專利名稱：：作為芳香酶抑制劑的稠合的咪唑衍生物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及新的雜環(huán)化合物，制備所述化合物的方法，包含所述化合物的藥品和它們作為活性藥物成分，尤其是作為芳香酶抑制劑的用途。發(fā)明詳述首先，本發(fā)明涉及通式(I)化合物及其鹽，優(yōu)選其可藥用鹽其中R是氘、卣素或氫；R1是芳基-QrC4-烷基或者雜環(huán)基-QrC4-烷基，它們可以被下述基團取代1-4個d-C8烷氧基、d-Cs烷氧基羰基、d-Cs烷基、C。-C8烷基羰基、d-Cs烷基磺酰基、可任選取代的芳基、芳基-Co-C4烷氧基羰基、氰基、卣素、可任選取代的雜環(huán)基、羥基、硝基、氧化物、氧代、三-d-Q烷基硅烷基、三氟甲氧基或者三氟曱基；R"是a)氘、囟素、羥基、氰基或者氫；或者b)C2-Cs鏈烯基、C2-Cs炔基、d-Cg烷氧基、d-C4烷氧基羰基-C廣C4烷基、d-Cs烷基、Co-C4烷基羰基、芳基-QrC4烷基、羧基-d-C4烷基、C3-C8環(huán)烷基或者雜環(huán)基-Co-C4烷基，它們可以被下述基團取代1-4個d-Cs烷氧基、CrCs烷氧基羰基、d-Cs烷基、QrC8烷基羰基、d-C8烷基磺酰基、可任選取代的芳基、芳基-C。-C4烷氧基羰基、氰基、閨素、可任選取代的雜環(huán)基、羥基、硝基、氧化物、氧代、三-d-C4烷基硅烷基、三氟甲氧基或者三氟曱基；R3是CrQ烷基；Q是氧或者碌"m是0、1或者2的數(shù)；n是0、l或者2的數(shù)；其中，如果W是氫，則1^不是d-C8烷基-取代的芳基。式(I)化合物是應理解為具有圍繞標示"所示不對稱碳原子的特定構(gòu)型的化合物。如果采用獲得外消旋化合物的合成方法，則按照常規(guī)方法，例如通過手性HPLC柱，進行外消旋體拆分。本發(fā)明所述式(I)化合物表現(xiàn)出顯著的芳香酶抑制活性。該活性十分容易通過如下所述的方法，采用市售的Cyp19酶抑制試劑盒，優(yōu)選Cypl9/甲氧基-4-三氟甲基-香豆素(MFC)高通量抑制試劑盒(BectonDickinsonBiosciences,SanJose,CA,USA)進行測定。上述酶抑制測試中，式(I)化合物顯示出高于圍繞標示所示不對稱碳原子的相對構(gòu)型的式(I)物質(zhì)至少10倍，優(yōu)選20倍，或者更優(yōu)選40倍的抑制活性。較高的抑制活性對應于較低的IC50值。術(shù)語芳基表示符合Hiickel規(guī)則的單、雙或者三環(huán)的芳族烴基，它們通常包含6-14個，優(yōu)選6-10個碳原子，它們是例如苯基、萘基如l-或者2-萘基、或者蒽基。具有6-IO個碳原子的芳基，尤其是苯基或者1-或2-萘基是優(yōu)選的。所述基團可以是未取代的或者被取代一次或者多次，如一或兩次，在任何情況下取代基都可以位于任何位置，例如位于苯基的鄰、間或者對位或者位于1-或者2-萘基的3或4位，還可以存在多個相同或者不同的取代基。芳基或者優(yōu)選的苯基或者萘基上的取代基實例是d-Cs烷氧基、CrCs烷氧基羰基、d-Q烷基、QrCs烷基羰基、d-Cs烷基磺?；?、可任選取代的芳基、芳基-Co-C4烷氧基羰基、氰基、自素、可任選取代的雜環(huán)基、羥基、硝基、三-d-C4烷基硅烷基、三氟甲氧基或者三氟曱基。芳基-Q)-C4烷基是例如苯基、萘基或者千基。術(shù)語雜環(huán)基表示飽和的、部分飽和的或者不飽和的4-8元、尤其優(yōu)選5元的單環(huán)環(huán)系，飽和的、部分飽和的或者不飽和的7-12元、尤其優(yōu)選9-10元的雙環(huán)環(huán)系，還表示部分飽和的或不飽和的9-12元三環(huán)環(huán)系，它們的至少一個環(huán)中包含N、O或者S原子，在同一個環(huán)中還可以存在其他的N、O或者S原子。所述基團可以是未取代的或者被取代一次或者多次，如一或兩次，并且還可以存在多個相同或者不相同的基團。雜環(huán)基上的取代基的實例是d-C8烷氧基、d-Cs烷氧基羰基、d-Cs烷基、Co-Cs烷基羰基、C廣Cs烷基磺?；?、可任選取代的芳基、芳基-Q)-C4烷氧基羰基、氰基、卣素、可任選取代的雜環(huán)基、羥基、硝基、氧化物、氧代、W-C廣C4烷基硅烷基、三氟曱氧基或者三氟曱基。飽和的雜環(huán)基-QrC4烷基是例如氮雜環(huán)庚烷基(azepanyl)、氮雜環(huán)丁烷基、氮雜環(huán)丙烷基、3,4-二羥基-吡咯烷基、2,6-二甲基嗎啉基、3,5-二甲基嗎啉基、二哺烷基、[1,4]二氧雜環(huán)庚烷基(dioxepanyl)、二氧雜環(huán)戊烷基、4,4-二氧代硫代嗎啉基、二噻烷基(dithianyl)、二硫雜環(huán)戊烷基(dithiolanyl)、2-羥基甲基他咯烷基、4-輕基哌啶基、3-羥基吡咯烷基、4-甲基哌嗪基、1-曱基哌啶基、l-甲基-吡咯烷基、嗎啉基、氧硫雜環(huán)己烷基、氧雜環(huán)庚烷基、2-氧代-氮雜環(huán)庚烷基、2-氧代-咪唑烷基、2-氧代J惡唑烷基、2-氧代-哌啶基、4-氧代-哌啶基、2-氧代-p比咯烷基、2-氧代-四氬-嘧啶基、4-氧代-硫代嗎啉基、哌。