專利名稱：人異體間質(zhì)干細(xì)胞(攜帶治療基因)的基因治療方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于干細(xì)胞基因工程和基因治療領(lǐng)域，具體涉及人異體間質(zhì)干細(xì)胞(攜帶治療基因)作為基因治療的靶細(xì)胞和載體，對(duì)人類的遺傳性疾病和后天獲得性疾病進(jìn)行基因治療，治愈人類的各種難治性疾病。
背景技術(shù)：
干細(xì)胞技術(shù)自從1998年科學(xué)家發(fā)現(xiàn)干細(xì)胞的多分化潛能后，干細(xì)胞的研究與應(yīng)用在美國的《科學(xué)》雜志的1999年世界十大科學(xué)成果中名列榜首，2000年再度入選世界十大科技進(jìn)展。科學(xué)家們發(fā)現(xiàn)，“取自人胚胎，胎盤，臍血或骨髓的干細(xì)胞可培育不同的人體細(xì)胞，組織或器官。這有望成為移植器官新的材料來源和細(xì)胞治療的基礎(chǔ)?！背酥猓梭w的干細(xì)胞有許多種類，由于它們的組織來源不同和自身生物學(xué)特性不一樣，許多實(shí)驗(yàn)室和臨床治療組，用它們來做基因治療的靶細(xì)胞，讓它們攜帶治療基因在人體的病變器官進(jìn)行治療性的目的基因表達(dá)。實(shí)驗(yàn)研究已證實(shí)有非常重要的臨床治療意義。這將有望在21世紀(jì)人們利用干細(xì)胞這一生物學(xué)特性，結(jié)合基因治療方法，攻克人類某些重大疾病，如癌癥，心腦血管疾病，老年性疾病，內(nèi)分泌和自身免疫性疾病等。
隨著生命科學(xué)的迅猛發(fā)展，相關(guān)學(xué)科的相互交叉滲透，使得干細(xì)胞的基因工程學(xué)方面有了突破性進(jìn)展，特別是干細(xì)胞的分離，純化，培養(yǎng)擴(kuò)增，性能研究，誘導(dǎo)分化等取得長足的進(jìn)步。干細(xì)胞是具有自我更新，高度增殖和多向分化潛能的細(xì)胞群體，干細(xì)胞可通過細(xì)胞分裂維持自身細(xì)胞群的大小，同時(shí)又可以進(jìn)一步分化成為各種不同的組織細(xì)胞，從而構(gòu)成機(jī)體的各種復(fù)雜的組織器官。隨著干細(xì)胞基因工程和技術(shù)的發(fā)展，以及干細(xì)胞自身具有的特性，人們能在體外大規(guī)模擴(kuò)增某些干細(xì)胞，有望利用干細(xì)胞來治療人類各種疾病，特別是基因治療浪潮掀起，給干細(xì)胞基因工程帶來了前所未有的發(fā)展勢(shì)頭。尤其是來自骨髓和臍帶或胎盤的間質(zhì)干細(xì)胞(Mesenchymal Stem Cell，MSC)是中胚層來源的具有多向分化潛能的干細(xì)胞，主要存在于全身結(jié)締組織和器官間質(zhì)中，以骨髓組織中含量最豐富，胎兒臍血亦可分離得到。間質(zhì)干細(xì)胞具有向骨細(xì)胞，軟骨細(xì)胞，肌腱細(xì)胞，肌細(xì)胞，神經(jīng)細(xì)胞，脂肪細(xì)胞和造血支持間質(zhì)細(xì)胞等分化的能力。同所有的干細(xì)胞一樣，骨髓間質(zhì)干細(xì)胞也具有自我更新能力和多向分化潛能，它雖然僅占骨髓單核細(xì)胞的0.001％-0.01％，卻有驚人的增殖能力和強(qiáng)大的自我更新能力，間質(zhì)干細(xì)胞還具有以下的特點(diǎn)和優(yōu)勢(shì)1.