專利名稱：：秋水仙堿衍生物-膽汁酸偶合物及其醫(yī)藥用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及新的秋水仙堿衍生物_膽汁酸偶合物及其非毒性的藥學(xué)上可接受的鹽以及含有這些化合物作為活性成分的藥物組合物及其在制備肝硬化和肝纖維化治療藥物方面的應(yīng)用；本發(fā)明還涉及秋水仙堿衍生物-膽汁酸偶合物及其非毒性的藥學(xué)上可接受的鹽的制備方法。
背景技術(shù)：
：肝硬化是威脅人類健康的重大疾病。全球5億多乙肝和丙肝患者中，25%將發(fā)展成為肝硬化；各種原因(酒精性、肥胖、糖尿病等)引起的脂肪肝的發(fā)展也會(huì)導(dǎo)致肝硬化。臨床試驗(yàn)的結(jié)果表明，秋水仙堿在治療肝硬化和肝纖維化方面具有明確的療效，有效劑量較低。秋水仙堿抗肝纖維化和肝硬化的機(jī)理包括抗微管蛋白活性、抑制有絲分裂、抗炎作用、抑制脂質(zhì)過(guò)氧化作用、膜穩(wěn)定作用以及降低細(xì)胞色素P-450水平等。在肝內(nèi)，秋水仙堿可以抑制前膠原在微管中聚合和分泌，同時(shí)刺激膠原酶的分泌并增加其活性，促進(jìn)膠原的降解。它還能直接抑制I型膠原mRNA的升高，從而改善肝臟的功能，改善肝循環(huán)，增加供氧和營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，有利于肝臟病情穩(wěn)定，促進(jìn)肝細(xì)胞再生和修復(fù)，達(dá)到治療肝硬化的藥理作用。去乙酰基秋水仙堿及秋水仙酸是秋水仙堿的活性代謝產(chǎn)物，可以通過(guò)水解秋水仙堿而獲得，在臨床研究中三曱基秋水仙酸顯示出良好的抗肝硬化和肝纖維化作用。但是，秋水仙堿及其衍生物給藥后全身分布，往往產(chǎn)生一定的副作用，如惡心、食欲減退、腹?jié)q，嚴(yán)重者出現(xiàn)腸麻痹和便秘以及胃出血，4限制了它的應(yīng)用。-火水仙堿去乙酰-火水仙i威-火水仙酸通過(guò)肝靶向給藥技術(shù)將化學(xué)治療藥物選擇性的投放于肝臟，能夠減輕或避免其全身的毒副作用。將藥物與含有半乳糖殘基的糖蛋白或寡肽偶聯(lián)，利用肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞上去唾液酸糖蛋白受體對(duì)半乳糖殘基特異性的識(shí)別和結(jié)合作用，可以將藥物選擇性投放于肝細(xì)胞。如將利巴韋林與乳糖化白蛋白或乳糖化多聚賴氨酸偶聯(lián)，可以將利巴韋林選擇性投放于肝細(xì)胞，耙向藥物抑制小鼠肝炎的有效劑量只有游離藥物的1/2-1/3;將阿德福韋與含半乳糖配基的寡肽載體偶聯(lián)形成的偶合物,能夠?qū)⒌赂ｍf選擇性的投放于肝細(xì)胞，阿德福韋的肝/腎濃度比由0.058提高到1.86至2.69;反義寡核香酸與肝靶向載體半乳糖化賴氨酸交聯(lián)形成的肝靶向反義核酸在大鼠靜脈給藥后，肝臟攝取高達(dá)77%,而游離反義核酸的肝攝取率只有19%，肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞的攝取率提高了60倍；秋水仙堿-乳糖化血清白蛋白偶合物，抗肝纖維化療效比秋水仙堿更好；將抗腫瘤藥物阿霉素與乳糖化血清白蛋白偶聯(lián)，能夠避免其心臟副作用。