專利名稱：一種關(guān)節(jié)腔內(nèi)注射治療骨關(guān)節(jié)炎的雷公藤內(nèi)酯醇復(fù)方制劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及治療骨關(guān)節(jié)炎的注射制劑，具體是一種關(guān)節(jié)腔內(nèi)注射治療骨關(guān)節(jié)炎的雷公藤內(nèi)酯醇復(fù)方制劑。
背景技術(shù)：
骨關(guān)節(jié)炎(Osteoarthritis，骨關(guān)節(jié)炎)是以關(guān)節(jié)的軟骨退變和繼發(fā)性骨質(zhì)增生為特點(diǎn)的最常見(jiàn)慢性骨關(guān)節(jié)病，分為原發(fā)性和繼發(fā)性。在超過(guò)50歲以上人群中，骨關(guān)節(jié)炎在導(dǎo)致長(zhǎng)期殘疾的疾病中僅次于心血管疾病而排名第二。疾病調(diào)查顯示，我國(guó)骨關(guān)節(jié)炎的人群患病率為10％左右，60歲以上的老年人患病率高達(dá)50％，且隨著年齡的增加其患病率直線上升；在農(nóng)村的發(fā)生率為9.6％，在城市退休人群中為49％。近年來(lái)有關(guān)骨關(guān)節(jié)炎藥物治療的研究很多，新的藥物及治療手段不斷出現(xiàn)，但尚不能阻斷其病理性破壞過(guò)程的進(jìn)一步發(fā)展，更難以使病變的組織結(jié)構(gòu)得到修復(fù)。目前臨床治療仍只能以控制疼痛、減少殘疾、改善關(guān)節(jié)功能和提高生活質(zhì)量、避免藥物不良反應(yīng)為目的。
透明質(zhì)酸(hyaluronic acid，透明質(zhì)酸)是一種天然的線性粘多糖，在人體內(nèi)主要分布于眼睛、皮膚、軟骨、關(guān)節(jié)滑液等組織。透明質(zhì)酸是由葡萄糖醛酸和N-乙酞氨基葡萄糖的二糖單位反復(fù)交替連接而成的直鏈均聚糖，為陰離子型聚合物，具有高度的親水性和粘彈性。
目前臨床上通過(guò)關(guān)節(jié)腔內(nèi)注射的給藥方式，常規(guī)應(yīng)用透明質(zhì)酸治療骨關(guān)節(jié)炎。它的藥理作用主要在于補(bǔ)充關(guān)節(jié)腔內(nèi)富有粘彈性的關(guān)節(jié)液，促進(jìn)關(guān)節(jié)自身透明質(zhì)酸合成，抑制滑膜及滑膜下的痛覺(jué)感受器與感覺(jué)纖維的興奮性，達(dá)到顯著改善骨關(guān)節(jié)炎患者的運(yùn)動(dòng)障礙、關(guān)節(jié)疼痛、關(guān)節(jié)積液及晨僵等癥狀。
關(guān)節(jié)腔內(nèi)注入作為注射制劑的透明質(zhì)酸治療骨關(guān)節(jié)炎，尚存在不能完全緩解關(guān)節(jié)內(nèi)的炎癥反應(yīng)，難以促使關(guān)節(jié)軟骨損傷的修復(fù)等不足。所以只能減輕局部癥狀，長(zhǎng)期療效不佳，難以阻斷病理性破壞過(guò)程的進(jìn)一步發(fā)展和病變組織的再生修復(fù)。
雷公藤內(nèi)酯醇(triptolide，雷公藤內(nèi)酯醇)是雷公藤的主要有效成分之一。近期研究發(fā)現(xiàn)，它可以抑制導(dǎo)致骨關(guān)節(jié)炎軟骨破壞的細(xì)胞因子(IL-1α，IL-1β，TNF-α、IL-6)的表達(dá)與合成；抑制炎癥因子誘導(dǎo)的金屬蛋白酶、蛋白聚糖酶的表達(dá)；提高促進(jìn)軟骨修復(fù)的生物因子(IL-10等)的表達(dá)與合成；選擇性抑制COX-2表達(dá)和合成，以抑制IL-1α誘導(dǎo)的PEG2的生成，而對(duì)COX-1無(wú)影響。因而針對(duì)骨關(guān)節(jié)炎具有免疫抑制、抗炎止痛、軟骨保護(hù)、促進(jìn)軟骨再生修復(fù)等多重治療作用。
