專利名稱：：降纖酶口服制劑及其制法和用途的制作方法
技術領域：
：本發(fā)明涉及一種降纖酶口服制劑，以及所述降纖酶口服制劑的制法和用途。
背景技術：
：降纖酶是從蛇毒中提取純化的單一成分類凝血酶(Thrombinlike),具有血漿凝血酶相似的作用，有降纖、抗栓、溶栓的功能。類凝血酶(ThrombinLikeenzyme)是世界衛(wèi)生組織(WHO)國際性非專利藥用名命名的有一定療效的產(chǎn)品，它具有精氨酸酯酶及凝血酶活性。由于蛇種的不同，有許多產(chǎn)品問世，諸如經(jīng)WHO鑒定并命名且英國藥典收載的Ancrod、瑞士巴塞爾素高大藥廠的立止血Reptilas(VenomsofAgkistrodonacutus，蝮蛇血凝酶haemocoagulase)禾口日本生產(chǎn)的巴曲酶(Batroxobin，由巴西矛頭蛇的亞種Bothropsmoojeni的蛇毒中分離、精制獲得，主要為絲氨酸蛋白酶SerineProtease等)，其中巴曲酶經(jīng)曰本東菱藥品工業(yè)株式會社制成制劑"東菱精純克栓酶"。根據(jù)1997年中國衛(wèi)生部按國際同種藥物質(zhì)量標準制定的中國降纖酶部頒標準(97)衛(wèi)藥標字01號)，國產(chǎn)降纖酶系是從長白山白眉蝮蛇或尖吻蝮蛇毒中分離提純的單組份類凝血酶(ThrombinLikeEnzyme,TLE)，屬蛋白水解酶，分子量在36000左右，比活性lmg蛋白中降纖酶活性不少于1200單位(U)(比活性單位下以U/mg來表示)。有降低血漿纖維蛋白原，抑制血栓生成，誘發(fā)血管內(nèi)皮組織釋放t-PA，溶解血栓，還具有降低血液粘度和血脂，抑制紅細胞聚集和血小板聚集，增強紅細胞的變形能力，改善微循環(huán)等作用，因此具有強力抗凝、溶栓作用。目前臨床上使用的降纖酶制劑為凍干粉針(5U/支、10U/支)，該制劑可用于急性腦梗死，包括腦血栓、腦栓塞，短暫性腦缺血發(fā)作，以及腦梗死再復發(fā)的預防；心肌梗死，不穩(wěn)定性心絞痛以及心肌梗死再復發(fā)的預防；四肢血管病，包括股動脈栓塞，血栓閉塞性脈管炎，雷諾氏??；血液呈高粘狀態(tài)、高凝狀態(tài)、血栓前狀態(tài)；突發(fā)性耳聾；肺栓塞等，有用藥次數(shù)少，療程短，副作用少的特點。但降纖酶注射制劑存在缺點，首先，對注射劑生產(chǎn)要求的條件高，生產(chǎn)費用高；其次，注射時給病人帶來疼痛；再者，使用不便，該制劑需要在臨用前，用適量注射用水或生理鹽水使之溶解，因此要求由技術熟練的人來嚴格進行無菌操作和注射。由于降纖酶本身是蛋白酶，采用普通口服制劑給藥將導致降纖酶在胃里大部分被降解，降纖酶在腸胃也很難被吸收，生物利用度很低，因此很難達到口服給藥治療的目的。綜上所述，本領域迫切需要開發(fā)一種給藥方便、且可提供高活性的降纖酶的非注射制劑。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的就是提供一種給藥方便、且可提供高活性的降纖酶的口服腸溶制劑。本發(fā)明的另一目的是提供所述降纖酶的口服腸溶制劑的制法和用途。在本發(fā)明的第一方面，提供了一種降纖酶口服制劑，所述口服制劑為腸溶制劑并且具有以下特性(i)每劑中含有降纖酶蛋白量為0.0001-20mg;(ii)按以下方法測定，口服此制劑后，降纖酶的最高血藥濃度達到0.2-3U/L血液給體重為250土10g的SD大鼠口服給藥所述制劑，連續(xù)三天，每天一次，給藥劑量對應于0.01mg降纖酶，并在第三天給藥后測定降纖酶的血藥濃度；和(iii)所述的降纖酶的比活性為400—8000U，較佳地為500—4000U/mg蛋白，更佳地為800-3000U/mg蛋白。在另一優(yōu)選例中，所述制劑在人工胃液中降纖酶的釋放率不超過6%。在另一優(yōu)選例中，所述釋放率不超過5%，更佳地不超過3%。更佳地，所述釋放率用標定的酶活性方法測定，并用下列公式計算釋放率=議的降纖酶讓畫制劑中所含有的降纖酶總活性量在另一優(yōu)選例中，所述制劑在人工腸液中降纖酶的釋放率大于90%。