但是，以乳糖化白蛋白或乳糖化多聚賴氨酸等大分子為載體的肝靶向藥物易被網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)清除、載藥量小、化學(xué)組成復(fù)雜，需注射給藥。膽酸是內(nèi)源性的肝細(xì)胞特異性的天然配基，膽酸口服后通過(guò)主動(dòng)轉(zhuǎn)運(yùn)途徑由腸道吸收進(jìn)入肝臟，具有高度的器官特異性和較高的轉(zhuǎn)運(yùn)能力；因此，以膽酸為靶向載體，不但能夠?qū)崿F(xiàn)藥物的肝靶向性，減少毒副作用，而且能夠提高藥物的口服生物利用度；作為內(nèi)源性的天然配基，膽酸具有較好的生物兼容性好。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明提供分別由結(jié)構(gòu)式Ia和Ib所示的膽酸或熊去氧膽酸與秋水仙堿衍生物的偶合物結(jié)構(gòu)式中，R代表OH(膽酸)或H(熊去氧膽酸)，A代表氨基酸，n為1-3的整數(shù)，m為0-2的整數(shù)，氨基酸的構(gòu)型為D型或L型。D代表去乙酰秋水仙堿或秋水仙酸及其它^大水仙石威的活性代謝產(chǎn)物。本發(fā)明還提供式Ia和Ib所示的膽酸或熊去氧膽酸與秋水仙堿衍生物的非毒性藥學(xué)上可接受的鹽，這些鹽可以由Ia和Ib分子中的羧基與各種陽(yáng)離子如鈉離子、鉀離子、氨離子、鈣離子、鋅離子、鎂離子或氨離子等形成。本發(fā)明另一方面還提供式Ia和Ib所代表的膽酸或熊去氧膽酸與秋水仙44衍生物的偶合物及其非毒性的藥學(xué)上可接受的鹽的制備方法。本發(fā)明另一方面還提供含有式Ia和Ib所代表的膽酸或熊去氧膽酸與秋水仙堿衍生物的偶合物及其非毒性的藥學(xué)上可接受的鹽作為活性成分以及適宜的賦型劑形成的藥物組合物。這些藥物組合物可以是溶液劑、片劑、膠嚢或注射劑；這些藥物組合物可以通過(guò)注射途徑給藥或口服給藥。本發(fā)明另一方面還提供通過(guò)給于有效治療量的式Ia和Ib所代表的膽酸或熊去氧膽酸與秋水仙堿衍生物的偶合物及其非毒性的藥學(xué)上可接受的鹽及其藥物組合物治療肝硬化的方法。本發(fā)明的范圍包括下述化合物，并不限于下述化合物。本領(lǐng)域的專業(yè)人員能夠理解，在不背離本發(fā)明的精神和范圍的前提下，可以對(duì)本發(fā)明進(jìn)行各種變化和修飾。目標(biāo)化合物Ia的合成反應(yīng)如下:<formula>formulaseeoriginaldocumentpage7</formula>Ia合成路線將膽酸或熊去氧膽酸位的游離羧基與a-羧基被保護(hù)的酸性氨基酸的游離氨基反應(yīng)生成酰胺，然后將膽汁酸-氨基酸偶合物的游離羧基與秋水仙堿衍生物或者秋水仙堿衍生物-氨基酸偶合物的游離氨基縮合，將縮合產(chǎn)物皂化脫去保護(hù)基，得到目標(biāo)化合物。目標(biāo)化合物lb的合成反應(yīng)如下<formula>formulaseeoriginaldocumentpage7</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage8</formula>Ib合成3各線先將膽酸或熊去氧膽酸的游離羧基曱酯化，膽酸或熊去氧膽酸曱酯的3-位羥基再與氯曱酸對(duì)硝基苯酯反應(yīng)得到3-位活化的膽酸或熊去氧膽酸曱酯，再與秋水仙堿衍生物或者秋水仙堿衍生物-氨基酸偶合物的游離氨基縮合，將縮合產(chǎn)物皂化脫去保護(hù)基，得到目標(biāo)化合物。