專(zhuān)利名稱：骨碎補(bǔ)提取物用于治療骨關(guān)節(jié)炎的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及骨碎補(bǔ)提取物的新用途，具體說(shuō)，涉及骨碎補(bǔ)提取物在治療骨關(guān)節(jié)炎中的應(yīng)用，治療骨關(guān)節(jié)炎的藥物以及骨關(guān)節(jié)炎的治療方法。
背景技術(shù)：
骨關(guān)節(jié)炎是常見(jiàn)的關(guān)節(jié)病。骨關(guān)節(jié)炎的主要表現(xiàn)包括有軟骨退行性病變和關(guān)節(jié)邊緣骨贅的形成。一般表現(xiàn)有關(guān)節(jié)疼痛、壓痛、強(qiáng)響、關(guān)節(jié)積液、活動(dòng)受限、關(guān)節(jié)畸形以及可有不同程度的局部炎癥。一般無(wú)全身的癥狀。
研究表明自后20歲后人的骨關(guān)節(jié)就開(kāi)始退化。隨年齡增大，患病率迅速上升。在對(duì)一定范圍內(nèi)的人群調(diào)查表明，其患病率為38.7％，其中60歲以上受到影響的患病率為78.5％。此疾病在我國(guó)已成為僅次于缺血性心臟病導(dǎo)致工作能力喪失的第二大因素。
骨關(guān)節(jié)炎的病因尚待進(jìn)行深入研究。但一般認(rèn)為與年齡、關(guān)節(jié)過(guò)度勞損、激素水平、畸形、損傷等有關(guān)。對(duì)其治療來(lái)說(shuō)，目前有運(yùn)動(dòng)療法、理療、手術(shù)治療、藥物治療等。
治療骨關(guān)節(jié)炎的藥物，例如阿斯匹林、對(duì)乙酰氨基酚、消炎痛、布洛芬、雙氯芬酸、萘普生、塞米昔布等非甾體解熱鎮(zhèn)痛消炎藥，皮質(zhì)激素類(lèi)甾體抗炎藥，透明質(zhì)酸，氨基葡萄糖等。上述藥物可以在一定程度上緩解疼痛、消除炎癥，但是并不能扭轉(zhuǎn)病變組織，因此通常病人仍然難以避免進(jìn)行昂貴的手術(shù)治療。
根據(jù)中醫(yī)理論，骨關(guān)節(jié)炎相當(dāng)于中醫(yī)中的骨痹或者骨痿。中醫(yī)認(rèn)為，這雖是發(fā)生在關(guān)節(jié)上的疾病，但與腎、脾、肝的腑臟相關(guān)，因此要適當(dāng)補(bǔ)益腎與脾肝。目前市場(chǎng)上銷(xiāo)售的治療骨關(guān)節(jié)炎的中成藥均是從此點(diǎn)出發(fā)的。但是利用骨碎補(bǔ)或者其提取物治療骨關(guān)節(jié)炎的報(bào)道還沒(méi)有見(jiàn)到。
骨碎補(bǔ)是蕨類(lèi)植物，為水龍骨科植物槲蕨Drynaria fortunei(Kunze)J.Sm.或中華槲蕨D.baronii(Chist)Diels等的根莖。我們?cè)?jīng)就骨碎補(bǔ)提取物治療骨質(zhì)疏松進(jìn)行了研究，發(fā)現(xiàn)含有黃酮類(lèi)化合物的骨碎補(bǔ)提取物可以治療骨質(zhì)疏松，并據(jù)此提交了國(guó)際專(zhuān)利申請(qǐng)(參見(jiàn)WO02/53164A1號(hào)公報(bào))。
現(xiàn)在，我們驚訝地發(fā)現(xiàn)，除了治療骨質(zhì)疏松以外，上述骨碎補(bǔ)提取物還可以治療骨關(guān)節(jié)炎，經(jīng)過(guò)進(jìn)一步研究，完成了本發(fā)明。

發(fā)明內(nèi)容