能在體外大批量擴(kuò)增培養(yǎng)，傳代至40-50代或擴(kuò)增109以上仍保持不分化的特性和不丟失其多向分化潛能；2.外源基因易于植入并整合到間質(zhì)干細(xì)胞的基因組中穩(wěn)定表達(dá)而不影響干細(xì)胞特性；3.外源基因的表達(dá)具有組織特異體，受所定位微環(huán)境的作用；4.間質(zhì)干細(xì)胞是未分化的原始細(xì)胞，不表達(dá)成熟的細(xì)胞抗原，異體注射免疫源性很弱，不發(fā)生異體排斥反應(yīng)；5.間質(zhì)干細(xì)胞具有自我更新能力，治療基因?qū)腴g質(zhì)干細(xì)胞后如果能長期表達(dá)，病人可終生受益；6.間質(zhì)干細(xì)胞具有向各系分化的能力，只要少數(shù)間質(zhì)干細(xì)胞轉(zhuǎn)染目的基因后，由其分化而成的細(xì)胞便可隨著血液循環(huán)分布到全身各部位，利于其攜帶的外源治療基因能更大限度地發(fā)揮治療作用；7.間質(zhì)干細(xì)胞無論在骨髓內(nèi)還是在循環(huán)或組織中，治療基因表達(dá)產(chǎn)物都能通過血液循環(huán)而達(dá)到靶器官，也能通過血腦屏障進(jìn)入腦循環(huán)；8.當(dāng)機(jī)體損傷或病變時(shí)，病變局部會(huì)誘發(fā)出信號(hào)，間質(zhì)干細(xì)胞會(huì)循著信號(hào)到達(dá)病變部位，釋放細(xì)胞因子和細(xì)胞生長因子或表達(dá)治療基因的產(chǎn)物，對(duì)局部病變起到治療和保護(hù)作用。由于這些優(yōu)勢(shì)和特點(diǎn)，使用間質(zhì)干細(xì)胞作為靶細(xì)胞和載體，為人類多種疾病的基因治療帶來新的希望。
基因治療21世紀(jì)是生命科學(xué)的世紀(jì)，基因治療的興起和人類基因組計(jì)劃的全面實(shí)施已有力地說明了這一點(diǎn)。2000年6月26日獲得了人類基因組計(jì)劃的“工作框架圖”。2003年4月14日人類基因組序列繪制成功，成為人類基因組計(jì)劃的一個(gè)重要里程碑?；蚪M計(jì)劃的成功為基因治療奠定了堅(jiān)實(shí)的基礎(chǔ)。基因治療的基本原理來源于人類對(duì)自身遺傳機(jī)制的了解，基因作為機(jī)體內(nèi)的遺傳的基本單位，不僅可以決定人們的相貌，高矮，膚色，而且它的異常變化將會(huì)不可避免的導(dǎo)致各種疾病。某些缺陷的基因可能會(huì)遺傳給他們的后代(血友病，高血壓，糖尿病等)，而有些則不能遺傳。基因治療的最早提出是針對(duì)單基因缺陷的遺傳病，目的在于用一個(gè)正常的基因來代替或置換缺陷的基因或者補(bǔ)救缺陷基因。
1990年美國國立衛(wèi)生院(NIH)的Blase RM和Anderson WF用ADA(腺苷酸脫氨酶)基因治愈了一位ADA基因缺陷導(dǎo)致嚴(yán)重免疫缺損(SCID)的4歲女孩，我國1991年由復(fù)旦大學(xué)生命科學(xué)院薛京倫教授領(lǐng)導(dǎo)的課題組，用基因治療方法對(duì)兩例XIII對(duì)凝血因子缺失的患者進(jìn)行基因治療，取得可喜的成績，使世界各國都掀起研究基因治療的熱潮。至今，基因治療的研究內(nèi)容也從單基因的遺傳病擴(kuò)大到多基因的腫瘤，艾滋病，心血管病，神經(jīng)系統(tǒng)疾病，自身免疫性疾病和內(nèi)分泌和老年性疾病。
