淡紫擬青霉孢子的保存方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了淡紫擬青霉孢子的保存方法，它屬于生防菌保存領(lǐng)域。本發(fā)明主要解決現(xiàn)有淡紫擬青霉保存時間短、成本高、孢子死亡率高的技術(shù)問題。本發(fā)明淡紫擬青霉孢子的保存方法是將淡紫擬青霉孢子和粉狀多孔材料混合均勻，加水至含水量為20%~40%，密封在0℃~30℃條件下保存。將本發(fā)明方法淡紫擬青霉生防菌劑產(chǎn)品直接施放到土壤中使用即可，使用方法簡單、方便，能很均勻的施放到土壤中。本發(fā)明采用簡便的便于工業(yè)化使用方法提高產(chǎn)品的保質(zhì)期，并且采用常溫保存，冰點(diǎn)到30℃均可以，便于運(yùn)輸，能降低保存成本，常溫保存1年以上，孢子萌發(fā)率大于80%，便于產(chǎn)品的推廣使用。
【專利說明】淡紫擬青霉孢子的保存方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于生防菌保存領(lǐng)域；具體涉及淡紫擬青霉孢子的保存方法。

【背景技術(shù)】
[0002] 近年來我國的植物線蟲危害日益嚴(yán)重，植物線蟲病是植物四大病害之一，同時線 蟲病還還能引起枯萎病、根腐病等多種病害，給農(nóng)業(yè)生產(chǎn)造成嚴(yán)重?fù)p失。目前采取的方法普 遍采用輪作防病、抗病育種、化學(xué)防治等方法，由于潛在的環(huán)境問題，涉及人類和動物健康， 殺線蟲劑的使用受到很大的限制，同時防治的效果不是很好。由于淡紫擬青霉對于線蟲的 防治的效果較好，還不會環(huán)境造成傷害，因而植物線蟲的生物防治受到廣泛重視，因此開發(fā) 高效穩(wěn)定安全的生物殺線蟲劑已迫在眉睫。生物防治由于安全、環(huán)保越來越受到人們的重 視，植物寄生線蟲生防菌的研究和開發(fā)在這幾年來有很大的發(fā)展。
[0003] 淡紫擬青霉（hVaci/HAs)是控制植物病原線蟲的優(yōu)良生防菌，同 時對多種土傳尖孢鐮刀菌引起的枯萎病等病害也具有防治作用。淡紫擬青霉，在國外己進(jìn) 行登記和推廣使用，在國內(nèi)也己進(jìn)行中試和小面積推廣應(yīng)用。淡紫擬青霉產(chǎn)品中的孢子數(shù) 量是生防真菌的生物學(xué)指標(biāo)之一，淡紫擬青霉通常以孢子形態(tài)存在于基質(zhì)中，當(dāng)溫度、濕 度、營養(yǎng)等條件適宜時萌發(fā)形成菌絲侵入寄主來實(shí)現(xiàn)其抗病作用。起作用的方式主要是通 過淡紫擬青霉活孢子的作用而實(shí)現(xiàn)的，因而產(chǎn)品中的淡紫擬青霉的孢子的成活率對產(chǎn)品使 用效果尤為重要。衡量產(chǎn)品的質(zhì)量主要產(chǎn)品中的活孢子數(shù)。為開發(fā)高效的淡紫擬青霉制劑， 國內(nèi)外學(xué)者選擇農(nóng)副產(chǎn)品作為營養(yǎng)基質(zhì)，通過發(fā)酵提高擬青霉的孢子產(chǎn)量。雖然國內(nèi)外科 研人員已將淡紫擬青霉室內(nèi)培養(yǎng)或中試生產(chǎn)制成相應(yīng)菌劑。但是對于產(chǎn)品中孢子保存方面 的研究較少。由于自身的生物學(xué)特性，淡紫擬青霉的孢子的抗逆性較差，容易死亡。因而影 響到產(chǎn)品的使用效果。
[0004] 目前淡紫擬青霉生產(chǎn)工藝有兩種，液體深層發(fā)酵、固體發(fā)酵生產(chǎn)。通過微生物的發(fā) 酵技術(shù)生產(chǎn)出淡紫擬青霉的孢子，然后將孢子制成生防菌劑產(chǎn)品。
[0005] 采用凍干將含有孢子粉的菌種進(jìn)行保存，成本很高，是我們技術(shù)的十倍以上，不便 于農(nóng)業(yè)生產(chǎn)上應(yīng)用，一般為實(shí)驗室保存菌種中使用。
[0006] 還有一種存放方法是將含有孢子的物料利用海藻酸鈣進(jìn)行包埋，產(chǎn)品的成本很 高，產(chǎn)品呈液固混合物，不便于農(nóng)業(yè)生產(chǎn)上應(yīng)用，產(chǎn)品易破碎，而且使用不方便，不能很均勻 的施放到土壤中。
[0007] 現(xiàn)有普遍的做法為將制備好的孢子直接干燥或者吸附到河沙等載體上，干燥到含 水10%以下，然后低溫保存，目前市場產(chǎn)品采用此方法，但是產(chǎn)品需要低溫保存，不便于使 用及運(yùn)輸。
[0008] 綜上所述，現(xiàn)有淡紫擬青霉保存方法的保質(zhì)期短，孢子的死亡率高，而且保存成本 高，不便于運(yùn)輸、使用，不利于大面積的推廣使用。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0009] 本發(fā)明要解決現(xiàn)有淡紫擬青霉保存時間短、成本高、孢子死亡率高的技術(shù)問題；而 提供了淡紫擬青霉孢子的保存方法。本發(fā)明采用一種簡便的方法提高淡紫擬青霉產(chǎn)品的保 質(zhì)期即提高淡紫擬青霉孢子的成活率。
[0010] 本發(fā)明中淡紫擬青霉孢子的保存方法是將淡紫擬青霉孢子和粉狀多孔材料混合 均勻，加水至含水量為209Γ40%，密封在(TC?30°C條件下保存。 上述方法中將淡紫擬青霉孢子和粉狀多孔材料混合使混合后的孢子數(shù)為5X108cfu/g至Ij2X109cfu/g。 toon] 所述的淡紫擬青霉孢子獲得的方法按淡紫擬青霉生產(chǎn)方法分為兩種。采用液體深 層發(fā)酵工藝孢子獲取的方法是將經(jīng)液體深層發(fā)酵的含有淡紫擬青霉孢子發(fā)酵原液經(jīng)過離 心機(jī)離心，將得到的固體物質(zhì)用無菌水洗滌后進(jìn)行二次離心，得到淡紫擬青霉孢子。采用 固體發(fā)酵工藝孢子獲取的方法是固體發(fā)酵的淡紫擬青霉用分樣篩篩分，得到淡紫擬青霉孢 子。
[0012] 所述粉狀多孔材料為粉狀活性炭。
[0013] 所述粉狀活性炭的含水在10%以下，粒度80目以上，比表面積在500m2/g以上。所 述粉狀活性炭是由果殼或木炭制成的。
[0014] 將本發(fā)明方法淡紫擬青霉生防菌劑產(chǎn)品直接施放到土壤中使用即可，使用方法簡 單、方便，能很均勻的施放到土壤中。
[0015] 本發(fā)明采用簡便的便于工業(yè)化使用方法提高產(chǎn)品的保質(zhì)期，并且采用常溫保存， 冰點(diǎn)到30°C均可以，便于運(yùn)輸，能降低保存成本，常溫保存1年以上，孢子萌發(fā)率大于80%， 便于產(chǎn)品的推廣使用。