秦基、哌咬基、吡咯烷基、四氬呋喃基、四氫吡喃基、四氬石危代苯基、四氫;危代吡喃基、石危雜環(huán)庚烷基或者硫代嗎啉基。部分飽和的雙環(huán)的雜環(huán)基-QrC4烷基四例如3,4-二氫-2H-苯并[1，4]喝嗪基、4,5,6,7-四氫苯并呋喃基或者4,5，6,7-四氫苯并噻唑基。不飽和的雙環(huán)的雜環(huán)基-QrC4烷基是例如苯并呋喃基、苯并咪唑基、苯并[d]異噻唑基、苯并[d]異嚅唑基、苯并[b]噻吩基、喹啉基、咪唑并[l,5-a]吡啶基、吲唑基、吲哚基或者異喹啉基。不飽和的單環(huán)的雜環(huán)基-C()-C4烷基是例如咪唑基、嗜唑基、吡啶基、吡咯基、四唑基、噻唑基或者噻吩基。C2-C8鏈烯基是例如乙烯基、丙烯基、異丙烯基、丁烯基、異丁烯基、仲丁烯基、叔丁烯基或者戊烯基、己烯基或庚烯基。C2-C8炔基是例如乙炔基、丙炔基、丁炔基或者戊炔基、己炔基或庚炔基。C廣C8烷氧基是例如C廣C5烷氧基，如甲氧基、乙氧基、丙氧基、異丙氧基、丁氧基、異丁氧基、仲丁氧基、叔丁氧基或者戊氧基，但也可以是己氧基或庚氧基。d-Cs烷氧基羰基優(yōu)選是d-C4烷氧基羰基，例如甲氧基羰基、乙氧基羰基、丙氧基羰基、異丙氧基羰基、丁氧基羰基、異丁氧基羰基、仲丁氧基羰基或者叔丁氧基羰基。CrC4烷氧基羰基-C廣C4烷基是例如甲氧基羰基曱基或者乙氧基羰基甲基、2-甲氧基羰基乙基或者2-乙氧基羰基乙基、3-甲氧基羰基丙基或者3-乙氧基羰基丙基或者4-乙氧基羰基丁基。CrCs烷基可以是直鏈或者支鏈的和/或橋連的，例如甲基、乙基、丙基、異丙基、丁基、異丁基、仲丁基、叔丁基或者戊基、己基或者庚基。C0-C8烷基羰基或者優(yōu)選的QrC4烷基羰基是例如甲?；?、乙?；?、丙?；?、丙基羰基、異丙基羰基、丁基羰基、異丁基羰基、仲丁基羰基或者叔丁基羰基。羧基-d-C4烷基是例如羧基曱基、2-羧基乙基、2-或者3-羧基丙基、2-羧基-2-甲基丙基、2-羧基-2-乙基丁基或者4-羧基丁基，尤其是羧基甲基。C3-Cs環(huán)烷基優(yōu)選是3-、5-或者6-元環(huán)烷基，例如環(huán)丙基、環(huán)戊基、環(huán)己基。鹵素是例如氟、氯、溴或捵。上述化合物的基團應認為是非封閉的；相反，部分這些化合物的基團可以有意義地彼此替代或者一皮上述定義取代，或者可以省略，例如以更具體的定義替代一般含義。所述定義適用通用化學原理范圍的一般含義，例如原子的常規(guī)價。R優(yōu)選是氘或者氫。W優(yōu)選是芳基，尤其優(yōu)選是單-、二-或者三-取代的苯基或者單-、二-或者三-取代的萘基，或者雜環(huán)基，尤其優(yōu)選是任選單-、二-或者三-取代的苯并呋喃基、苯并[b]噻吩基、苯并咪唑基、苯并[d]異噻唑基、苯并[d]異嚅唑基、苯并[b]噻吩基、咪唑基、吲唑基、口引咮基、嗜唑基、吡啶基、吡咯基、噻唑基或者噻吩基。W優(yōu)選是CVCs烷氧基、羥基、d-Cs烷基、可任選取代的芳基-QrC4烷基、氘、鹵素、氰基或者氫。R3優(yōu)選是CVC4烷基。n優(yōu)選是0或者l的數(shù)。n尤其優(yōu)選是l。芳基或者雜環(huán)基的優(yōu)選取代基是d-Cs烷氧基、d-Cs烷基、CrC8烷基-羰基、d-Cs烷基磺?；⒖扇芜x取代的芳基、氰基、卣素、可任選取代的雜環(huán)基、硝基、氧化物、三氟曱基、三氟甲氧基或者三甲基硅烷基。芳基或者雜環(huán)基的尤其優(yōu)選的取代基是乙?；?、氯、氰基、氟、曱磺?；⒓籽趸⑾趸?、嚅唑基、氧化物、可任選取代的苯基、可任選取代的四唑基、可任選取代的P塞唑基或者可^f壬選取〗戈的P塞吩基。W同樣優(yōu)選是單-、二-或者三-取代的不飽和的雜環(huán)基取代基，其中取代基優(yōu)選選自d-Cs烷基、CrQ烷氧基、CrCs烷氧基羰基、CVQ烷基羰基、d-Cs烷基磺?；?、可任選取代的芳基、芳基-C。-C4烷氧基羰基、氰基、卣素、可任選取代的雜環(huán)基、羥基、硝基、氧化物、氧代、三-d-C4烷基硅烷基、三氟曱氧基和三氟甲基。具有第二個不對稱碳原子的化合物可以以光學純的非對映體、非對映體混合物、非對映的外消旋體、非對映的外消旋體的混合物或者內(nèi)消旋化合物形式存在。本發(fā)明包括所有這些形式。非對映體、非對映的外消旋體、非對映的外消旋體的混合物的混合物可通過常規(guī)方法，例如外消旋體拆分、柱色譜、薄層色譜、HPLC等分餾。