研究表明，骨碎補(bǔ)提取物可以治療骨關(guān)節(jié)炎，因此本發(fā)明的內(nèi)容是1.治療骨關(guān)節(jié)炎的骨碎補(bǔ)提取物，其中含有黃酮類(lèi)物質(zhì)，黃酮類(lèi)物質(zhì)中包含柚皮苷，在提取物中，黃酮類(lèi)物質(zhì)的含量在30重量％以上，并且柚皮苷的含量在黃酮類(lèi)物質(zhì)的30重量％以上，但少于100重量％。
2.根據(jù)1的提取物，其中黃酮類(lèi)物質(zhì)的含量在50重量％以上。
3.根據(jù)1或2的提取物，其中柚皮苷的含量在黃酮類(lèi)物質(zhì)的90重量％以下。
4.根據(jù)1～3中任一項(xiàng)的提取物在制備治療骨關(guān)節(jié)炎的藥物中的應(yīng)用。
5.治療骨關(guān)節(jié)炎的藥物，其中至少含有根據(jù)1～3任一項(xiàng)的提取物作為有效成分。
6.根據(jù)5的藥物，為口服制劑。


圖1是100倍放大的實(shí)驗(yàn)例1的兔膝骨關(guān)節(jié)炎模型正常對(duì)照組的關(guān)節(jié)滑膜、滑膜下組織病理照片。
圖2是100倍放大的實(shí)驗(yàn)例1的兔膝骨關(guān)節(jié)炎模型模型組的關(guān)節(jié)滑膜、滑膜下組織病理照片。
圖3是100倍放大的實(shí)驗(yàn)例1的兔膝骨關(guān)節(jié)炎模型本發(fā)明提取物高劑量組的關(guān)節(jié)滑膜、滑膜下組織病理照片。
圖4是100倍放大的實(shí)驗(yàn)例1的兔膝骨關(guān)節(jié)炎模型本發(fā)明提取物中劑量組的關(guān)節(jié)滑膜、滑膜下組織病理照片。
圖5是100倍放大的實(shí)驗(yàn)例1的兔膝骨關(guān)節(jié)炎模型本發(fā)明提取物低劑量組的關(guān)節(jié)滑膜、滑膜下組織病理照片。
圖6是100倍放大的實(shí)驗(yàn)例1的兔膝骨關(guān)節(jié)炎模型正常對(duì)照組的軟骨組織病理照片。
圖7是100倍放大的實(shí)驗(yàn)例1的兔膝骨關(guān)節(jié)炎模型模型組的軟骨組織病理照片。
圖8是100倍放大的實(shí)驗(yàn)例1的兔膝骨關(guān)節(jié)炎模型本發(fā)明提取物高劑量組的軟骨組織病理照片。
圖9是100倍放大的實(shí)驗(yàn)例1的兔膝骨關(guān)節(jié)炎模型本發(fā)明提取物中劑量組的軟骨組織病理照片。
圖10是100倍放大的實(shí)驗(yàn)例1的兔膝骨關(guān)節(jié)炎模型本發(fā)明提取物低劑量組的軟骨組織病理照片。
圖11是100倍放大的實(shí)驗(yàn)例2的大鼠骨關(guān)節(jié)炎模型正常對(duì)照組(假手術(shù)組)的關(guān)節(jié)軟骨、滑膜組織病理照片。
圖12是100倍放大的實(shí)驗(yàn)例2的大鼠骨關(guān)節(jié)炎模型模型組的關(guān)節(jié)軟骨、滑膜組織病理照片。
圖13是100倍放大的實(shí)驗(yàn)例2的大鼠骨關(guān)節(jié)炎模型本發(fā)明提取物高劑量組的關(guān)節(jié)軟骨、滑膜組織病理照片。
圖14是100倍放大的實(shí)驗(yàn)例2的大鼠骨關(guān)節(jié)炎模型本發(fā)明提取物中劑量組的關(guān)節(jié)軟骨、滑膜組織病理照片。
圖15是100倍放大的實(shí)驗(yàn)例2的大鼠骨關(guān)節(jié)炎模型本發(fā)明提取物低劑量組的關(guān)節(jié)軟骨、滑膜組織病理照片。
圖16是實(shí)驗(yàn)例2的大鼠骨關(guān)節(jié)炎模型正常對(duì)照組(假手術(shù)組)大鼠的股骨外髁的掃描電鏡照片，圖中比例尺為2微米。