在另一優(yōu)選例中，所述的釋放率大于95%，更佳地大于96%。釋放率的計算公式如下釋放出的降纖酶活性量xlo。％制劑中所含有的降纖酶總活性量在另一優(yōu)選例中，所述制劑在人工腸液中在40分鐘內(nèi)崩解。更佳地，所述制劑在人工腸液中崩解時間是在30分鐘以內(nèi)。在另一優(yōu)選例中，所述制劑選自下組(a)腸溶片劑，所述片劑包括藥芯和腸溶性包衣，其中所述藥芯含有降纖酶和藥學上可接受的載體；(b)腸溶膠囊劑，所述膠囊包括腸溶膠囊和位于腸溶膠囊內(nèi)的藥物粉末或顆粒，其中所述的藥物粉末或顆粒含有降纖酶和藥學上可接受的載體；或(c)腸溶微丸劑，所述微丸劑包括膠囊以及位于膠囊內(nèi)的腸溶微丸，其中所述的腸溶微丸包括微丸藥芯和腸溶性包衣，其中所述微丸藥芯含有降纖酶和藥學上可接受的載體。在另一優(yōu)選例中，所述的腸溶性包衣可以是先制備降纖酶顆粒，然后直接采用腸溶性材料包裹在顆粒外面后再進行制片，也可以是制備好的降纖酶顆粒制片后用腸溶材料包片。在另一優(yōu)選例中，所述的藥學上可接受的載體包括填充劑、粘合劑、崩解劑或溶脹性輔料、潤濕劑、助流劑、抗粘著劑、芳香劑、甜味劑。較佳地，所述崩解劑選自下組淀粉、改良淀粉、羥丙基淀粉、羧甲基淀粉鈉、微晶纖維素、纖維素衍生物(包括甲基纖維素、羧丙基纖維素、羥丙基甲基纖維素、羧甲基纖維素鈉、低取代-羥丙纖維素、交聯(lián)羧甲基纖維素鈉羧甲基纖維素鈣)、交聯(lián)聚乙烯吡咯烷酮、吐溫-80、十二垸基硫酸鈉、瓜耳膠、蒼耳膠、黃原膠、或其組合。在另一優(yōu)選例中，所述制劑是在小腸、大腸(包括結腸)、或直腸釋放的腸溶制劑。在另一優(yōu)選例中，所述制劑中每劑含有降纖酶的蛋白量為O.OOl-lOmg，更佳地0.01-10mg。在另一優(yōu)選例中，所述的降纖酶包括蛇降纖酶(如蝮蛇的降纖酶)。在另一優(yōu)選例中，口服制劑采用比活性為每mg蛋白含有降纖酶活性600-4000U的降纖酶原料。在本發(fā)明的第二方面，提供了本發(fā)明上述降纖酶口服制劑的用途，所述制劑被用于制備治療或預防以下疾病的藥物(l)急性腦梗死，包括腦血栓、腦栓塞，短暫性腦缺血發(fā)作，以及腦梗死再復發(fā)的預防；(2)心肌梗死，不穩(wěn)定性心絞痛以及心肌梗死再復發(fā)；(3)四肢血管病，包括股動脈栓塞，血栓閉塞性脈管炎，雷諾氏??；(4)血液呈高粘狀態(tài)、高凝狀態(tài)、血栓前狀態(tài)；(5)突發(fā)性耳聾；(6)肺栓塞。在本發(fā)明的第三方面，提供了本發(fā)明上述的降纖酶的口服制劑的制備方法，該方法包括步驟在片劑藥芯外部包裹腸溶性包衣，從而形成腸溶片劑，其中所述藥芯含有降纖酶和藥學上可接受的載體；或者將藥物粉末或顆粒裝填于腸溶膠囊中，從而形成腸溶膠囊劑，其中所述的藥物粉末或顆粒含有降纖酶和藥學上可接受的載體；或者將腸溶微丸裝填于膠囊中，從而形成腸溶微丸劑，其中所述的腸溶微丸包括微丸藥芯和腸溶性包衣，其中所述微丸藥芯含有降纖酶和藥學上可接受的載體；或者將腸溶微丸和藥學上可接受的載體混合后壓片制備成腸溶片，其中所述的腸溶微丸包括微丸藥芯和腸溶性包衣，其中所述微丸藥芯含有降纖酶。具體實施方式本發(fā)明人鑒于現(xiàn)有降纖酶注射制劑存在的問題，經(jīng)過深入而廣泛的研究，在篩選大量的處方以及制備工藝的基礎上，首次將降纖酶制成口服腸溶制劑。實驗證明，本發(fā)明降纖酶口服腸溶制劑具有良好的有效性、安全性以及良好的患者順應性和耐受性。在此基礎上完成了本發(fā)明。術語本發(fā)明中的藥芯是指在腸溶片劑或腸溶微丸(小丸，Pellets)中除去腸溶性包衣的部分，藥芯中含有降纖酶和藥學上可接受的載體。如本文所用，術語"人工腸液"指模擬哺乳動物腸液的液體。人工腸液可按照中國藥典進行配制，也可使用磷酸鹽緩沖液(p朋.8)。一種優(yōu)選的制備方法如下取磷酸二氫鉀6.8g，加水500ml使溶解，用0.lmol/L氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)PH值至6.8，取胰酶10g，加水使溶解，將兩液混合后，加水稀釋至1000ml即得人工腸液。