專利名稱：：用二乙烯基砜交聯(lián)透明質(zhì)酸的方法
背景技術(shù)：
：本發(fā)明涉及一種制備用于化妝品、生物醫(yī)學和制藥應(yīng)用的改性透明質(zhì)酸(HA)、特別是交聯(lián)的HA的方法。透明質(zhì)酸(HA)是屬于非硫酸化糖胺聚糖類別的天然和線性碳水化合物高分子。其由β-1，3-N-乙?；咸前泛挺?1，4-葡糖醛酸重復(fù)的二糖單元組成，分子量(MW)高達6MDa。HA存在于透明軟骨、滑液關(guān)節(jié)流體、和皮膚組織(真皮和表皮二者)中。HA可以從天然組織包括脊椎動物的結(jié)締組織中、從人臍帶中和從雞冠中提取。但是，目前優(yōu)選通過微生物方法制備HA，以使傳播傳染物的潛在風險最小化，和增加產(chǎn)品均勻性、質(zhì)量和可用性(WO03/0175902、Novozymes)。已確認了體內(nèi)HA的許多功能。其在生物有機體中起到重要的功能，作為用于許多組織如皮膚、腱、肌肉和軟骨的細胞的機械載體。HA參予到關(guān)鍵的生物過程中，如組織的潤濕，和潤滑過程。也懷疑其在大量生理機能中起作用，如粘附、成長、細胞運動性、癌癥、血管發(fā)生、和創(chuàng)傷愈合。由于HA的獨特物理與生物性能(包括粘彈性、生物相容性、生物降解性)，在化妝品、眼科學、風濕病學、給藥、創(chuàng)傷愈合和組織工程之內(nèi)的寬范圍現(xiàn)有與發(fā)展中的應(yīng)用中使用了HA。HA在一些這些應(yīng)用中的用途受限于這樣的事實，HA在室溫、即約20℃下溶于水，其被體內(nèi)的透明質(zhì)酸酶快速降解，且其難以加工成生物材料。由此，已提出了HA的交聯(lián)，由此改進HA的物理與機械系能和其體內(nèi)停留時間。US4,582,865(BiomatrixInc.)描述了HA的交聯(lián)凝膠的制備，單獨地或者與其它親水性聚合物混合地，使用二乙烯基砜(DVS)作為交聯(lián)劑。利用多官能環(huán)氧化物制備交聯(lián)的HA或其鹽公開于EP0161887B1。用于通過共價鍵交聯(lián)HA的其它二-或多-官能試劑包括甲醛(U.S.4,713,448、BiomatrixInc.)，聚氮丙啶(WO03/089476A1、GenzymeCorp.)，L-氨基酸或L-氨基酯(WO2004/067575、BiosphereS.P.A.)。也已報道了碳二亞胺來交聯(lián)HA(US5,017,229、GenzymeCorp.；US6,013,679、AnikaResearch，Inc)。US4,957,744中公開了用脂肪醇全部或部分交聯(lián)的HA的酯，和這種偏酯與無機或有機堿的鹽。發(fā)明概述本發(fā)明所要解決的問題是如何制備具有改進的性質(zhì)的基于透明質(zhì)酸的水凝膠，如更高的均質(zhì)性、增強的柔軟性、和/或更容易的可注射性。通過本發(fā)明的方法制得的交聯(lián)的凝膠，相對于標準DVS交聯(lián)的HA-水凝膠，顯示增強的均質(zhì)性和增強的柔軟性。如實施例中所示，由本發(fā)明方法獲得的凝膠也更容易通過注射器注射。由此，一方面，本發(fā)明涉及一種制備包含由二乙烯基砜(DVS)交聯(lián)的透明質(zhì)酸或其鹽的水凝膠的方法，所述方法包括以下步驟(a)提供透明質(zhì)酸或其鹽的堿性溶液；(b)將DVS加到步驟(a)的溶液中，由此用DVS交聯(lián)透明質(zhì)酸或其鹽以形成凝膠；(c)用緩沖劑處理步驟(b)的凝膠，其中凝膠溶脹且形成包含由DVS交聯(lián)的透明質(zhì)酸或其鹽的水凝膠。第二方面，本發(fā)明涉及一種包含由二乙烯基砜(DVS)交聯(lián)的透明質(zhì)酸或其鹽的水凝膠，其均質(zhì)性足以用穩(wěn)定注射力以12.5mm/min的速度在55mm的距離之上通過27G1/2針從1mL注射器中注射，該注射力在注射的最初40秒鐘之后、和直到注射器清空，變化不超過約5牛頓(N)，優(yōu)選地不超過約4N，更優(yōu)選3N、2N，或者最優(yōu)選地不超過約1N。第三方面，本發(fā)明涉及一種組合物，其包含第二方面中所定義的水凝膠和活性成分，優(yōu)選地該活性成分是藥理學活性劑。本發(fā)明的第四方面涉及藥物組合物，其包含有效量的第二方面中所定義的水凝膠，以及可藥用載體、賦形劑或稀釋劑。第五方面涉及藥物組合物，其包含有效量的第二方面中所定義的水凝膠作為媒介物(vehicle)，以及藥理學活性劑。第六方面涉及化妝用品(cosmeticarticle)，其包含作為活性成分的有效量的第二方面中所定義的水凝膠，或者第三、第四、或第五方面任一項中所定義的組合物。第七方面，本發(fā)明涉及衛(wèi)生、醫(yī)療或外科用品，其包含第二方面中所定義的水凝膠，或者第三、第四、或第五方面任一項中所定義的組合物；優(yōu)選地該用品為尿布、衛(wèi)生巾、外科紗布(surgicalsponge)、創(chuàng)傷愈合紗布(woundhealingsponge)、或者繃帶(bandaid)或其它創(chuàng)傷敷料(wounddressingmaterial)中所含的一部分。重要的方面涉及藥物膠囊或微膠囊，其包含第二方面中所定義的水凝膠，或者第三、第四、或第五方面任一項中所定義的組合物。許多方面涉及第二方面中所定義的水凝膠或者第三、第四、或第五方面任一項中所定義的組合物的用途，用于制備治療骨關(guān)節(jié)炎、癌癥的藥物，制備眼科治療(ophtalmologicaltreatment)用藥物，制備治療創(chuàng)傷的藥物，制備血管發(fā)生用藥物，制備治療脫發(fā)(hairloss)或禿頂(baldness)的藥物，制備保濕劑或化妝品(cosmetic)，或者用于美容處理(cosmetictreatment)。定義本文中所使用的術(shù)語“透明質(zhì)酸”含義為由D-葡糖醛酸和N-乙?