具體買施方式通過(guò)下面的實(shí)施例可以對(duì)本發(fā)明進(jìn)行進(jìn)一步的描述，然而，本發(fā)明的范圍并不限于下述實(shí)施例。本領(lǐng)域的專業(yè)人員能夠理解，在不背離本發(fā)明的精神和范圍的前提下，可以對(duì)本發(fā)明進(jìn)行各種變化和修飾。實(shí)施例1N-膽酰谷氨酸-三甲基秋水仙酸偶合物(Ia-l)的制備1.1N-膽酰谷氨酸-oc-曱酯的合成將16.1克(O.l摩爾)谷氨酸-cx-甲酯溶于160毫升1N氫氧化鈉溶液中，并將混合液泠卻至0。C。取膽酸36.7克(90毫摩爾)溶解于110毫升四氫呋喃中，在冰鹽浴下冷卻至-15°C;依次加入5.20毫升N-曱基嗎啡啉、6.02毫升氯曱酸異丁酯，在冰鹽浴下反應(yīng)8-10分鐘。將谷氨酸-oc-曱酯溶液加入到反應(yīng)液中，冰浴下攪拌1.5小時(shí)，除去冰浴，在室溫下攪拌2小時(shí)。反應(yīng)畢，以5。/o的檸檬酸酸化PH值至3，用乙酸乙酯提取3次，合并乙酸乙酯層，依次用5%檸檬酸、飽和食鹽水洗滌，無(wú)水硫酸鎂干燥。減壓除去溶劑，柱層析分離(展開劑=石油醚乙酸乙酯曱醇=4:4:0.3)，得白色固體45.1克，收率91%。TLC:R產(chǎn)0.3-0.4,展開劑=石油醚乙酸乙酯甲醇冰醋酸=4:4:i:2。1.2N-膽酰谷氨酸-a-曱酯-三曱基秋水仙酸偶合物的合成將DCC溶于四氫呋喃中，放于冰箱中冷卻。將三曱基秋水仙酸1.03克(3毫摩爾)溶于重蒸的四氫呋喃中，滴加入N-膽酰谷氨酸-cx-曱酯1.65克(3毫摩爾)的重蒸四氫呋喃溶液，攪拌，冰鹽浴冷卻，0。C以下加入HoBt,將DCC的四氫呋喃溶液加入反應(yīng)瓶中，0。C以下攪拌2小時(shí)，撤去冰鹽浴，室溫?cái)嚢柽^(guò)夜。濾去白色不溶固體，水泵減壓除去四氬吹喃，殘余物用乙酸乙酯溶解，依次用飽和碳酸氯鈉水溶液、10%檸檬酸溶液、飽和碳酸氬鈉水溶液及飽和氯化鈉水溶液洗滌三次，收集有機(jī)相，無(wú)水硫酸鈉干燥。過(guò)濾除去干燥劑，減壓旋除溶劑，柱層析分離，得到產(chǎn)物。TLC:氯仿甲醇=20:1,Rf=0.3。1.3N-膽酰谷氨酸-三甲基秋水仙酸偶合物的合成將N-膽酰谷氨酸-a-曱酯-三曱基秋水仙酸偶合物0.6克(0.68毫摩爾)溶于甲醇中，加入20。/。氫氧化鈉溶液2ml，室溫?cái)嚢?小時(shí)，蒸除曱醇，殘余物加水溶解，用乙酸乙酯洗滌三次。用檸檬酸將水溶液調(diào)至pH-2，然后用乙酸乙酯萃取三次，收集有機(jī)相，無(wú)水硫酸鈉干燥。過(guò)濾除去干燥劑，減壓旋除溶劑，柱層析分離，得到產(chǎn)物，收率62%,。TLC:氯仿曱醇=10:1,9Rf=0.4。MS(m/e):863.1(M+1);元素分析(C48H66N2012):理論值C66.80%,H7.71%,N3.25%;實(shí)驗(yàn)值C66.71%，H7.89%,N3.35%。實(shí)施例2N-熊去氧膽酰谷氨酸-三曱基秋水仙酸偶合物(Ia-2)的制備以熊去氧膽酸取代膽酸，參照實(shí)施例l的方法，得到化合物Ia-2，收率72%,TLC:氯仿曱醇=20:1,Rf=0.5。MS(m/e):847.0(M+1);元素分析(C48H66N20):理論值C68.06%,H7.85%,N3.31%;實(shí)驗(yàn)值C68.12%,H7.74%,N3.40%。