(見中國藥典2005版第二部附錄158頁)。如本文所用，術語"人工胃液"指模擬哺乳動物胃液的液體。人工胃液可按照中國藥典進行配制，也可使用0.lmol/L鹽酸溶液。一種優(yōu)選的制備方法如下取稀鹽酸16.4ml，加水約800ml與胃蛋白酶10g，搖勻后，加水衡釋至1000ml，即得人工胃液(見中國藥典2005版第二部附錄72頁)。活性成分在本發(fā)明中，活性成分為降纖酶。適用于本發(fā)明的降纖酶沒有特別限制，可以是各種常規(guī)的降纖酶，其中包括(但并不限于)從各類蛇(如蝮蛇)中提取的降纖酶。優(yōu)選的降纖酶是來源于長白山白眉蝮蛇或尖吻蝮蛇的降纖酶。這些降纖酶可用常規(guī)方法提取或制備。無論是天然的降纖酶或重組基因工程方式生產(chǎn)的降纖酶都可用于本發(fā)明。通常用作注射制劑使用的降纖酶原料其比活性在1200U/mg或以上，在本發(fā)明中，由于降纖酶作為口服制劑在制劑制備損耗、胃腸道吸收、降解失活等因素影響，考慮到單次口服給藥后目標蛋白吸收總量控制、達到最佳治療效果的藥物濃度窗口(血藥濃度的上下限)、原料成本等因素，通常用作口服制劑的活性成分降纖酶原料的比活性宜大于200U/mg并且低于8000U/mg，更佳地，為600-4000U/mg。當然，在本發(fā)明的制劑中還可含有有助于降纖作用的其他活性物質(zhì)或輔助成分。腸溶制劑及其制法本發(fā)明的腸溶制劑主要包括(a)腸溶片劑，所述的片劑包括藥芯和腸溶性包衣，其中所述藥芯含有降纖酶和藥學上可接受的載體；其中，所述的腸溶性包衣可以是先制備降纖酶顆粒，然后直接采用腸溶性材料包裹在顆粒外面后再進行制片，也可以是制備好的降纖酶顆粒制片后用腸溶材料包片。(b)腸溶膠囊劑，所述的膠囊包括腸溶膠囊和位于腸溶膠囊內(nèi)的藥物粉末或顆粒，其中所述的藥物粉末或顆粒含有降纖酶和藥學上可接受的載體；(c)腸溶微丸劑，所述的微丸劑包括膠囊以及位于膠囊內(nèi)的腸溶微丸，其中所述的腸溶微丸包括微丸藥芯和腸溶性包衣，其中所述微丸藥芯含有降纖酶和藥學上可接受的載體。通常，在本發(fā)明的口服腸溶制劑中，每劑含有降纖酶0.0001-20mg、填充劑0-200mg、粘合劑0-200mg、崩解劑或溶脹性輔料0-300mg、潤滑劑0.l-20mg、助流劑0.1-15mg、抗粘著劑0-15mg等，其中活性物質(zhì)降纖酶(以蛋白重量計算)為0.0001-20mg。所述的填充劑選自淀粉、糊精、糖粉、乳糖、甘露醇、磷酸氫鈣或微晶纖維素、纖維素，也可以是它們的混合物。所述的潤濕劑選自水或乙醇，或他們的混合物。所述的粘合劑選自淀粉漿、羥丙基淀粉、改良淀粉、預膠化淀粉、糊精、糖粉、糖漿、微晶纖維素、纖維素衍生物(包括羥丙基甲基纖維素、甲基纖維素、羧甲基纖維素鈉、乙基纖維素)、聚乙烯吡咯烷酮膠漿、明膠漿的一種，或它們的混合物。所述的崩解劑或溶脹性輔料選自羥丙基淀粉、改良淀粉、淀粉、羧甲基淀粉鈉、微晶纖維素、纖維素衍生物(包括羥丙基甲基纖維素、甲基纖維素、羧甲基纖維素鈉、低取代-羥丙纖維素、交聯(lián)羧甲基纖維素鈉、羧丙基纖維素、羧甲基纖維素鈣)、交聯(lián)聚乙烯吡咯烷酮、吐溫-80、十二烷基硫酸鈉、瓜耳膠、蒼耳膠、黃原膠中的一種或它們的混合物。所述的潤滑劑、助流劑、抗粘著劑可以選用改良淀粉、微晶纖維素、氫氧化鋁、硼酸、苯甲酸鈉、聚乙二醇、硬脂酸、硬脂酸鎂、硬脂酸鈣、硬脂酸鋅、滑石粉、十二烷基硫酸鎂、十二烷基硫酸鈉或微粉硅膠、硬脂酸單甘油酯、粽桐酰硬脂酸甘油酯、氫化的蓖麻油、氫化植物油、輕礦物油、延胡索酸十八烷基鈉中的一種或它們的混合物。在做片劑時還可以在配方中增加芳香劑和甜味劑，可以是甜菊糖、香精或阿斯巴坦中的一種或它們的混合物。包衣材料包括腸溶型丙烯酸樹脂、羥丙基甲基纖維素鄰苯二甲酸酯、醋酸纖維素鄰苯二甲酸酯、蟲膠等。本發(fā)明的口服腸溶制劑可用本領域常規(guī)的方法和設備進行制造。