早期藥理和臨床試驗(yàn)表明，雷公藤內(nèi)酯醇具有免疫抑制、抗炎、抗生育及抗腫瘤等生物活性，故臨床曾將其用于類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、腎炎等自身免疫性疾病及惡性腫瘤的治療。然而，由于其給藥方法主要是全身用藥，療效劑量較大，毒副作用明顯，因此其臨床應(yīng)用受到了較大限制。雷公藤內(nèi)酯醇制劑急性毒性實(shí)驗(yàn)證明，小鼠靜脈注射的LD50＝0.8mg/kg，腹腔注射的LD50＝0.9mg/kg；亞急性毒性試驗(yàn)表明，犬，20μg/kg，每日靜注一次，連續(xù)7天，無(wú)毒性反應(yīng)發(fā)生；40μg/kg、80μg/kg，分別每日靜注一次，連續(xù)7天，則出現(xiàn)心臟、造血系統(tǒng)及胃腸道的可逆性毒性反應(yīng)。
應(yīng)用現(xiàn)代技術(shù)制備的復(fù)方雷公藤涂抹劑，旨在通過(guò)病變局部透皮吸收而達(dá)到治療目的。但由于其分子量較大，且不溶于水，因而藥物的組織滲透性差，局部吸收率低，并對(duì)皮膚有一定的刺激作用，故治療效果較差。
發(fā)明的內(nèi)容本發(fā)明可提供一種關(guān)節(jié)腔內(nèi)注射治療骨關(guān)節(jié)炎的雷公藤內(nèi)酯醇復(fù)方制劑，該復(fù)方制劑以凝膠液體，包括透明質(zhì)酸和殼聚糖或其衍生物溶液，與雷公藤內(nèi)酯醇的協(xié)同作用，通過(guò)關(guān)節(jié)腔內(nèi)注射的給藥方式，減少雷公藤內(nèi)酯醇的給藥劑量，降低其毒副作用，并獲得顯著治療效果。
本發(fā)明采用的技術(shù)方案，即一種關(guān)節(jié)腔內(nèi)注射治療骨關(guān)節(jié)炎的雷公藤內(nèi)酯醇復(fù)方制劑，包括濃度為1×10-4mg/ml～5×10-2mg/ml雷公藤內(nèi)酯醇溶液和凝膠液體，它們以1∶(1～9)的容積比混合，其中，所述凝膠液體為透明質(zhì)酸、殼聚糖或其衍生物溶液。
本發(fā)明上述復(fù)方制劑所選擇的配比關(guān)系的說(shuō)明1、影響雷公藤內(nèi)酯醇臨床應(yīng)用的主要原因?yàn)槎靖弊饔幂^大，其急性毒性實(shí)驗(yàn)證明，小鼠靜脈注射的LD50＝0.8mg/kg，腹腔注射的LD50＝0.9mg/kg；亞急性毒性試驗(yàn)表明，犬，20μg/kg，每日靜注一次，連續(xù)7天，無(wú)毒性反應(yīng)發(fā)生；40μg/kg、80μg/kg，分別每日靜注一次，連續(xù)7天，則出現(xiàn)心臟、造血系統(tǒng)及胃腸道的可逆性毒性反應(yīng)。
2、體外實(shí)驗(yàn)表明，雷公藤內(nèi)酯醇在100～600nM的濃度，甚至小于100nM的濃度時(shí)，均有明顯的抑制炎癥因子、金屬蛋白酶表達(dá)的作用，而且它們之間呈劑量相關(guān)性。
3、動(dòng)物實(shí)驗(yàn)表明，雷公藤內(nèi)酯醇在本發(fā)明所選濃度范圍內(nèi)，其復(fù)方制劑治療均有效，并且優(yōu)于單獨(dú)用透明質(zhì)酸或殼聚糖溶液及單用同劑量的雷公藤內(nèi)酯醇制劑。經(jīng)檢測(cè)證實(shí)，雷公藤內(nèi)酯醇復(fù)方制劑治療后關(guān)節(jié)液中IL-1β、TNF-α、MMP-3的含量低于不治療、單用透明質(zhì)酸及單用同劑量雷公藤內(nèi)酯醇治療后的關(guān)節(jié)液中上述細(xì)胞因子和酶的含量；關(guān)節(jié)軟骨中II型膠原、粘多糖含量均高于不治療、單用透明質(zhì)酸及單用同劑量雷公藤內(nèi)酯醇治療的關(guān)節(jié)軟骨中II型膠原、粘多糖的含量，與正常關(guān)節(jié)軟骨中II型膠原、粘多糖的含量接近；關(guān)節(jié)軟骨退變的mankin評(píng)分也低于單用兩者治療的上述評(píng)分，并與正常關(guān)節(jié)軟骨的上述評(píng)分接近。