；?D-葡糖胺的殘基構(gòu)成的具有不同分子量的酸性多糖，其天然地存在于細胞表面中，脊椎動物的結(jié)締組織的堿性細胞外物質(zhì)中，關(guān)節(jié)的滑液中，眼睛的內(nèi)延髓流體中，人臍帶組織中和雞冠中。術(shù)語“透明質(zhì)酸”實際上經(jīng)常用于表示全系列的多糖，其具有交替的D-葡糖醛酸和N-乙?；?D-葡糖胺的殘基，以及變化的分子量或者甚至其降解部分，且其由此似乎使用復(fù)數(shù)形式的“透明質(zhì)酸”更準確。但是，該說明書中仍然使用單數(shù)形式；另外，經(jīng)常使用“HA”代替該集合術(shù)語?！巴该髻|(zhì)酸”在本文中定義為由交替的β-1，4和β-1，3糖苷鍵連接在一起的N-乙酰基葡糖胺(GlcNAc)和葡糖醛酸(GlcUA)的重復(fù)二糖單元組成的非硫酸化糖胺聚糖。透明質(zhì)酸也稱為乙酰透明質(zhì)酸(hyaluronan)、透明質(zhì)酸鹽、或HA。術(shù)語乙酰透明質(zhì)酸和透明質(zhì)酸在本文中也可交換地使用。公雞冠是乙酰透明質(zhì)酸的重要商用原料。微生物是替換的原料。US4,801,539公開了用于制備透明質(zhì)酸的發(fā)酵方法，包括獸瘟鏈球菌(Streptococcuszooepidemicus)的菌株，所報道的產(chǎn)量為約3.6g透明質(zhì)酸/升。歐洲專利EP0694616公開了利用改進的獸瘟鏈球菌菌株的發(fā)酵方法，所報道的產(chǎn)量為約3.5g透明質(zhì)酸/升。如WO03/054163(Novozymes)中所公開的那樣，其全部內(nèi)容引入本文，可以在例如格蘭氏陽性(Gram-positive)芽孢桿菌宿主中重組地制得透明質(zhì)酸或其鹽。已描述了來自眷椎動物、細菌病原體和海藻病毒的乙酰透明質(zhì)酸合酶(DeAngelis、P.L.、1999、Cell.MoI.LifeSci.56670-682)。WO99/23227公開了似馬鏈球菌中的GroupI透明質(zhì)酸鹽合酶。WO99/51265和WO00/27437描述了Pasturellamultocida中的GroupII透明質(zhì)酸合酶。Ferretti等公開了釀膿鏈球菌的透明質(zhì)酸合酶，其由三種基因hasA、hasB、和hasC組成，其分別編碼透明質(zhì)酸合酶、UDP葡萄糖脫氫酶、和UDP-葡萄糖焦磷酸化酶(Proc.Natl.Acad.Sci.USA.98，4658-4663，2001)。WO99/51265描述了具有似馬鏈球菌乙酰透明質(zhì)酸合酶的編碼區(qū)域的核酸片段。由于重組的芽孢桿菌屬細胞的乙酰透明質(zhì)酸直接表達到培養(yǎng)基，可以采用簡單的方法將乙酰透明質(zhì)酸從培養(yǎng)基中分離出來。首先，將芽孢桿菌屬細胞和細胞碎片從培養(yǎng)基中物理去除。如果需要的話，可以首先將培養(yǎng)基稀釋以降低介質(zhì)的粘度。用于從培養(yǎng)基中除去細胞的許多方法是本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的，如離心或微濾。如果需要的話，隨后可以將剩余的上清液過濾，例如通過超濾進行過濾，以將小分子污染物從乙酰透明質(zhì)酸中濃縮和除去。除去細胞和細胞碎片之后，可以通過已知的機理從介質(zhì)中進行簡單地沉淀乙酰透明質(zhì)酸。可以采用鹽、醇、或鹽與醇的組合將乙酰透明質(zhì)酸從濾液中沉淀。一旦變?yōu)槌恋砦镏?，可以通過物理方法容易地將乙酰透明質(zhì)酸從溶液中分離。可以采用本領(lǐng)域已知的蒸發(fā)技術(shù)將乙酰透明質(zhì)酸干燥或從濾液中濃縮，如凍干法或噴霧干燥法。宿主細胞優(yōu)選實施方式涉及第一方面的方法，其中重組地制得透明質(zhì)酸或其鹽，優(yōu)選地通過格蘭氏陽性細菌或宿主細胞，更優(yōu)選地通過芽孢桿菌屬的細菌。該宿主細胞可以是適合于透明質(zhì)酸的重組制備的芽孢桿菌屬細胞。該芽孢桿菌屬宿主細胞可以是野生型的芽孢桿菌屬細胞或其突變體。用于實施本發(fā)明的芽孢桿菌屬細胞包括、但并非限定于，Bacillusagaraderhens、嗜堿芽孢桿菌(Bacillusalkalophilus)、解淀粉芽孢桿菌(Bacillusamyloliquefaciens)、短芽孢桿菌(Bacillusbrevis)、環(huán)狀芽孢桿菌(Bacilluscirculans)、Bacillusclausii、凝結(jié)芽孢桿菌(Bacilluscoagulans)、堅強芽孢桿菌(Bacillusfirmus)、燦爛芽孢桿菌(Bacilluslautus)、遲緩芽孢桿菌(Bacilluslentus)、地衣芽孢桿菌(Bacilluslicheniformis)、巨大芽孢桿菌(Bacillusmegaterium)、短小芽孢桿菌(Bacilluspumilus)、嗜熱脂肪芽孢桿菌(Bacillusstearothermophilus)、枯草芽孢桿菌(Bacillussubtilis)、和蘇云金芽孢桿菌(Bacillusthuringiensis)細胞。特別地適合于重組表達的突變枯草芽孢桿菌細胞描述于WO98/22598。非封裝的(non-encapsulating)芽孢桿菌屬細胞特別適用于本發(fā)明。優(yōu)選實施方式中，該芽孢桿菌屬宿主細胞為解淀粉芽孢桿菌、Bacillusclausii、遲緩芽孢桿菌、地衣芽孢桿菌、嗜熱脂肪芽孢桿菌或枯草芽孢桿菌細胞。更優(yōu)選的實施方式中，芽孢桿菌屬細胞為解淀粉芽孢桿菌細胞。另一更優(yōu)選的實施方式中，芽孢桿菌屬細胞為Bacillusclausii細胞。另一更優(yōu)選的實施方式中，芽孢桿菌屬細胞為遲緩芽孢桿菌細胞。另一更優(yōu)選的實施方式中，芽孢桿菌屬細胞為地衣芽孢桿菌細胞。另一更優(yōu)選的實施方式中，芽孢桿菌屬細胞為枯草芽孢桿菌細胞。