枯草芽孢桿菌ansb0e1及其應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明提供一株用于降解玉米赤霉烯酮、α-玉米赤霉烯醇和β-玉米赤霉烯醇的保藏編號為CGMCC?No.8515的枯草芽孢桿菌ANSB0E1及其培養(yǎng)方法和應(yīng)用。本發(fā)明還提供了利用菌株ANSB0E1的發(fā)酵液降解玉米赤霉烯酮、α-玉米赤霉烯醇和β-玉米赤霉烯醇的方法，將發(fā)酵液與玉米赤霉烯酮反應(yīng)72小時，降解率可達(dá)88%以上；將發(fā)酵液與α-玉米赤霉烯醇反應(yīng)72小時，降解率可達(dá)83%以上；將發(fā)酵液與β-玉米赤霉烯醇反應(yīng)72小時，降解率可達(dá)80%以上。本發(fā)明的枯草芽孢桿菌降解活性高、特異性強(qiáng)、作用效果溫和，不會破壞飼料中的營養(yǎng)成分，適用于去除飼料中的玉米赤霉烯酮、α-玉米赤霉烯醇和β-玉米赤霉烯醇。
【專利說明】枯草芽孢桿菌ANSB0E1及其應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于微生物學(xué)領(lǐng)域，具體地說，涉及一株枯草芽孢桿菌(Bacillussubtilis) ANSB0E1 及其應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002]霉菌毒素(Mycotoxin)是霉菌生長過程中產(chǎn)生的次級代謝產(chǎn)物，具有高毒性、高誘變性及強(qiáng)致癌性，嚴(yán)重威脅著動物的生長發(fā)育和人類健康。目前對畜牧業(yè)和人類威脅最大的霉菌毒素主要有黃曲霉毒素(Aflatoxin, AFT)、玉米赤霉烯酮(Zearalenone, ZEN)、單端孢霉烯族毒素(Trichothecenes, TRT)、赭曲霉毒素(Ochratoxin A, 0ΤΑ)及煙曲霉毒素(Fumonisins)等。玉米赤霉烯酮又稱F-2毒素,是由鐮孢菌屬真菌產(chǎn)生的非類固醇類真菌毒素，可與體內(nèi)雌激素受體相結(jié)合，產(chǎn)生雌激素效應(yīng)。α-玉米赤霉烯醇和β-玉米赤霉烯醇是玉米赤霉烯酮的衍生物，也具有和玉米赤霉烯酮相同的雌激素作用，且毒性比玉米赤霉烯酮更強(qiáng)。在高溫低濕環(huán)境下，霉變的玉米、高粱、小麥等谷類作物易產(chǎn)生玉米赤霉烯酮，作為飼料原料的谷物被動物采食后，經(jīng)代謝可沉積于肉、蛋、奶等動物產(chǎn)品中，嚴(yán)重威脅著動物健康和食品安全。豬對玉米赤霉烯酮最為敏感，中毒的典型臨床癥狀為陰戶腫大、陰道和直腸脫垂以及乳腺增大，引起母豬的不孕、流產(chǎn)和假發(fā)情等繁殖障礙。此外，玉米赤霉烯酮還具有肝臟毒性、免疫毒性、細(xì)胞毒性和遺傳毒性，對腫瘤的發(fā)生也有一定影響。
[0003]霉菌毒素傳統(tǒng)的物理和化學(xué)去毒方法存在效果不穩(wěn)定、營養(yǎng)成分損失大、影響飼料適口性，且難以規(guī)模化生產(chǎn)等缺點(diǎn)而不能被廣泛應(yīng)用到實(shí)際生產(chǎn)中。微生物及生物酶解毒因具有解毒效率高、特異性強(qiáng)、對飼料和環(huán)境無污染等優(yōu)點(diǎn)，具有很好的應(yīng)用前景，備受關(guān)注。研究報道，許多真菌包括粉紅粘帚霉(61;[0013(1;[111]11'08611111)、米根霉(1?.0ryzae)、葡枝根霉(R.stolonifer)和小抱根霉(R.microsporus)、雅致枝霉(Thamnidiumelegans)、貝勒被毛霉(Mucorbainieri)、龜裂鏈霉菌(Streptomyces rimosus)和班尼小克銀漢霉(Cunninghamellabainieri)等能夠生物降解玉米赤霉烯酮。然而，關(guān)于細(xì)菌降解玉米赤霉烯酮的報道較少。
[0004]迄今為止，未見到關(guān)于枯草芽孢桿菌及其代謝物能夠同時降解玉米赤霉烯酮、α-玉米赤霉烯醇和β-玉米赤霉烯醇的相關(guān)報道。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明的目的是提供一株用于降解玉米赤霉烯酮、α -玉米赤霉烯醇和β -玉米赤霉烯醇的枯草芽孢桿菌。