術(shù)語"可藥用鹽"包括與有機酸或者無機酸形成的鹽，例如與鹽酸、氬溴酸、硝酸、硫酸、磷酸、檸檬酸、曱酸、馬來酸、乙酸、琥珀酸、酒石酸、甲磺酸、對甲苯磺酸等。包含成鹽基團的化合物的鹽是，例如酸加成鹽、與堿等形成的鹽，如果適合存在兩個或者多個成鹽基團，則可以是混合的鹽或者內(nèi)鹽。式(I)化合物可以以類似于JP63145286文獻中本身公開的制備方法，然后分離為標示碳原子的對映體的方式制備(方案)。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage8</formula>實施例描述了具體制備的詳細變化。對映體的分離可通過本身已知的方法進行，優(yōu)選在合成的前期，通過與光學活性的酸，例如(+)-或者(-)-苦杏仁酸形成鹽，然后通過分級結(jié)晶分離非對映體鹽，或者優(yōu)選在合成的最后階段，通過用手性助劑，例如(+)-或者(-)-莰基氯化物，衍化，通過色譜和/或結(jié)晶分離對映體產(chǎn)物，隨后裂解與手性助劑相連的鍵?？刹捎脝尉-射線光學儀代表的一種特別適合的方法，通過光譜方法，分析測定純的非對映體鹽和衍生物中存在化合物的絕對構(gòu)型。鹽主要是式(I)化合物的可藥用的或者無毒的鹽。這類鹽可例如由包含酸基，如羧基或者磺基的式(I)化合物形成，是例如其與適宜的堿形成的鹽，如由元素周期表的Ia、Ib、IIa和IIb族的金屬衍生的無毒的鹽，例如堿金屬鹽，尤其是鋰、鈉或者鉀鹽，堿土金屬鹽，例如鎂或4丐鹽，還有鋅鹽或銨鹽，再有與有機胺形成的鹽，例如未取代的或者羥基-取代的一-、二-或者三-烷基胺，尤其是一-、二-或者三-低級烷基胺，或者與季銨堿形成的的鹽，例如曱基-、乙基-、二乙基-或者三乙基胺，一-、二-或者三(2-羥基-低級烷基)胺，例如乙醇胺、二乙醇胺或者三乙醇胺、三(羥基甲基)甲胺或者2-羥基-叔丁胺、N,N-二-低級烷基-N-(羥基-低級烷基)胺，如N,N-二-N-二曱基-N-(2-羥基乙基)胺，或者N-曱基-D-葡糖胺，或者季銨氫氧化物，如四丁基氬氧化銨。包含堿基如氨基的式(I)化合物可與適宜的無才幾酸，例如氫卣酸如鹽酸、氫溴酸形成酸加成鹽，或者與硫酸置換一個或者多個質(zhì)子，與磷酸例如正磷酸或偏磷酸置換一個或者多個質(zhì)子，或者焦磷酸置換一個或者多個質(zhì)子，或者與有機羧酸、磺酸或者膦酸或者N-取代的氨基石黃酸，如乙酸、丙酸、羥基乙酸、琥珀酸、馬來酸、羥基馬來酸、甲基馬來酸、富馬酸、蘋果酸、酒石酸、葡糖酸、葡糖二酸、葡糖醛酸一寧檬酸、苯曱酸、肉桂酸、苦杏仁酸、水楊酸、4-氨基水楊酸、2-苯氧基苯曱酸、2-乙酰氧基苯甲酸、雙羥萘酸、煙酸、異鹽酸，還有氨基酸如早些時候特別說明的a-氨基酸，還有甲磺酸、乙磺酸、2-羥基乙磺酸、乙烷-l,2-二磺酸、苯磺酸、4-曱苯磺酸、萘-2-磺酸、2-或3-磷酸甘油酯、葡萄糖6-磷酸酯、N-環(huán)己基氨基磺酸(形成環(huán)己基氨基磺酸鹽)，或者與其他酸性有機化合物，例如抗壞血酸形成的鹽。包含酸性基團和堿性基團的式(I)化合物還可以形成內(nèi)鹽。也可使用非藥用鹽進行分離和純化。式(I)化合物還包括其中一個和多個原子被其穩(wěn)定的、非放射性同位素置換，例如氘置換了氫的那些化合物。本發(fā)明所述化合物的前藥衍生物是當使用時通過化學或者生理過程體內(nèi)釋放出原始化合物的那些衍生物。例如當達到生理pH時，或者經(jīng)過酶轉(zhuǎn)化，前藥可轉(zhuǎn)化為原始化合物?？赡艿那八幯苌锏睦影ㄓ坞x的可利用羧酸的酯、硫醇、醇或者苯酚的S-和O-?；苌铮缟隙x的?；?yōu)選的在生理介質(zhì)中通過溶劑分解作用轉(zhuǎn)化為原始羧酸的可藥用酯是，例如低級烷基酯、環(huán)烷基酯、低級鏈烯基酯、節(jié)基酯、一-或者二-取代的低級烷基酯，如低級(D-(氨基、一-或者二-烷基氨基、羧基、低級烷氧基羰基)-烷基酯或者如低級OC-(鏈烷酰氧基、烷氧基羰基或者二烷基氨基羰基)烷基酯；戊酰氧基曱基酯和類似的酯常用作這類酯書f生物。由于游離化合物、前藥衍生物和鹽化合物之間的密切關(guān)系，在可能和適合的情況下，本發(fā)明定義的化合物還包括其前藥衍生物和鹽形式。天然存在的雌激素17P-雌二醇(E2)、雌酮(E1)和雌三醇(E3)是膽固醇衍生的C18甾類化合物。與脂蛋白受體結(jié)合后，膽固醇被生成類固醇的細胞攝取，貯存并移動至載體合成位點。載體骨架中A-環(huán)的芳化是雌激素形成的最后一步。該反應通過存在于滑面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)并起脫甲基酶功能的P450芳香酶單氧合酶復合物(Cypl9)催化。在連續(xù)的三步羥基化反應中，雌酮和雌二醇分別由其專門的前體雄烯二酮和睪酮形成。婦女中雌二醇主要來源于卵巢的膜和顆粒細胞和這些細胞的黃體化衍生物。根據(jù)雌激素合成的"雙-細胞"理論，膜細胞分泌雌激素，它們擴散到顆粒細胞被芳化為雌激素。