實(shí)施例3N-膽酰谷氨酸-去乙酰秋水仙堿偶合物(Ia-3)的制備以去乙酰秋水仙堿取代三曱基秋水仙酸，參照實(shí)施例1的方法，得到化合物Ia-3，收率58%，TLC:氯仿曱醇=25:1，Rf=0.3。MS(m/e):877.3(M+1);元素分析(C49H68N2012):理論值C67.10%，H7.81%，N3.19%;實(shí)-瞼值C67.25%,H7.70%,N3.24%。實(shí)施例4N-熊去氧膽酰谷氨酸-去乙酰秋水仙堿偶合物(Ia-4)的制備以熊去氧膽酸取代膽酸，去乙酰秋水仙堿取代三曱基秋水仙酸，參照實(shí)施例1的方法，得到化合物Ia-4，收率65%,TLC:氯仿甲醇=25:1,Rf=0.4。MS(m/e):861.1(M+1);元素分析(C49H68N20):理論值C68.35%，H7.96%,N3.25%;實(shí)驗(yàn)值C68.17%,H8.06%,N3.40%。實(shí)施例5N-膽酰谷氨酰甘氨酸-三曱基秋水仙酸偶合物(Ia-5)的制備以N-甘氨酰三甲基秋水仙酸取代三曱基秋水仙酸，參照實(shí)施例1的方法，得到化合物Ia-5，收率51%,TLC:氯仿甲醇=15:1，Rf=0.4。MS(m/e):920.1(M+1);元素分析(C5。H69N3013):理論值C65.27%，H7.56%,N4.57%;實(shí)驗(yàn)值C65.30°/。，H7.72%，N4.39%。實(shí)施例6N-熊去氧膽酰谷氨酰甘氨酸-三曱基秋水仙酸偶合物(Ia-6)的制備以熊去氧膽酸取代膽酸，N-甘氨酰三甲基秋水仙酸取代三曱基秋水仙酸，參照實(shí)施例1的方法，得到化合物Ia-6，收率55%,TLC:氯仿曱醇=15:1,Rf=0.5。MS(m/e):904.2(M+l);元素分析(C5QH69N3012):理論值C66.42%,H7.69%,N4.650/o;實(shí)驗(yàn)值C66.28%,H7.81%,N4.49%。實(shí)施例7N-膽酰谷氨酰甘氨酸-去乙酰秋水仙堿偶合物(Ia-7)的制備以N-甘氨酰去乙酰秋水仙堿取代三曱基秋水仙酸，參照實(shí)施例1的方法，得到化合物Ia-7，收率45%，TLC:氯仿曱醇=15:1,Rf=0.4。MS(m/e):934.2(M+l);元素分析(C51H71N3013):理論值C65.58%，H7.66%,N4.50%;實(shí)驗(yàn)值C65.66%,H7.72%,N4.39%。實(shí)施例8N-熊去氧膽酰谷氨酰甘氨酸-去乙酰秋水仙堿偶合物(Ia-8)的制備以熊去氧膽酸取代膽酸，N-甘氨酰去乙酰秋水仙堿取代三曱基秋水仙酸，參照實(shí)施例1的方法，得到化合物Ia-8，收率48%,TLC:氯仿曱醇=15:l,Rf=0.6。MS(m/e):918.1(M+1);元素分析(C51H71N3012):理論值C66.72%,H7.79%,N4.58%;實(shí)驗(yàn)值C66.59%，H7.90%,N4.55%。實(shí)施例9三曱基秋水仙酸-膽酸偶合物(Ib-l)的制備9.1膽酸曱酯的合成將100ml無(wú)水曱醇水鹽浴冷卻，待溫度恒定后，滴加10ml乙酰氯，維持冰鹽浴1小時(shí)，自然恢復(fù)室溫，加入10g膽酸，反應(yīng)2小時(shí)，TLC鑒定，反應(yīng)完成。