專利名稱：白首烏中新的化合物開德苷元3－O－β－磁麻糖苷及其用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，具體為從白首烏Cynanchum auriculatum Royle ex Wight中提取分離得到的新化合物開德苷元3-O-β-磁麻糖苷的化學(xué)結(jié)構(gòu)，具有抗腫瘤的作用，以及該新化合物的制備方法及該新化合物在醫(yī)藥領(lǐng)域中的用途，尤其是在制備預(yù)防和治療腫瘤藥物方面的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
腫瘤是一大類嚴(yán)重威脅人民生命和健康的多發(fā)病及常見病，全世界每年新發(fā)的癌癥病人有1000萬，每年死亡的癌癥病人630萬，需要治療的癌癥病人大概在2000萬。我國現(xiàn)有癌癥病人不少于200萬，而我國每年新發(fā)病人數(shù)約有160萬人。每5個死亡病例中就有一個死于癌癥，每200個家庭中就有1個癌癥患者。世界衛(wèi)生組織要求21世紀(jì)癌癥在全世界減少40％，為實現(xiàn)這個目標(biāo)，任重而道遠(yuǎn)。
白首烏為江蘇地產(chǎn)藥材，栽培歷史達(dá)100年之久，在民間被當(dāng)作何首烏的替代品，有時則作為獨(dú)立的藥材，具有補(bǔ)肝腎、強(qiáng)筋骨、益精血、健脾益氣之功效，主治腰膝酸痛、陽痿遺精、頭暈耳鳴、心悸失眠、食欲不振、小兒疳積、產(chǎn)后乳汁稀少、瘡癰腫痛、毒蛇咬傷等?，F(xiàn)代藥理實驗表明，白首烏中甾體酯甙類活性物質(zhì)具有抗腫瘤、抗衰老、調(diào)節(jié)免疫功能、抗缺氧、降血脂等功效，近年來國內(nèi)外對白首烏類藥材化學(xué)成分和藥理活性的研究工作相當(dāng)活躍，從天然資源中尋找高效低毒的C21甾體衍生物直接用于臨床或作為新藥合成的半成品研究，受到世界各國的高度重視。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明者致力于從天然產(chǎn)物中尋找更安全更有效的純天然腫瘤抑制劑，經(jīng)過不斷努力，從江蘇省地產(chǎn)藥材白首烏Cynanchum auriculatum Royle ex Wight中分離得到了一種C21甾體類新化合物，并發(fā)現(xiàn)了它具抑制腫瘤細(xì)胞的活性，從而完成了本發(fā)明。本發(fā)明的目的是要提供具有抑制腫瘤功能的新的C21甾體類化合物，為研制開發(fā)抗腫瘤新藥提供新的天然活性物質(zhì)。本發(fā)明是通過如下技術(shù)方案完成的，具體內(nèi)容包括C21甾體新化合物的提取分離，結(jié)構(gòu)鑒定，抗腫瘤活性研究及可能的醫(yī)藥用途的探討。
(1)提取分離以白首烏Cynanchum auriculatum Royle ex Wight根莖為原料，經(jīng)水或有機(jī)溶劑或它們的混合溶劑提取，提取液減壓濃縮后溶于水中，氯仿萃取部分經(jīng)硅膠柱層析分離得到。
有機(jī)溶劑包括石油醚、正己烷、乙酸乙酯、氯仿、二氯甲烷、丙酮、乙醇、甲醇或正丁醇，硅膠包括30-60目、60-100目、100-200目、200-300目或300目以上型號。
本發(fā)明具體利用采集于江蘇省濱?？h，經(jīng)自然干燥的白首烏的根莖，用氯仿回流提取，提取液經(jīng)減壓濃縮得氯仿提取物。此提取物再溶于水制成混懸液，分別用石油醚和氯仿萃取，得到石油醚萃取部分和氯仿萃取部分，經(jīng)減壓濃縮、干燥后分別得到石油醚萃取物和氯仿萃取物，取氯仿萃取物利用硅膠柱層析進(jìn)行粗分離，再利用ODS柱層析進(jìn)行進(jìn)一步分離、純化，最終獲得新化合物。
