克倫特羅適配體與檢測(cè)克倫特羅的適配體電化學(xué)生物傳感器的制造方法
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明涉及一種克倫特羅適配體以及檢測(cè)克倫特羅的適配體電化學(xué)生物傳感器，以及該傳感器的制備方法與檢測(cè)方法。本發(fā)明所述的克倫特羅適配體為含有GGATATTGG序列、長(zhǎng)度為13-18個(gè)堿基的單鏈DNA探針，且3’端修飾了3’-NH2-(CH2)7-。該傳感器提高了檢測(cè)克倫特羅的靈敏性，最低可以檢測(cè)出1.0pg/mL的克倫特羅；大大降低了檢測(cè)克倫特羅的成本，操作簡(jiǎn)單方便，可實(shí)現(xiàn)對(duì)克倫特羅的快速檢測(cè)。
【專(zhuān)利說(shuō)明】克倫特羅適配體與檢測(cè)克倫特羅的適配體電化學(xué)生物傳感 器 【技術(shù)領(lǐng)域】
[〇〇〇1] 本發(fā)明屬于檢測(cè)【技術(shù)領(lǐng)域】，涉及一種克倫特羅適配體以及檢測(cè)克倫特羅的適配體 電化學(xué)生物傳感器，以及該傳感器的制備方法與檢測(cè)方法。 【背景技術(shù)】
[0002] 克倫特羅（(：161*1^61'〇1，0^)，化學(xué)命名為人-[(叔丁氨基）甲基]-4-氨基-3， 5_二氯苯甲醇鹽酸鹽，分子量為277. 19,分子式C12H18C12N20,是一種人工合成的化學(xué)物質(zhì)， 化學(xué)結(jié)構(gòu)式如下：
[0003]
【權(quán)利要求】
1. 一種克倫特羅適配體，其特征在于，所述適配體為含有GGATATTGG序列、長(zhǎng)度為 13-18個(gè)堿基的單鏈DNA探針，即XnGGATATTGGYm，其中，X和Y表示任意核酸堿基，η和m表 示整數(shù)。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的克倫特羅適配體，其特征在于：所述適配體的3'端進(jìn)行氨基 修飾。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的克倫特羅適配體，其特征在于：所述3'端氨基修飾基團(tuán) 為-NH2 _ (CH2) 7-。
4. 一種檢測(cè)克倫特羅的適配體電化學(xué)生物傳感器，其特征在于：所述的電化學(xué)生物傳 感器中含有如權(quán)利要求1至3之一所述的適配體。
5. 如權(quán)利要求4所述的適配體電化學(xué)生物傳感器的制備方法，其特征在于，包括以下 步驟： (1) 裸金電極表面的拋光及活化處理：將裸金電極用氧化鋁粉末打磨，用超純水超聲 清洗去除氧化鋁粉末，將清洗好的裸金電極浸入新鮮配制的熱的Piranha溶液于20-25°C 下活化10分鐘，得到活化的裸金電極； (2) 活化電極的適配體修飾：合成如權(quán)利要求1所述的適配體，配制100 μ mol/L的適 配體溶液，加入到NaCl溶液中配制成2 μ mol/L適配體組裝液；將步驟（1)所得的活化的裸 金電極浸入適配體組裝液中，4°C下組裝24小時(shí)，得到所述的適配體電化學(xué)生物傳感器。
6. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的適配體電化學(xué)生物傳感器可以用于克倫特羅的檢測(cè)。