但是，證據(jù)表明這兩種細胞都能形成雄激素和雌激素。還在肌肉、脂肪、神經(jīng)組織和睪丸的萊迪希細胞中;險測到了芳香酶活性。性l^外組織中雌激素合成的水平隨年齡和體重的函凄史而i曾力口。血清中，雌二醇可逆性地與性激素結(jié)合球蛋白，p-球蛋白結(jié)合，與白蛋白具有較低的親和性；約2-3%未結(jié)合。雌激素通過硫酸化和葡萄苦酸化代謝，輒合物纟皮排泄進入膽汁或者尿液中。這些軛合物通過腸道菌群水解，隨后雌激素的再吸收形成肝腸循環(huán)。雌激素刺激性器官的生長、血流和水分保持，并且還與乳腺癌和子宮內(nèi)膜肺瘤的形成有關(guān)。肝臟中，雌激素增加脂蛋白受體的表達，進而降低低密度脂蛋白膽固醇的血清濃度。雌激素還通過刺激肝臟中凝血因子的產(chǎn)生而增加凝血的可能性。在骨骼中，破骨細胞和成骨細胞都是雌激素的直接靶細胞，總之，雌激素被劃分為抗再吸收物質(zhì)。乳腺組織中，雌激素刺激導管上皮細胞的生長和分化，誘導導管柱狀細胞的有時分裂活動并刺激結(jié)締組織的生長。雌激素刺激乳腺癌細胞的生長。在患乳腺癌的絕經(jīng)后婦女中，腫瘤的雌二醇濃度由于就地芳香化而升高，盡管血清雌二醇濃度較低。本發(fā)明所述化合物具有有用的藥理學特定，因為它們選擇性地抑制哺乳動物，包括人的芳香酶(Cyp19)。結(jié)果，雄激素向雌激素的代謝轉(zhuǎn)化-波抑制。因此，本發(fā)明化合物適于治療雌激素依賴性疾病，包括雌激素依賴性乳腺癌，尤其是絕經(jīng)后婦女中發(fā)生的。它們還可用于治療男子女性型乳房，即男子的乳腺發(fā)育，因為類固醇的芳香化可被所述化合物抑制。這些作用可通過使用不包括細胞的系統(tǒng)和細胞系體外分析測定來證明。本發(fā)明化合物的芳香酶活性的體外抑制作用可使用市售的Cypl9酶抑制試劑盒進行證明。例如，Cypl9/曱氧基-4-三氟曱基-香豆素(MFC)高通量抑制試劑盒(BectonDickinsonBiosciences,SanJose,CA,USA)一皮設(shè)計用于以96孔板篩選Cypl9催化活性的潛在抑制劑。該試劑盒包括:supersomes形式的重組人Cypl9酶、熒光P450底物、NADPH再生系統(tǒng)、反應緩沖劑和終止試劑。MFC,焚光探針底物^皮Cypl9supersomes轉(zhuǎn)化為高熒光性產(chǎn)物7-羥基-4-三氟曱基香豆素(7-HFC)。根據(jù)制造商的說明，在0.2納摩爾-20納摩爾不同濃度的抑制劑化合物的存在下進行測定。使用最小二乘法，擬合4-參數(shù)邏輯函數(shù)與樣品的原始數(shù)據(jù)，生成抑制曲線。函數(shù)如下所示Y=(d-a)/((l+(x/c)-b)+a)其中a=最小數(shù)據(jù)值b=斜率c=IC50d=最大數(shù)據(jù)值x=抑制劑濃度本發(fā)明所述化合物在10-3~1(T1Qmol/1的低濃度下顯示出Cypl9抑制特性。CYP19抑制作用的實施例<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>把分析證明。又獻中詳細描述了NCI-H295R人腎上腺皮質(zhì)癌細胞系的特性，據(jù)顯示，它們表達最多的類固醇生成所需的關(guān)鍵酶。這些酶包括Cypl1A(膽固醇側(cè)鏈分解酶)、CypllBl(類固醇lip-羥基酶)、CypllB2(醛甾酮合成酶)、Cypl7(類固醇17a-羥基酶和/或17,20分解酶)、Cypl9(芳香酶)、Cyp21B2(類固醇21-鞋基酶)和3P-HSD(羥基類固醇脫氫酶)。這些細胞具有區(qū)域未分化的人胚胎腎上腺細胞的生理特性，具有生產(chǎn)成人腎上腺皮質(zhì)中存在的三個表現(xiàn)型獨特區(qū)域的每種類固醇激素的能力。在75cm2細胞培養(yǎng)燒瓶中，將NCI-H295R細胞(AmericanTypeCultureCollection,ATCC,Rockville,MD,USA)在Dulbecco'sModifiedEagle'HamF-12培養(yǎng)基(DME/F12)中于37°C和95%空氣/5%。〇2的潮濕范圍下培養(yǎng)，所述培養(yǎng)基中補充有UltroserSF血清(Soprachem,Cergy陽Saint-Christophe,France)以及胰島素、轉(zhuǎn)鐵蛋白、selenit(I-T-S,BectonDickinsonBiosiences,FranklinLakes,NJ，USA)和抗生素。然后將細胞轉(zhuǎn)移到24孔培養(yǎng)板中，并在用0.1%牛血清白蛋白替代UltroserSF血清的DME/F12培養(yǎng)基的存在下接種。在補充有0.1%牛血清白蛋白和試驗化合物的DME/F12培養(yǎng)基中，在有或者沒有細胞刺激劑的存在下，將細胞培養(yǎng)72小時引發(fā)實驗。