最優(yōu)選的實施方式中，芽孢桿菌屬宿主細胞為枯草芽孢桿菌A164Δ5(參見U.S.5,891,701)或枯草芽孢桿菌168Δ4。分子量可以依據(jù)改進的咔唑方法(Bitter和Muir，1962，AnalBiochem.4330-334)測量透明質(zhì)酸的含量。另外，可以采用本領(lǐng)域中的標準方法測量透明質(zhì)酸的平均分子量，如Ueno等，1988，Chem.Pharm.Bull.36，4971-4975；Wyatt，1993，Anal.Chim.Acta2721-40；和WyattTechnologies，1999，″LightScatteringUniversityDAWNCourseManual″與″DAWNEOSManual″WyattTechnologyCorporation，SantaBarbara，California描述的那些方法。優(yōu)選實施方式中，本發(fā)明的透明質(zhì)酸或其鹽的分子量為約10,000～約10,000,000Da。更優(yōu)選的實施方式中，其分子量為約25,000～約5,000,000Da。最優(yōu)選的實施方式中，透明質(zhì)酸的分子量為約50,000～約3,000,000Da。優(yōu)選實施方式中，本發(fā)明的透明質(zhì)酸或其鹽的分子量范圍為300,000～3,000,000，優(yōu)選地為400,000～2,500,000，更優(yōu)選地為500,000～2,000,000，且最優(yōu)選地為600,000～1,800,000。仍另一優(yōu)選實施方式中，透明質(zhì)酸或其鹽的低平均分子量(lowaveragemolecularweight)范圍為10,000～800,000Da，優(yōu)選地為20,000～600,000Da，更優(yōu)選地為30,000～500,000Da，甚至更優(yōu)選地為40,000～400,000Da，且最優(yōu)選地為50,000～300,000Da。鹽和交聯(lián)的HA優(yōu)選的實施方式涉及第一方面的方法，其包括透明質(zhì)酸的無機鹽，優(yōu)選透明質(zhì)酸鈉、透明質(zhì)酸鉀、透明質(zhì)酸銨、透明質(zhì)酸鈣、透明質(zhì)酸鎂、透明質(zhì)酸鋅、或透明質(zhì)酸鈷。其它成分優(yōu)選實施方式中，通過本發(fā)明方法制得的產(chǎn)品也可以包含其它成分，優(yōu)選一種或多種活性成分，優(yōu)選一種或多種藥理學活性的物質(zhì)，且也優(yōu)選水溶性賦形劑，如乳糖或非生物學衍生的糖?？梢杂糜诒景l(fā)明的活性成分或藥理學活性的物質(zhì)的非限定性實例包括維生素，蛋白質(zhì)和/或肽藥物，如人生長激素、牛生長激素、豬生長激素、促生長激素釋放激素/肽(growthhomronereleasinghormone/peptide)、粒細胞-集落刺激因子、粒細胞巨噬細胞-集落刺激因子、巨噬細胞-集落刺激因子、促紅細胞生成素、骨形態(tài)發(fā)生蛋白、干擾素或其衍生物、胰島素或其衍生物、心房肽激素-III、單克隆抗體、腫瘤壞死因子、巨噬細胞活化因子、白介素、腫瘤退化因子(tumordegeneratingfactor)、胰島素-樣生長因子、表皮生長因子、組織纖溶酶原激活物、因子IIV、因子IIIV、和尿激酶。出于穩(wěn)定活性成分的目的，可以包括水溶性賦形劑，該賦形劑可以包括蛋白質(zhì)，例如白蛋白或明膠；氨基酸，如甘氨酸、丙氨酸、谷氨酸、精氨酸、賴氨酸及其鹽；碳水化合物如葡萄糖、乳糖、木糖、半乳糖、果糖、麥芽糖、蔗糖、葡聚糖、甘露醇、山梨糖醇、海藻糖和硫酸軟骨素；無機鹽如磷酸鹽；表面活性劑如TWEEN(ICI)、聚乙二醇，及其混合物。該賦形劑或穩(wěn)定劑的用量范圍可以為該產(chǎn)品的0.001～99wt％。本發(fā)明的幾個方面涉及各種組合物和藥物，其包括，除其它成分之外，有效量的交聯(lián)的HA產(chǎn)品，和活性成分，優(yōu)選地該活性成分為藥理學活性劑；可藥用載體、賦形劑或稀釋劑，優(yōu)選水溶性賦形劑，且最優(yōu)選乳糖。本發(fā)明的優(yōu)選實施方式涉及泡騰片(effervescenttablet)中所包含的本發(fā)明的產(chǎn)品或組合物，其可以如本領(lǐng)域中所述以其它方式配制。例如，泡騰片可以包括檸檬酸、碳酸氫鈉、和寡糖或其它糖。泡騰片容易儲存，且采用本發(fā)明的快速溶解的產(chǎn)品，它們快速溶解且由此提供了口服給藥的理想方式。另外，本發(fā)明的方法涉及包含第一方面中所定義的產(chǎn)品或者上述方面和實施方式中定義的組合物的用品，例如化妝用品、衛(wèi)生用品、醫(yī)療或外科用品。最后的方面中，本發(fā)明涉及藥物膠囊或微膠囊，其包含第一方面中所定義的產(chǎn)品或者本發(fā)明其它方面和實施方式中所定義的組合物。圖1闡述了由透明質(zhì)酸酶降解獲得的DVS-HA水凝膠的重量損失隨時間的變化。將如實施例2中所述，通過加熱步驟(“加熱的”)制得的DVS-HA水凝膠與未進行熱處理(“未加熱的”)的DVS-HA水凝膠比較。圖2顯示了一組具有不同交聯(lián)比例或者程度的DVS交聯(lián)的HA水凝膠在磷酸鹽緩沖劑(pH＝7.0)中溶脹期間的PH值的時間過程，如以下實施例6中詳細地描述。圖3顯示了依據(jù)本發(fā)明制得的兩種HA水凝膠的彈性模量(G’)，其用圓形標注，和剪切損失(shearloss)或粘性模量(viscousmodulus)(G”)，其用正方形標注，一種采用10∶1的HA/DVS比例和6％HA制備，另一種采用15∶1的HA/DVS比例和6％HA制備，如下實施例7中詳細地描述。HA/DVS10∶1水凝膠的彈性模量(G’圓形)在全部頻率(x-軸)為上面的線(y-軸)，且HA/DVS10∶1水凝膠的剪切損失模量(G”正方形)是下面的線，除了在x-軸的最左手側(cè)，其為上面的線。