專利名稱：用于親水性化合物非腸道給藥的緩釋藥物組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及以穩(wěn)定的、生物相容性的且易于制備的油包水(w/o型)微乳形式存在的，用于活性成分非腸道給藥的緩釋藥物組合物，該活性成分是親水性的或者通過(guò)適當(dāng)?shù)难苌瞥捎H水性。更確切的說(shuō)，對(duì)于需要防止生物體內(nèi)水解酶的快速攻擊并能在一定時(shí)間內(nèi)持續(xù)釋放從而避免反復(fù)給藥的肽類活性成分或者生物學(xué)活性低聚糖或多糖而言，通過(guò)所述微乳來(lái)配制是將有利的。所述用于治療用的制劑可注射給藥而不會(huì)引起問(wèn)題或顯著的副作用，并且易于在工業(yè)上制備，因此該制劑具有顯著的技術(shù)進(jìn)步。
現(xiàn)有技術(shù)微乳通常是指光學(xué)各向同性的體系，其在偏振光下觀察不到雙折射現(xiàn)象，它是透明的，熱力學(xué)穩(wěn)定的，液滴直徑非常小，在5-200nm之間，它是通過(guò)分散混合兩種不相混溶、但是在乳化劑存在下能穩(wěn)定共存的液體而制備的，乳化劑可調(diào)整兩種液體間分隔表面的化學(xué)-物理性質(zhì)，并將界面張力基本上降低為零。油、水、表面活性劑及任選的輔助表面活性劑通常是形成微乳所必需的；形成油包水(w/o型)還是水包油(o/w)型微乳取決于共存的水相和油相的比例以及表面活性劑的性質(zhì)。具體地講，通過(guò)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)可得出包含水、疏水性化合物以及表面活性劑和輔助表面活性劑的混合物的三相圖，在圖上可標(biāo)出w/o型和o/w型微乳穩(wěn)定存在的區(qū)域。例如，Aboofazeli等人(Int.J.Pharm.111(1994)63-72)研究了各種具有輔助表面活性劑活性的化合物形成w/o型微乳的能力。作者所研究的體系由脂肪酸酯、1∶1的卵磷脂-輔助表面活性劑和水的不同比例的混合物組成。用作輔助表面活性劑的化合物的效力等級(jí)為伯胺＞醇類＞脂肪酸。此外，該效力被證實(shí)與醇類和脂肪酸烷基鏈的長(zhǎng)短有關(guān)；即丁醇＞戊醇＞己醇＞戊酸＞己酸。在這些實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的基礎(chǔ)上，醇類例如丁醇或戊醇以及相應(yīng)的脂肪酸(次優(yōu)選)似乎是最佳的備選物。使用上述化合物可制備出穩(wěn)定的w/o型微乳，但是并不能保證所述制劑的可耐受性，尤其是當(dāng)作為貯庫(kù)使用時(shí)，因?yàn)榇藭r(shí)該制劑與皮下或肌肉內(nèi)的組織要接觸數(shù)天甚至數(shù)周。
而且，據(jù)報(bào)道，輔助表面活性劑和表面活性劑之間的比例非常重要；Aboofazeli等人報(bào)道的數(shù)據(jù)是兩者之間的比例為1∶1。Atwood等人(Int.J.Pharmacy 84 R5(1992))研究了卵磷脂/水/脂肪酸酯/丁醇混合物的特性，其中表面活性劑/輔助表面活性劑的比例為約1.7到3。作者證實(shí)，降低輔助表面活性劑相對(duì)于卵磷脂的量可以明顯限制可觀察到w/o型微乳存在的區(qū)域，即便使用的是非常有效的輔助表面活性劑例如丁醇。