將反應(yīng)液傾入200ml水中，乙醚(35mlx3)萃取，合并乙醚溶液，分別用飽和碳酸氫鈉、飽和食鹽水依次洗滌，無(wú)水硫酸鈉干燥，濾除干燥劑，減壓旋除溶劑，柱層析分離，得白色固體，收率96%。TLC:乙酸乙酯，R產(chǎn)0.5，'H-畫RS(ppm,CDC13):3.96(1H,s);3.84(1H,s);3.66(3H,s)，3.44(1H,s,br);3.11-2.90(lH,br，m);2.38(2H,m);2.21(2H,m，br);1.90-1.04(steroidalCH2andCH,m,br);0.99(3H,d);0.89(3H，s);0.67(3H,s)9.2膽酸3-位活化產(chǎn)物的合成在0。C下將膽酸甲酯(2.0g,4.7mmol)溶于吡啶中，邊攪拌邊加入氯曱酸-4-硝基苯酯(1.4g,7.1mmol)。在0°C下將混合物攪拌30分鐘，之后在室溫下攪拌l小時(shí)。將反應(yīng)后混合物傾倒入50mlIN鹽酸中并用乙酸乙酯萃取3次。合并乙酸乙酯層，無(wú)水硫酸鈉干燥，濾除干燥劑，減壓旋除溶劑，柱層析分離，得白色固體。TLC:乙酸乙酯石油醚=1:3,R尸0.4。9.3三曱基秋水仙酸-膽酸曱酯偶合物的合成將中間體三曱基秋水仙酸溶于水/二氧六環(huán)(1:1,v:v)混合溶劑中，按照摩爾比為1:1加入適當(dāng)量的中間體膽酸3-位活化產(chǎn)物，滴入催化量的N-曱基嗎啡啉，在60。C下反應(yīng)約70小時(shí)，用TLC薄板檢測(cè)，直至原料完全反應(yīng)。將反應(yīng)后溶液傾倒入50ml1N鹽酸中并用乙酸乙酯萃取3次，收集有機(jī)相，用飽和氯化鈉洗滌后用無(wú)水硫酸鈉干燥。過(guò)濾除去干燥劑，減壓旋除溶劑，柱層析分離，產(chǎn)率為80%。TLC:氯仿:曱醇=100:5,Rf=0.4。MS(m/e):792.0(M+1);!H-麗RS(ppm，CDC13):7.26(1H,s);7.20(2H,m);6.57(1H,s);3.92-3.5(9H，s);3.66-3.40(9H,m);2.64—0.70(steroidalCH2andCH,m,br);0.69(6H,s)9.4三曱基秋水仙酸-膽酸偶合物的合成將三曱基秋水仙酸-膽酸曱酯偶合物溶于曱醇中，加入20%氫氧化鈉溶液，室溫?cái)嚢?小時(shí)，蒸除曱醇，殘余物加水溶解，用乙酸乙酯洗滌三次。用檸檬酸將水溶液調(diào)至？11=2,然后用乙酸乙酯萃:f又三次，收集有機(jī)相，無(wú)水硫酸鈉干燥。過(guò)濾除去干燥劑，減壓旋除溶劑，柱層析分離，得到產(chǎn)物，收率71%。TLC:氯仿曱醇=10:1,Rf=0.5。MS(m/e):778.1(M+l);'H-畫R5(ppm，CDC13):10.18(1H，br);7.70(1H，s);7.54(1H,s);7.28(1H，s);3.92-3.5(9H，s);3.66-3.40(6H，m);2.64-0.70(steroidalCH2andCH，m，br);0.69(6H，s);元素分析(ChH^NOu):理論值C67.93%，H7.64%，Nl.80%;實(shí)驗(yàn)值C67.78%,H7.80%，N1.75%。實(shí)施例10三曱基秋水仙酸-熊去氧膽酸偶合物(Ib-2)的制備以熊去氧膽S吏取代膽酸，參照實(shí)施例9的方法，得到化合物Ib-2，收率68%，TLC:氯仿曱醇=10:1,Rf=0.6。