4、臨床研究表明，用于關(guān)節(jié)腔內(nèi)注射治療骨關(guān)節(jié)炎的透明質(zhì)酸或殼聚糖溶液的濃度較大，治療效果一般較好。因此，它們與雷公藤內(nèi)酯醇溶液的容積比＞1∶1。透明質(zhì)酸具有緩釋、靶向作用，并可增強(qiáng)藥物的滲透性。因此已在臨床用作某些藥物的載體，比如潤(rùn)舒滴眼液。雷公藤內(nèi)酯醇濃度較大可增強(qiáng)其治療作用，但毒副作用亦隨之明顯。而在本發(fā)明的雷公藤內(nèi)酯醇濃度范圍內(nèi)，無(wú)毒副作用顯現(xiàn)，并且可以從多個(gè)環(huán)節(jié)上達(dá)到治療骨關(guān)節(jié)炎的作用。
上述復(fù)方制劑的制備方法在室溫下，將每毫克雷公藤內(nèi)酯醇先溶于0.5～1ml無(wú)水乙醇，再溶于0.5～1ml二甲基亞砜中，用生理鹽水稀釋至藥物治療濃度范圍；超濾除菌后，與無(wú)菌透明質(zhì)酸或殼聚糖或其衍生物溶液按需要比例均勻混合即得本發(fā)明復(fù)方注射制劑。
發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)及積極效果1、具有更好的免疫抑制、抗炎止痛作用，能夠有效的抑制關(guān)節(jié)內(nèi)炎癥因子IL-1、TNF-α、COX-2等的表達(dá)，同時(shí)阻斷炎癥因子誘導(dǎo)軟骨細(xì)胞及滑膜細(xì)胞產(chǎn)生MMPs、蛋白聚糖酶的途徑，并能夠吸附和減少關(guān)節(jié)液中炎癥因子，減輕骨關(guān)節(jié)炎早期癥狀。
2、通過(guò)透明質(zhì)酸對(duì)位于滑膜及滑膜下的痛覺(jué)感受器與感覺(jué)纖維的興奮性的抑制作用，達(dá)到早期緩解癥狀的目的。
3、補(bǔ)充外源性透明質(zhì)酸可促進(jìn)滑膜自身透明質(zhì)酸的合成，有利于關(guān)節(jié)軟骨修復(fù)，恢復(fù)關(guān)節(jié)液的粘彈性，增加機(jī)械保護(hù)作用，避免軟骨老化和磨損。
4、上調(diào)促進(jìn)軟骨修復(fù)的因子(IL-10等)的表達(dá)，促進(jìn)關(guān)節(jié)軟骨再生修復(fù)。
5、由于關(guān)節(jié)內(nèi)炎癥因子濃度的降低，使其對(duì)關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞合成I、III型膠原的促進(jìn)作用減弱，從而恢復(fù)關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞合成II型膠原、蛋白聚糖的功能，使關(guān)節(jié)軟骨逐漸再生修復(fù)。
6、透明質(zhì)酸、殼聚糖或其衍生物凝膠溶液能夠與雷公藤內(nèi)酯醇等藥物結(jié)合，并當(dāng)其凝膠溶液濃度增大時(shí)可形成網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)。因此制備兩者復(fù)合制劑，可使其中的雷公藤內(nèi)酯醇有效緩釋，達(dá)到延長(zhǎng)藥物作用時(shí)間，降低藥物的毒副作用。
本發(fā)明提供的關(guān)節(jié)腔內(nèi)注射治療骨關(guān)節(jié)炎的雷公藤內(nèi)酯醇復(fù)方制劑，能夠阻斷中、早期骨關(guān)節(jié)炎的病理性破壞過(guò)程，并且改善關(guān)節(jié)內(nèi)環(huán)境，促進(jìn)關(guān)節(jié)軟骨的再生修復(fù)，達(dá)到有效治療骨關(guān)節(jié)炎的目的。
上述復(fù)方制劑還可用于肩周炎、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎等其它關(guān)節(jié)炎的局部治療。
具體實(shí)施例方式