表面活性劑通常根據(jù)經(jīng)驗(yàn)等級(jí)進(jìn)行分類，這些經(jīng)驗(yàn)等級(jí)稱為親水親油平衡值(HLB)，其指定的數(shù)值范圍在1到40之間。通常，w/o型微乳適宜的表面活性劑具有較低的HLB，而適合o/w型微乳的具有較高的HLB。當(dāng)界面張力＜2×10-2dyn/cm時(shí)，可形成穩(wěn)定的微乳。任選存在的輔助表面活性劑可以增加界面流動(dòng)性，因?yàn)檩o助表面活性劑分子可以滲透到表面活性劑分子之間，由此產(chǎn)生一層非均相的界面膜層。輔助表面活性劑還能降低水相的親水性，從而降低兩相之間界面的張力?？偟膩?lái)說(shuō)，使用輔助表面活性劑的優(yōu)點(diǎn)在于其能在增加微乳穩(wěn)定性的同時(shí)降低所需的表面活性劑的量；然而，正如上文已經(jīng)提到的，最好能限制輔助表面活性劑的使用，因?yàn)槠渚哂袧撛诘木植慷拘?，主要是在載體和皮下或肌內(nèi)組織之間長(zhǎng)時(shí)間接觸的情況下。
人們已經(jīng)了解了使用微乳作為活性成分載體的很多優(yōu)點(diǎn)。
在成分之間比例的特定條件下，微乳可自發(fā)形成而不需要很高的能量來(lái)制備它；因此在工業(yè)規(guī)模上的制備非常容易。所述自發(fā)形成的微乳是熱力學(xué)穩(wěn)定的、均勻透明的，因此能用光譜技術(shù)進(jìn)行監(jiān)測(cè)?？梢灾频闷骄剑?00nm的微乳，可通過(guò)用0.22微米薄膜商業(yè)過(guò)濾器過(guò)濾進(jìn)行冷滅菌。微乳可實(shí)現(xiàn)低溶解度或低穩(wěn)定性藥物的給藥。
此外，當(dāng)存在額外的分散相或者溫度發(fā)生改變時(shí)，所述體系會(huì)發(fā)生相轉(zhuǎn)變這一性質(zhì)可影響活性成分的生物利用度，而其中的機(jī)理尚不清楚。
w/o型微乳可控制活性成分的釋放或者通過(guò)防止水解酶破壞而延長(zhǎng)其在生理液體中的穩(wěn)定性。有大量關(guān)于微乳形成的綜述，例如，“微乳的工業(yè)應(yīng)用”，Marcel Dekker編1997，在“制藥領(lǐng)域中的微乳展望和應(yīng)用”章節(jié)中涉及到了其在制藥領(lǐng)域中的用途，而“微乳工藝手冊(cè)”，Kumar Mittal編(1999)，涉及它的化學(xué)物理方面。
w/o型微乳作為載體用以實(shí)現(xiàn)親水性的或者通過(guò)適當(dāng)衍生化變成親水性的活性成分的控制釋放的用途已報(bào)道于專利文獻(xiàn)中。
具體地講，對(duì)于生物可降解的分子，例如肽類，在一項(xiàng)研究中報(bào)道了含這些活性成分的非腸道給藥的w/o型微乳[M.R.Gasco等人，Int.J.Pharm.62，119(1990)]，其中，將LHRH激素類似物在一種由生物相容性成分組成的微乳中配制，活性成分含量為500μg/ml，微乳通過(guò)單次肌內(nèi)注射以3mg/Kg的劑量向重約200g的成年雄性大鼠給藥，其注射后所引起的睪酮血漿濃度下降能持續(xù)近30天；所述濃度要低于將活性成分溶于緩沖液中并以100μg/Kg的活性成分劑量對(duì)第二組小鼠進(jìn)行反復(fù)注射(一天一次，共28天)所觀察到的睪酮濃度。
必須注意的是觀察期間內(nèi)睪酮濃度的下降是不均勻的，其在給藥8天后才具有治療效果。
該治療效果的遲滯現(xiàn)象是非常不利的，尤其在治療需要睪酮才能生長(zhǎng)的前列腺腫瘤時(shí)，因此睪酮的正常產(chǎn)生終止的越快，治療效果就越好。