MS(m/e):762.2(M+1);'H-NMRS(ppm,CDC13):IO.IO(IH，br);7.70(1H,s);7.54(1H,s);7.28(lH，s);3.92-3.5(9H，S);3.66-3.40(6H,m);2.64—0.70(steroidalCH2andCH,mbr,);0.69(6H，s);元素分析(C44H59NO10):理論值C69.36%，H7.80%,Nl.84%;實(shí)驗(yàn)值C69.45%，H7.89%,N1.70%。實(shí)施例11去乙酰秋水仙堿-膽酸偶合物(Ib-3)的制備以去乙酰秋水仙堿取代三甲基秋水仙酸，參照實(shí)施例9的方法，得到化合物Ib-3，收率64%，TLC:氯仿曱醇=10:1，Rf=0.5。MS(m/e):791.9(M+1);iH-薩RS(ppm,CDC13):10.20(1H,br);7.26(1H,s);7.20(2H，m);6.57(1H，s);3.92-3.5(9H,s);3.66-3.40(6H,m);2.64_0.70(steroidalCH2andCH，m,br);0.69(6H，s);元素分析(C^H^NOu):理論值C68.25%,H7.76%,Nl.77%;實(shí)驗(yàn)值C68.45%,H7.59%,N1.70%。實(shí)施例12去乙酰秋水仙堿-熊去氧膽酸偶合物(Ib-4)的制備以熊去氧膽酸取代膽酸，去乙酰秋水仙堿取代三曱基秋水仙酸，參照實(shí)施例9的方法，得到化合物Ib-4，收率75%，TLC:氯仿曱醇=10:1，Rf=0.6。MS(m/e):776.2(M+1);'H畫NMRS(ppm,CDC13):IO.IO(IH,br);7.26(1H,s);7.20(2H，m);6.57(1H，s);4.48(1H，m);3.98-3.90(8H，13m);3.63(6H，d);2.64—0.66(steroidalCH2andCH,colchicinesCH2andCH3，m,br);元素分析(C45H61NO10):理論值C69.65%,H7.92%,Nl.81%;實(shí)驗(yàn)值C69.54%,H7.99%，N1.86%。實(shí)施例13N-甘氨酰三曱基秋水仙酸-膽酸偶合物(Ib-5)的制備以N-甘氨酰三甲^^火水仙酸取代三曱基秋水仙酸，參照實(shí)施例9的方法，得到化合物Ib-5，收率58%，TLC:氯仿:曱醇=10:1,Rf=0.5。MS(m/e):835.0(M+1);iH-NMRS(ppm,CDC13):10.20(1H，br);7.54(1H，d);7.28(2H,d);7.26(1H,s);4.30(2H,t);3.98-3.66(27H,m);2.64-0.68(steroidalCH2andCH,colchicinesCH2andCH3，m.br);元素分析(C46H62N2012):理論值C66.17%，H7.48%,N3.35%;實(shí)驗(yàn)值C66.35%，H7.59%,N3.18%。實(shí)施例14N-甘氨酰三曱基秋水仙酸-熊去氧膽酸偶合物(Ib-6)的制備以熊去氧膽酸取代膽酸，N-甘氨酰三曱基秋水仙酸取代三曱基秋水仙酸，參照實(shí)施例9的方法，得到化合物Ib-6，收率55%,TLC:氯仿曱醇=10:1，Rf=0.6。