載體技術(shù)基因治療方案大部分都包括相輔相成的三個(gè)部分治療基因或其它核酸(如RNA分子或合成的寡核苷酸)選擇；可攜帶治療基因進(jìn)入靶細(xì)胞的載體；治療基因在靶細(xì)胞，靶組織中的表達(dá)調(diào)控。如何將精心挑選的治療基因?qū)塍w內(nèi)，穿過細(xì)胞膜，進(jìn)入細(xì)胞核獲得表達(dá)。這是基因治療成敗的關(guān)鍵。無論是體內(nèi)還是體外途徑的基因轉(zhuǎn)移都需要一種安全，無毒，高效表達(dá)的工具來攜帶外源基因進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)。這種工具被稱之為載體(Vector)。理想的載體應(yīng)具有以下條件易獲得高滴度的純品；可以穩(wěn)定，高效的重組體內(nèi)非增殖狀態(tài)的細(xì)胞；可以長期穩(wěn)定地表達(dá)外源基因而不會(huì)引起細(xì)胞毒性、感染或免疫應(yīng)答；能特異地識(shí)別靶組織和在靶細(xì)胞內(nèi)表達(dá)外源基因，包括藥理學(xué)和生理學(xué)上的調(diào)控基因。至今，還沒有一種載體系統(tǒng)適用于所有的基因治療方案。目前，已經(jīng)建立了多種基因轉(zhuǎn)染方法，其中包括化學(xué)的，物理的，以及生物學(xué)的方法(如電穿孔，脂質(zhì)體和基因槍，病毒載體和非病毒載體，病毒載體有腺病毒載體和腺相關(guān)病毒載體及其它病毒載體)。本發(fā)明選擇腺相關(guān)病毒作為間質(zhì)干細(xì)胞的轉(zhuǎn)染體。腺相關(guān)病毒(Adeno-Associated Virus，AAV)是一個(gè)缺陷的非致病性的單鏈DNA病毒，其復(fù)制需要輔助病毒的共感染，沒感染時(shí)，野生型AAV優(yōu)先整合到19q 13.3處潛伏存在，直到被輔助病毒“拯救”出來。AAV進(jìn)行位點(diǎn)特異性的整合需要基因末端的反向重復(fù)序列(Inverted Terminal Repeat，ITR)與非結(jié)構(gòu)蛋白R(shí)ep78和Rep68共同存在。AAV適用于基因治療的特性包括沒有證明對(duì)人體有致病性；廣泛的宿主和組織范圍，可穩(wěn)定地整合入細(xì)胞內(nèi)并穩(wěn)定的表達(dá)外源基因，在實(shí)驗(yàn)猴子中已觀察rAAV表達(dá)持續(xù)5年；由于ITR的存在，插入基因引起突變的危險(xiǎn)性低；由于缺乏病毒基因，因而不會(huì)引起機(jī)體對(duì)載體的免疫應(yīng)答，所以用rAAV載體與間質(zhì)干細(xì)胞進(jìn)行轉(zhuǎn)染，將有效的治療基因轉(zhuǎn)染間質(zhì)干細(xì)胞，間質(zhì)干細(xì)胞作為基因治療的靶細(xì)胞，攜帶目的基因到達(dá)靶組織發(fā)揮治療作用。如果用DNA質(zhì)?；騌NA分子來轉(zhuǎn)染干細(xì)胞，需要提高轉(zhuǎn)染率。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明采用干細(xì)胞基因工程技術(shù)和基因治療方法，結(jié)合動(dòng)物細(xì)胞大規(guī)模培養(yǎng)工程技術(shù)，將治療基因?qū)氪笠?guī)模培養(yǎng)的人異體間質(zhì)干細(xì)胞中，使人異體間質(zhì)干細(xì)胞(攜帶治療基因)作為基因治療的靶細(xì)胞載體，對(duì)人類的遺傳性疾病和后天獲得性疾病進(jìn)行基因治療，徹底治愈人類的各種難治性疾病。