在一優(yōu)選例中，在控制生產(chǎn)環(huán)境的溫度(如4-15°C)、濕度(低于40%RH，最好低于20%RH)條件下，同時由于原料具有引濕性，制劑過程中所有的輔料水分要控制，保持干燥的情況下，以每劑中含有降纖酶5-800mg、填充劑0-200mg、粘合劑0-200mg、崩解劑或溶脹性輔料0-300mg、潤滑劑0.1-20mg、助流劑O.l-15mg、抗粘著劑0-15mg等，將活性物質(zhì)降纖酶(以蛋白重量計算為5-500mg)與各種類型的藥物載體或輔料均勻混合，得到混合物。腸溶片劑的制備方法，通常包括制粒、壓片、包衣等步驟。腸溶膠囊的制備方法，通常包括制粒、裝膠囊等步驟。腸溶微丸的制備方法，通常包括微丸的制備方法有包衣鍋法、離心層積法、球晶造粒法、乳化法、擠出滾圓法、沸騰床制粒包衣、振蕩滴制法等方法，具體的操作步驟有差異。在另一優(yōu)選例中，將所得混合物制備成微囊，進行壓片后包衣制備成腸溶片，或者將微囊填充至腸溶膠囊殼中制成腸溶膠囊，或者將微囊制成腸溶微丸。也可以采用球型微丸造粒機制備微丸，其中控制工藝條件生產(chǎn)環(huán)境和設備溫度保持在10度以下。微丸直徑控制在2mm以內(nèi)。采用不同處方，可將藥物制成普通、速釋、或快速崩解(控釋)的微丸，填充入空腸溶膠囊、或采用腸溶包衣壓成片劑使用。為達到降纖酶蛋白在胃液中不被降解且活性不傷失，同時能夠在腸中快速釋放出來被吸收的目的，通過以下兩個條件控制制劑工藝(1)腸溶制劑方式的制備，腸溶制劑方式可以是先將腸溶材料和降纖酶蛋白混合指標成具有腸溶特點的微丸，然后采用這樣的微丸再去壓片、灌膠囊，從而在微丸水平上做到腸溶；也可以是先將降纖酶蛋白制備微丸后，再壓片包腸溶材料，或灌裝腸溶膠囊。(2)快速崩解，通過腸溶方式將降纖酶送達到腸部后，要確保將降纖酶快速分布到腸表面被吸收，采用微丸和快速崩解的兩個方式結合，以保護酶的活性又快速分布的目的，快速崩解的輔料可以和降纖酶混合后一起制備微丸，也可以在微丸制備好后再和快速崩解輔料混合壓片?？焖籴尫诺奈⑼?速釋微丸)是降纖酶與一般輔料制成的具有較快釋藥速度的微丸，一般情況下，30min溶出度不得少于7(f/。，微丸處方中常加入一定量的崩解劑或表面活性劑，以保證微丸的快速崩解和降纖酶的溶出。優(yōu)選的方式，降纖酶先包裹腸溶材料后再和快速崩解輔料混合，以保護酶的活性，不受崩解輔料的影響而失活。丸芯的輔料主要有稀釋劑和粘合劑，常用丸芯輔料有蔗糖、乳糖、淀粉、微晶纖維素、甲基纖維素、聚乙烯醇、聚乙烯吡咯垸酮、羥丙基纖維素、羥丙基甲基纖維素等。微丸包衣膜的輔料有包衣成膜材料，增塑劑，有時尚須加致孔劑、著色劑、抗粘劑和避光劑等。常用的水溶性增塑劑有檸檬酸三乙酯、甘油、丙二醇、聚乙二醇類；脂溶性增塑劑有檸檬酸三乙酯、苯二甲酸二甲酯、癸二酸二丁酯、甘油三醋酸酯、蓖麻油等；常用致孔劑有聚乙二醇類、聚乙烯吡咯烷酮、蔗糖、鹽類以及其他水溶性成膜材料如HPMC、HPC等；常用抗粘性有滑石粉、微粉硅膠、硬脂酸鎂；另外包衣液處方中有時還須加著色劑、穩(wěn)定劑、表面活性劑如十二垸基硫酸鈉、消泡劑如二甲基硅油?？捎糜谥苽浔景l(fā)明微丸的方法沒有特別限制，可以用本領域現(xiàn)有的方法和設備。微丸的制備方法根據(jù)設備類型和制備過程大體上可歸納為四大類1)、旋轉滾動式制丸；2)、層積式制丸，包括液相層積法和粉末式層積法；3)、擠壓式制丸；4)、球形化制丸。微丸的制備設備和技術有傳統(tǒng)的包衣鍋和快速型包衣鍋、流化床及離心流化設備離心造粒機、擠壓-滾圓機以及在液體介質(zhì)中制備微丸的液中干燥法和球型結晶造粒技術。微丸的制備方法除了以上所述四大類之外，還可利用微囊制備技術如化學聚合法制得理想粒徑的微丸。雖然上述四種方式均可以達到制備微丸的目的，但是考慮到本發(fā)明中藥物的蛋白質(zhì)性質(zhì)以及酶活性很容易收到物理(熱、壓等)和化學(酸、堿、變性劑、表面活性劑等)因素而致失活的特點，在生產(chǎn)過程中要充分考慮各種工藝環(huán)節(jié)的條件控制。優(yōu)選的，微丸制備工藝條件應該考慮到低溫(溫度控制在攝氏15度以下)、干燥(生產(chǎn)環(huán)境濕度控制在8%以下)和壓片壓力低、速度低等因素。在優(yōu)選例中，為了進一步解決在生產(chǎn)過程中蛋白酶失活問題，可以在控制的生產(chǎn)條件下直接采用微囊技術將酶原料包被，再與其它各種類型的藥物載體或輔料均勻混合。