MS(m/e):819.2(M+l);^-顧R5(ppm，CDC13):IO.IO(IH,br);7.54(lH,d);7.28(2H,d);7.26(1H,s);4.30(lH,s);3.98-3.66(30H,m);2.64—0.68(steroidalCH2andCH,colchicinesCH2andCH3，m.br);元素分斗斤(C46H62即u):理論值C67.46%,H7.63%，N3.42%;實(shí)驗(yàn)值C67.59%,H7.49%,N3.35%。實(shí)施例15N-甘氨酰去乙酰秋水仙石成-膽酸偶合物(Ib-7)的制備以N-甘氨酰乙酰壽火水仙堿取代三曱基秋水仙酸，參照實(shí)施例9的方法，得到化合物Ib-7，收率62%,TLC:氯仿:曱醇=10:1，Rf=0.5。MS(m/e):849.1(M+1);^-NMRS(ppm，CDC13):10.20(1H,br);7.77(lH,s);7.42(lH,d);7.18(2H,t);4.59(lH,s);4.40(lH,s);3.98-3.66(22H,m);2.64—0.68(steroidalCH2andCH,colchicinesCH2andCH3,m.br);元素分析(C47H64N2012):理論值C66.49%,H7.60%,N3.30%;實(shí)驗(yàn)值C66.45%,H7.49%,N3.26%。實(shí)施例16N-甘氨酰去乙酰秋水仙堿-熊去氧膽酸偶合物(Ib-8)的制備以熊去氧膽酸取代膽酸，N-甘氨酰去乙酰秋水仙堿取代三曱基秋水仙酸，參照實(shí)施例9的方法，得到化合物Ib-8，收率55%,TLC:氯仿曱醇=10:1，Rf=0.4。MS(m/e):833.1(M+1);'H-NMRS(ppm,CDC13):10.20(1H，br);7,46(1H,d);7.28(2H，d);7.04(1H,s);4.59(2H,m);3.98-3.66(12H,m);3.67(5H,s);2.64-0.68(steroidalCH2andCH,colchicinesCH2andCH3,m.br);元素分析(C47H64N20):理論值C67.77%,H7.74%,N3.36%;實(shí)驗(yàn)值C67.87%,H7.67%,N3.46%。實(shí)施例l7抗CCh中毒所致小鼠肝損傷的藥效學(xué)評(píng)價(jià)取質(zhì)量大約20-25g的Baclb/c小鼠，隨機(jī)分組，每組5只小鼠。通過(guò)口服給予不同劑量的待測(cè)化合物；lh后，按照10mL/kg的劑量，皮下注射100mL/L°"々CCl4,制備肝損傷模型；皮下注射生理鹽水作為正常對(duì)照組。造模后12小時(shí)后，再次口服給予不同劑量的待測(cè)化合物。第二次給藥后24小時(shí)，處死動(dòng)物，留取血清標(biāo)本，統(tǒng)一用全自動(dòng)生化^f義對(duì)于血清中的ALT，AST水平進(jìn)行檢測(cè)。評(píng)價(jià)結(jié)果見(jiàn)表l。實(shí)施例18抗對(duì)乙酰氨基酚所致小鼠肝損傷的藥效學(xué)評(píng)價(jià)取質(zhì)量大約20-25g的Baclb/c小鼠，隨機(jī)分組，每組5只小鼠。通過(guò)口服給予不同劑量的待測(cè)化合物；lh后，用100mL/kg的對(duì)乙酰氨基酚皮下注射制備肝損傷模型，皮下注射生理鹽水作為正常對(duì)照組。造模1h后，通過(guò)口服再次給予不同劑量的待測(cè)化合物。第二次給藥后24小時(shí)，處死動(dòng)物，留取血清標(biāo)本，統(tǒng)一用全自動(dòng)生化儀對(duì)于血清中的ALT,AST水平進(jìn)行;險(xiǎn)測(cè)。