間質(zhì)干細(xì)胞(攜帶基因治療)基因治療的意義基于間質(zhì)干細(xì)胞的更新增殖能力，基因轉(zhuǎn)染的間質(zhì)干細(xì)胞基因治療與傳統(tǒng)的基因治療相比有明顯的優(yōu)勢(shì)?；蜣D(zhuǎn)染的間質(zhì)干細(xì)胞基因治療包括以下幾個(gè)靶標(biāo)1.轉(zhuǎn)染間質(zhì)干細(xì)胞的潛能——以間質(zhì)干細(xì)胞為靶標(biāo)，間質(zhì)干細(xì)胞的某些生物學(xué)特性可因?yàn)檗D(zhuǎn)入新的基因而發(fā)生改變。成人組織中分離出的間質(zhì)干細(xì)胞可能會(huì)因?yàn)闄C(jī)體年齡的問題，遺傳性或后天獲得性疾病等原因而使其重建受損組織或治療效果受到影響，導(dǎo)入轉(zhuǎn)錄基因或相關(guān)的酶基因進(jìn)行轉(zhuǎn)染是一種有效的途徑來維持，增強(qiáng)或抑制干細(xì)胞增殖分化的能力。2.改善器官的性能——以間質(zhì)干細(xì)胞的子代細(xì)胞為靶標(biāo)，導(dǎo)入間質(zhì)干細(xì)胞的基因可隨著干細(xì)胞的分化傳給子代細(xì)胞，由于基因轉(zhuǎn)染的間質(zhì)干細(xì)胞重建了某一組織后使插入的基因在這一組織中持續(xù)表達(dá)一生。如對(duì)具有遺傳缺陷的組織，特別是造血系統(tǒng)的遺傳性缺陷，或心血管疾病，糖尿病等，可通過基因轉(zhuǎn)染的間質(zhì)干細(xì)胞進(jìn)行治療。3.加快組織重建——利用間質(zhì)干細(xì)胞的增殖和分化能力重建受損細(xì)胞，如用間質(zhì)干細(xì)胞和造血干細(xì)胞重建骨髓造血系統(tǒng)，間質(zhì)干細(xì)胞在骨和軟骨受損處重建，亦可以通過轉(zhuǎn)染治療基因隨著受損或病變處誘發(fā)的信號(hào)，到達(dá)病變部位和受損區(qū)，釋放，表達(dá)轉(zhuǎn)錄治療基因，對(duì)病變和受損部位進(jìn)行治療。此外，機(jī)體自身修復(fù)過程可由于組織嚴(yán)重的損傷，疾病或老年化問題而難以實(shí)現(xiàn)?；蜣D(zhuǎn)染的間質(zhì)干細(xì)胞以促進(jìn)有絲分裂，對(duì)負(fù)調(diào)節(jié)因子進(jìn)行抑制或影響特定基因的原位表達(dá)等方式加快被延遲的組織重建過程。間質(zhì)干細(xì)胞基因治療的意義除了上述外，最重要意義是間質(zhì)干細(xì)胞能被轉(zhuǎn)染和導(dǎo)入廣泛具有治療的基因，作為靶細(xì)胞攜帶這些治療基因，執(zhí)行對(duì)各種人類疾病(如癌癥，心血管病，神經(jīng)系統(tǒng)疾病，自身免疫性疾病，內(nèi)分泌和老年性疾病等)的全方位的基因治療，克服目前基因治療所遇到的種種難題。基于間質(zhì)干細(xì)胞的治療是癌癥研究中一個(gè)重要的領(lǐng)域，研究者正在設(shè)計(jì)更多的方法，以實(shí)現(xiàn)將原于干細(xì)胞的特殊細(xì)胞鎖定到特定癌細(xì)胞上，從而直接將可破壞或修飾癌細(xì)胞的藥物送到癌細(xì)胞。這一方面，更多是直接將治療基因轉(zhuǎn)染間質(zhì)干細(xì)胞，以間質(zhì)干細(xì)胞作為靶細(xì)胞將按照間質(zhì)干細(xì)胞自身生物學(xué)的特征，一方面將治療基因在局部及病變組織釋放表達(dá)起到治療作用，另一方面，間質(zhì)干細(xì)胞自身的分化潛能和增殖能力，其子代的細(xì)胞會(huì)不斷地表達(dá)治療基因，起到長效的治療作用。