制備成微囊時可以采用的囊材與載體材料包括明膠、阿拉伯膠、海藻酸鹽、蛋白類(包括白蛋白，如人血清白蛋白、小牛血清白蛋白、玉米蛋白、雞蛋白、小牛酪蛋白等)、淀粉(包括玉米淀粉、小麥淀粉、馬鈴薯淀粉等)、和羧甲基纖維素、鄰苯二甲酸纖維素、甲基纖維素、乙基纖維素、羥丙甲纖維素、丁酸醋酸纖維素、琥珀酸醋酸纖維素等。聚碳酯、聚氨基酸、聚乳酸、聚丙烯酸樹脂、聚甲基丙烯酸甲酯、聚甲基丙烯酸羥乙酯、聚氰基丙烯酸烷酯、乙效酯丙交酯共聚物、聚乳酸-聚乙二醇嵌段共聚物，s-已內(nèi)酯與丙交酯嵌段共聚物、聚合酸酐及羧甲基葡萄糖等。在一優(yōu)選例中，本發(fā)明的腸溶制劑為降纖酶腸溶膠囊，每劑包含降纖酶0.005-5mg，淀粉0-200mg，微晶纖維素0-200mg,交聯(lián)聚乙烯吡咯烷酮2-200mg，交聯(lián)羧甲基纖維素鈉0-200mg，低取代-羥丙纖維素0-200mg，微粉硅膠0-15mg，硬脂酸鎂0.l-20mg，十二烷基硫酸鈉0-15mg。其制備方法包括稱取降纖酶、淀粉，微晶纖維素，交聯(lián)聚乙烯吡咯烷酮、交聯(lián)羧甲基纖維素鈉、低取代-羥丙纖維素，混合均勻；滴加5%聚乙烯吡咯烷酮K30乙醇液制軟材，過18-24目篩制粒；濕顆粒于低溫下微風吹干進行干燥；用18-24目篩整粒，加入硬脂酸鎂和微粉硅膠混勻，灌裝入腸溶膠囊內(nèi)，即得到降纖酶腸溶膠囊。在另一優(yōu)選例中，本發(fā)明的腸溶制劑為降纖酶腸溶片，每片包含降纖酶0.005-5mg，淀粉0-200mg，微晶纖維素0-200mg,交聯(lián)聚乙烯吡咯烷酮2-200mg，交聯(lián)羧甲基纖維素鈉0-200mg，低取代-羥丙纖維素0-200mg，微粉硅膠0-15mg，硬脂酸鎂0.1-20mg，十二垸基硫酸鈉0-15mg，甜菊糖0-15mg。其制備方法包括稱取降纖酶、淀粉，微晶纖維素、部分交聯(lián)聚乙烯吡咯烷酮，部分交聯(lián)羧甲基纖維素鈉、部分低取代-羥丙纖維素，混合均勻；滴加5%聚乙烯吡咯垸酮K30乙醇液制軟材，過18-24目篩制粒；濕顆粒于低溫下微風干燥；采用腸溶性材料，包括腸溶型丙烯酸樹脂、羥丙基甲基纖維素鄰苯二甲酸酯、醋酸纖維素鄰苯二甲酸酯、蟲膠等包衣；用18-24目篩整粒，再按前述配方加入剩余的交聯(lián)聚乙烯吡咯烷酮、交聯(lián)羧甲基纖維素鈉、低取代-羥丙纖維素，硬脂酸鎂和微粉硅膠，混勻壓片。所有實施例中，如果采用的降纖酶原料比活性較高，所用的蛋白量相對比較少，在實際操作過程中容易出現(xiàn)原料分散不勻、原輔料混合不勻等問題，因此在投料過程中要保證原料和輔料充分混合均勻。比如，可以通過先將相當比例(不超過l:5)的降纖酶和淀粉充分混合，然后再將此混合物按比例的作為原料再和各種輔料混合，逐步放大量的方式，保證原輔料的充分混合。給藥方式本發(fā)明的口服腸溶制劑可通過口服給藥。通常根據(jù)降纖酶原料比活性、制劑的吸收情況而變化制劑的蛋白量，和在醫(yī)生指導下確定具體患者的每日給藥量，按降纖酶活性計算單個患者的每日給藥劑量，當然，具體劑量還應考慮給藥途徑、病人健康狀況等因素，這些都是熟練醫(yī)師技能范圍之內(nèi)的工作。本發(fā)明的口服制劑可用于治療目前降纖酶注射劑所適用的各種疾病和癥狀，其中包括(但并不限于)用于治療或預防(l)急性腦梗死，包括腦血栓、腦栓塞，短暫性腦缺血發(fā)作，以及腦梗死再復發(fā)；(2)心肌梗死，不穩(wěn)定性心絞痛以及心肌梗死再復發(fā)；(3)四肢血管病，包括股動脈栓塞，血栓閉塞性脈管炎，雷諾氏??；(4)血液呈高粘狀態(tài)、高凝狀態(tài)、血栓前狀態(tài)；(5)突發(fā)性耳聾；(6)肺栓塞等疾病。本發(fā)明的降纖酶口服制劑的主要優(yōu)點包括(a)相對于注射給藥，口服制劑服用更方便。(b)在本發(fā)明的制劑中降纖酶蛋白活性高，確保了口服吸收后有效。(C)通過制劑方式在胃液中降纖酶得到保護活性基本上不降解，且制劑腸溶性好，蛋白酶大部分在腸道得到吸收，血藥濃度高。