專利名稱：山梨木糖假絲酵母及其在制備(s)-4-氯-3-羥基丁酸乙酯中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種新的菌株-山梨木糖假絲酵母ZJB-12164 (Candida
sorboxylosa ZJB-12164),及其在生物催化4_氯乙酰乙酸乙酯合成(S)-4-氯-3-輕基丁酸乙酯中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
(S) -4-氯-3-輕基丁酸乙酯(Ethyl (S) -4-chloro-3-hydroxybutanoate,(S)-CHBE)是一種無色透明油狀液體，分子式為C6H11ClO3，分子量166.6，相對(duì)密度1.19g/mL,沸點(diǎn)93-95°C /5mmHg, (S)-CHBE結(jié)構(gòu)如式(I )所示。(S)-CHBE作為重要的手性藥物中間體，可用于合成他汀類藥物一輕甲基戊二酰CoA(HMG-CoA)還原酶抑制劑，其制劑立普妥(阿托伐他汀鈣)是美國第一個(gè)年銷量超過一百億美元的藥物，目前也是全球最高銷量的藥物。另外，(S)-CHBE還可以轉(zhuǎn)化生成1，4_ 二氫吡啶類β-阻滯劑。因此，制備光學(xué)活性(S) -CHBE備受研究者的關(guān)注。
權(quán)利要求
1.一種山梨木糖假絲酵母ZJB_12164(Candida sorboxylosa ZJB-12164),保藏于中國典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏地址:中國，武漢，武漢大學(xué)，郵編430072，保藏編號(hào)CCTCC No:M2012420，保藏日期2012年10月22日。
2.—種權(quán)利要求1所述山梨木糖假絲酵母ZJB-12164在生物催化制備(S)_4_氯-3-羥基丁酸乙酯中的應(yīng)用，其特征在于所述的應(yīng)用為:以山梨木糖假絲酵母ZJB-12164發(fā)酵培養(yǎng)獲得的含酶濕菌體為催化劑，以4-氯乙酰乙酸乙酯為底物，于ρΗ4.(T9.0的水或緩沖液構(gòu)成的轉(zhuǎn)化體系a中，在20 45°C下進(jìn)行轉(zhuǎn)化反應(yīng)，反應(yīng)完全后，將轉(zhuǎn)化液后處理，獲得所述(S)-4-氯-3-羥基丁酸乙酯。
3.如權(quán)利要求2所述山梨木糖假絲酵母ZJB-12164在生物催化制備(S)-4-氯-3-羥基丁酸乙酯中的應(yīng)用，其特征在于所述轉(zhuǎn)化體系a中底物初始濃度為l(T2000mmOl/L。
4.如權(quán)利要求2所述山梨木糖假絲酵母ZJB-12164在生物催化制備(S)-4-氯-3-羥基丁酸乙酯中的應(yīng)用，其特征在于轉(zhuǎn)化體系a中含酶濕菌體質(zhì)量計(jì)為l(T200g/L，所述含酶濕菌體含水質(zhì)量為7(Γ90%。
5.如權(quán)利要求2所述山梨木糖假絲酵母ZJB-12164在生物催化制備(S)-4-氯-3-羥基丁酸乙酯中的應(yīng)用，其特征在于所述轉(zhuǎn)化體系a中還包括輔助底物，由輔助底物、底物、催化劑與ρΗ4.(T9.0的水或緩沖液構(gòu)成轉(zhuǎn)化體系b，所述輔助底物為下列之一:甲醇、乙醇、正丙醇、異丙醇、葡萄糖、果糖、蔗糖、麥芽糖、乳糖或甘油。
6.如權(quán)利要求5所述山梨木糖假絲酵母ZJB-12164在生物催化制備(S)-4-氯-3-羥基丁酸乙酯中的應(yīng)用，其特征在于所述應(yīng)用為:以山梨木糖假絲酵母ZJB-12164發(fā)酵培養(yǎng)獲得的含酶濕菌體為催化劑，以4-氯乙酰乙酸乙酯為底物，加入輔助底物，于ρΗ4.(T9.0的水或緩沖液構(gòu)成的轉(zhuǎn)化體系b中，在20 45°C下進(jìn)行轉(zhuǎn)化反應(yīng)，反應(yīng)完全后，將轉(zhuǎn)化液后處理，獲得所述(S)-4-氯-3-羥基丁酸乙酯；所述轉(zhuǎn)化體系b中底物初始濃度為10"2000mmol/L,含酶濕菌體添加量以濕菌體質(zhì)量計(jì)為l(T200g/L，所述含酶濕菌體含水質(zhì)量為70 90%，輔助底物初始濃度為l(T2000mmOl/L，所述輔助底物為下列之一:甲醇、乙醇、正丙醇、異丙醇、葡萄糖、果糖、蔗糖、麥芽糖、乳糖或甘油。