試驗化合物的加入濃度為0.2納摩爾~20納摩爾。使用血管緊張素-II(IO或者100納摩爾濃度)、鉀離子(16毫摩爾)、福司柯林(10毫摩爾)或者組合的兩種試劑作為細胞刺激劑。使用市售的免疫分析和特異性單克隆抗體，按照制造商的說明，可定量分析細胞分泌到細胞培養(yǎng)基中的雌酮、雌二醇、二氳表雄烯二酮、醛甾酮、皮質(zhì)酮和/或皮質(zhì)醇。使用選擇性類固醇分泌的水平作為酶活性，在試驗化合物存在或不存在下各酶的抑制作用。以IC50值表征的抑制曲線反映化合物的劑量依賴性酶抑制活性。使用最小二乘法，擬合4-參數(shù)邏輯函數(shù)與樣品的原始數(shù)據(jù)，生成抑制曲線。函數(shù)如下所示Y=(d-a)/((l+(x/c)-b)+a)其中a=最小數(shù)據(jù)值b=斜率c=IC50d=最大數(shù)據(jù)值x=抑制劑濃度本發(fā)明所述化合物在10-3~10—1Qmol/1的低濃度下顯示出Cypl9抑制特性。也可以方便地使用哺乳動物模型，如豚鼠、小鼠、大鼠、貓、狗或者猴子體內(nèi)證明所述化合物的芳香酶抑制作用?；衔锝閷У捏w內(nèi)芳香酶抑制活性可如下所述通過監(jiān)測血漿類固醇水平變化來測試對周期性雌性大鼠隔天皮下注射0.1ml無菌鹽水中的100IU孕馬血清促性腺激素(PMSG,Sigma),注射5次。最后注射后24小時，給動物口服給予0.01~10mg/kg劑量范圍的測試化合物。給藥后24小時，對動物進行末端放血。將加肝素的血漿貯存于-20。C直至分析。類固醇的血漿水平(17p-雌二醇、雌酮、雌三醇、孕酮、睪酮、醛甾酮和皮質(zhì)甾酮(cortiocosterone))可采用市售放射免疫分析試劑盒，按照制造商的說明進行測定。需要純化和濃縮步驟以測定雌性大鼠中的血漿睪酮將四倍體積的乙醚加到樣品中，輕輕攪拌轉(zhuǎn)化15分鐘，然后以2000rpm離心5分鐘。用干水冷凍水相，回收有才幾相并甾氮氣流下蒸發(fā)至干。干燥的萃取物再分配到測定緩沖液中?；衔锝閷У捏w內(nèi)芳香酶抑制活性可如下通過監(jiān)測卵巢雌激素含量來測定對21日齡大鼠皮下注射IOIU孕馬血清促性腺激素(PMSG,Sigma)。2天后，對相同的大鼠皮下注射30IU人絨毛膜促性腺激素(hCG,Sigma)。hCG注射后的第二天，對大鼠皮下注射丙二醇(0.2ml)或者不同劑量的測試化合物。1小時后，對所有大鼠皮下注射0.1ml油中的2.25mg4-雄甾烯-3,17-二酮。注射雄甾烯二酮4小時后，處死大鼠，取出卵巢并除去粘連組織，成對貯存于-50。C。為測定卵巢的總的雌激素含量，將1.5ml0.05M磷酸鉀緩沖液(pH7.4)和0.2ml0.1NNaOH水溶液加到組織中，然后勻漿化。漿勻漿用15ml乙醚萃取。5ml等份的樣品用與雌酮、雌二醇和雌三醇具有100%交叉反應性的抗血清進行放射免疫測定。結(jié)果以ng雌激素/對卵巢表示。抗腫瘤，尤其是抗雌激素依賴性胂瘤的活性可例如使用在雌性Sprague-Dawley大鼠中用二曱基苯并蒽(DMBA)豫發(fā)的哺乳動物肺瘤進行體內(nèi)測定(參見Proc.Soc.Exp.Biol.Med.160,296-301,1979)。約1~約20mg/kgp.o或者更低日劑量的本發(fā)明化合物使存在的胂瘤消退并抑制新肺瘤的出現(xiàn)。為在治療的患者中達到所需效果，本發(fā)明化合物可以口服或者經(jīng)腸給藥，例如經(jīng)靜脈內(nèi)、腹膜內(nèi)、肌內(nèi)、直腸、皮下或者局部直接注射活性物質(zhì)進入組織或者腫瘤。術(shù)語患者包括溫血動物和哺乳動物，例如人、靈長類、牛、狗、貓、馬、羊、小鼠、大鼠和豬。化合物可以以藥品形式給藥或者摻入確保長效釋放所述化合物的給藥裝置中。給予的物質(zhì)的量可在較寬的范圍內(nèi)變化并且表示著非常有效的劑量。根據(jù)所治療的患者或者治療的適應癥以及給藥的方式，有效物質(zhì)的每日劑量可以為約0.005~50毫克/7>斤體重，優(yōu)選約0.05~5毫克//>斤體重。對于口服給藥，化合物可以配制成固體或者液體藥品形式，例如膠嚢、丸劑、片劑、包衣片、顆粒劑、粉末、溶液、混懸液或者乳液。一劑固體藥品形式可以是一枚可填充活性成分和賦形劑，如潤滑劑和填充劑例如乳糖、蔗糖和玉米淀粉的常規(guī)硬明膠膠囊。另一種給藥形式是本發(fā)明的活性物質(zhì)的壓片形式。可使用常規(guī)的制片賦形劑，例如乳糖、蔗糖、玉米淀粉，與選自阿拉伯膠、玉米淀粉和明膠的粘合劑，崩解劑如土豆淀粉或者交聯(lián)的聚乙烯吡咯烷酮(PVPP),以及潤滑劑如硬脂酸或硬脂酸鎂。適用于軟明膠膠嚢的賦形劑實例是植物油、蠟、脂肪、半固體和液體多元醇等。適于生產(chǎn)溶液和糖漿劑的賦形劑的實例是水、多元醇、蔗糖、轉(zhuǎn)化糖、葡萄糖等。