【具體實(shí)施方式】

【具體實(shí)施方式】 [0016] 一：本實(shí)施方式中淡紫擬青霉孢子的保存方法是按最后孢子數(shù)為 5X108cfu/g的比例將淡紫擬青霉孢子和粉狀椰果殼活性炭混合均勻，加水至含水量為 40%，密封在(T30°C條件下保存。本實(shí)施方式中活性炭的含水5%，粒度100目，比表面積為 600m2/g。
[0017] 本實(shí)施方式采用液體深層發(fā)酵工藝孢子獲取的方法是將經(jīng)液體深層發(fā)酵的含有 淡紫擬青霉孢子發(fā)酵原液經(jīng)過離心機(jī)離心，將得到的固體物質(zhì)用無菌水洗滌后進(jìn)行二次離 心，得到淡紫擬青霉孢子。
[0018] 本實(shí)施方式的存放時間和萌發(fā)率結(jié)果見表1和2。
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【權(quán)利要求】
1. 淡紫擬青霉孢子的保存方法，其特征在于淡紫擬青霉孢子的保存方法是將淡紫擬青 霉孢子和粉狀多孔材料混合均勻，加水至含水量為209Γ40%，密封在0°C?30°C條件下保存。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的淡紫擬青霉孢子的保存方法，其特征在于將淡紫擬青霉孢子 和粉狀多孔材料混合使混合后的孢子數(shù)為5X 108cfu/g到2X 109cfu/g。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的淡紫擬青霉孢子的保存方法，其特征在于所述的淡紫擬青霉 孢子獲得方法：固體發(fā)酵的淡紫擬青霉用分樣篩篩分，得到淡紫擬青霉孢子。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的淡紫擬青霉孢子的保存方法，其特征在于所述的淡紫擬青霉 孢子獲得方法：將經(jīng)液體深層發(fā)酵的含有淡紫擬青霉孢子發(fā)酵原液經(jīng)過離心機(jī)離心，將得 到的固體物質(zhì)用無菌水洗滌后進(jìn)行二次離心，得到淡紫擬青霉孢子。
5. 根據(jù)權(quán)利要求1-4中任意一項權(quán)利要求所述的淡紫擬青霉孢子的保存方法，其特征 在于所述粉狀多孔材料為粉狀活性炭。
6. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的淡紫擬青霉孢子的保存方法，其特征在于粉狀活性炭的含水 在10%以下，粒度80目以上，比表面積在500m 2/g以上。
7. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的淡紫擬青霉孢子的保存方法，其特征在于所述粉狀活性炭是 由果殼或木炭制成的。
【文檔編號】C12N1/04GK104263648SQ201410564788
【公開日】2015年1月7日 申請日期:2014年10月22日 優(yōu)先權(quán)日:2014年10月22日
【發(fā)明者】谷軍, 高娃, 沙長青, 張小彥, 王玉文 申請人:黑龍江省科學(xué)院微生物研究所