評(píng)價(jià)結(jié)果見(jiàn)表2。15<table>tableseeoriginaldocumentpage16</column></row><table>權(quán)利要求1、由結(jié)構(gòu)式Ia和Ib所示的膽汁酸與秋水仙堿衍生物的偶合物及其非毒性的藥學(xué)上可接受的鹽，以及它們的制備方法，以及含有這些化合物的藥物組成，以及通過(guò)給于有效治療量的膽汁酸與秋水仙堿衍生物的偶合物及其非毒性的藥學(xué)上可接受的鹽治療肝臟疾病的方法。在式Ia和Ib中，R2代表H或OH，A代表氨基酸，n為1-3的整數(shù)，m為0-2的整數(shù)，氨基酸的構(gòu)型為D型或L型。D去乙?；锼蓧A或秋水仙酸及其它秋水仙堿的活性代謝產(chǎn)物。2、根據(jù)權(quán)利要求1的膽汁酸與秋水仙堿衍生物的偶合物及其非毒性的藥學(xué)上可接受的鹽，其中的膽汁酸為膽酸。3、根據(jù)權(quán)利要求1的膽汁酸與秋水仙堿衍生物的偶合物及其非毒性的藥學(xué)上可接受的鹽，其中的膽汁酸為熊去氧膽酸。4、根據(jù)權(quán)利要求1的膽汁酸與秋水仙堿衍生物的偶合物及其非毒性的藥學(xué)上可接受的鹽，其中的秋水仙堿衍生物為去乙酰秋水仙堿。5、根據(jù)權(quán)利要求1的膽汁酸與秋水仙堿衍生物的偶合物及其非毒性的藥學(xué)上可接受的鹽，其中的秋水仙堿衍生物為三甲基秋水仙酸。6、根據(jù)權(quán)利要求1—5的膽酸或熊去氧膽酸與秋水仙堿衍生物的偶合物的非毒性藥學(xué)上可接受的鹽，這些鹽可以由Ia和Ib分子中的羧基與各種陽(yáng)離子如鈉離子、鉀離子、氨離子、鈣離子、鋅離子、鎂離子或氨離子等形成。7、根據(jù)權(quán)利要求1-5的膽酸或熊去氧膽酸與秋水仙堿衍生物的偶合物及其非毒性的藥學(xué)上可接受的鹽的制備方法。8、根據(jù)權(quán)利要求1-5的膽酸或熊去氧膽酸與秋水仙堿衍生物的偶合物及其非毒性的藥學(xué)上可接受的鹽作為活性成分以及適宜的賦型劑形成的藥物組合物。這些藥物組合物可以是溶液劑、片劑、膠嚢或注射劑；這些藥物組合物可以通過(guò)注射途徑給藥或口服給藥。9、根據(jù)權(quán)利要求1-5的膽酸或熊去氧膽酸與秋水仙堿衍生物的偶合物及其非毒性的藥學(xué)上可接受的鹽及其藥物組合物治療肝纖維化、肝硬化等肝臟疾病的方法。全文摘要由式Ia和Ib所示的膽酸或熊去氧膽酸與秋水仙堿衍生物的偶合物及其非毒性藥學(xué)上可接受的鹽，制備方法以及含有這些化合物的藥物組成及用途。結(jié)構(gòu)式中，R代表OH(膽酸)或H(熊去氧膽酸)，A代表氨基酸，n為1-3的整數(shù)，m為0-2的整數(shù)，氨基酸的構(gòu)型為D型或L型。D代表去乙酰秋水仙堿或秋水仙酸及其它秋水仙堿的活性代謝產(chǎn)物。文檔編號(hào)A61K47/48GK101440113SQ20071018796公開日2009年5月27日申請(qǐng)日期2007年11月19日優(yōu)先權(quán)日2007年11月19日發(fā)明者仲伯華,李美英,?？∑?陳蘭福,靳雪源,慶馬申請(qǐng)人:中國(guó)人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院毒物藥物研究所