上文提到的文獻(xiàn)顯示了由油酸乙酯(60.5％)、水(10.1％)、磷脂酰膽堿(18.9％)和己酸(10.5％)組成的、用于持續(xù)釋放肽類的w/o型微乳的有效性。表面活性劑(磷脂酰膽堿)與輔助表面活性劑(己酸)的比例是1.8。作者認(rèn)為所述微乳的組分，如果單獨(dú)服用，是生物可相容的。然而既沒(méi)有人提到過(guò)微乳作為一個(gè)整體的生物相容性，也沒(méi)有人提到過(guò)與制劑接觸的皮下組織的情況。
根據(jù)所述文獻(xiàn)的教導(dǎo)，人們制備了一種含有醋酸亮丙瑞林作為具有LHRH活性的活性成分的w/o型微乳，其由油酸乙酯(66.9％)、水(9.7％)、磷脂酰膽堿(19.4％)和己酸/丁酸以3/1混合的混合物(3.9％)組成。根據(jù)該文獻(xiàn)，使用丁酸與己酸的混合物代替單獨(dú)的己酸以降低表面活性劑與輔助表面活性劑的比例，即，從4.9下降至1.8。通過(guò)大鼠皮下注射對(duì)產(chǎn)品進(jìn)行的體內(nèi)測(cè)試證實(shí)了其有效性，但也意外的引起了人們對(duì)局部潰瘍和頑固性皮下風(fēng)濕性肉芽腫的警惕。盡管只使用了很少量的輔助表面活性劑，這些藥理學(xué)上無(wú)法接受的結(jié)果仍然表明當(dāng)用于非腸道給藥時(shí)，微乳單個(gè)組分的生物相容性并不足以保證組成微乳的混合物的生物相容性。
相似的，在各種專利例如WO 94/08610中公開和要求保護(hù)的混合物盡管提供了穩(wěn)定的微乳并實(shí)現(xiàn)了活性成分在一定時(shí)間內(nèi)可控的釋放，卻沒(méi)有教導(dǎo)本領(lǐng)域技術(shù)人員如何實(shí)現(xiàn)親水性活性成分的持續(xù)釋放并同時(shí)避免上述副作用。實(shí)際上，所述微乳通常由水、油性組分、表面活性劑、輔助表面活性劑及可任選的電解質(zhì)以各種比例組成?，F(xiàn)有技術(shù)既沒(méi)有對(duì)微乳“整體”的生物相容性進(jìn)行評(píng)估，也沒(méi)有指出為達(dá)到活性成分和微乳的穩(wěn)定性以及制劑的生物相容性所需使用的混合物成分與活性成分的比例。
另一方面，所述專利沒(méi)有明確的考慮與肌內(nèi)(i.m)和皮下(s.c)給藥有關(guān)的局部可耐受性問(wèn)題，而此種給藥方式是非腸道給藥最適宜和簡(jiǎn)單的路徑。
在大量的專利文獻(xiàn)如US 3,976,071中還公開并要求保護(hù)了另一項(xiàng)已在工業(yè)規(guī)模上使用的用于肽類持續(xù)釋放的技術(shù)，其中所述釋放通過(guò)使用摻入了活性成分的生物可降解聚合物而實(shí)現(xiàn)。典型的生物可降解聚合物的例子是基于乙醇酸和乳酸的聚合物。所述技術(shù)的缺點(diǎn)是其與上述乳液相比價(jià)格相對(duì)昂貴且麻煩費(fèi)事，而且，其在制備過(guò)程中需要使用有機(jī)溶劑，尤其是含氯的有機(jī)溶劑，這將涉及破壞環(huán)境和藥劑安全性方面的問(wèn)題。
另一方面，所述制劑優(yōu)選不會(huì)引起頑固性風(fēng)濕性肉芽腫也不會(huì)導(dǎo)致局部潰瘍。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明目的在于提供一種穩(wěn)定的w/o型微乳形式的緩釋藥物組合物，它制備簡(jiǎn)單，可對(duì)其進(jìn)行消毒，且無(wú)顯著的全身或局部的副作用，該組合物適于對(duì)親水性的或者通過(guò)適當(dāng)衍生化而變得親水性的活性成分進(jìn)行非腸道給藥，優(yōu)選肌內(nèi)或皮下給藥，因此，與現(xiàn)有技術(shù)相比，在技術(shù)上得到了顯著的提高。