圖17是實(shí)驗(yàn)例2的大鼠骨關(guān)節(jié)炎模型模型組大鼠的股骨外髁的掃描電鏡照片，圖中比例尺為2微米。
圖18是實(shí)驗(yàn)例2的大鼠骨關(guān)節(jié)炎模型本發(fā)明提取物高劑量組大鼠的股骨外髁的掃描電鏡照片，圖中比例尺為2微米。
圖19是實(shí)驗(yàn)例2的大鼠骨關(guān)節(jié)炎模型本發(fā)明提取物中劑量組大鼠的股骨外髁的掃描電鏡照片，圖中比例尺為2微米。
圖20是實(shí)驗(yàn)例2的大鼠骨關(guān)節(jié)炎模型本發(fā)明提取物低劑量組大鼠的股骨外髁的掃描電鏡照片，圖中比例尺為2微米。
具體實(shí)施例方式
以下具體敘述本發(fā)明。
本發(fā)明引用上述WO02/53164A1號(hào)公報(bào)的內(nèi)容，在此全文引入作為參考。
本發(fā)明中所述的骨碎補(bǔ)(Rhizoma Drynariae)是指水龍骨科(Polypodiaceae S.F.Gary)槲蕨屬(Drynaria(Bory)J.Sm.)植物如槲蕨Drynaria fortunei(Kunze)J.Sm.、秦嶺槲蕨D.baronii(Chist)Diels、中華槲蕨D.sinica Diels、川滇槲蕨D.delavayi Chirst，以及骨碎補(bǔ)科骨碎補(bǔ)屬(Davallia Sm.)植物骨碎補(bǔ)Davallia mariesii Moore exBak等一種或多種植物的根莖或全草。在本發(fā)明中，作為上述用作骨碎補(bǔ)使用的植物，只要是鑒定為骨碎補(bǔ)的，可以單獨(dú)或者混合使用，在本發(fā)明中對(duì)此不加限制。
本發(fā)明的骨碎補(bǔ)提取物中，黃酮類(lèi)物質(zhì)的總含量應(yīng)該在30重量％以上，優(yōu)選40重量％以上，更優(yōu)選45重量％以上，最優(yōu)選50重量％以上。骨碎補(bǔ)提取物中黃酮類(lèi)的含量上限沒(méi)有特別限制，在30重量％～100重量％的范圍內(nèi)均具有治療骨關(guān)節(jié)炎的活性。從工藝路線的選擇和成本方面考慮，黃酮類(lèi)物質(zhì)的含量在50％以上即可較好的實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的目的，如果把黃酮類(lèi)物質(zhì)的量提高到90％以上，不僅原料的成本要上升，而且還要增加額外的處理工序，因此黃酮類(lèi)物質(zhì)的含量最優(yōu)選在50重量％～90重量％的范圍內(nèi)。
根據(jù)本發(fā)明人等的研究，根據(jù)本發(fā)明方法所得的骨碎補(bǔ)提取物中還可以含有多酚化合物。雖未發(fā)現(xiàn)多酚化合物對(duì)骨質(zhì)疏松的明確作用，但本發(fā)明提取物這優(yōu)選包含多酚化合物，因?yàn)橐阎喾踊衔锞哂锌寡?、抗氧化作用，含有多酚化合物有利于本提取物在制備藥物中的?yīng)用。多酚的含量因提取工藝等而變化，大體在10～50重量％之間。
在本發(fā)明提取物的黃酮類(lèi)物質(zhì)中，柚皮苷應(yīng)不少于30％，優(yōu)選不少于40％，更優(yōu)選不少于50％，但黃酮類(lèi)物質(zhì)中不應(yīng)該全部是柚皮苷，優(yōu)選不多于90％，更優(yōu)選至多80％。
本發(fā)明骨碎補(bǔ)提取物的典型制備方法例如包括藥材粉碎、水煎煮提取、大孔樹(shù)脂吸附、含水乙醇洗脫、后處理等步驟進(jìn)行提取。具體可參見(jiàn)上述WO02/53164A1號(hào)公報(bào)中關(guān)于提取的記載，在此不再贅述。
獲得提取物后，可以采用常規(guī)方法將提取物進(jìn)行處理如調(diào)整含量、干燥等，然后制成制劑。