(2)結(jié)構(gòu)鑒定新化合物為白色無定形粉末(甲醇)，mp166-169℃，Libermann-Burchard反應(yīng)和Keller-Kiliani反應(yīng)陽性，遇水振搖起泡豐富，表明為C21甾體酯苷類化合物。ESI-MS(m/z)顯示677.3[M+Na]+，1331.6[2M+Na]+，分子量654。結(jié)合氫譜和碳譜推測，分子式為C37H50O10。UVλmaxMeOHnm221、。IR bands(KBr，νmax，cm-1)3478，1710，1635，1580，1490，1450，1380，1365，1350，1310，1280，1255，1170，1110，1090，1065，990，770，690。1H-NMRδ6.80(1H，d，J＝16.00Hz，2′-CH反式雙鍵)，7.34(3H，m，6′，7′，8′-CH)，7.62(2H，d，J＝7.64Hz，5′，9′-CH)，7.99(1H，d，J＝16.01Hz，3′-CH)，13C-NMRδ165.79，119.25，144.92，135.83，128.58，129.32，130.59，129.32，128.58，提示苷元部分有肉桂酰(Cin)酯基，苷元鑒定為開德苷元(Kidjoranin)。與開德苷元相比，該化合物的C3化學(xué)位移向低場移動6ppm，C2、C4化學(xué)位移分別向高場移動2.14和4.33ppm，有明顯的苷化位移，故為C-3連糖的糖苷。13C-NMR譜中1個糖的端基碳信號96.38和1H NMR譜中1個糖的端基氫信號5.17(1H，dd，J＝9,4Hz)，說明為單糖苷。苷元開德苷元分子量為510，單糖分子量則為144，是一種2，6-去氧-3-O-甲基糖。與文獻(xiàn)對照，單糖為β-D-磁麻糖(加拿大麻糖，cymarose)。與已知化合物WilfosideK1N相比，該化合物少了3個糖信號δc100.91，99.43，99.00。所以鑒定該新化合物為開德苷元3-O-β-磁麻糖苷(Kidjoranin 3-O-β-cymaropyranoside)。結(jié)構(gòu)式如下
新化合物的的1H-NMR、13C-NMR數(shù)據(jù)(300MHz，δppm from TMS in C5D5N，J＝Hz)

(3)抗腫瘤活性研究1、實驗用樣品新化合物開德苷元3-O-β-磁麻糖苷；2、實驗方法試驗方法為國際通用的MTT法取對數(shù)生長期細(xì)胞，制備細(xì)胞懸液；調(diào)整細(xì)胞濃度為1×107/L，接種于96孔培養(yǎng)板內(nèi)，每孔加入200μl細(xì)胞懸液，預(yù)先培養(yǎng)24h；按實驗分組辦法加入不同劑量藥物200μl/孔，各組設(shè)6個復(fù)孔，分別培養(yǎng)12、24、36、48h；每孔加入20μl濃度為5g/L的MTT，繼續(xù)培養(yǎng)4h，使MTT還原為甲臜。吸出全部上清液后，每孔加二甲基亞砜(DMSO)150μl。用平板搖床震搖10min，使甲臜充分溶解后，運(yùn)用酶聯(lián)免疫檢測儀測定490nm處的吸光度(OD值)。然后，按照公式計算細(xì)胞抑制率，實驗結(jié)果見下表。
生長抑制率(％)＝(1-加藥孔平均A值/空白對照孔平均A值)×100％3、實驗數(shù)據(jù)腫瘤細(xì)胞株 Hela HCT-8 A-549 MCF-7 IA-9IC5040.25μg/ml55.84μg/ml60.25μg/ml90.16μg/ml 80.36μg/ml腫瘤細(xì)胞株 U-87-MGCAKI-1 PC-3 KBKB-VIN SK-MEL-2IC5059.05μg/ml75.39μg/ml45.15μg/ml65.38μg/ml 69.38μg/ml 50.72μg/ml4、實驗討論上述實驗結(jié)果表明，開德苷元3-O-β-磁麻糖苷對11種不同的腫瘤細(xì)胞株均顯示抑制作用。本發(fā)明為研制新的抗癌藥物提供了新的先導(dǎo)化合物，對開發(fā)利用江蘇省地產(chǎn)藥材白首烏具有重要價值。