下面結合具體實施例，進一步闡述本發(fā)明。應理解，這些實施例僅用于說明本發(fā)明而不用于限制本發(fā)明的范圍。下列實施例中未注明具體條件的實驗方法，通常按照常規(guī)條件，例如Thetheoryandpracticeofindustrialpharmacy(LachmanL)或《藥劑學》第三版(屠錫德等主編，人民衛(wèi)生出版社出版)、和《藥物新劑型與新技術》(陸彬主編，人民衛(wèi)生出版社，1998)中所述的條件，或按照制造廠商所建議的條件。實施例1、降纖酶腸溶膠囊的制備取降纖酶O.2g(蛋白重量，比活為2000U/mg蛋白)和羧甲基纖維素鹽15g、低取代羥丙基纖維素15g、交聯(lián)聚乙烯吡咯烷酮10g、明膠5g等充分混合，制備成微囊，然后將微囊和微晶纖維素5g、淀粉25g、滑石粉充分混合，裝入3號腸溶膠囊，制備成1000粒腸溶膠囊，每個膠囊含有0.2mg降纖酶。本實施例制得多批次的膠囊，其中隨機取批號為0901，0902,0903進行檢測。實施例2、降纖酶腸溶片的制備取降纖酶0.2g(比活約為1500U/mg蛋白)和羧甲基纖維素鹽15g、低取代羥丙基纖維素10g、交聯(lián)聚乙烯吡咯垸酮4g、明膠5g等充分混合，制粒，冷干，醋酸纖維素鄰苯二甲酸酯包衣，過18-24目篩，然后和微晶纖維素5g、淀粉25g、交聯(lián)聚乙烯吡咯烷酮4g、交聯(lián)羧甲基纖維素鈉4g、低取代-羥丙纖維素5g，適量硬脂酸鎂和微粉硅膠，混勻壓1000片。每片含有0.2mg降纖酶。本實施例制得多批次的腸溶片，其中隨機取批號為1011，1012，1013進行檢測。實施例3、腸溶制劑的抗酸性能本實施例中，人工胃液為0.lmol/L鹽酸溶液。將實施例1中制備的降纖酶腸溶膠囊和腸溶片放置于lOOmL人工胃液中，于37土rC的恒溫水浴中攪拌速度不超過200r/min，于2小時內(nèi)測定人工胃液中降纖酶的含量，發(fā)現(xiàn)有不超過6%的降纖酶釋放出來。表一、腸溶制劑抗酸能力樣品及批號釋放率(溶液中降纖酶含量的百分比)膠囊09012.7%膠囊09012.3%膠囊09013.5%片10114.6%片10115.2%片10113.8%表一的結果表明根據(jù)實施例l和2的配方制備的制劑在胃環(huán)境中是穩(wěn)定的。實施例4、腸溶制劑的腸溶性能取磷酸二氫鉀6.8g，加水500ml使溶解，用0.lmol/L氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)PH值至6.8，取胰酶10g，加水量使溶解，將兩液混合后，加水稀釋至1000ml得到人工腸液。將降纖酶腸溶膠囊和腸溶片放置于lOOraL人工腸液中，于37土rC的恒溫水浴中攪拌速度不超過200r/min，于1小時內(nèi)測定人工腸液中降纖酶的含量，發(fā)現(xiàn)有超過96%的降纖酶釋放出來。表二、腸溶制劑的腸溶性能<table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>表二的結果表明根據(jù)實施例l和2的配方制備的制劑在腸環(huán)境中可以快速釋放出降纖酶。實施例5、腸溶制劑的穩(wěn)定性在干燥器下部放入飽和氯化鈉溶液，上部放3批降纖酶腸溶膠囊和腸溶片樣品，加蓋密封，干燥器放于40士rC恒溫培養(yǎng)箱中連續(xù)放置90天，每隔30天取樣一次，測定。表三、恒溫恒濕加速試驗結果(溫度40土rC，濕度75%)<table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>表三的結果表明根據(jù)實施例1和2的配方制備的腸溶制劑對溫度是穩(wěn)定的。實施例6、腸溶制劑的口服吸收測定降纖酶采用1251(放射性碘)標記，按照實施例1的配方，采用動物專用腸溶膠囊(汕頭藥用膠囊廠提供的小動物專用腸溶膠囊殼)制備成腸溶膠囊，每膠囊含有2mg降纖酶標記蛋白。同時采用降纖酶標記蛋白按照常規(guī)方式制備普通膠囊做對照，每個普通膠囊也含有2mg降纖酶蛋白。