已發(fā)現(xiàn)了一種適于全面評(píng)估各種用于緩釋給藥的制劑其生物相容性的方法，該方法包括對(duì)用上文所述微乳進(jìn)行治療的動(dòng)物做臨床、驗(yàn)尸和組織學(xué)的檢查。
根據(jù)該方法，如文獻(xiàn)中所述(Protein Formulation and Delivery-E.J.McKelly 2000，第245-247頁(yè))，當(dāng)局部腫脹(其或多或少地顯著依賴于給藥劑量)是可逆的時(shí)，微乳被認(rèn)為是可接受的；另一方面，對(duì)于被認(rèn)為是生物可降解的材料也要觀察其類似的組織應(yīng)答，此應(yīng)答對(duì)于影響藥物在一定時(shí)間內(nèi)的持續(xù)釋放非常重要。不過(guò)，頑固性潰瘍形式的局部不可耐受性被認(rèn)為是不可接受的。
本發(fā)明的微乳由如下組分組成最多20％的含活性成分的內(nèi)層親水性水相、30到98％的外層疏水相和最多50％的表面活性劑或表面活性劑與輔助表面活性劑的混合物。該微乳優(yōu)選含有百分比≤35％的表面活性劑和輔助表面活性劑，其中表面活性劑/輔助表面活性劑的比值≥2，最優(yōu)選≥3.5。
還可以使用其它不會(huì)影響微乳穩(wěn)定性的生物相容性賦型劑。
適用于本發(fā)明微乳的表面活性劑選自天然或者合成的含C4-C20飽和或不飽和的羧酸殘基的甘油磷脂，其磷酸酯部分含膽堿、乙醇胺、絲氨酸、甘油殘基；膽固醇；糖例如山梨醇糖、半乳糖、葡萄糖、蔗糖等的C12-C20脂肪酸酯；C12-C20脂肪酸聚氧乙烯脫水山梨醇酯。
可任選使用的輔助表面活性劑選自C8-C20脂肪酸，C2-C14多羥基烷烴，優(yōu)選丙二醇、己二醇和甘油，C2-C12醇，含C2-C8醇?xì)埢娜樗狨ァ?br> 疏水性連續(xù)相選自下列單獨(dú)或混合形式的化合物含C2-C8醇?xì)埢腃8-C20飽和或不飽和羧酸酯或者C8-C20脂肪酸的單甘油酯、二甘油酯和三甘油酯、或者適于非腸道給藥的植物油，例如大豆油、花生油、芝麻油、棉籽油、葵花油。
本發(fā)明微乳進(jìn)一步的特征為其pH在4.5-7.5之間，優(yōu)選為5-7，當(dāng)乳液組合物本身達(dá)不到所述pH值時(shí)，優(yōu)選向微乳中加入適量天然氨基酸來(lái)達(dá)到該pH值，同時(shí)還不會(huì)影響乳液的穩(wěn)定性和液滴平均粒徑。
本發(fā)明w/o型微乳特別適合作為肽類的載體，特別是LHRH類似物，例如醋酸亮丙瑞林、戈舍瑞林、曲普瑞林、醋酸那法瑞林、組氨瑞林、西曲瑞克或相應(yīng)的醋酸鹽；或者如促生長(zhǎng)素抑制素或其類似物，例如醋酸奧曲肽及醋酸蘭瑞肽等肽類。
此外，本發(fā)明的微乳特別適用于作為多糖、尤其是未分離的肝素或者低分子量肝素的載體。
本發(fā)明的微乳可用于制備可緩釋親水性活性成分的制劑。本發(fā)明進(jìn)一步的發(fā)明目的是提供所述緩釋制劑，該制劑不會(huì)引起局部潰瘍和產(chǎn)生頑固性風(fēng)濕性肉芽腫，能在藥物有效的時(shí)間內(nèi)被吸收。在使用LHRH-型肽類，尤其是亮丙瑞林、戈舍瑞林、曲普瑞林、醋酸那法瑞林、組氨瑞林、西曲瑞克及其相應(yīng)的鹽的情況下，可實(shí)現(xiàn)至少30天的持續(xù)釋放。在使用促生長(zhǎng)素抑制素、奧曲肽和蘭瑞肽時(shí)，可實(shí)現(xiàn)至少8天的持續(xù)釋放。
本發(fā)明進(jìn)一步的涉及含亮丙瑞林、戈舍瑞林、曲普瑞林、醋酸那法瑞林、組氨瑞林、西曲瑞克或相應(yīng)的醋酸鹽的本發(fā)明的微乳在制備抑制睪酮生成的藥物上的應(yīng)用，該藥物在單次給藥后至少能起效30天，且給予該藥物48小時(shí)后睪酮濃度就已降低。