對于直腸給藥，可將化合物配制成固體或者液體藥物形式，例如栓劑。適合于栓劑的賦形劑的實例是天然或者硬化的油、蠟、脂肪、半固體或者液體的多元醇等。對于腸胃外給藥，可將化合物配制成活性成分在液體或者混懸液中的注射劑。制劑通常包括可生理耐受的無菌溶劑，包括油包水乳液，其中包含和不包含表面活性劑，以及其他可藥用賦形劑?？捎糜诖祟愔苿┑挠褪鞘灪椭参?、動物或者合成來源的甘油三酯，例如花生油、大豆油和礦物油。注射液一4i包含液體載體，如優(yōu)選水、鹽水、葡萄糖或者有關(guān)糖的溶液、乙醇和二醇類，例如丙二醇或者聚乙二醇。如果制劑可緩慢釋放活性成分，可以將物質(zhì)以透皮貼劑、長效注射機或者植入劑形式給藥?？蓪⒒钚晕镔|(zhì)壓縮為顆粒、窄長的園柱狀經(jīng)皮下或者肌內(nèi)以長效注射劑或者植入劑形式給藥。藥品還可以包括防腐劑、增溶劑、增粘物質(zhì)、穩(wěn)定劑、潤濕劑、乳化劑、甜味劑、著色劑、芳香劑、改變滲透壓的鹽類、緩沖劑、包衣劑或者抗氧劑。它們還可以包括其他治療有益物質(zhì)。本發(fā)明還提供式(I)化合物及其可藥用鹽窄治療或者預防對芳香酶抑制作用響應的疾病或者適應癥，尤其是增殖性疾病，如乳腺癌或者類似的l欠組織內(nèi)分泌敏感性癌癥，最優(yōu)選雌激素依賴性適應癥，例如男子乳腺發(fā)育、乳腺和子宮內(nèi)膜的腫瘤、子宮內(nèi)膜異位癥和早產(chǎn)分娩。本發(fā)明化合物還可用于治療或者預防絕經(jīng)后婦女的激素受體陽性或者未知的局部進行性或者轉(zhuǎn)移性乳腺癌。式(I)化合物及其可藥用鹽還可以與一種和多種具有抗肺瘤作用的藥物聯(lián)合給藥，如所述抗雌激素活性的藥物例如依西美坦、托瑞米芬、氟維司群、他莫昔芬；如所述骨吸收抑制活性的藥物例如帕瑪二磷酸、唑來膦酸，如所述烷化劑活性的藥物白消安、替莫唑胺、美法侖、苯丁酸氮芥、氮芥(mechlorethalamine),如所述核普酸堿基嵌入活性的藥物例如阿霉素、柔紅霉素、更生霉素、多柔比星、表柔比星、伊達比星；如所述抗代謝物活性的藥物例如阿糖胞苷、氟達拉賓、克拉屈賓(cladrbine)、巰噤呤、石危鳥噤呤、卡培他賓；如所述抗雄激素活性的藥物例如阿巴瑞克、比卡魯胺；如所述雄激素活性的藥物例如尼魯米特、甲基睪酮；如所述促性腺激素釋放激素活性的藥物例如亮丙瑞林、曲普瑞林、戈舍瑞林；如所述促黃體激素活性的藥物例如曱羥孕酮、如所述核苷酸類似物活性的藥物例如吉西他賓(gemcitarabine);如所述拓樸異構(gòu)酶I抑制活性的藥物例如托泊替坎、伊立替康；如所述激酶抑制活性的藥物例如伊馬替尼；如所述生長因素抑制活性的藥物例如吉非替尼、曲妥珠單抗；如所述生長激素活性的藥物例如阿法依泊汀-a、沙格司亭、非格司亭、培非司亭、奧普瑞白介素、干擾素ot-2b;如所述混合抗腫瘤活性的藥物例如培美曲塞、達卡巴溱、丙卡巴肼、奧沙利鉑、天冬酰胺酶、培門冬酶、六甲蜜胺(altetamine)、吉姆單抗、長春瑞濱、米托蒽醌、地尼白介素、利妥昔單抗、阿利維曱酸、三氧化砷、硼替佐咪、維曱酸、多西紫杉醇；如止吐活性的藥物例如多拉司瓊、帕洛諾司瓊、阿瑞匹坦、才各拉司瓊、屈大麻酚、昂丹司瓊。本發(fā)明所述化合物可以如下使用'-以制劑或者藥盒形式作為聯(lián)合治療劑，其由各成分組成，包括本文所述式(I)化合物及其可藥用鹽和至少一種具有抗胂瘤活性的藥物，它們可以同時或者順序服用。所述制劑或者藥盒可包括使用說明。劑量可以在較寬范圍內(nèi)變化，當然應適應于每位患者的個體情況。通常，對于口服給藥，日劑量為約0.3mg~約3g,優(yōu)選約1mg~約1g,例如對于成人(70kg)為約10mg，可劃分為優(yōu)選例如適合的相等劑量給藥1-3次，如果發(fā)現(xiàn)合適，也可以超出所規(guī)定的上限；一般而言，兒童根據(jù)其年齡和體重應接受較低的劑量。實施例下列實施例舉例說明本發(fā)明。所有溫度以攝氏度，壓力以毫巴表示。除非另有說明，反應在室溫進行。縮略語"Rf=xx(A)，，表示例如Rf在溶劑系統(tǒng)A中的值為xx。溶劑彼此的比例總是以體積份表示。終產(chǎn)物和中間體的化學名稱借助AutoNom2000(AutomaticNomenclature)程序生成。HPLC梯度洗脫HypersilBDSC-18(5]Lim);柱4x125mm:90%水/10%乙腈*~0%水/100%乙腈*洗脫時間為5分鐘+2.5分鐘(1.5ml/分)*包含0.1%三氟乙酸使用下列縮略語Rf—種物質(zhì)展行的距離與洗脫劑距薄層色譜的原點間的距離的比率Rt物質(zhì)在HPLC中的保留時間(分鐘)-m.p.熔點(溫度)<table>tableseeoriginaldocumentpage16</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage17</column></row><table>實施例14-(5,6-二氫-8H-咪唑并『5,l-cin,41^g。