如上所述本發(fā)明的提取物，可以按照常規(guī)的制劑工藝，制備成任何適用于臨床使用的藥物劑型，例如，膠囊劑、丸劑、片劑、滴丸、顆粒劑、溶液劑或注射劑等。其中各劑型所含提取物的量依據(jù)劑型組成、所治療患者的狀況、臨床使用條件等而有所不同。大體來(lái)說(shuō)，當(dāng)提取物中黃酮類(lèi)物質(zhì)含量以50％計(jì)時(shí)，患者每天給藥0.1～5克，分1～4次服用。
另外，本發(fā)明的提取物也可以與其它現(xiàn)有的治療骨關(guān)節(jié)炎的藥物合用，例如與解熱鎮(zhèn)痛藥、非甾體抗炎藥、甾體抗炎藥等聯(lián)用，或者與其它治療骨關(guān)節(jié)炎的中成藥聯(lián)用，治療各種原因引起的骨關(guān)節(jié)炎。
本發(fā)明所述的骨關(guān)節(jié)炎，例如原發(fā)性或繼發(fā)性骨關(guān)節(jié)炎。原發(fā)性全身性骨關(guān)節(jié)炎如累及遠(yuǎn)端和近端指間關(guān)節(jié)、第1腕掌關(guān)節(jié)、頸腰椎的椎間盤(pán)及椎突間關(guān)節(jié)、第1跖關(guān)節(jié)、髖和膝關(guān)節(jié)等骨關(guān)節(jié)炎等。其亞型包括侵蝕性、炎性骨關(guān)節(jié)炎、迅速破壞的肩、膝髖關(guān)節(jié)炎、彌漫性特發(fā)性骨骺肥厚、髕軟骨骨關(guān)節(jié)炎等。繼發(fā)性骨關(guān)節(jié)炎包括先天性關(guān)節(jié)畸形、遺傳學(xué)缺陷、感染性、代謝性、內(nèi)分泌性和神經(jīng)病性疾病、改變透明軟骨正常結(jié)構(gòu)與功能的各種疾病如痛風(fēng)、軟骨鈣質(zhì)沉著等所導(dǎo)致的骨關(guān)節(jié)炎、對(duì)透明軟骨及周?chē)M織的創(chuàng)傷如骨折、一個(gè)或一組關(guān)節(jié)長(zhǎng)期過(guò)勞等導(dǎo)致的骨關(guān)節(jié)炎等。
具體來(lái)說(shuō)，本發(fā)明中所指的骨關(guān)節(jié)炎是指任何由于軟骨細(xì)胞發(fā)生病理變化導(dǎo)致骨質(zhì)變硬、順應(yīng)性降低，形成骨軟骨贅、骨刺等，和/或同時(shí)軟骨下的骨髓內(nèi)形成骨囊腫所引發(fā)的關(guān)節(jié)疾病，如大體病理所見(jiàn)為透明軟骨表面粗糙或缺失；有凹痕、不規(guī)則、局部出現(xiàn)大塊潰爛、軟骨表面彌漫缺失、滑膜增生和輕度滑膜炎的關(guān)節(jié)疾病。
同時(shí)，由于本發(fā)明的骨關(guān)節(jié)炎如果發(fā)生在頸椎、腰椎等位置時(shí)，還可引起脊髓病和神經(jīng)根病，因此本發(fā)明的提取物也可以用于上述骨關(guān)節(jié)炎引發(fā)的其它疾病的輔助治療。
以下實(shí)驗(yàn)例用來(lái)說(shuō)明本發(fā)明提取物的效果，但不對(duì)本發(fā)明構(gòu)成任何限制。
方法通過(guò)在關(guān)節(jié)腔內(nèi)注入木瓜蛋白酶引發(fā)兔膝骨關(guān)節(jié)炎，通過(guò)股靜脈結(jié)扎引發(fā)大鼠骨關(guān)節(jié)炎。觀察本發(fā)明提取物對(duì)上述病理模型的效果。
藥物和試劑1.本發(fā)明提取物原料褐色結(jié)晶粉末，由北京岐黃制藥有限責(zé)任公司，批號(hào)0301012.木瓜蛋白酶北京奧博星生物技術(shù)責(zé)任有限公司產(chǎn)品，批號(hào)20030401其它試劑等均為市售常規(guī)試劑。