本發(fā)明還涉及含奧曲肽或其類似物的微乳在制備用于抑制生長(zhǎng)激素產(chǎn)生的藥物上的應(yīng)用，該藥物至少能作用8天。
本發(fā)明進(jìn)一步的目的是含未分離的肝素或低分子量肝素的微乳在制備在單次給藥后能持續(xù)釋放的藥物上的應(yīng)用。
以下實(shí)施例將進(jìn)一步的闡述本發(fā)明。實(shí)施例1-含醋酸亮丙瑞林的w/o型微乳的制備a)水相的制備將350mg醋酸亮丙瑞林溶于加入了200mg賴氨酸的10ml注射用水中。
b)油相的制備在一適宜的恒溫在60-70℃的容器內(nèi)，在攪拌的情況下將60g油酸乙酯、25g大豆卵磷脂(純度＞95％)和5g辛酸混合。將所得透明均勻的溶液冷卻至室溫。
c)微乳的制備在攪拌的條件下將水相(溶液a)加入到油相(溶液b)中，得到透明均勻的微乳。根據(jù)所使用的溶于水相的賴氨酸和辛酸的量可估算出pH值約為6。
所述微乳通過(guò)用適宜的0.22μm膜過(guò)濾滅菌。
所述微乳中醋酸亮丙瑞林的含量用HPLC分析法在下述條件下檢測(cè)固定相Vydac C18 5μ柱(250×4mm)流動(dòng)相A H2O+0.1％TFAB CH3OH+0.1％TFA洗脫梯度 20′100％A到100％B流速 0.8 ml/分鐘檢測(cè)器UV 214nm醋酸亮丙瑞林含量為3mg/ml。實(shí)施例2-含醋酸亮丙瑞林的w/o型微乳的制備按照實(shí)施例1的操作方法，只是在10ml水中溶解600mg的醋酸亮丙瑞林。實(shí)施例3-含醋酸亮丙瑞林的w/o型微乳的制備按照實(shí)施例1的操作方法，但是不加入200mg賴氨酸。計(jì)算得pH值約為3。實(shí)施例4-含醋酸亮丙瑞林的w/o型微乳的制備按照實(shí)施例1的操作方法，只是在10ml水中溶解900mg醋酸亮丙瑞林。實(shí)施例5-含醋酸亮丙瑞林的w/o型微乳的制備按照實(shí)施例1的操作方法，但是要將表面活性劑和輔助表面活性劑的量分別改變成15g大豆卵磷脂和3g辛酸。用這種方法制備，雖然表面活性劑和輔助表面活性劑之間的比例仍然沒(méi)有改變(5∶1)，但是兩種成分混合物的總量已從30％變化至18％。實(shí)施例6-含奧曲肽的w/o型微乳的制備按照實(shí)施例1的操作方法，但是在10ml水中溶入3g奧曲肽，替代在10ml水中溶入350mg醋酸亮丙瑞林的操作。實(shí)施例7-含肝素的w/o型微乳的制備按照實(shí)施例1的操作方法，但是向10ml水中溶入50mg鈣鹽或鈉鹽形式的未分離的肝素而不是350mg醋酸亮丙瑞林。實(shí)施例8-含醋酸亮丙瑞林的w/o型微乳的制備按照實(shí)施例1的操作方法，但是需要將油相質(zhì)量和數(shù)量的組成改變?yōu)橛退嵋阴?66.9％)、磷脂酰膽堿(19.4％)及3∶1的己酸-丁酸混合物(總共3.9％)。實(shí)施例9-含醋酸亮丙瑞林的w/o型微乳的制備a)水相的制備將60mg醋酸亮丙瑞林溶于加入了8mg賴氨酸的0.6ml注射用水中。
b)油相的制備將2.1g油酸乙酯、215mg單油酸聚氧乙烯脫水山梨醇酯和1g大豆卵磷脂在一適宜容器中混合，在攪拌的情況下加熱到50℃。然后將所得透明均勻的混合物冷卻至室溫。
將水溶液在攪拌的情況下緩慢地分批加入到油性混合物中，得到含1.5％醋酸亮丙瑞林的透明微乳。實(shí)施例10-含醋酸亮丙瑞林的w/o型微乳的制備a)水相的制備將60mg醋酸亮丙瑞林溶于加入了4.1mg賴氨酸的0.2ml注射用水中。
b)油相的制備將1.2g油酸乙酯、0.5g單油酸聚氧乙烯脫水山梨醇酯和0.1g辛酸在一適宜容器中混合，在攪拌的情況下加熱到50℃。然后將所得透明均勻的混合物冷卻至室溫。