秦-8-基)苯曱腈將1.20mmol2-[(4-氰基苯基)-(3H-咪唑-4-基)曱氧基]乙基曱磺酸酯在10ml乙腈中的溶液加熱回流24小時J吏反應混合物冷卻到室溫并蒸發(fā)。殘余物經(jīng)快速色譜(Si0260F),獲得白色固體形式的標題化合物。Rf=0.14(二氯曱烷-2M氨乙醇溶液95:5);Rt=4.29。如下制備原料a)2-「(4-氰基苯基W3H-咪唑-4-基)曱氧基l乙基甲磺酸酯0。C下，將1.44mmol二異丙基乙胺和1.20mmol曱磺酰氯加到1.20mmol4-[(2-羥基乙氧基)-pH-咪唑-4-基)曱基]苯曱腈在10ml二氯甲烷中的溶液中。使反應混合物在0。C攪拌3小時，傾入水中，用二氯曱烷萃取。合并的有機相用鹽水洗滌，經(jīng)硫酸鈉干燥并蒸發(fā)。該標題化合物粗品無需進一步純化即可用于下步。b)4-f(2-羥基乙氧基W3H-咪唑-4-基)甲基l苯甲腈室溫下，將2.45mmol硼氬化鈉加到1.63mmol[(4-氰基-苯基)-1-(三苯曱基-lH-咪唑-4-基)曱氧基]乙酸乙酯在10ml乙醇中的溶液中。該反應混合物在室溫攪拌16小時后蒸發(fā)。殘余物加到二氯曱烷和飽和碳酸氬鈉水溶液中，分離兩相，水相用二氯曱烷反萃取。合并的有機相用石克酸鈉干燥并蒸發(fā)。殘余物通過快速色"i普(SiO260F)，獲得白色固體形式的標題化合物。Rf=0.10(乙酸乙酉旨-庚烷1:2);Rt=7.39。c)「(4-氰基苯基)-(1-三苯甲基-1H-咪唑-4-基)甲氧基乳酸乙酯0°C下，將5.00mmol4-[羥基-(l-三苯曱基-lH-咪唑-4-基)曱基]苯甲腈加到6.50mmol氳化鈉(60%石蠟分散體)在20mlN,N-二甲基-甲酰胺中的混合物中。反應混合物在0。C攪拌1小時后，滴加溴乙酸。反應混合物在室溫攪拌16小時后，傾入水中，用叔丁基曱基醚萃取。合并的有機相用鹽水洗滌，硫酸鈉干燥并蒸發(fā)。殘余物經(jīng)快速色譜(SiO260F)，獲得琥珀色油狀的標題化合物。Rf=0.42(乙酸乙酯-庚烷1:2);Rt=8.00。d)4-「羥基-n-三苯甲基-lH-咪唑-4-基)甲基l苯甲腈將14.80mmol4-碘苯曱腈[3058-39-7]的20ml四氳吹喃溶液冷卻到-30。C,并加入14.80mmol異丙基氯化鎂(2M四氬吹喃溶液)。將該混合物在-30。C攪拌60分鐘，然后加入預先冷卻到-30。C的11.84mmoll-三苯甲基-lH-咪唑-4-甲醛[33016-47-6]在30ml四氫呋喃中的溶液。該混合物在-30。C攪拌30分鐘后，使反應混合物溫熱到室溫并用飽和氯化銨水溶液終止反應。分離兩相，水相用乙酸乙酯萃取(3x)。合并的有才幾相用鹽水洗滌，硫酸鎂干燥并蒸發(fā)。殘余物經(jīng)乙酸乙酯重結(jié)晶，獲得白色固體形式的標題化合物。Rf=0.23(CH2C12-2MNH3的EtOH溶液97:3);Rt=7.32。通過手性制備性HPLC將外消旋化合物分離為對映體，得到標題化合物。該標題化合物是首先洗脫分離出來的對映體。Rt*=5.41min。gHPLC方法柱250x50mmCHIRALPAKAD20,流動相(302/甲醇80:20流速240ml/min斗全測UV250nm溫度25。C壓力150bar以類似于實施例1描述的方法制備下列化合物24-(5,6-二氪-8H-咪唑并r5,l-cl「l,4lp惡。秦-8-基)-2-氟苯曱腈,以2-氟-4畫碘苯曱腈[137553_42-5]為原料。38-(4-硝基苯基)-5,6-二氫-8H-咪唑并[5,1-cl『1,41^。秦,以l-碘-4-硝基苯[636-98-6]為原料。使用四氫呋喃替代N,N-二曱基甲酰胺作為步驟c中的溶劑。48-(4-曱磺?；交?-5,6-二氫-8H-咪唑并「5、l-cin，41g。秦,以U典-4-甲磺酰基苯[64984-08-3]為原料。54-(5,6-二氳-8H-咪唑并「5J-ciri,41^。秦-8-基)-2,6-二氟苯曱腈,以2,6-二氟-4-碘苯甲腈[14743-50-3]為原料。68-a4-二氟苯基V5,6-二氫-8H-咪唑并「5，l-cin,41g。秦,以3,4-二氟誦1-碘苯[64248-58-4]為原料。白色蠟狀物。84-(5,6-二氫-8H-咪唑并「5,1-cl「1,41，。秦-8-基)酞腈,以4-》典酞腈[69518-17-8]為原料。實施例71-「4-(5,6-二氫-8H-咪唑并「5,1-cl「1,41oxazin-8-基)苯基l乙酮氬氣氛下，將3mmol甲基溴化4美溶液(3M乙醚溶液)加到0.97mmol4-(5,6-二氫-8H-咪唑并[5,l-c][l,4]p惡嗪-8-基)-N-甲氧基-N-曱基苯甲酰胺在10ml無水四氫吹喃中的溶液中。該反應溶液在室溫4覺拌4小時后，傾入飽和氯化銨水溶液，用叔丁基曱基醚萃取。