7.如權(quán)利要求2或5所述山梨木糖假絲酵母ZJB-12164在生物催化制備(S)-4-氯-3-羥基丁酸乙酯中的應(yīng)用，其特征在于所述轉(zhuǎn)化反應(yīng)是在2(T45°C下反應(yīng)0.1 36h。
8.如權(quán)利要求2或5所述山梨木糖假絲酵母ZJB-12164在生物催化制備(S)-4-氯-3-羥基丁酸乙酯中的應(yīng)用，其特征在于所述轉(zhuǎn)化液后處理的方法為:反應(yīng)結(jié)束后，將轉(zhuǎn)化液離心，去除菌體細(xì)胞，取上清液用等體積乙酸乙酯萃取，取有機(jī)層用無水Na2SO4脫水、過濾，濾液即為含(S)-4-氯-3-羥基丁酸乙酯的粗品，將粗品分離純化，即得(S)-4-氯-3-羥基丁酸乙酯。
9.如權(quán)利要求2或5所述山梨木糖假絲酵母ZJB-12164在生物催化制備(S) -4-氯-3-羥基丁酸乙酯中的應(yīng)用，其特征在于所述轉(zhuǎn)化體系a或轉(zhuǎn)化體系b均是由蒸餾水、自來水、磷酸鹽緩沖液或檸檬酸鹽緩沖液形成的ρΗ4.(T9.0單相體系，或者水與有機(jī)介質(zhì)形成的PH4.(T9.0雙相體系；所述有機(jī)介質(zhì)為正己烷、正辛烷、異辛烷、正庚烷、二甲苯、環(huán)己烷、乙酸乙酯或乙酸丁酯。
10.如權(quán)利要求2或5所述山梨木糖假絲酵母ZJB-12164在生物催化制備(S) -4-氯-3-羥基丁酸乙酯中的應(yīng)用，其特征在于所述含酶濕菌體按如下方法制備: (1)斜面培養(yǎng):將山梨木糖假絲酵母ZJB-12164菌株接種于斜面培養(yǎng)基，于20~37°C下培養(yǎng)12 48小時(shí),獲得斜面活化菌種；所述斜面培養(yǎng)基為豆芽汁瓊脂培養(yǎng)基,配置方法為:50~200g新鮮黃豆芽放入燒杯中，加入水，煮沸半個(gè)小時(shí)，紗布過濾得上清，再加入l(T50g葡萄糖，15^20g瓊脂，補(bǔ)加水至1L ； (2)種子培養(yǎng):將斜面活化菌種接種于種子培養(yǎng)基，在25 35°C、搖床轉(zhuǎn)數(shù)100~200r/min條件下培養(yǎng)12 36小時(shí)得到種子液；所述種子培養(yǎng)基配方為:葡萄糖5 50g/L，酵母膏5 40g/L，KH2PO4 0.5 5g/L，NaCl 0.5 5g/L，溶劑為水，初始 pH 為 5.0 8.0 ； (3)發(fā)酵培養(yǎng):將種子液按照體積比廣5%接入發(fā)酵培養(yǎng)基，在25 35°C、搖床轉(zhuǎn)數(shù)10(T200r/min條件下培養(yǎng)12 48小時(shí)，將培養(yǎng)液離心、洗滌，收集含酶濕菌體，冷藏備用；所述發(fā)酵培養(yǎng)基配方為:葡萄糖5 50g/L，酵母提取粉5 100g/L，KH2PO4 0.5 5g/L，NaCl0.5 5g/L，CuCl2 0.ΟΓΟ.lg/L，溶劑為水，初始 pH 為 5.0 8.0。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種山梨木糖假絲酵母及在生物催化制備(S)-4-氯-3-羥基丁酸乙酯中的應(yīng)用，所述山梨木糖假絲酵母ZJB-12164保藏于中國典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏地址中國，武漢，武漢大學(xué)，郵編430072，保藏編號(hào)CCTCC NoM2012420，保藏日期2012年10月22日；本發(fā)明提供了一種山梨木糖假絲酵母ZJB-12164新菌株及這種山梨木糖假絲酵母ZJB-12164菌株在生物轉(zhuǎn)化合成(S)-CHBE中的應(yīng)用，該合成反應(yīng)條件溫和，環(huán)境友好，流程簡(jiǎn)單，轉(zhuǎn)化率高，產(chǎn)物光學(xué)純度高(e.e.＞99%)。
文檔編號(hào)C12R1/72GK103074239SQ20121059451
公開日2013年5月1日 申請(qǐng)日期2012年12月31日 優(yōu)先權(quán)日2012年12月31日
發(fā)明者鄭裕國, 孫麗慧, 舒學(xué)香, 柳志強(qiáng), 沈寅初 申請(qǐng)人:浙江工業(yè)大學(xué)