某些疾病是由于多基因平衡失調(diào)所至，因此，在治療上采用單一基因的方法不能起到很好的治療效果。用間質(zhì)干細(xì)胞作為基因轉(zhuǎn)染的載體，可分別轉(zhuǎn)染多種治療基因，用同一載體，轉(zhuǎn)染不同治療基因，同時(shí)治療病患，會(huì)起到十分滿意的效果，如癌癥的病患就可以采用這一方法，筆者已在另一申請(qǐng)的專利《癌癥的多基因綜合治療》中提到了關(guān)于單一基因治療和多基因的綜合治療療效的比較。多基因的綜合治療比單一基因的治療的效果明顯增強(qiáng)。在該專利中筆者使用rAAV作載體，同時(shí)用三組治療基因，實(shí)施綜合性基因治療。這一方法的理論基礎(chǔ)是在于癌癥的發(fā)病機(jī)制是多基因的平衡失調(diào)所至，腫瘤的發(fā)生過程中的癌基因的得能，抑制癌基因的失能，加上癌癥轉(zhuǎn)移基因的得能和癌癥轉(zhuǎn)移抑制基因失能的綜合因素失調(diào)，導(dǎo)致癌變，最后演變成癌癥的發(fā)生，如果治療無效，最終導(dǎo)致癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移，耗盡機(jī)能生命體能而死亡。因此，利用間質(zhì)干細(xì)胞作為對(duì)癌癥治療的靶細(xì)胞時(shí)，可實(shí)施多基因綜合治療方案，同時(shí)分別轉(zhuǎn)染經(jīng)精心挑選的基因，組成綜合治療的相關(guān)藥物，對(duì)癌癥實(shí)施多方位的綜合基因治療。組合搭配的治療基因可以從這幾方面著手1.增強(qiáng)機(jī)體免疫功能基因；2.直接殺死癌細(xì)胞基因；3.抑制癌癥轉(zhuǎn)移的基因；4.反義核苷；5.增強(qiáng)機(jī)體抗癌藥物的耐藥性基因和細(xì)胞因子基因。經(jīng)過精心科學(xué)的選擇，組合成最有效的治療方案。對(duì)艾滋病的治療亦可以采用多基因的綜合治療，將有效殺死HIV病毒的基因和增強(qiáng)機(jī)體免疫能力的基因組合，分別轉(zhuǎn)染間質(zhì)干細(xì)胞，從幾個(gè)方面實(shí)施對(duì)HIV的患者進(jìn)行基因綜合治療。除上述外，其它由于多基因平衡失調(diào)所致疾病，也可以用基因綜合治療的方案。
人異體間質(zhì)干細(xì)胞(攜帶治療基因)產(chǎn)品的制備工藝異體的種子間質(zhì)干細(xì)胞進(jìn)行工作庫的放大培養(yǎng)，然后按一定的細(xì)胞數(shù)目接種在反應(yīng)器(發(fā)酵罐)或轉(zhuǎn)瓶中進(jìn)行懸浮或貼壁培養(yǎng)。培養(yǎng)介質(zhì)中除增殖間質(zhì)細(xì)胞的細(xì)胞因子和細(xì)胞生長因子外，促分化的細(xì)胞因子和細(xì)胞生長因子一律不用。產(chǎn)品制備過程1.間質(zhì)干細(xì)胞的發(fā)酵罐或轉(zhuǎn)瓶大規(guī)模培養(yǎng)；2.