動(dòng)物雄性白色家兔，48只，體重2.0～2.4kg，由南京安立默科技有限公司提供。許可證號(hào)為SCXK(蘇)2002-0002。
SD雄性大鼠，60只，重200-230g，由東南大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。許可證號(hào)為SCXK(蘇)2002-0014。
實(shí)驗(yàn)例1.本發(fā)明提取物對(duì)木瓜蛋白酶引發(fā)兔膝骨關(guān)節(jié)炎的效果按照文獻(xiàn)方法[(1)高文香等，補(bǔ)腎法與活血法治療兔膝骨關(guān)節(jié)炎的病理形態(tài)學(xué)對(duì)比研究，中醫(yī)正骨，2000，12(6)325；(2)凌沛學(xué)等，玻璃酸鈉對(duì)關(guān)節(jié)腔內(nèi)注入木瓜蛋白酶所致兔膝關(guān)節(jié)退行性改變的改善作用，中國(guó)生化藥物雜志，1996，17(6)242]，考察本發(fā)明提取物對(duì)兔膝骨關(guān)節(jié)炎模型的影響分組及劑量設(shè)計(jì)取40只白色家兔，按體重隨機(jī)分為5組，每組8只，即正常對(duì)照組，模型對(duì)照組，本發(fā)明提取物高，中，低劑量組，本發(fā)明提取物組稱取適量本發(fā)明提取物，用蒸餾水配成18mg/ml、9mg/ml、4.5mg/ml溶液，高、中、低劑量組給藥劑量分別為108mg/kg、54mg/kg、27mg/kg，給藥容積為6ml/kg；正常對(duì)照及模型對(duì)照組給予蒸餾水6ml/kg。
造模方法按照文獻(xiàn)(1)公開(kāi)的兔膝關(guān)節(jié)腔內(nèi)注入木瓜蛋白酶造成骨關(guān)節(jié)炎病變模型方法，在家兔右膝關(guān)節(jié)腔內(nèi)注入1.6％木瓜蛋白酶生理鹽水溶液0.5ml，隔3天再注射第2次，共注射2次。
實(shí)驗(yàn)步驟 40只健康家兔正常飼養(yǎng)1周后，模型對(duì)照組、本發(fā)明提取物高、中、低劑量組按上述造模方法造模。在造模的同時(shí)，灌胃給藥。連續(xù)給藥8周后，將各組家兔放血處死，取下右膝關(guān)節(jié)，10％福爾馬林溶液固定，常規(guī)石蠟包埋，然后切取膝關(guān)節(jié)的滑膜組織，作HE染色，光鏡下觀察。再切取股骨內(nèi)髁軟骨后，作HE染色，光鏡下觀察。
觀察指標(biāo)軟骨及滑膜HE染色，觀察有關(guān)的形態(tài)學(xué)變化。各組關(guān)節(jié)滑膜、滑膜下組織的病理照片如圖1～圖5所示，各組軟骨組織病理照片如圖6～10所示。
評(píng)分標(biāo)準(zhǔn) 按Mankin骨關(guān)節(jié)病組織學(xué)分類(lèi)方法(表1、表2)對(duì)軟骨及滑膜進(jìn)行評(píng)分。
統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 病理觀察結(jié)果采用平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示，顯著性比較采用t檢驗(yàn)。結(jié)果見(jiàn)表3、表4。
表1骨關(guān)節(jié)軟骨退行性改變?cè)u(píng)分表

表2滑膜組織改變的評(píng)分表

表3本發(fā)明提取物對(duì)兔膝骨關(guān)節(jié)炎模型關(guān)節(jié)滑膜病變積分的影響