7. -種基于如權(quán)利要求4所述的適配體電化學(xué)生物傳感器的檢測(cè)克倫特羅的方法，其 特征在于，包括以下步驟： (1)對(duì)克倫特羅標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行檢測(cè)，建立標(biāo)準(zhǔn)曲線： 將所述的適配體電化學(xué)生物傳感器作為工作電極，Ag/AgCl (飽和KC1)電極作為參比 電極，鉬絲電極作為對(duì)電極； 將所述的適配體電化學(xué)生物傳感器用超純水沖洗，去除未結(jié)合的適配體，然后置于濃 度為 5mmol/L 的 K3[Fe(CN)6]/K4[Fe(CN)6]為 1 :1 的含 0. lmol/L KC1 的電解液中，進(jìn)行交 流阻抗分析，初始電位為〇. 22V，頻率為0. 1-1. 0X105Hz，得到適配體電化學(xué)生物傳感器的 交流阻抗圖譜及其阻抗值RetO ; 將交流阻抗分析后的適配體電化學(xué)生物傳感器用超純水沖洗后浸入濃度1. 〇pg/mL的 克倫特羅水溶液中，室溫孵育15分鐘，反應(yīng)后用超純水沖洗去除非特異性吸附的克倫特 羅，然后置于濃度為5mmol/L的1( 3%_)6]/1(4%_)6]為1 :1的含0. lmol/L KC1的電 解液中，進(jìn)行交流阻抗分析，初始電位為〇. 22V，頻率為0. 1-1. 0X105Hz，得到濃度為1. Opg/ mL的克倫特羅標(biāo)準(zhǔn)液的交流阻抗圖譜及其阻抗值Retl ; 同理，將上述修飾電極依次放入濃度5. 0pg/mL、10. 0pg/mL、50. 0pg/mL、l. OX 102pg/ mL、5. 0 X 102pg/mL、1. 0 X 103pg/mL、5. 0 X 103pg/mL的克倫特羅標(biāo)準(zhǔn)液中，分別于室溫下 孵育反應(yīng)15分鐘，分別進(jìn)行交流阻抗分析，記錄其對(duì)應(yīng)的交流阻抗圖譜及阻抗值Retn(η =2, 3···8)，并計(jì)算各標(biāo)準(zhǔn)液相對(duì)初始的適配體電化學(xué)生物傳感器的阻抗變化值Λ Ret， Λ Ret為各標(biāo)準(zhǔn)液對(duì)應(yīng)的阻抗值Retn (η = 1，2, 3…8)減去適配體電化學(xué)生物傳感器對(duì)應(yīng) 的阻抗值RetO ; 以濃度為 1. 0pg/mL、5. 0pg/mL、10. 0pg/mL、50. 0pg/mL、1. 0 X 102pg/mL、5. 0 X 102pg/mL、 1. OX 103pg/mL、5. OX 103pg/mL的克倫特羅標(biāo)準(zhǔn)液濃度的對(duì)數(shù)為橫坐標(biāo)，以這8種標(biāo)準(zhǔn)液對(duì) 應(yīng)的阻抗變化值Λ Ret為縱坐標(biāo)作圖，建立標(biāo)準(zhǔn)曲線； (2)對(duì)含克倫特羅的樣品溶液進(jìn)行定量檢測(cè)： 根據(jù)GB/T 5009. 192-2003所述方法對(duì)樣品中的克倫特羅進(jìn)行提取純化；將得到的克 倫特羅干粉用超純水溶解后過(guò)〇. 45 μ Μ濾膜，然后進(jìn)行電化學(xué)檢測(cè)； 將交流阻抗分析后的適配體電化學(xué)生物傳感器用超純水沖洗后浸入從樣品溶液中提 取純化得到的克倫特羅水溶液中，室溫孵育15分鐘，反應(yīng)后用超純水沖洗，然后置于濃度 為 5mmol/L WK3[Fe(CN)6]/K4[Fe(CN)6]為 1 :1 的，含濃度 0· lmol/L KC1 的電解液中，進(jìn)行 交流阻抗分析，初始電位為0. 22V，頻率為0. 1-1. 0X105Hz，得到樣品中克倫特羅溶液檢測(cè) 的交流阻抗圖譜及其阻抗值Rets ; 通過(guò)步驟（1)建立的標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算出Rets-RetO對(duì)應(yīng)的克倫特羅濃度，即為樣品中克 倫特羅的濃度。
【文檔編號(hào)】C12N15/115GK104109677SQ201410369878
【公開(kāi)日】2014年10月22日 申請(qǐng)日期:2014年7月30日 優(yōu)先權(quán)日:2014年7月30日
【發(fā)明者】劉大嶺, 陳丹, 姚冬生, 謝春芳 申請(qǐng)人:暨南大學(xué)