采用SD大鼠，每組7個，灌胃給藥，分別在給藥前和給藥后30、45、60分鐘，眼眶取血，測定100uL血液中',放射性物質(zhì)含量(以放射性計數(shù)計算)，結果如表四。表四、灌胃給藥后50大鼠血液中'251放射性的測定<table>tableseeoriginaldocumentpage16</column></row><table>表四的結果表明在60分鐘內(nèi)，根據(jù)實施例1的配方制備的腸溶制劑相對于普通制劑有較大的吸收。實施例7、腸溶制劑的體內(nèi)活性為達到評價口服腸溶降纖酶制劑后是否能夠有效吸收的目的，需要測定口服給藥后體內(nèi)降纖酶的活性，該部分工作分如下幾個內(nèi)容1)、采用氯胺T法進行同位素'25l(Na'25l)標記降纖酶，S印hadexG50分離純化，標記率為40.1%，比活度為25.03kBq/ug，采用SDS-PAGE電泳法測定標記物的放化純度大于95%，標記后的降纖酶測定其生物活性沒有明顯降低。2)、采用4mg標記的降纖酶(1251降纖酶)在實驗室條件下，按照實施例1制備小量微丸，罐裝小動物用腸溶膠囊中，每個膠囊中含有0.01mg的降纖酶。按照實施例3和實施例4測定其腸溶特性合格。3)、SD大鼠(6只，雄性，250土10g)口服給藥，連續(xù)三天，每天一次，每次O.Olmg的降纖酶(l個膠囊直接送入胃中)，在第一次給藥前和第三天給藥后的0，30,60，120分鐘，眼眶取血入加肝素的Eppendorf管中，每次取血0.5-0.8ml，3000rpm離心5分鐘，取上清血漿作為待測定樣品備用。4)、制備三氯乙酸(TCA)沉淀法和SDS-PAGE兩種測定的標準曲線首先制備O.OIM，pH6的磷酸緩沖液制備'251降纖酶標準溶液(濃度梯度為12.5，50，200，800，3200ng/ml);然后按照三氯乙酸沉淀法在0.5mlEppendorf離心管中各加入標準溶液10ul、正常鼠血漿15ul、蒸餾水175ul和三氯乙酸200ul，混勻后12000rpm離心3分鐘，棄上清液，將離心管直接放在放射性測定管中，測定60秒鐘放射性Y計數(shù)，以此計算放射性計數(shù)和1251降纖酶濃度的線性關系。結果表明在上述測定范圍內(nèi)，放射性計數(shù)和'251降纖酶濃度有良好的線性關系，本方法測定血漿中'MI降纖酶濃度的信噪比為3.1，最小檢出量為2.4ng/ml。將上面的1251降纖酶標準溶液10ul，加上等體積非標記的lmg/ml降纖酶，加熱后進行SDS-PAGE電泳，電泳完成后，考馬斯亮蘭R-250染色，再行脫色，每條泳帶等距離橫切成膠條，分別進行放射性測定，計算泳帶中降纖酶位置膠條的總放射性計數(shù)和'251降纖酶的濃度成線性關系。結果表明在上述測定范圍內(nèi)，泳帶中降纖酶位置處膠條的總放射性計數(shù)和'251降纖酶濃度有良好的線性關系，本方法測定血漿中'251降纖酶濃度的信噪比為2.8，最小檢出量為2.lng/ml。5)、取第三步驟所制備的待測定樣品，分別按照第四步驟分別進行TCA法和SDS-PAGE法測定，對照所制備的標準曲線，計算口服降纖酶后血液中的降纖酶濃度。結果如下1)采用本實施例所描述方法，TCA法和SDS-PAGE法均可有效檢測1251標記后的降纖酶量，其放射性計數(shù)和降纖酶濃度呈良好線性關系。2)待測定樣品中1251降纖酶量在所制備的標準曲線范圍內(nèi)。3)兩種方法對照，結果一致，相關性很好。4)通過上述方法測定的結果表明口服按照實施例1制備的降纖酶腸溶制劑30分鐘后，血液中只有極少量降纖酶量可被檢測到，口服60分鐘后血液中的降纖酶含量為0.2-3U/L(根據(jù)個體差異有變動)，.最高為3U/L，120分鐘后血液仍可以檢測到降纖酶的存在。與之相反，以降纖酶普通膠囊(非腸溶制劑)為對照(給藥劑量和方式相同)。在口服對照膠囊30分鐘后、60分鐘后和120分鐘后，血液中檢測不到降纖酶量。由此可知，與作為對照的降纖酶普通膠囊(非腸溶制劑)相比較，本發(fā)明的降纖酶腸溶制劑具有更優(yōu)良的體內(nèi)活性。在本發(fā)明提及的所有文獻都在本申請中引用作為參考，就如同每一篇文獻被單獨引用作為參考那樣。