將水溶液在攪拌的情況下緩慢地分批加入到油性混合物中，得到含3mg/ml的醋酸亮丙瑞林的透明微乳。實(shí)施例11-含醋酸奧曲肽的w/o型微乳的制備a)水相的制備將20mg醋酸奧曲肽溶于含0.2g丙二醇和4mg賴氨酸的0.2ml注射用水中。
b)油相的制備將0.98g油酸乙酯、0.5g大豆卵磷脂和0.1g辛酸在一適宜容器中混合，在攪拌情況下加熱至50℃。然后將所得透明均勻的混合物冷卻至室溫。
將水溶液在攪拌的情況下緩慢地分批加入到油性混合物中，得到含10mg/ml的醋酸奧曲肽的透明微乳。實(shí)施例12-含醋酸奧曲肽的w/o型微乳的制備a)水相的制備將10mg醋酸奧曲肽溶于加入了2mg賴氨酸的0.1ml注射用水中。
b)油相的制備將0.59g油酸乙酯、0.25g大豆卵磷脂和0.05g辛酸在一適宜的容器中混合，在攪拌情況下加熱至50℃。然后將所得透明均勻的混合物冷卻至室溫。
將水溶液在攪拌的情況下緩慢地分批加入到油性混合物中，得到含1％醋酸奧曲肽的透明微乳。實(shí)施例13-含醋酸奧曲肽的w/o型微乳的制備將0.59g油酸乙酯、0.25g大豆卵磷脂和0.05g辛酸在一適宜容器中混合，在攪拌情況下加熱到50℃。然后將所得透明均勻的混合物冷卻至室溫。將含有2mg賴氨酸的0.1g注射用水在攪拌下緩慢的加入到油溶液中。將10mg醋酸奧曲肽在攪拌的情況下加入到所形成的透明微乳中。幾秒鐘內(nèi)活性成分便被包埋在了所述微乳中。將微乳用0.22mcm聚砜濾器過(guò)濾。所得透明微乳用HPLC分析顯示醋酸奧曲肽的含量為6.35mg/ml。實(shí)施例14-含肌紅蛋白的w/o型微乳的制備a)水相的制備將5.5mg肌紅蛋白溶于加入了10mg賴氨酸的1.5ml注射用水中。
b)油相的制備將2g油酸乙酯、1.2g大豆卵磷脂和0.25g辛酸在一適宜容器中混合加熱至50℃。將所得透明均勻的混合物冷卻至室溫。
將水溶液在攪拌的情況下緩慢地分批加入到油性混合物中。所得透明的微乳中含有1.3mg/ml肌紅蛋白。實(shí)施例15-按實(shí)施例1和實(shí)施例2所述制備的含醋酸亮丙瑞林的微乳其有效性的體內(nèi)評(píng)價(jià)將三組Sprague Dawley雄性大鼠(每組10只)在試驗(yàn)前圈養(yǎng)5天，可隨意接近水和食物。
將按照實(shí)施例1和實(shí)施例2所述制備的，區(qū)別在于醋酸亮丙瑞林濃度不同的兩種微乳，即3mg/ml(實(shí)施例1)和6mg/ml(實(shí)施例2)的微乳，以單劑量形式給予各組的大鼠，活性劑量相當(dāng)于0.750mg/kg。
對(duì)照動(dòng)物(每組3只)給予鹽水溶液。
在第1、2、3、4、7、14、21、28、42和56天取血樣評(píng)估睪酮血漿濃度。血樣經(jīng)離心后，用EIA試劑盒測(cè)定血清睪酮。
在給藥60天后才對(duì)血清睪酮濃度進(jìn)行評(píng)估。
結(jié)果示于

圖1中。
下文表1總結(jié)了試驗(yàn)動(dòng)物被考察器官的重量的數(shù)據(jù)。
表1-按照實(shí)施例1和實(shí)施例2所述制備的微乳對(duì)大鼠體重和生殖器官重量的影響微乳 28天和56天之后的體重和生殖器官重量(g)28天 56天體重 睪丸 前列腺精囊 體重 睪丸 前列腺 精囊鹽水 570.0±13.2 3.73±0.09 0.72±0.071.95±0.010 631.2±10.1 3.54±0.05 0.80±0.05 1.96±0.26實(shí)施例1 546.6±8.8 1.84±0.11*0.33±0.03*0.49±0.08*600.0±16.4 2.39±0.17*0.50±0.03# 1.39±0.14實(shí)施例2 532.8±4.6 1.68±0.14*0.22±0.03*0.25±0.03*626.6±25.5 2.5±0.21◇0.51±0.08# 1.43±0.22數(shù)據(jù)表示為組內(nèi)平均值±標(biāo)準(zhǔn)差(5只動(dòng)物)*p＜0.001；◇p＜0.01；#p＜0.05相對(duì)于鹽水組(用于多重比較的ANOVA檢驗(yàn)和Bonferronit檢驗(yàn))。