質(zhì)粒DNA、核酸、RNA分子或rAAV的轉(zhuǎn)染(其它病毒載體或非病毒載體進(jìn)行轉(zhuǎn)染)；3.細(xì)胞的收集和純化；4.安全性檢測(cè)后包裝儲(chǔ)存。(發(fā)酵罐大規(guī)模培養(yǎng)詳細(xì)過程見如下)取1.5×105/mL量的工作庫種子間質(zhì)干細(xì)胞接種于50L的特殊發(fā)酵罐中，接種前培養(yǎng)基的pH值用二氧化碳來校正，發(fā)酵罐預(yù)熱至37℃時(shí)開始接種，培養(yǎng)介質(zhì)是無血清或血清培養(yǎng)基，發(fā)酵罐的攪拌速度約100-300r/min，不得大于350r/min，攪拌葉輪的切片應(yīng)光滑平整，不能有鋒尖的葉面，避免攪拌時(shí)損傷培養(yǎng)細(xì)胞，攪拌的目的是保持細(xì)胞均勻呈懸浮狀態(tài)生長，細(xì)胞的培養(yǎng)過程中的氧氣，二氧化碳，pH值，葡萄糖濃度及氨濃度等參數(shù)的變化，隨時(shí)調(diào)整和補(bǔ)充介質(zhì)。每天觀察細(xì)胞生長狀態(tài)及檢測(cè)生長密度。當(dāng)細(xì)胞長到80％的罐內(nèi)培養(yǎng)密度時(shí)，開始進(jìn)行治療基因的轉(zhuǎn)染，治療基因可以是質(zhì)粒DNA、核酸、RNA分子，轉(zhuǎn)染過程相對(duì)簡單(主要加氯化鈣或其它物質(zhì)增加細(xì)胞膜的通透性，質(zhì)粒DNA易于吸收入細(xì)胞內(nèi))，但轉(zhuǎn)染率比較低。用病毒載體的過程相對(duì)復(fù)雜，特別是腺相關(guān)病毒載體，至少要2-3天的共轉(zhuǎn)染過程才能比較完全地轉(zhuǎn)染進(jìn)入間質(zhì)干細(xì)胞內(nèi)，在2-3天的轉(zhuǎn)染過程中，發(fā)酵罐的攪拌速度和次數(shù)應(yīng)嚴(yán)格按照預(yù)定的程序進(jìn)行，保持每小時(shí)輕微的攪拌次數(shù)，讓細(xì)胞能立即轉(zhuǎn)染，使細(xì)胞不會(huì)貼壁生長，一旦完成轉(zhuǎn)染過程后，陽性比率達(dá)到90％以上時(shí)，及時(shí)收集細(xì)胞。常規(guī)細(xì)胞收集方法是利用反應(yīng)器(發(fā)酵罐)中的濾膜排放系統(tǒng)，將發(fā)酵罐內(nèi)培養(yǎng)液放去80％左右，大約20L的培養(yǎng)液，或用過濾的方法濾去培養(yǎng)液，留下5L的細(xì)胞混合液，在洗脫液洗脫下，將收集到的細(xì)胞混合液和洗脫液一起經(jīng)過離心收集沉淀的細(xì)胞層，所有收集，測(cè)試安全性生物特性后，進(jìn)行分瓶罐裝，再存入液氮中(逐步降溫后)保存，保證產(chǎn)品始終保持最佳的生物活性。以上的生產(chǎn)工藝已日益完善，特別是發(fā)酵罐技術(shù)已有突破性進(jìn)展，使干細(xì)胞的大規(guī)模培養(yǎng)變成現(xiàn)實(shí)。
權(quán)利要求
1.人異體間質(zhì)干細(xì)胞包括骨髓間質(zhì)干細(xì)胞或胎盤，臍血及其它組織的間質(zhì)干細(xì)胞，經(jīng)過放大擴(kuò)增(大規(guī)模)培養(yǎng)，采用基因(質(zhì)粒DNA、RNA分子或病毒載體和非病毒載體所攜帶的治療基因)轉(zhuǎn)染技術(shù)將治療基因?qū)腴g質(zhì)干細(xì)胞中，間質(zhì)干細(xì)胞作為基因治療的靶細(xì)胞和載體，讓治療基因通過自身分化表達(dá)或子代細(xì)胞的表達(dá)，對(duì)患者實(shí)施有目的的基因治療。