本發(fā)明技術(shù)效果通過(guò)以下的實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步說(shuō)明實(shí)施例1復(fù)方制劑配比的選擇試驗(yàn)證明，雷公藤內(nèi)酯醇的濃度在1×10-4mg/ml～5×10-2mg/ml范圍內(nèi)存在治療效果，并且濃度越高效果越好，但其上限濃度可能開始出現(xiàn)毒副作用；透明質(zhì)酸或殼聚糖或其衍生物溶液的加入可以降低毒副作用。試驗(yàn)證明，濃度為5×10-2mg/ml的雷公藤內(nèi)酯醇溶液與透明質(zhì)酸或殼聚糖或其衍生物溶液的最佳容積比為1∶7～9；濃度為1×10-4mg/ml的雷公藤內(nèi)酯醇溶液與透明質(zhì)酸或殼聚糖或其衍生物溶液的最佳容積比為1∶1～2。
另外需根據(jù)骨關(guān)節(jié)炎病變程度、炎癥反應(yīng)情況、關(guān)節(jié)液中透明質(zhì)酸的含量，決定雷公藤內(nèi)酯醇與透明質(zhì)酸或殼聚糖或其衍生物溶液的濃度和最佳容積比。
實(shí)施例2 制備方法1在常溫下，將每毫克雷公藤內(nèi)酯醇先溶于1ml無(wú)水乙醇中，再溶于0.5ml二甲基亞砜中，用生理鹽水稀釋至相應(yīng)濃度5×10-3mg/ml，用0.22μm的雙層濾膜過(guò)濾后，與羧甲基殼聚糖溶液按1∶9容積比例均勻混合，其中羧甲基殼聚糖溶液的配制過(guò)程是將每10g羧甲基殼聚糖溶于1升蒸餾水中，高溫高壓消毒(115℃)。殼聚糖還可以是低聚殼聚糖、羥基殼聚糖等。
制備方法2在常溫下，將每毫克雷公藤內(nèi)酯醇先溶于1ml無(wú)水乙醇中，再溶于0.5ml二甲基亞砜中，用生理鹽水稀釋至相應(yīng)濃度5×10-3mg/ml，用0.22μm的雙層濾膜過(guò)濾后，與透明質(zhì)酸按1∶8容積比例均勻混合。
實(shí)施例3 有關(guān)療效的動(dòng)物試驗(yàn)采用實(shí)施例2中制備方法1所得的復(fù)方制劑，在日本大耳白兔上進(jìn)行療效觀察。采用膝關(guān)節(jié)腔內(nèi)注射II型膠原酶法制作兔骨關(guān)節(jié)炎模型，采用實(shí)施例2中制備方法1所得的復(fù)方制劑進(jìn)行治療，每個(gè)膝關(guān)節(jié)0.4ml/次，1次/周，共4次。觀察結(jié)果如下1)治療4周后動(dòng)物休息時(shí)體位基本恢復(fù)正常，體重增長(zhǎng)趨勢(shì)大于生理鹽水注射組、單用透明質(zhì)酸及單用同等劑量的雷公藤內(nèi)酯醇治療組。
2)大體觀察和組織形態(tài)學(xué)上關(guān)節(jié)軟骨的退變程度均較生理鹽水組、單用透明質(zhì)酸及單用同等劑量的雷公藤內(nèi)酯醇治療組輕。
3)治療組關(guān)節(jié)軟骨中粘多糖含量均高于同期生理鹽水注射組、單用透明質(zhì)酸及單用同等劑量的雷公藤內(nèi)酯醇治療組，與正常組接近。
4)治療組關(guān)節(jié)軟骨中膠原總量及II型膠原含量均較正常關(guān)節(jié)軟骨為低，但高于生理鹽水注射組、單用透明質(zhì)酸及單用同等劑量的雷公藤內(nèi)酯醇治療組。
5)治療組關(guān)節(jié)液中的IL-1β、TNF-α、MMP-3含量低于生理鹽水注射組、單用透明質(zhì)酸及單用同等劑量的雷公藤內(nèi)酯醇治療組。
6)治療組關(guān)節(jié)軟骨退變的組織病理學(xué)評(píng)分(mankin評(píng)分)均低于同期單生理鹽水注射組、單用透明質(zhì)酸及單用同等劑量的雷公藤內(nèi)酯醇治療組，而且治療后4周的上述評(píng)分接近正常關(guān)節(jié)軟骨。
上述結(jié)果表明，較單用透明質(zhì)酸及單用同等劑量的雷公藤內(nèi)酯醇治療組，雷公藤內(nèi)酯醇與透明質(zhì)酸復(fù)合制劑在治療骨關(guān)節(jié)炎后4周內(nèi)，能更有效的抑制關(guān)節(jié)內(nèi)炎癥反應(yīng)，保護(hù)關(guān)節(jié)軟骨，促進(jìn)軟骨再生修復(fù)。