本發(fā)明的制劑，無(wú)論微乳中活性成分的濃度是多少，均沒(méi)有顯著的全身性或者局部副作用，且在注射后48小時(shí)即可產(chǎn)生治療效果并在至少30天的時(shí)間內(nèi)持續(xù)釋放活性成分。
該效果與使用以生物可降解聚合物為基礎(chǔ)的市售制儲(chǔ)庫(kù)劑“Enantone”所達(dá)到的效果相當(dāng)。實(shí)施例16-微乳皮下可受耐性的評(píng)價(jià)通過(guò)向至少含9只大鼠的試驗(yàn)組單次注射給藥下表2所示的微乳來(lái)進(jìn)行評(píng)價(jià)皮下可耐受性的試驗(yàn)。
在給藥后第48小時(shí)、第7天和第14天時(shí)進(jìn)行臨床上、驗(yàn)尸、組織學(xué)的檢查。表2

(1)按照實(shí)施例1的方法制備的微乳。
(2)按照實(shí)施例8的方法制備的微乳。
*分值含義1輕微；2中度；3嚴(yán)重。
該試驗(yàn)顯示該制劑具有生物相容性，它不產(chǎn)生頑固性的局部潰瘍，而其產(chǎn)生的腫脹是產(chǎn)物注射量和皮下組織中油酸乙酯的清除速率的函數(shù)(參見(jiàn)Howard等，Int.J.Pharm.16(1983)31-39中的描述)。實(shí)施例17-含醋酸奧曲肽微乳的有效性的體內(nèi)評(píng)價(jià)將按照實(shí)施例11的描述制備的含奧曲肽的微乳以相當(dāng)于6mg/大鼠的劑量向6只體重約175-200g的雄性大鼠給藥。在給藥前、給藥后第0.5小時(shí)、第24小時(shí)、第4天、第6天和第8天抽取血漿樣品。
從血漿中提取奧曲肽并用LC-MS-MS儀器參照校準(zhǔn)曲線進(jìn)行分析。血漿濃度示于下文的表3中表3

給藥后第8天仍能發(fā)現(xiàn)明顯的奧曲肽血漿濃度。實(shí)施例18-含醋酸亮丙瑞林微乳的劑量/效力比的評(píng)價(jià)將按照實(shí)施例2的描述制備的含醋酸亮丙瑞林的制劑以2.25mg/kg的單劑量向大鼠給藥(實(shí)施例組)。對(duì)照動(dòng)物接受相應(yīng)劑量的鹽水溶液(對(duì)照)。
在第0、1、2、3、5、7、14、21、28、42和56天對(duì)血液樣品中的睪酮血漿濃度進(jìn)行評(píng)估。血樣離心后將血清睪酮用Elisa試劑盒進(jìn)行測(cè)定。
結(jié)果示于圖2中。
給藥動(dòng)物的有關(guān)器官重量的數(shù)據(jù)概括于下表4中。表4醋酸亮丙瑞林微乳或鹽水溶液對(duì)大鼠體重和生殖器官重量的影響(實(shí)施例組和對(duì)照組)。第56天的體重和生殖器官的重量(g)

給予微乳56天后清楚的證實(shí)了睪酮血漿濃度和生殖器官重量的降低。
權(quán)利要求
1.一種穩(wěn)定的、生物相容性的、可耐受性很好的w/o型微乳，其適用于親水性或者通過(guò)適當(dāng)?shù)难苌瞥捎H水性的生物活性化合物的非腸道給藥，且能提供所含活性化合物的持續(xù)釋放。
2.權(quán)利要求1的w/o型微乳，其特征在于在向?qū)嶒?yàn)動(dòng)物給藥后不會(huì)引起頑固性潰瘍，在注射點(diǎn)的任何腫脹均是可逆的。