圖4顯示了采用本文實施例2中所述的方法制得的(“新的，加熱的”)DVS交聯(lián)的HA水凝膠(HA/DVS10∶1，wt)、和如下面實施例9中所述的那樣依據(jù)現(xiàn)有技術(shù)(參見US4,582,865，實施例1)不加熱制得的水凝膠的可注射性(syringeability)。y-軸顯示以牛頓為單位的注射力，開始于0.0，增量為2.5，且結(jié)束于35.0。圖5顯示了采用本文實施例2中所述的方法制得的(“新的，加熱的”)DVS交聯(lián)的HA水凝膠(HA/DVS15∶1，wt)、和如下面實施例9中所述的那樣依據(jù)現(xiàn)有技術(shù)(參見US4,582,865，實施例1)不加熱制得的水凝膠的可注射性(syringeability)。y-軸顯示以牛頓為單位的注射力，開始于0.0，增量為2.5，且結(jié)束于30.0。發(fā)明詳述本發(fā)明的第一方面涉及一種制備包含由二乙烯基砜(DVS)交聯(lián)的透明質(zhì)酸或其鹽的水凝膠的方法，所述方法包括以下步驟(a)提供透明質(zhì)酸或其鹽的堿性溶液；(b)將DVS加到步驟(a)的溶液中，由此用DVS交聯(lián)透明質(zhì)酸或其鹽以形成凝膠；(c)用緩沖劑處理步驟(b)的凝膠，其中凝膠溶脹且形成包含由DVS交聯(lián)的透明質(zhì)酸或其鹽的水凝膠。先前已描述了如何在芽孢桿菌屬宿主細胞中重組地制備透明質(zhì)酸，參見WO2003/054163，NovozymesA/S，其全部引入本文中。由此，在優(yōu)選的實施方式中，本發(fā)明涉及第一方面的方法，其中在芽孢桿菌屬宿主細胞中重組地制備透明質(zhì)酸或其鹽。有益地出于具體目的，已描述了各種分子量分數(shù)的透明質(zhì)酸。本發(fā)明的優(yōu)選實施方式涉及第一方面的方法，其中該透明質(zhì)酸或其鹽的平均分子量為100～3,000kDa，優(yōu)選地為500～2,000kDa，且最優(yōu)選地為700～1,800kDa。本發(fā)明的方法中，透明質(zhì)酸或其鹽的初始濃度影響獲得的交聯(lián)凝膠和溶脹的水凝膠的性質(zhì)。由此，本發(fā)明的優(yōu)選實施方式涉及第一方面的方法，其中堿性溶液包含濃度為0.1％～40％(w/v)的溶解的透明質(zhì)酸或其鹽。交聯(lián)反應(yīng)期間的pH值也影響結(jié)果，由此在優(yōu)選實施方式中本發(fā)明涉及第一方面的方法，其中該堿性溶液包含濃度為0.001～2.0M的溶解的氫氧化鈉。也值得注意的是，交聯(lián)劑的濃度顯著影響獲得的凝膠。由此，本發(fā)明的優(yōu)選實施方式涉及第一方面的方法，其中以HA/DVS(干重)為1∶1～100∶1、優(yōu)選HA/DVS(干重)為2∶1～50∶1的重量比將DVS加到步驟(a)的溶液中。發(fā)明者發(fā)現(xiàn)，在將DVS加到HA-溶液期間和/或之后緊接著，初始階段的攪拌是期望的，由此獲得滿意的凝膠化。由此，本發(fā)明的優(yōu)選實施方式涉及第一方面的方法，其中在攪拌下將DVS加到步驟(a)的溶液中，且其中將溶液溫度保持在5℃～50℃、優(yōu)選15℃～40℃、更優(yōu)選20℃～30℃；優(yōu)選地，該攪拌持續(xù)1～180分鐘。在第一方面的方法的另一優(yōu)選實施方式中，將DVS加到步驟(a)的溶液中，而不攪拌。本發(fā)明者證實，在將DVS加到溶液中之后加熱步驟是有益的。由此，本發(fā)明的優(yōu)選實施方式涉及第一方面的方法，其中將步驟(b)中溶液溫度加熱到20℃～100℃，優(yōu)選為25℃～80℃，更優(yōu)選為30℃～60℃，和最優(yōu)選為35℃～55℃，且其中將溫度保持在該范圍下至少5分鐘，優(yōu)選至少10分鐘，20分鐘，30、40、50、60、70、80、90、100、110、120、130、140、150、160、170，或者最優(yōu)選地至少180分鐘；優(yōu)選不攪拌。有利的是在進行交聯(lián)反應(yīng)之后使凝膠在室溫下放置短暫的時間。在第一方面的方法的優(yōu)選實施方式中，將凝膠保持在0℃～40℃、優(yōu)選10℃～30℃的溫度范圍下至少5分鐘，優(yōu)選至少10分鐘、20分鐘、30、40、50、60、70、80、90、100、110、120、130、140、150、160、170，或者最優(yōu)選地至少180分鐘。預(yù)想本領(lǐng)域技術(shù)人員眾所周知的多種類型的緩沖劑適用于溶脹和中和本發(fā)明的交聯(lián)的凝膠。在優(yōu)選的實施方式中，該緩沖劑包含pH值范圍為2.0～8.0、優(yōu)選為5.0～7.5的緩沖劑。最佳地，選擇適宜的緩沖劑，其pH值導(dǎo)致溶脹的水凝膠的pH盡可能地接近中性。優(yōu)選的實施方式中，該緩沖劑包含其pH值使水凝膠的pH值在5.0～7.5之間的緩沖劑。優(yōu)選地，在第一方面的方法中，該緩沖劑包括磷酸鹽緩沖劑和/或鹽緩沖劑(salinebuffer)。在溶脹步驟中，緩沖劑的體積必須足以容納溶脹的凝膠直到該凝膠完全溶脹。由此，在第一方面的方法的優(yōu)選實施方式中，步驟(c)中的緩沖劑的體積是步驟(b)的凝膠的體積的至少3倍。在第一方面的方法的優(yōu)選實施方式中，在20℃～50℃溫度下進行步驟(c)的溶脹至少5分鐘，優(yōu)選至少10分鐘、20分鐘、30、40、50、60、70、80、90、100、110、120、130、140、150、160、170，或者最優(yōu)選地至少180分鐘。也優(yōu)選用pH值為2.0～8.0、優(yōu)選為5.0～7.5的水，水與磷酸鹽緩沖劑、水與鹽緩沖劑、或水和磷酸鹽緩沖劑與鹽緩沖劑，洗滌步驟(c)中形成的水凝膠至少一次。實施例實施例1-DVS-交聯(lián)的HA水凝膠的制備該實施例闡述了采用伴隨有溶脹和pH調(diào)節(jié)制備DVS-交聯(lián)的HA水凝膠。