本發(fā)明制劑產(chǎn)生協(xié)同作用的機(jī)理為(1)抑制關(guān)節(jié)內(nèi)炎癥反應(yīng)；(2)抑制金屬蛋白酶和蛋白聚糖酶的表達(dá)，防止軟骨破壞；(3)增加軟骨中II型膠原及蛋白聚糖的含量；(4)補(bǔ)充外源性透明質(zhì)酸、殼聚糖或其衍生物，恢復(fù)關(guān)節(jié)液粘彈性；(5)透明質(zhì)酸、殼聚糖或其衍生物作為載體，具有緩釋、控釋的作用，從而減少雷公藤內(nèi)酯醇的毒副作用，并延長(zhǎng)了藥物作用時(shí)間。
文獻(xiàn)報(bào)道，關(guān)節(jié)腔注射殼聚糖或其衍生物溶液治療骨關(guān)節(jié)炎的療效，與應(yīng)用透明質(zhì)酸溶液的療效相當(dāng)。因此，雷公藤內(nèi)酯醇和透明質(zhì)酸復(fù)合制劑關(guān)節(jié)腔注射治療骨關(guān)節(jié)炎的療效應(yīng)優(yōu)于單用殼聚糖或其衍生物溶液的療效。
權(quán)利要求
1.一種關(guān)節(jié)腔內(nèi)注射治療骨關(guān)節(jié)炎的雷公藤內(nèi)酯醇復(fù)方制劑，包括濃度為1×10-4mg/ml～5×10-2mg/ml雷公藤內(nèi)酯醇和凝膠液體，它們以1∶(1～9)的容積比混合。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的關(guān)節(jié)腔內(nèi)注射治療關(guān)節(jié)炎的雷公藤內(nèi)酯醇復(fù)方制劑，其特征是所述凝膠液體為透明質(zhì)酸或殼聚糖或其衍生物溶液。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的關(guān)節(jié)腔內(nèi)注射治療關(guān)節(jié)炎的雷公藤內(nèi)酯醇復(fù)方制劑，其特征是濃度為5×10-2mg/ml雷公藤內(nèi)酯醇和凝膠液體以1∶(7～9)的容積比混合。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的關(guān)節(jié)腔內(nèi)注射治療關(guān)節(jié)炎的雷公藤內(nèi)酯醇復(fù)方制劑，其特征是濃度為1×10-4mg/ml的雷公藤內(nèi)酯醇與透明質(zhì)酸或殼聚糖或其衍生物溶液的容積比為1∶1～2。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的關(guān)節(jié)腔內(nèi)注射治療關(guān)節(jié)炎的雷公藤內(nèi)酯醇復(fù)方制劑，其特征是濃度為5×10-3mg/ml的雷公藤內(nèi)酯醇與透明質(zhì)酸或殼聚糖或其衍生物溶液的容積比為1∶7～9。
6.一種制備如權(quán)利要求1所述雷公藤內(nèi)酯醇復(fù)方制劑的方法，方法步驟為在室溫下，將每毫克雷公藤內(nèi)酯醇先溶于0.5～1ml無(wú)水乙醇，再溶于0.5～1ml二甲基亞砜中，用生理鹽水稀釋至相應(yīng)濃度；滅菌處理后與無(wú)菌透明質(zhì)酸或殼聚糖或其衍生物溶液按需要的容積比例均勻混合即得復(fù)方注射制劑。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種關(guān)節(jié)腔內(nèi)注射治療骨關(guān)節(jié)炎的雷公藤內(nèi)酯醇復(fù)方制劑，它包括濃度為1×10
文檔編號(hào)A61K31/58GK1864662SQ20061005435
公開日2006年11月22日 申請(qǐng)日期2006年6月12日 優(yōu)先權(quán)日2006年6月12日
發(fā)明者戴剛, 張衛(wèi)東, 楊柳 申請(qǐng)人:中國(guó)人民解放軍第三軍醫(yī)大學(xué)第一附屬醫(yī)院