量為 7. 1%。 實施例3羊血紅素肽的制備
按照如下步驟進行 (1)、向2000g羊血液中加入濃度為20 %的檸檬酸三鈉溶液37g，攪拌均勻，然后在 5000g離心(TGL-16A離心機，長沙平凡儀器儀表有限公司)6min，分離得到兩層溶液，下層 為羊血紅蛋白溶液(1340g)，上層為羊血漿蛋白溶液(660g)，收集下層的羊血紅蛋白溶液。
(2)、將羊血紅蛋白溶液置于密閉容器中，然后用真空泵抽氣，當(dāng)真空度達到0. 084 兆帕?xí)r，再加熱到65t:，抽氣5分鐘，得到無膻味的羊血紅蛋白溶液。 (3)、用水將步驟(2)所得的羊血紅蛋白溶液稀釋至濃度為18%，調(diào)節(jié)pH為6. 9， 加入復(fù)合蛋白酶(木瓜蛋白酶與中性蛋白酶按酶活l : 1的比例)3.0g，在43t:、pH為6.9 條件下進行水解反應(yīng)6h，然后在9(TC保溫3分鐘，冷卻到20°C ，在6000g離心6min，收集沉 淀，得到沉淀物60g; (4)、用80g蒸餾水洗滌步驟(3)所得的沉淀物，在5000g離心8分鐘，取沉淀物；重復(fù)上述洗滌沉淀物操作2次，將沉淀物冷凍干燥(FD-1PF，北京德天佑科技發(fā)展有限公 司)10小時，得血紅素肽31g。 采用硫氰酸鉀比色法測定血紅素肽中鐵的含量，結(jié)果血紅素肽中鐵的含量為 7. 3%。
權(quán)利要求
一種羊血紅素肽，其特征在于按照如下方法制備(1)按照0.3～0.5％的重量百分比向羊血中加入檸檬酸三鈉，攪拌均勻，然后在4000～6000g離心6～10min，分離為兩層溶液，上層為羊血漿蛋白溶液，下層為羊血紅蛋白溶液，收集下層的羊血紅蛋白溶液；(2)將所得羊血紅蛋白溶液置于密閉容器中，然后用真空泵抽氣，當(dāng)真空度達到0.07～0.09兆帕?xí)r，再加熱到60～70℃抽氣3～5分鐘，得到無膻味的羊血紅蛋白溶液；(3)用水將步驟(2)所得的羊血紅蛋白溶液的濃度調(diào)節(jié)為15～20％，調(diào)節(jié)其pH為6.5～7.5，按照復(fù)合蛋白酶與血紅蛋白之間質(zhì)量比為1∶50～100的比例向羊血紅蛋白溶液中加入復(fù)合蛋白酶，然后在40～45℃、pH為6.5～7.5條件下進行水解反應(yīng)4～7h，再在85～90℃下保溫2～4min滅酶，接著冷卻至20℃，在5000～6000g離心5～10min，收集沉淀，得沉淀物；(4)用1～2倍重量的蒸餾水洗滌步驟(3)所得的沉淀物，再在4000g～5000g離心5min～10min，取沉淀物；按上述操作重復(fù)洗滌沉淀物2～3次；冷凍干燥，得羊血紅素肽。
2. 按照權(quán)利要求l所述的羊血紅素肽，其特征在于其步驟(3)中所述的復(fù)合蛋白酶由 木瓜蛋白酶和中性蛋白酶組成，它們之間的酶活比例為1 : 1。
3. 按照權(quán)利要求1或2所述的羊血紅素肽，其特征在于其步驟(1)中所述的羊血為新 鮮羊血。
4. 按照權(quán)利要求3所述的羊血紅素肽，其特征在于其步驟(3)中所述的pH值用l摩爾 濃度的鹽酸或氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)。
5. 權(quán)利要求1所述的羊血紅素肽的制備方法，包括如下步驟(1) 按照0. 3 0. 5%的重量百分比向羊血中加入檸檬酸三鈉，攪拌均勻，然后在 4000 6000g離心6 10min，分離為兩層溶液，上層為羊血漿蛋白溶液，下層為羊血紅蛋 白溶液，收集下層的羊血紅蛋白溶液；(2) 將所得羊血紅蛋白溶液置于密閉容器中，然后用真空泵抽氣，當(dāng)真空度達到 0. 07 0. 09兆帕?xí)r，再加熱到60 7(TC抽氣3 5分鐘，得到無膻味的羊血紅蛋白溶液；(3) 用水將步驟(2)所得的羊血紅蛋白溶液稀釋至濃度為15 20X，調(diào)節(jié)pH為6. 5 7. 5，按照復(fù)合蛋白酶與血紅蛋白之間質(zhì)量比為1 : 50 100的比例向羊血紅蛋白溶液中 加入復(fù)合蛋白酶，然后在40 45°C 、pH 6. 5 7. 5條件下進行水解反應(yīng)4 7h，再在85 90。C下保溫2 4min滅酶，接著冷卻至20°C ，在5000 6000g離心5 10min，收集沉淀， 得沉淀物；(4) 用1 2倍重量的蒸餾水洗滌步驟(3)所得的沉淀物，再在4000g 5000g離心 5min 10min，取沉淀物；按上述操作重復(fù)洗滌沉淀物2 3次；冷凍干燥，得羊血紅素肽。
6. 按照權(quán)利要求5所述的制備方法，其特征在于其步驟(3)中所述的復(fù)合蛋白酶由木 瓜蛋白酶和中性蛋白酶組成，它們之間的酶活比例為1 : 1。
7. 按照權(quán)利要求5或6所述的制備方法，其特征在于其步驟(1)中所述的羊血為新鮮 羊血。
8. 按照權(quán)利要求7所述的制備方法，其特征在于其步驟(3)中所述的pH值用l摩爾濃 度的鹽酸或氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種羊血紅素肽及其制備方法，屬于食品添加劑領(lǐng)域。主要是向羊血中加入檸檬酸三鈉，然后離心，收集分離所得的羊血紅蛋白溶液；再置于密閉容器中抽真空，去掉膻味；然后加入由木瓜蛋白酶和中性蛋白酶組成的復(fù)合蛋白酶進行酶解，離心，收集沉淀；再用蒸餾水洗滌沉淀物，離心取沉淀物，最后冷凍干燥即得羊血紅素肽。本發(fā)明羊血紅素肽無膻味，且安全性高，無副作用；本發(fā)明血紅素回收率高，可達到95％以上，且血紅素含量高，可達到28～32％；本發(fā)明制備方法簡便易行，成本低。
文檔編號A23J3/12GK101755997SQ20101000093
公開日2010年6月30日 申請日期2010年1月21日 優(yōu)先權(quán)日2010年1月21日
發(fā)明者伏圣興, 楊蘇揚, 蘇東明, 蘇巖, 薛可 申請人:遼源市麒鳴生物技術(shù)綜合開發(fā)有限公司