本發(fā)明的新化合物與醫(yī)學(xué)上可接受的藥用輔料組成的藥物組合物及其制劑。
本發(fā)明的新化合物在制備預(yù)防與治療腫瘤藥物中的用途。
本發(fā)明的新化合物，作為藥物活性成分，可以制備成常規(guī)的藥用劑型，如片劑、膠囊劑、顆粒劑、口服液及注射用粉針劑或水針液。


圖1新化合物的ESI-MS圖。
圖2新化合物的IR圖。
圖3新化合物的1H-NMR圖。
圖4新化合物的13C-NMR圖。
圖5新化合物的提取分離流程圖。
具體實施例方式
下面結(jié)合具體實施例，對本發(fā)明作進(jìn)一步的說明，但本發(fā)明的內(nèi)容并不僅僅局限于所列舉的實施例。實驗用白首烏Cynanchum auriculatum Royle ex Wight的根莖，2003年8月采集于江蘇省濱?？h。
實施例1經(jīng)自然干燥的白首烏根莖10公斤，用乙醇回流提取三次，乙醇用量分別為白首烏根莖重量的12、10、8倍，提取時間分別為120、90、60分鐘，提取液減壓濃縮后加水溶解，再分別石油醚、氯仿萃取，萃取液減壓濃縮。氯仿萃取物經(jīng)柱層析分離后分別得到500毫克沒新化合物。
實施例2經(jīng)自然干燥的白首烏根莖10公斤，用甲醇回流提取三次，甲醇用量分別為白首烏根莖重量的12、10、8倍，提取時間分別為90、60、30分鐘，提取液減壓濃縮后加水溶解，再分別石油醚、氯仿萃取，萃取液減壓濃縮。氯仿萃取物經(jīng)柱層析分離后分別得到500毫克新化合物。
實施例3經(jīng)自然干燥的白首烏根莖10公斤，用氯仿回流提取三次，乙醇用量分別為白首烏根莖重量的12、10、8倍，提取時間分別為100、80、60分鐘，提取液減壓濃縮后加水溶解，再分別石油醚、氯仿萃取，萃取液減壓濃縮。氯仿萃取物經(jīng)柱層析分離后分別得到500毫克新化合物。
實施例4膠囊劑的制備取上述新化合物，加藥用輔料淀粉適量，充分混勻后裝入膠囊，制成每粒含上述新化合物100mg的膠囊劑供口服使用。
權(quán)利要求
1.從白首烏中提取分離得到的具有抗腫瘤作用的新化合物開德苷元3-O-β-磁麻糖苷，其特征在于化學(xué)結(jié)構(gòu)式如下
2.權(quán)力要求1所述的新化合物的制備方法，其特征在于以白首烏Cynanchum auriculatumRoyle ex Wight根莖為原料，經(jīng)水或有機(jī)溶劑或它們的混合溶劑提取，提取液減壓濃縮后溶于水中，氯仿萃取部分經(jīng)硅膠柱層析分離得到。
3.權(quán)力要求2所述的制備方法，其特征在于有機(jī)溶劑包括石油醚、正己烷、乙酸乙酯、氯仿、二氯甲烷、丙酮、乙醇、甲醇或正丁醇，硅膠包括30-60目、60-100目、100-200目、200-300目或300目以上型號。
4.權(quán)力要求1所述的化合物，其特征在于對腫瘤細(xì)胞株Hela、HCT-8、A-549、MCF-7、IA-9、U-87-MG、CAKI-1、PC-3、KB、KB-VIN、SK-MEL-2的抑制活性。
5.權(quán)利要求1所述的新化合物與醫(yī)學(xué)上可接受的藥用輔料組成的藥物組合物及其制劑。
6.權(quán)力要求1所述的新化合物在制備預(yù)防與治療腫瘤藥物中的用途。
7.權(quán)力要求5所述的制劑，包括片劑、膠囊劑、顆粒劑或口服液。
全文摘要
本發(fā)明涉及醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，具體為一種從白首烏中分離的抗腫瘤化合物開德苷元3－O－β－磁麻糖苷，分子式C
文檔編號A61K31/7028GK101029069SQ20071002137
公開日2007年9月5日 申請日期2007年4月10日 優(yōu)先權(quán)日2007年4月10日
發(fā)明者馮煦, 趙興增, 王鳴, 董云發(fā), 趙友誼, 陳雨, 印敏 申請人:江蘇省中國科學(xué)院植物研究所