**P＜0.01，與模型對(duì)照組比較表4本發(fā)明提取物對(duì)兔膝骨關(guān)節(jié)炎模型關(guān)節(jié)軟骨病變積分的影響

*P＜0.05，**P＜0.01，與模型對(duì)照組比較由表3和圖1～5可見(jiàn)，木瓜蛋白酶關(guān)節(jié)腔內(nèi)注射造模8周后，模型對(duì)照組關(guān)節(jié)囊滑膜組織不完整，滑膜上皮細(xì)胞增生肥大，滑膜出現(xiàn)明顯炎細(xì)胞浸潤(rùn)。正常組和模型對(duì)照組滑膜病變積分存在顯著差異(P＜0.01)。高、中劑量組用藥后病變減輕，積分顯著降低(P＜0.01，與模型對(duì)照組比較)。
由表4和圖6～10可見(jiàn)，木瓜蛋白酶關(guān)節(jié)腔內(nèi)注射造模8周后，模型對(duì)照組關(guān)節(jié)軟骨出現(xiàn)退行性病變，表層軟骨細(xì)胞肥大，增生。正常組和模型對(duì)照組軟骨病變積分存在顯著差異(P＜0.01)。高、中、低劑量組用藥后病變減輕，積分顯著降低(分別P＜0.01，P＜0.05，與模型對(duì)照組比較)。
從圖1～5和圖6～10的結(jié)果可見(jiàn)，本發(fā)明提取物家兔給藥后，與模型對(duì)照組相比，各劑量組形態(tài)優(yōu)于模型對(duì)照組，高、中劑量組有明顯改善。
實(shí)驗(yàn)例2.本發(fā)明提取物對(duì)大鼠骨關(guān)節(jié)炎模型的影響按照文獻(xiàn)(唐旭升等，手法治療大鼠實(shí)驗(yàn)性膝骨關(guān)節(jié)炎掃描電鏡研究；中醫(yī)正骨，2001，13(1)3)，考察本發(fā)明提取物對(duì)大鼠實(shí)驗(yàn)性骨關(guān)節(jié)炎的效果。
分組及劑量設(shè)計(jì)取50只大鼠，按體重隨機(jī)分為5組，每組10只，即假手術(shù)組、模型對(duì)照組、本發(fā)明提取物高、中、低劑量組。本發(fā)明提取物組稱取適量本發(fā)明提取物，用蒸餾水配成21.6mg/ml，10.8mg/ml，5.4mg/ml溶液，高、中、低劑量組給藥劑量分別為216mg/kg，108mg/kg，54mg/kg，給藥容積為1ml/100g體重；假手術(shù)及模型對(duì)照組給予蒸餾水1ml/100g體重。
大鼠乙醚麻醉，于無(wú)菌條件下垂直腹股溝切口，分離出股靜脈，做雙重結(jié)扎，縫合皮膚。術(shù)后分籠飼養(yǎng)。假手術(shù)組找到股靜脈后不予結(jié)扎，縫合切口。4周起開(kāi)始給藥。每天灌胃給藥1次，共給藥8周。
于術(shù)后12周處死取材，取左膝關(guān)節(jié)，固定于10％福爾馬林溶液，石蠟包埋，切片，進(jìn)行組織病理學(xué)檢查。并按照上述Mankin骨關(guān)節(jié)病組織學(xué)分類(lèi)方法對(duì)軟骨和滑膜進(jìn)行評(píng)分。結(jié)果見(jiàn)表5、表6。
各組關(guān)節(jié)軟骨、滑膜組織病理照片如圖11～15所示。
另取右股骨外髁，先用生理鹽水沖凈表面血液、關(guān)節(jié)液及碎屑等，于2％的戊二醛固定，4℃下保存24小時(shí)，0.1M PBS清洗，以1％四氧化鋨固定2小時(shí)。再以0.1M PBS漂洗，乙醇逐級(jí)脫水，丙酮-醋酸異戊脂置換，液態(tài)二氧化碳臨界點(diǎn)干燥，粘臺(tái)，鍍金，于SX-40掃描電鏡下觀察，加速電壓20KV。
各組掃描電鏡照片如圖16～20所示。
表5本發(fā)明提取物對(duì)大鼠膝骨關(guān)節(jié)炎模型關(guān)節(jié)軟骨病變積分的影響

*P＜0.05，**P＜0.01，與模型對(duì)照組比較表6本發(fā)明提取物對(duì)大鼠膝骨關(guān)節(jié)炎模型關(guān)節(jié)滑膜病變積分的影響