將透明質(zhì)酸鈉(HA，770kDa，1g)溶解到0.2MNaOH中獲得4％(w/v)的溶液，將其在室溫、即約20℃下攪拌1h。制得三個復(fù)制品。隨后以足量將二乙烯基砜(DVS)加到HA溶液中，由此分別使HA/DVS重量比為10∶1、7∶1、和5∶1。將混合物在室溫下攪拌5分鐘并且隨后使其在室溫下靜置1h。隨后將凝膠在160mL磷酸鹽緩沖劑(pH4.5或6.5)中溶脹24h，如表1中所示。表1DVS-HA水凝膠制備的條件在溶脹步驟期間使凝膠的pH穩(wěn)定。溶脹后，通過過濾除去任何過量的緩沖劑，并且用IKAULTRA-TURRAXT25均化器(IkaLabortechnik，DE)將水凝膠簡單地均化。測量凝膠的體積和pH(參見表2)。表2DVS-HA水凝膠的特征水凝膠的pH范圍為7.1～7.6(表2)，其證實了可以利用溶脹步驟在該方法中調(diào)節(jié)pH。全部凝膠占據(jù)的體積為70mL，其對應(yīng)于約1.4％(w/v)的HA濃度。它們是透明的、粘性的和均質(zhì)的。柔軟性隨著交聯(lián)度降低而增加(表2)。實施例2-均質(zhì)DVS-交聯(lián)的HA水凝膠的制備該實施例闡述了高均質(zhì)的DVS-交聯(lián)的HA水凝膠的制備。將透明質(zhì)酸鈉(770kDa，2g)溶解到0.2MNaOH中，在室溫下攪拌約1h，由此獲得8％(w/v)的溶液。隨后加入DVS使HA/DVS重量比為7∶1。在室溫下攪拌5分鐘之后，將一個樣品在50℃下熱處理2h而不攪拌，并隨后使其在室溫下靜置過夜。將獲得的交聯(lián)凝膠在37℃下溶脹到200mL磷酸鹽緩沖劑(pH5.5)中42或55h，最后用100mL水洗滌兩次，將其拋棄。測量體積和pH，以及將凝膠從27G*1/2注射針頭中推過必須的壓力(參見表3)。表3DVS-交聯(lián)的HA水凝膠的特征相對于未進行熱處理的對照水凝膠(表3)，依據(jù)該實施例制得的交聯(lián)的HA水凝膠顯示更高的溶脹比例和增強的柔軟性。通過27G*1/2針頭注射期間施加的壓力相對于后一樣品的情況更穩(wěn)定，表明交聯(lián)的HA水凝膠更均質(zhì)。實施例3-DVS-交聯(lián)的HA水凝膠的生物穩(wěn)定性該實施例采用酶降解闡述了DVS-交聯(lián)的HA水凝膠的體外生物穩(wěn)定性。在30mM檸檬酸、150mMNa2HPO4、和150mMNaCl(pH6.3)中制得牛睪丸透明質(zhì)酸酶(HA酶)溶液(100U/mL)。將DVS-HA交聯(lián)的水凝膠樣品(約1mL)置于完全封閉的(safelock)玻璃瓶中，凍干，和稱重(Wo；式1)。隨后將酶溶液(4mL，400U)加到每個樣品中，并且將瓶子在37℃下在溫和振蕩(100-200rpm)下溫育。在預(yù)定的時間間隔，除去上清液并且將樣品用蒸餾水徹底清洗以除去殘留的鹽，隨后將它們凍干，和最終稱重(Wt；式1)。生物降解表述為相對于樣品初始重量的重量損失比例(式1)。由酶降解測試前后每個樣品的重量減少計算重量損失。每個生物降解試驗重復(fù)三次。式1結(jié)果示于表4、以及圖1中，其闡述了由HA酶降解獲得的DVS-HA水凝膠的重量損失隨時間的變化。將如實施例2中所述制得的(“加熱的”)DVS-HA水凝膠與未進行熱處理(“未加熱的”)的DVS-HA水凝膠比較。對于兩種類型的凝膠，在開始4個小時內(nèi)降解是快速的，且隨后進程減慢直到在24h時結(jié)束。重要地，與如實施例2中所述采用加熱步驟制得的水凝膠比較時，未加熱的樣品的重量損失值存在顯著的變化。這清楚地顯示，通過使用實施例2中所述的方法獲得了高均質(zhì)的DVS-交聯(lián)的HA水凝膠。實施例4-用于化妝品的油包水乳液的制備在本實施例和隨后的實施例中，將DVS-交聯(lián)的HA水凝膠配制成乳膏(cream)和漿液(serum)，其在施用到皮膚上時增加皮膚濕潤性和彈性，并且提供直接的(immediate)抗老化效應(yīng)，以及成膜效應(yīng)。通常的油包水(w/o)乳液配制物含有2％的DVS-交聯(lián)的HA。通過混合所定義的成分(參見表4)，單獨地制備每個相(A～E)。隨后在采用機械推進攪拌裝置攪拌的條件下和在小于40℃的溫度下將相B加到相A中。隨后在攪拌下加入相C，隨后是相D，并且最后是相E。也制備配制物，其中相D中HA水凝膠濃度分別為4％、6％、和8％，由此獲得多種w/o配制物。表4表5中顯示了另一通常的含有2％DVS交聯(lián)的HA的W/O-乳劑配制物。通過混合所定義的成分(參見表5)，單獨地制得每個相(A～F)。將相B與相A混合，并且將獲得的油相在75℃下加熱。將相C也加熱到75℃。在75℃下在采用機械推進攪拌裝置攪拌下將油相加到相C中。隨后將乳劑冷卻到低于40℃，之后在攪拌下加入相D，隨后是相E和最后是相F。也制備配制物，其中相E中HA水凝膠濃度分別為4％、6％和8％，由此獲得多種w/o配制物。表5實施例5-硅氧烷漿液的制備如表6中所示，制得了含有2％DVS交聯(lián)的HA的通常的硅氧烷漿液配制物。在極高攪拌和小于40℃下將全部成分同時混合(參見表6)。也制備配制物，其中HA水凝膠濃度分別為4％、6％和8％，由此獲得多種漿液。表6實施例6-溶脹期間的pH平衡；動力學研究動力學研究顯示，依據(jù)交聯(lián)度，在磷酸鹽緩沖劑(pH7.0)中溶脹8～14小時之后，獲得了具有中性pH的DVS交聯(lián)的HA水凝膠。如上所述制得一組DVS交聯(lián)的HA水凝膠，利用4～8％的HA溶液，且利用各種量的DVS交聯(lián)劑，如表7中所示。表7在定期的間隔(每2小時)，在熱處理期間取出水凝膠并傾析，并且測量pH值(參見圖2)。每次測量之后使用新的溶脹緩沖劑。結(jié)果顯示，對于所有水凝膠，2小時的溶脹之后pH范圍為11～12。隨后pH逐漸降低到7.2-7.5。對于較少交聯(lián)的水凝膠，即其中HA/DVS比例較高的水凝膠，降低較快。