合并的有機相經(jīng)硫酸鎂干燥并蒸發(fā)。殘余物經(jīng)快速色譜(Si0260F),獲得米色固體的標題化合物。Rf=0.19(二氯曱烷-2M氨乙醇溶液97:3);Rt=4.10.如下制備原料a)4-(5,6-二氫-8H-咪唑并「5J-cl「1,41哺溱-8-基)-:^-曱氧基-N-甲基苯甲酰度將9.30mmol亞石克酰氯加到3.10mmol4-(5,6-二氪-8H-咪唑并[5,l-c][l,4]喁嗪-8-基)苯曱酸在5ml氯仿中的溶液中。將反應混合物回流3小時后蒸發(fā)。殘余物用曱苯處理后，加到10ml二氯曱烷中。將反應溶液冷卻到05。C,加入3.10mmolN,O-二甲基羥胺鹽酸鹽，然后加入15.5mmol二異丙基乙胺。該反應混合物在室溫攪拌16小時后，濾過Hyflo,蒸發(fā)濾液。殘余物經(jīng)快速色譜(Si0260F),獲得黃色油狀的標題化合物。Rf=0.13(二氯曱烷-2M氨乙醇溶液97:3);Rt=4.00。b)4-(5,6-二氳-8H-咪唑并「5,l-cUl,41^n秦-8-基)苯曱酸將3.10mmol4-(5,6-二氫-8H-咪唑并[5,l-c][l,4p惡嗪-8-基)苯甲腈(實施例l)的5ml乙醇溶液與3.1ml2M氬氧化鈉溶液混合。將該反應溶液加熱回流24小時。反應混合物冷卻到室溫后，用2M鹽酸綜合并蒸發(fā)。粗產(chǎn)物無需純化即可直接用于下步。Rt=3.79.權(quán)利要求1.通式(I)化合物或其鹽，優(yōu)選其可藥用鹽其中R是氘、鹵素或氫；R1是芳基-C0-C4-烷基或者雜環(huán)基-C0-C4-烷基，它們可以被下述基團取代1-4個C1-C8烷氧基、C1-C8烷氧基羰基、C1-C8烷基、C0-C8烷基羰基、C1-C8烷基磺?；?、可任選取代的芳基、芳基-C0-C4烷氧基羰基、氰基、鹵素、可任選取代的雜環(huán)基、羥基、硝基、氧化物、氧代、三-C1-C4烷基硅烷基、三氟甲氧基或者三氟甲基；R2是a)氘、鹵素、羥基、氰基或者氫；或者b)C2-C8鏈烯基、C2-C8炔基、C1-C8烷氧基、C1-C4烷氧基羰基-C1-C4烷基、C1-C8烷基、C0-C4烷基羰基、芳基-C0-C4烷基、羧基-C1-C4烷基、C3-C8環(huán)烷基或者雜環(huán)基-C0-C4烷基，它們可以被下述基團取代1-4個C1-C8烷氧基、C1-C8烷氧基羰基、C1-C8烷基、C0-C8烷基羰基、C1-C8烷基磺酰基、可任選取代的芳基、芳基-C0-C4烷氧基羰基、氰基、鹵素、可任選取代的雜環(huán)基、羥基、硝基、氧化物、氧代、三-C1-C4烷基硅烷基、三氟甲氧基或者三氟甲基；R3是C1-C8烷基；Q是氧或者硫；m是0、1或者2的數(shù)；n是0、1或者2的數(shù)；其中，如果R2是氫，則R1不是C1-C8烷基-取代的芳基，所述化合物顯示出高于圍繞標示“*”所示不對稱碳原子的相對構(gòu)型的式(I)物質(zhì)至少10倍，優(yōu)選20倍，或者更優(yōu)選40倍的抑制活性。2.權(quán)利要求1或2的化合物，其中R是氘或者氬。3.權(quán)利要求l或2任一項的化合物，其中R/是可任選取代的苯基、可任選取代的萘基、苯并呋喃基、苯并[b]噻吩基、苯并咪唑基、苯并[d]異噻唑基、苯并[d]異-惡唑基、苯并[b]噻吩基、咪唑基、p引哇基、p惡唑基、吡啶基、吡咯基、噻唑基或者p塞吩基。4.權(quán)利要求1-3任一項的化合物，其中RS是CrQ烷氧基、羥基、C廣C8烷基、可任選取代的芳基-Q)-C4烷基、氘、卣素、氰基或者氫。5.權(quán)利要求1-4任一項的化合物，其中Q是氧。6.權(quán)利要求1-5任一項的通式(I)化合物或其可藥用鹽制備藥物的用途。7.權(quán)利要求1-5任一項的通式(I)化合物或其可藥用鹽用于制備人的預防、延緩或者治療對芳香酶抑制作用具有響應的疾病或者適應癥，尤其是增殖性疾病或其發(fā)展的藥物的用途。8.—種預防、延緩或者治療對芳香酶抑制作用具有響應的疾病或者適應癥，尤其是增殖性疾病或者其發(fā)展的方法，其中使用治療有效量的權(quán)利要求1-5任一項的通式(I)化合物或者其可藥用鹽。9.一種藥品，包含權(quán)利要求1-5任一項的通式(I)化合物或者其可藥用鹽和常規(guī)賦形劑。全文摘要本發(fā)明涉及通式(I)化合物或其鹽，優(yōu)選其可藥用鹽，其中R，R¹，R²，R³，Q，m和n具有說明書中詳細解釋的含義，*表示不對稱碳原子，還涉及它們的制備方法以及這些化合物作為藥物，尤其是芳香酶抑制劑的用途。文檔編號A61K31/5383GK101421278SQ200780013096公開日2009年4月29日申請日期2007年4月12日優(yōu)先權(quán)日2006年4月12日發(fā)明者A·斯托賈諾維克,C·馬蒂,P·赫羅爾德,R·馬,S·斯圖茨,V·欣克申請人:斯皮德爾實驗股份公司