3.權(quán)利要求1或2的微乳，其中親水性的生物活性化合物是肽類、蛋白質(zhì)、寡糖或多糖。
4.權(quán)利要求3的微乳，其中的生物活性化合物是肽類。
5.權(quán)利要求4的微乳，其中的生物活性化合物是LHRH激素肽類似物。
6.權(quán)利要求5的微乳，其中的生物活性化合物是醋酸亮丙瑞林、戈舍瑞林、曲普瑞林、那法瑞林、組氨瑞林、西曲瑞克或者其相應(yīng)的醋酸鹽。
7.權(quán)利要求5或6的微乳，其可持續(xù)釋放活性化合物至少30天。
8.權(quán)利要求4的微乳，其中生物活性化合物是促生長(zhǎng)素抑制素、奧曲肽或者蘭瑞肽。
9.權(quán)利要求8的制劑，其可持續(xù)釋放肽類至少8天。
10.權(quán)利要求3的微乳，其中的生物活性化合物是寡糖或者多糖。
11.權(quán)利要求10的微乳，其中的生物活性化合物是未分離的肝素或者低分子量肝素。
12.前述任一權(quán)利要求中的w/o型微乳，其由a)最多20％的含治療活性親水性化合物的內(nèi)層親水性水相；b)30到98％的外層疏水性相；c)最多50％的單獨(dú)使用或與輔助表面活性劑混合的表面活性劑組成。
13.權(quán)利要求12的微乳，其中的表面活性劑選自a)含C4-C20飽和或不飽和的羧酸殘基的天然或合成的甘油磷脂，其包含膽堿、乙醇胺、絲氨酸、甘油殘基作為其磷脂部分；b)膽固醇；c)C12-C20脂肪酸糖酯；d)聚氧乙烯脫水山梨醇C12-C20脂肪酸酯。
14.權(quán)利要求12的微乳，其中的輔助表面活性劑選自C8-C20脂肪酸；C2-C14多羥基烷烴；C2-C12醇；含C2-C8醇?xì)埢娜樗狨ァ?br> 15.權(quán)利要求12的微乳，其中的疏水性連續(xù)相選自以下單獨(dú)或混合形式的化合物含C2-C8醇?xì)埢腃8-C20飽和或不飽和羧酸酯，或C8-C20脂肪酸的單甘油酯、二甘油酯和三甘油酯，或者適于非腸道給藥的植物油。
16.權(quán)利要求13的微乳，其中含生物活性化合物的水相的pH值在4.5到7.5之間，優(yōu)選5到7之間。
17.權(quán)利要求16的微乳，其中的pH通過(guò)加入天然氨基酸來(lái)調(diào)節(jié)。
18.前述權(quán)利要求中含亮丙瑞林、戈舍瑞林、曲普瑞林、醋酸那法瑞林、組氨瑞林、西曲瑞克或其相應(yīng)的醋酸鹽或其它LHRH類似物的微乳在制備用于在單次給藥后可抑制睪酮生產(chǎn)至少30天的藥物中的應(yīng)用，其中睪酮的濃度在給藥48小時(shí)后就已降低。
19.前述權(quán)利要求中含奧曲肽或其類似物的微乳在制備用于抑制生長(zhǎng)激素的生產(chǎn)至少8天的藥物中的應(yīng)用。
20.前述權(quán)利要求中含未分離的肝素或低分子量肝素的微乳在制備單次給藥后能持續(xù)釋放的藥物中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明涉及穩(wěn)定的、生物相容性的、以油包水(w/o型)微乳形式存在的藥物組合物，其用于通過(guò)非腸道給藥來(lái)持續(xù)釋放親水性或通過(guò)適當(dāng)?shù)难苌瞥捎H水性的活性成分，本發(fā)明還涉及所述微乳的制備方法和用途。
文檔編號(hào)A61K31/702GK1430502SQ01809925
公開日2003年7月16日 申請(qǐng)日期2001年5月23日 優(yōu)先權(quán)日2000年5月26日
發(fā)明者F·奧托里, C·比安基尼, G·博托尼, F·萊昂尼, P·馬斯卡尼, V·蒙扎尼, O·皮科洛 申請(qǐng)人:意大利法爾馬科有限公司