圖2中顯示了對于HA6％溶液和兩種不同比例的HA/DVS的pH降低，其中10∶1的HA/DVS比例用三角形標注，15∶1用正方形標注。在這兩種情形中，在8小時之內(nèi)使pH中和。相反，對于具有更高HA濃度(例如8％)或者更高程度交聯(lián)(例如HA/DVS比例為2.5)的水凝膠，在14小時溶脹之后達到中性pH。這些觀察與低交聯(lián)水凝膠中HA分子顯示更高自由度和靈活性的事實相一致，其容許良好的水合作用和由此更快的pH平衡。實施例7-基于DVS-交聯(lián)的HA的水凝膠的粘彈性采用板-板幾何形狀和在25℃的控制溫度下，在PhysicaMCR301流變儀(AntonPaar，Ostfildern，Germany)上進行流變學測量。通過動態(tài)振幅剪切擺動測試考察樣品的粘彈性行為，其中使材料經(jīng)受正弦剪切應(yīng)變。首先，進行應(yīng)變/振幅掃描試驗以評價其中線性粘彈性有效的變形區(qū)域。應(yīng)變通常范圍為0.01～200％，且頻率設(shè)定為1Hz。隨后，在線性粘彈性區(qū)域中，在恒定剪切應(yīng)變(10％)和0.1～10Hz的頻率下，從頻率掃描試驗中記錄剪切儲存模量(或彈性模量G’)和剪切損失模量(或粘性模量，G”)值。幾何形狀、NF和間隙分別為PP25、2和1mm。G’給出了關(guān)于變形期間材料中儲存的彈性或能量的信息，而G”描述了加熱時消散的粘性特征或能量。特別地，彈性模量給出了關(guān)于樣品支撐負荷和強加應(yīng)力或變形之后恢復(fù)初始結(jié)構(gòu)的能力的信息。全部試驗中，每個樣品測試至少三次。結(jié)果(圖3)顯示，對于兩種水凝膠·G’＞G”和·G’幾乎獨立于頻率。在具有較高程度的交聯(lián)(即，較低的HA/DVS比例10/1)的水凝膠情形中，G’比G”高一個數(shù)量級，表明該樣品變現(xiàn)為強的凝膠材料。簡要地，整體流變學響應(yīng)歸因于物理與化學交聯(lián)的貢獻，和HA大分子之間的拓撲相互作用。鏈之間的相互作用帶來了它們的本征運動性(intrinsicmobility)的降低，其不能夠釋放應(yīng)力，并且由此該材料表現(xiàn)為三維網(wǎng)絡(luò)，其中所施加應(yīng)力的主要調(diào)整模式是通過網(wǎng)絡(luò)變形。另外，該水凝膠的彈性高于具有較低程度交聯(lián)(即，較高比例的HA/DVS15∶1)的水凝膠彈性。實際上，永久共價交聯(lián)的數(shù)目越高，纏結(jié)數(shù)目越大，且由此水凝膠的彈性響應(yīng)更高。實施例8-網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)參數(shù)該試驗中，使用平行板幾何形狀(PP30單元)在旋轉(zhuǎn)流變儀(Gemini，BohlinInstruments，UK)上評價粘彈性。使用恒溫浴在25℃的控制溫度下進行測試。為了避免水蒸發(fā)，通過濕度控制附件控制含有該樣品的室的濕度。使水凝膠在動態(tài)試驗(小振幅頻率掃描測試)中經(jīng)受周期性擺動，由此評價彈性和粘性模量G’和G”的依賴性。頻率范圍為0.01Hz～10Hz。為了確定材料的線性粘彈性響應(yīng)范圍，以1Hz的擺動頻率在樣品上進行初步的應(yīng)變掃描測試。每個樣品上的測試重復(fù)至少三次?？梢岳脧椥阅Ａ恐祦碓u估網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)的參數(shù)。由于G與纏結(jié)數(shù)目成比例(Ferry，1980)，所以彈性模量可以通過下式來表示式2其中，RT為熱能，且z為纏結(jié)點或交聯(lián)點的數(shù)目，以mol/體積表示。參數(shù)z可以通過下式來計算式3其中，c為聚合物濃度，且Me為兩個纏結(jié)之間聚合物鏈段的平均分子量。帶入式2，Me可以通過下列等式來估算式4為了通過式4計算G，假定橡膠彈性理論有效，且假設(shè)凝膠狀材料的臨時網(wǎng)絡(luò)，在短于纏結(jié)網(wǎng)絡(luò)的壽命的時間尺度的刺激下表現(xiàn)如同硫化橡膠(Flory，1953)?！皯掖苟恕保錇閮H通過一個纏結(jié)點連接于網(wǎng)絡(luò)的聚合物鏈鏈段，不會貢獻于G值，因為它們不能儲存彈性能量。由此，在式4中需要修正(Flory，1953)式5其中，Mn為數(shù)均分子量。利用“等價網(wǎng)絡(luò)模型”(Schurz，1981)，能夠估算DN，其為理想化的“等價網(wǎng)絡(luò)”中纏結(jié)點之間的平均距離式6其中，A為阿伏加德羅數(shù)(Avogadro′snumber)。DN和Md的結(jié)果在表8中給出?？梢宰⒁獾降氖?，對于樣品1獲得了更高的Md(248120g/mol)和更高的DN(46nm)。樣品2具有最低的Md(204000)和43.5nm的DN值。樣品3和4具有相同的彈性模量，其特征為在于，Md為240000g/mol和DN為42nm。表8對于DVS-HA水凝膠的網(wǎng)絡(luò)參數(shù)。(a)溶脹期間；(b)0.1Hz下的彈性模量值。實施例9-DVS-交聯(lián)的HA水凝膠的可注射性將依據(jù)本發(fā)明制得的DVS-交聯(lián)的HA水凝膠的可注射性與依據(jù)現(xiàn)有技術(shù)(例如US4,582,865實施例1)制得的水凝膠的可注射性進行比較。在Texture分析儀(StableMicroSystems，TA.XTPlus)上測量注射性，其為以12.5mm/min的速度在55mm的距離之上將水凝膠通過27G1/2針頭注射所需的力(以N表示)。將水凝膠樣品轉(zhuǎn)移到裝有27G1/2針頭的1mL-注射器中，并且將該注射器置于固定器中。每個樣品測量三次。