2.人異體間質(zhì)干細(xì)胞(攜帶治療基因)，是已導(dǎo)入了質(zhì)粒DNA、RNA分子、和病毒載體(rAV，rAAV或其它病毒)或非病毒載體。在治療過程中間質(zhì)干細(xì)胞扮演了雙重載體的角色，它即攜帶了病毒的載體(已重組治療基因)，且自身也作為載體轉(zhuǎn)運(yùn)治療基因。
3.權(quán)利要求人異體間質(zhì)干細(xì)胞(攜帶治療基因)的基因治療方法，可實(shí)施單一基因治療，也可以實(shí)施多基因綜合治療(特別是針對(duì)癌癥等多基因失調(diào)病變的基因治療)。多基因綜合治療是指用同一種間質(zhì)干細(xì)胞轉(zhuǎn)染不同的治療基因。
4.權(quán)利要求人異體間質(zhì)干細(xì)胞所攜帶的治療基因，是指對(duì)人類疾病(包括各種類型的癌癥，心腦血管疾病，神經(jīng)系統(tǒng)疾病，內(nèi)分泌和自身免疫性疾病，血液系統(tǒng)疾病，遺傳性疾病)有治療作用的基因。
5.權(quán)利要求所述的人異體間質(zhì)干細(xì)胞(攜帶治療基因)作為治療基因的轉(zhuǎn)染載體，取已培養(yǎng)至第5-8代以下的細(xì)胞做種子細(xì)胞，做起始培養(yǎng)(10代以下的間質(zhì)干細(xì)胞生長最旺盛，活性最佳)。
6.權(quán)利要求人異體間質(zhì)干細(xì)胞(攜帶治療基因)的基因治療方法，基因治療藥物的包裝是保護(hù)劑加上異體間質(zhì)干細(xì)胞(攜帶治療基因)以水劑的形式保存在-180℃的液氮中，降溫過程中以每分鐘降低1-2度為宜(包括出廠臨床使用前均應(yīng)在-180℃低溫條件中，以確保該產(chǎn)品的生物活性)。
7.權(quán)利要求人異體間質(zhì)干細(xì)胞(攜帶治療基因)的基因治療方法，病人的給藥途徑靜脈、動(dòng)脈注射，局部注射，肌肉注射，臟器內(nèi)注射，瘤體內(nèi)注射(如果不是肺部疾病，盡量避開靜脈注射，減少干細(xì)胞在肺部的凋亡)。
8.權(quán)利要求人異體間質(zhì)干細(xì)胞(攜帶治療基因)的基因治療方法的受試者為人。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種人異體間質(zhì)干細(xì)胞(MSCs攜帶治療基因)的基因治療方法。用人異體間質(zhì)干細(xì)胞作基因治療的靶細(xì)胞和載體，通過基因轉(zhuǎn)染技術(shù)，將治療的目的基因?qū)腴g質(zhì)干細(xì)胞內(nèi)，使間質(zhì)干細(xì)胞自身或分化后的后代細(xì)胞表達(dá)治療基因的產(chǎn)物，達(dá)到基因治療的目的。人異體間質(zhì)干細(xì)胞(攜帶治療基因)的基因治療方法可以是單基因?qū)嵤┓桨?，也可以是多基因綜合治療，稱之為“間質(zhì)干細(xì)胞(攜帶治療基因)的多基因綜合治療方法”。
文檔編號(hào)A61P5/00GK1872344SQ20051002634
公開日2006年12月6日 申請(qǐng)日期2005年6月1日 優(yōu)先權(quán)日2005年6月1日
發(fā)明者張?jiān)聘? 裘建英, 董西銀 申請(qǐng)人:上海二醫(yī)新生基因科技有限公司