此外應理解，在閱讀了本發(fā)明的上述講授內(nèi)容之后，本領域技術人員可以對本發(fā)明作各種改動或修改，這些等價形式同樣落于本申請所附權利要求書所限定的范圍。權利要求1.一種降纖酶口服制劑，其特征在于，所述口服制劑為腸溶制劑并且具有以下特性(i)每劑中含有降纖酶蛋白量為0.0001-20mg；(ii)按以下方法測定，口服此制劑后，降纖酶的最高血藥濃度達到0.2-3U/L血液給體重為250±10g的SD大鼠口服給藥所述制劑，連續(xù)三天，每天一次，給藥劑量對應于0.01mg降纖酶，并在第三天給藥后測定降纖酶的血藥濃度；和(iii)所述的降纖酶的比活性為500-4000U/mg蛋白。2.如權利要求l所述的口服制劑，其特征在于，所述制劑在人工胃液中降纖酶的釋放率不超過6%。3.如權利要求l所述的口服制劑，其特征在于，所述制劑在人工腸液中降纖酶的釋放率大于90%。4.如權利要求l所述的降纖酶口服制劑，其特征在于，所述制劑在人工腸液中在40分鐘內(nèi)崩解。5.如權利要求1所述的降纖酶口服制劑，其特征在于，所述制劑選自下組(a)腸溶片劑，所述片劑包括藥芯和腸溶性包衣，其中所述藥芯含有降纖酶和藥學上可接受的載體；(b)腸溶膠囊劑，所述膠囊包括腸溶膠囊和位于腸溶膠囊內(nèi)的藥物粉末或顆粒，其中所述的藥物粉末或顆粒含有降纖酶和藥學上可接受的載體；或(c)腸溶微丸劑，所述微丸劑包括膠囊以及位于膠囊內(nèi)的腸溶微丸，其中所述的腸溶微丸包括微丸藥芯和腸溶性包衣，其中所述微丸藥芯含有降纖酶和藥學上可接受的載體。6.如權利要求5所述的降纖酶口服制劑，其特征在于，所述的藥學上可接受的載體包括填充劑、粘合劑、崩解劑或溶脹性輔料、潤濕劑、助流劑、抗粘著劑、芳香劑、甜味劑。7.如權利要求6所述的降纖酶口服制劑，其特征在于，所述崩解劑選自下組淀粉、改良淀粉、羥丙基淀粉、羧甲基淀粉鈉、微晶纖維素、纖維素衍生物、交聯(lián)聚乙烯吡咯垸酮、吐溫-80、十二垸基硫酸鈉、瓜耳膠、蒼耳膠、黃原膠、或其組合。8.如權利要求l所述的降纖酶口服制劑，其特征在于，所述制劑是在小腸、大腸(包括結腸)、或直腸釋放的腸溶制劑。9.如權利要求l所述的降纖酶口服制劑的用途，其特征在于，所述制劑用于制備治療或預防以下疾病的藥物(l)急性腦梗死，包括腦血栓、腦栓塞，短暫性腦缺血發(fā)作，以及腦梗死再復發(fā)的預防；(2)心肌梗死，不穩(wěn)定性心絞痛以及心肌梗死再復發(fā)；(3)四肢血管病，包括股動脈栓塞，血栓閉塞性脈管炎，雷諾氏病；(4)血液呈高粘狀態(tài)、高凝狀態(tài)、血栓前狀態(tài)；(5)突發(fā)性耳聾;(6)肺栓塞。10.—種權利要求1所述的降纖酶的口服制劑的制備方法，其特征在于，包括步驟在片劑藥芯外部包裹腸溶性包衣，從而形成腸溶片劑，其中所述藥芯含有降纖酶和藥學上可接受的載體；或者將藥物粉末或顆粒裝填于腸溶膠囊中，從而形成腸溶膠囊劑，其中所述的藥物粉末或顆粒含有降纖酶和藥學上可接受的載體；或者將腸溶微丸裝填于膠囊中，從而形成腸溶微丸劑，其中所述的腸溶微丸包括微丸藥芯和腸溶性包衣，其中所述微丸藥芯含有降纖酶和藥學上可接受的載體；或者將腸溶微丸和藥學上可接受的載體混合后壓片制備成腸溶片，其中所述的腸溶微丸包括微丸藥芯和腸溶性包衣，其中所述微丸藥芯含有降纖酶。全文摘要本發(fā)明提供了一種新的降纖酶口服制劑，該制劑是含有降纖酶為主要成分的腸溶制劑。本發(fā)明還提供了所述降纖酶口服制劑的制法和用途。該制劑在臨床上可用于治療或預防(1)急性腦梗死，包括腦血栓、腦栓塞，短暫性腦缺血發(fā)作，以及腦梗死再復發(fā)；(2)心肌梗死，不穩(wěn)定性心絞痛以及心肌梗死再復發(fā)；(3)四肢血管病，包括股動脈栓塞，血栓閉塞性脈管炎，雷諾氏?。?4)血液呈高粘狀態(tài)、高凝狀態(tài)、血栓前狀態(tài)；(5)突發(fā)性耳聾；(6)肺栓塞等疾病。文檔編號A61P9/10GK101269216SQ200710038358公開日2008年9月24日申請日期2007年3月23日優(yōu)先權日2007年3月23日發(fā)明者張小芳,捷黃申請人:上海擬生生物科技有限公司