圖4和5闡述了HA/DVS重量比分別為10∶1和15∶1的DVS-交聯(lián)的HA水凝膠的可注射性。圖4和5中記錄的注射曲線是樣品均質(zhì)性特征。實際上，施加的注射力越穩(wěn)定，水凝膠均質(zhì)性越高。而且，低的力對應(yīng)于操作者容易注射該水凝膠。該結(jié)果清楚地表明，依據(jù)本文中所述方法制得的DVSHA水凝膠的均質(zhì)性遠遠大于由現(xiàn)有技術(shù)方法獲得的那些。值得注意的是，現(xiàn)有技術(shù)的樣品必須用機械方法均質(zhì)化，由此使它們完全可注射。這種均質(zhì)化產(chǎn)生了小顆粒，其存在導(dǎo)致非常不規(guī)則的注射曲線。另外，依據(jù)本發(fā)明制得的交聯(lián)的水凝膠更容易通過細針頭注射，這點由需要更低的力而得到證實。值得注意的是，由于形成更強的網(wǎng)絡(luò)，注射力隨著交聯(lián)度的增加而增加。實施例10-用于局部眼科學的交聯(lián)的DVS-HA水凝膠的配制物表9中顯示了含有1％(w/v)DVS交聯(lián)的HA的通常的500mL滴眼劑溶液配制物。稱量所有成分并轉(zhuǎn)移到500mL容量瓶中。加入水(300mL)并且將混合物在室溫下攪拌5h。用2MNaOH將pH調(diào)節(jié)到7.2，用Milli-Q水將體積調(diào)節(jié)到準確的500mL。表9實施例11-具有防腐劑的交聯(lián)的HA/DVS水凝膠采用0.2MNaOH中的1.5gHA鈉以獲得6％(w/v)溶液，制得DVS交聯(lián)的HA水凝膠。HA/DVS重量比為10∶1。依據(jù)實施例2中所述的工序制備水凝膠的三個復(fù)制品，直到溶脹步驟，之后如下處理在50℃的爐中溫育2小時之后，將水凝膠浸入Na2HPO4/NaH2PO4緩沖劑(1L，50mM，pH7.0)中，該緩沖劑含有防腐劑(2-苯氧基乙醇/3[(2-乙基己基)氧基]1，2-丙二醇)。防腐劑的濃度為10mL/mL以達到溶脹的水凝膠中最終濃度為1％(v/v)。預(yù)期防腐劑將在孵化期間擴散到水凝膠中，且同時，將防止緩沖劑中的微生物污染。將容器用parafilm覆蓋并且置于37℃的爐中。1h后，移除溶脹浴并且將水凝膠在含有10mL/mL防腐劑的新鮮磷酸鹽緩沖劑中溶脹6-7h。重復(fù)該步驟直到溶脹時間為12h，隨后測量pH。再繼續(xù)溶脹2.5h以達到中性pH。通過UV-分光光度法(ThermoE1ectron，Nicolet，Evolution900，equipmentnr.246-90)測量結(jié)合到水凝膠中的防腐劑的量。首先分析防腐劑在磷酸鹽緩沖劑中的1％(v/v)溶液以選擇波長。利用吸液管收集大約5mL的水凝膠。通常，在溶脹的圓形水凝膠的中間，和在該圓形凝膠的北、東、南和西“側(cè)面”中收集樣品。隨后將樣品轉(zhuǎn)移到比色皿中并且在292nm處讀出吸光度。每個樣品讀取三次，且相對于不含防腐劑的空白的DVS交聯(lián)的HA水凝膠，吸光度為零。結(jié)果顯示，結(jié)合到DVS-HA水凝膠中的防腐劑的量的范圍為0.91～1.02％(參見表10)。復(fù)用品之間存在極佳的再現(xiàn)性。重要地，并未觀察到來自相同水凝膠中的樣品之間的顯著差別，表明防腐劑均勻地擴散到水凝膠中。表10在摻加1％防腐劑的磷酸鹽緩沖劑中溶脹14.5h后結(jié)合到DVS-HA水凝膠中的防腐劑的量。(*)吸光度為在相同樣品上進行的三次測量的平均值。權(quán)利要求1.一種制備包含由二乙烯基砜(DVS)交聯(lián)的透明質(zhì)酸或其鹽的水凝膠的方法，所述方法包括以下步驟(a)提供透明質(zhì)酸或其鹽的堿性溶液；(b)將DVS加到步驟(a)的溶液中，由此用DVS交聯(lián)透明質(zhì)酸或其鹽以形成凝膠；(c)用緩沖劑處理步驟(b)的凝膠，其中凝膠溶脹且形成包含由DVS交聯(lián)的透明質(zhì)酸或其鹽的水凝膠。2.權(quán)利要求1的方法，其中透明質(zhì)酸或其鹽是在芽孢桿菌屬宿主細胞中重組制備的。3.權(quán)利要求1或2的方法，其中透明質(zhì)酸或其鹽的平均分子量為100～3,000kDa，優(yōu)選地為500～2,000kDa，且最優(yōu)選地為700～1,800kDa。4.權(quán)利要求1～3中任一項的方法，其中該堿性溶液包含濃度為0.1％～40％(w/v)的溶解的透明質(zhì)酸或其鹽。5.權(quán)利要求1～4中任一項的方法，其中該堿性溶液包含濃度為0.001～2.0M的溶解的氫氧化鈉。6.權(quán)利要求1～5中任一項的方法，其中以HA/DVS(干重)為1∶1～100∶1，優(yōu)選HA/DVS(干重)為2∶1～50∶1的重量比將DVS加到步驟(a)的溶液中。7.權(quán)利要求1～6中任一項的方法，其中在攪拌下將DVS加到步驟(a)的溶液中，且其中將溶液溫度保持在5℃～50℃，優(yōu)選15℃～40℃，更優(yōu)選20℃～30℃。8.權(quán)利要求7的方法，其中該攪拌持續(xù)1～180分鐘的時間。9.權(quán)利要求1～8中任一項的方法，其中將DVS加到步驟(a)的溶液中而不攪拌。10.權(quán)利要求1～9中任一項的方法，其中將步驟(b)中溶液溫度加熱到20℃～100℃，優(yōu)選為25℃～80℃，更優(yōu)選為30℃～60℃，和最優(yōu)選為35℃～55℃，且其中將溫度在該范圍保持至少5分鐘的時間。11.權(quán)利要求10的方法，其中在步驟(b)之后且在步驟(c)之前，將凝膠在0℃～40℃、優(yōu)選在10℃～30℃的溫度保持至少5分鐘的時間。12.權(quán)利要求1～11中任一項的方法，其中該緩沖劑包含pH值范圍為2.0～8.0、優(yōu)選為5.0～7.5的緩沖劑。13.權(quán)利要求1～11中任一項的方法，其中該緩沖劑包含其pH值使水凝膠的pH值在5.0～7.5之間的緩沖劑。14.