**P＜0.01，與模型對(duì)照組比較由表5和圖11～15可見(jiàn)，模型對(duì)照組軟骨表層細(xì)胞增生，軟骨細(xì)胞排列紊亂，關(guān)節(jié)軟骨出現(xiàn)退行性病變。假手術(shù)組和模型對(duì)照組軟骨病變積分存在顯著差異(P＜0.01)。高、中劑量組病變減輕，軟骨病變積分顯著降低(分別P＜0.01，P＜0.05，與模型對(duì)照組比較)。
由表6和圖11～15可見(jiàn)，模型對(duì)照組關(guān)節(jié)囊滑膜組織不完整，滑膜上皮細(xì)胞增生肥大，滑膜出現(xiàn)明顯炎細(xì)胞浸潤(rùn)。假手術(shù)組和模型對(duì)照組滑膜病變積分存在顯著差異(P＜0.01)。高、中劑量組病變減輕，積分顯著降低(P＜0.01，與模型對(duì)照組比較)。
掃描電鏡檢測(cè)結(jié)果假手術(shù)組，軟骨表面光滑，似覆蓋一層無(wú)定形物質(zhì)，典型的壟形結(jié)構(gòu)基本趨于平行，無(wú)膠原暴露；模型組，無(wú)定形物質(zhì)有所缺損，表面有膠原暴露，排列較不整齊，軟骨面膠原集合成粗枝狀，并翻起出現(xiàn)裂縫；高劑量組，軟骨表面光滑，似覆蓋一層無(wú)定形物質(zhì)，壟形結(jié)構(gòu)較平行，無(wú)定形物質(zhì)有少量缺損，有少量膠原暴露；中劑量組，軟骨表面較不光滑，無(wú)定形物質(zhì)部分缺損，部分膠原暴露，壟形結(jié)構(gòu)排列不平行；低劑量組，軟骨表面無(wú)定形物質(zhì)部分缺損，有部分膠原暴露，壟形結(jié)構(gòu)排列紊亂，但較模型組有所改善。
上述檢測(cè)結(jié)果表明本發(fā)明提取物大鼠給藥后，與模型對(duì)照組相比，各劑量組形態(tài)優(yōu)于模型對(duì)照組，高、中劑量組有明顯改善。
權(quán)利要求
1.治療骨關(guān)節(jié)炎的骨碎補(bǔ)提取物，其中含有黃酮類(lèi)物質(zhì)，黃酮類(lèi)物質(zhì)中包含柚皮苷，在提取物中，黃酮類(lèi)物質(zhì)的含量在30重量％以上，并且柚皮苷的含量在黃酮類(lèi)物質(zhì)的30重量％以上，但少于100重量％。
2.根據(jù)權(quán)利要求1的提取物，其中黃酮類(lèi)物質(zhì)的含量在50重量％以上。
3.根據(jù)權(quán)利要求2的提取物，其中柚皮苷的含量在黃酮類(lèi)物質(zhì)中的90重量％以下。
4.根據(jù)權(quán)利要求1～3中任一項(xiàng)的提取物在制備治療骨關(guān)節(jié)炎的藥物中的應(yīng)用。
5.治療骨關(guān)節(jié)炎的藥物，其中至少含有根據(jù)權(quán)利要求1～3任一項(xiàng)的提取物作為有效成分。
6.根據(jù)權(quán)利要求5的藥物，為口服制劑。
全文摘要
治療骨關(guān)節(jié)炎的骨碎補(bǔ)提取物，其中含有黃酮類(lèi)物質(zhì)和多酚類(lèi)物質(zhì)，黃酮類(lèi)物質(zhì)中包含柚皮苷，在提取物中，黃酮類(lèi)物質(zhì)的含量在30重量％以上，并且柚皮苷的含量在黃酮類(lèi)物質(zhì)的30重量％以上，但少于100重量％。
文檔編號(hào)A61P19/00GK1733022SQ200410057489
公開(kāi)日2006年2月15日 申請(qǐng)日期2004年8月13日 優(yōu)先權(quán)日2004年8月13日
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