[0006]本發(fā)明的另一目的是提供上述枯草芽孢桿菌的培養(yǎng)方法及其應(yīng)用。
[0007]本發(fā)明提供的用于降解玉米赤霉烯酮、α -玉米赤霉烯醇和β-玉米赤霉烯醇的枯草芽孢桿菌(Baci 1 lus subtilis) ANSB0E1,是發(fā)明人從魚腸道食糜中分離得到的，現(xiàn)已保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，地址北京市朝陽區(qū)北辰西路1號院3號，中國科學(xué)院微生物研究所，郵編100101，保藏編號CGMCC N0.8515，保藏日期2013年11月27日。
[0008]枯草芽孢桿菌ANSB0E1的形態(tài)和理化特征如表1所示。
[0009]表1.細(xì)胞形態(tài)和理化特征
【權(quán)利要求】
1.用于降解玉米赤霉烯酮、α-玉米赤霉烯醇和β-玉米赤霉烯醇的枯草芽孢桿菌(Bacillus subtil is) ANSBOEI，其保藏編號為 CGMCC N0.8515。
2.由權(quán)利要求1所述枯草芽孢桿菌ANSB0E1制備的復(fù)合微生物菌劑。
3.權(quán)利要求1所述枯草芽孢桿菌ANSB0E1的發(fā)酵培養(yǎng)方法，其特征在于，取活菌濃度為109CFU/mL的枯草芽孢桿菌ANSB0E1種子液l_4mL，接種于50_100mL培養(yǎng)基中進(jìn)行搖瓶發(fā)酵培養(yǎng)，所述培養(yǎng)基由如下組分組成:胰蛋白胨7-12g、酵母浸膏1.5-3g、葡萄糖2-5g、牛肉膏2-5g、氯化鈉3-6g、磷酸氫二鈉2.5-4g、七水硫酸鎂0.5-1.5g和蒸餾水800_1200mL，pH 值為 6.8-7.4。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的發(fā)酵培養(yǎng)方法，其特征在于，搖瓶發(fā)酵的條件為:25-45°C，發(fā)酵 18-32h, pH 值 6.8-7.4，轉(zhuǎn)速 150_225r/min。
5.由權(quán)利要求3或4所述方法獲得的枯草芽孢桿菌ANSB0E1發(fā)酵液。
6.權(quán)利要求1所述枯草芽孢桿菌ANSB0E1或權(quán)利要求5所述發(fā)酵液在降解玉米赤霉烯酮、α-玉米赤霉烯醇和/或β-玉米赤霉烯醇中的應(yīng)用。
7.一種降解玉米赤霉烯酮的方法，其特征在于，取權(quán)利要求5所述枯草芽孢桿菌ANSBOEI的發(fā)酵液700-900 μ L，加入5000ppb玉米赤霉烯酮溶液100-300 μ L，將反應(yīng)體系pH 值調(diào)至 6.0-8.0,于 20-45°C反應(yīng) 2_72h。
8.一種降解α-玉米赤霉烯醇的方法，其特征在于，取權(quán)利要求5所述枯草芽孢桿菌ANSBOEI的發(fā)酵液700-900 μ L，加入5000ppb α -玉米赤霉烯醇溶液100-300 μ L，將反應(yīng)體系 pH 值調(diào)至 6.0-8.0，于 20-45°C反應(yīng) 2_72h。
9.一種降解玉米赤霉烯醇的方法，其特征在于，取權(quán)利要求5所述枯草芽孢桿菌的ANSBOEI的發(fā)酵液700-900 μ L`，加入5000ppb β -玉米赤霉烯醇溶液100-300 μ L，將反應(yīng)體系 pH 值調(diào)至 6.5-8.5，于 20-45°C反應(yīng) 2_72h。
10.權(quán)利要求1所述枯草芽孢桿菌ANSB0E1或權(quán)利要求2所述復(fù)合微生物菌劑在飼料添加劑領(lǐng)域中的應(yīng)用。
【文檔編號】C12R1/125GK103695340SQ201310676784
【公開日】2014年4月2日 申請日期:2013年12月11日 優(yōu)先權(quán)日:2013年12月11日
【發(fā)明者】計成, 張建云, 雷元培, 馬秋剛, 趙麗紅 申請人:中國農(nóng)業(yè)大學(xué)