權(quán)利要求12或13的方法，其中該緩沖劑包括磷酸鹽緩沖劑和/或鹽緩沖劑。15.權(quán)利要求1～14中任一項的方法，其中步驟(c)中的緩沖劑的體積是步驟(b)的凝膠的體積的至少3倍。16.權(quán)利要求1～15中任一項的方法，其中在20℃～50℃溫度下進行步驟(c)至少5分鐘。17.權(quán)利要求1～16中任一項的方法，其中用水，和/或pH值為2.0～8.0，優(yōu)選為5.0～7.5的磷酸鹽和/或鹽緩沖劑，洗滌步驟(c)中形成的水凝膠至少一次。18.權(quán)利要求1～17中任一項的方法，其中將防腐劑作為組分加到水凝膠中，優(yōu)選地將防腐劑加到步驟(c)的緩沖劑中。19.一種包含由二乙烯基砜(DVS)交聯(lián)的透明質(zhì)酸或其鹽的水凝膠，其均質(zhì)性足以用穩(wěn)定注射力以12.5mm/min的速度在55mm的距離之上通過27G1/2針從1mL注射器中注射，該注射力在注射的最初40秒鐘之后、和直到注射器清空，變化不超過約5牛頓(N)，優(yōu)選地不超過約4N，更優(yōu)選3N、2N，或者最優(yōu)選地不超過約1N。20.權(quán)利要求19的水凝膠，其中透明質(zhì)酸或其鹽的分子量為300,000～3,000,000，優(yōu)選地為400,000～2,500,000，更優(yōu)選地為500,000～2,000,000，且最優(yōu)選地為600,000～1,800,000。21.權(quán)利要求19的水凝膠，其中透明質(zhì)酸或其鹽的低平均分子量范圍為10,000～800,000Da，優(yōu)選地為20,000～600,000Da，更優(yōu)選地為30,000～500,000Da，甚至更優(yōu)選地為40,000～400,000Da，且最優(yōu)選地為50,000～300,000Da。22.權(quán)利要求19～21中任一項的水凝膠，其包含透明質(zhì)酸的無機鹽，優(yōu)選透明質(zhì)酸鈉、透明質(zhì)酸鉀、透明質(zhì)酸銨、透明質(zhì)酸鈣、透明質(zhì)酸鎂、透明質(zhì)酸鋅、或透明質(zhì)酸鈷。23.權(quán)利要求19～22中任一項的水凝膠，其還包含活性成分。24.權(quán)利要求23的水凝膠，其中該活性成分是藥理學活性物質(zhì)。25.權(quán)利要求19～24中任一項的水凝膠，其還包含水溶性賦形劑，優(yōu)選乳糖。26.權(quán)利要求19～25中任一項的水凝膠，其還包含防腐劑。27.一種組合物，其包含權(quán)利要求19～26中任一項所定義的水凝膠和活性成分，優(yōu)選地該活性成分是藥理學活性劑。28.權(quán)利要求27的組合物，其還包含水溶性賦形劑，優(yōu)選乳糖。29.一種藥物組合物，其包含有效量的權(quán)利要求19～26中任一項所定義的水凝膠，以及可藥用載體、賦形劑或稀釋劑。30.一種藥物組合物，其包含有效量的權(quán)利要求19～26中任一項所定義的水凝膠作為媒介物，以及藥理學活性劑。31.一種化妝用品或組合物，其包含權(quán)利要求19～26中任一項所定義的水凝膠或權(quán)利要求27～30中任一項所定義的組合物。32.一種衛(wèi)生、醫(yī)療或外科用品，其包含權(quán)利要求19～26中任一項所定義的水凝膠、或權(quán)利要求27～30中任一項所定義的組合物；優(yōu)選地該用品為尿布、衛(wèi)生巾、外科紗布、創(chuàng)傷愈合紗布、或者繃帶(bandaid)或其它創(chuàng)傷敷料中所含的一部分。33.一種藥物膠囊或微膠囊，其包含權(quán)利要求19～26中任一項所定義的水凝膠或權(quán)利要求27～30中任一項所定義的組合物。34.權(quán)利要求19～26中任一項所定義的水凝膠或權(quán)利要求27～30中任一項所定義的組合物用于制備治療骨關(guān)節(jié)炎的藥物的用途。35.權(quán)利要求19～26中任一項所定義的水凝膠或權(quán)利要求27～30中任一項所定義的組合物用于制備眼科治療用藥物的用途。36.權(quán)利要求19～26中任一項所定義的水凝膠或權(quán)利要求27～30中任一項所定義的組合物用于制備治療癌癥的藥物的用途。37.權(quán)利要求19～26中任一項所定義的水凝膠或權(quán)利要求27～30中任一項所定義的組合物用于制備治療創(chuàng)傷的藥物的用途。38.權(quán)利要求19～26中任一項所定義的水凝膠或權(quán)利要求27～30中任一項所定義的組合物用于制備血管發(fā)生用藥物的用途。39.權(quán)利要求19～26中任一項所定義的水凝膠或權(quán)利要求27～30中任一項所定義的組合物用于制備保濕劑或化妝品組合物的用途。40.權(quán)利要求19～26中任一項所定義的水凝膠或權(quán)利要求27～30中任一項所定義的組合物用于制備治療脫發(fā)或禿頂?shù)乃幬锏挠猛尽?1.權(quán)利要求19～26中任一項所定義的水凝膠或權(quán)利要求27～30中任一項所定義的組合物在美容處理中的用途。全文摘要本發(fā)明涉及一種制備包含由二乙烯基砜(DVS)交聯(lián)的透明質(zhì)酸或其鹽的均質(zhì)水凝膠的方法，所述方法包括以下步驟(a)提供透明質(zhì)酸或其鹽的堿性溶液；(b)將DVS加到步驟(a)的溶液中，由此用DVS交聯(lián)透明質(zhì)酸或其鹽以形成凝膠；(c)用緩沖劑處理步驟(b)的凝膠，其中凝膠溶脹且形成包含由DVS交聯(lián)的透明質(zhì)酸或其鹽的水凝膠。文檔編號A61K9/48GK101107270SQ200580047101公開日2008年1月16日申請日期2005年11月24日優(yōu)先權(quán)日2004年11月24日發(fā)明者范妮·朗金,卡迪賈·施瓦科-阿布戴爾拉奧尤申請人:諾維信生物聚合物公司