專利名稱：：一種治療類風濕性關節(jié)炎的中藥組合物的制備工藝的制作方法
技術領域：
：本發(fā)明屬于中藥制藥領域，具體涉及一種治療類風濕性關節(jié)炎的中藥組合物的制備工藝。
背景技術：
：類風濕性關節(jié)炎(rheumatoidarthritis,RA)是一種常見的以慢性多關節(jié)炎癥病變?yōu)橹饕憩F(xiàn)的全身性免疫性疾病，該病的致殘率高，已成為世界上公認的頑疾之一，由于其發(fā)病機制尚未完全明確，臨床上還缺乏特異性治療措施。近年來，中醫(yī)藥在治療RA中取得了很大的進展，前景較為廣闊。玄七通痹膠囊處方由螞蟻、黃芪、重樓、三七、千年健、老鸛草六味藥材組成，是治療類風濕性關節(jié)炎的有效制劑。該方自投產(chǎn)以來，因其療效確切，無不良反應，受到了廣大患者的普遍歡迎。但是有患者反映該藥短時間服用止痛作用不明顯，其遠期療效要優(yōu)于近期療效。螞蟻是蟻科Forw/d^^的俗稱，又名蟲義、玄駒、蚍蜉、馬蟻，在我國有食用及藥用的悠久的歷史，中醫(yī)學認為螞蟻具有補腎、除濕、益氣的作用。螞蟻的揮發(fā)油中含有豐富的不飽和脂肪酸、萜類等物質，可以影響免疫系統(tǒng)的功能，并且有調整吞噬作用、促進細胞因子的產(chǎn)生和白細胞的遷移的作用，也干預巨噬細胞的抗體表達。千年健是天南星科千年健屬植物千年健//07^/owemioccw/to(Lour.)Schott的干燥根莖，該藥材主要用于祛風除濕、舒筋活絡、補肝腎壯筋骨、消腫止痛排膿及和胃止痛等，其揮發(fā)油中主要含有芳樟醇等倍半萜烯、萜醇類物質，具有祛風除濕、舒筋活絡、補肝腎壯筋骨等功效。黃苠最早為豆禾斗植物膜莢黃"^4欲aga/"J麼w6ra加c醋(Fisch.)Bge.禾口蒙古黃芪爿5/raga/wswem6rawacew5(Fisch.)Bge.var.wo"g/zo//cw1s(Bge.)Hsiao的干燥豐艮，是健脾益氣、固表利尿、脫毒排膿、斂瘡生肌的要藥，其主要活性成分是黃芪皂苷和多糖，黃芪皂苷具有消炎、降血壓、抗心肌缺血、中樞鎮(zhèn)痛、鎮(zhèn)靜的作用；黃芪多糖具有增強機體免疫力、提高人體抗應激反應能力的作用。重樓為百合禾斗云南重樓尸"r/i1一少-;/^/aSmithvar.yw""a"e肌j(Franch.)Hand.-Mazz.和七葉一枝花尸aWj/7o/_v-;/^//aSmithvar.c/2/"e"wJ(Franch.)Hara的干燥根莖。具有清熱解毒、消腫止痛、涼肝定驚之功效，其主要活性成分為薯蕷皂苷元，具有抗腫瘤、消炎、鎮(zhèn)靜、鎮(zhèn)痛、止血等作用。三七為五加科植物Pa"ox"oMg!Vwe"g(Burk.)F.H.Chen的干燥根及根莖，具有鎮(zhèn)痛、抗炎、滋補強壯等功效，其主要活性成分為三七皂苷、三七素等，為貴重藥材。生品重于散瘀止血，熟品重于補血。老鸛草為牦牛兒科植物牦牛兒苗fra力ww飾;？/wm'amwj附/W、老鸛草Geram'www///oW//Maxim.或野老鸛草Geraw/wwcaTO//wam/wL.的干燥地上部分，具有祛風除濕、通經(jīng)絡、清熱解毒之功效，其主要活性成分為鞣質、黃酮類化合物。鞣質為一種具有沉淀蛋白質特性的水溶性多元酚類化合物，不僅具有常見的收斂、抗菌消炎、止血、驅蟲、止瀉、抗多種病原蟲感染性疾病的作用，還具有抗腫瘤、抗突變、抗脂質過氧化、抗變態(tài)反應，抑制胃蛋白酶，預防應激性胃腸損傷，降壓、降脂，改善肝腎功能等功用，并對中樞神經(jīng)系統(tǒng)有鎮(zhèn)靜作用。玄七通痹膠囊原配方為螞蟻8-10重量份、黃芪2-3重量份、三七1-2重量份、千年健0.8-1.2重量份、老鸛草0.8-1.2重量份、重樓l-2重量份，按配方取黃芪粉碎成細粉，取螞蟻、三七、重樓、老鸛草、千年健加5-7倍量的20-80%乙醇浸泡1-3小時，然后微沸回流提取2-4小時，冷卻后放出提取液，再次按3-5倍量加入50-70%乙醇，微沸回流提取2-3小時，冷卻后放出提取液，重復提取2-3次，合并提取液，靜置得上清液；將上清液濃縮至40-50'C時相對密度為1.20-1.25，得稠膏；加入備用的黃芪粉，與所得稠膏混合均勻，于60-65'C干燥，得干浸膏；粉碎，過篩，加適量輔料，混勻，制成膠囊劑。原工藝中將黃芪直接打粉入藥，其微生物限度難以控制，服用量大；另外，其它幾味藥材則用50-70%乙醇混合提取，其出發(fā)點是兼顧其脂溶性和水溶性成分充分的提取，但是實際上有效成分并未充分提取，該藥短時間服用止痛作用不明顯，因此其藥效和生物利用度有待進一步提高。
發(fā)明內容本發(fā)明的目的是提供一種治療類風濕性關節(jié)炎的中藥組合的制備工藝。本發(fā)明的目的是通過以下措施實現(xiàn)的一種治療類風濕性關節(jié)炎的中藥組合的制備工藝，選用為螞蟻8-10重量份、黃疾2-3重量份、三七1-2重量份、千年健0.8-1.2重量份、老鸛草0.8-1.2重量份、重樓1-2重量份為原料藥，該工藝包括以下步驟a、C02超臨界萃取將螞蟻和千年健粉成粗粉后置于萃取釜中進^^C02超臨界萃取，萃取壓力為24-36Mpa,萃取溫度為40-60°C，萃取時間為30-90min，收集螞蟻與千年健混合萃取物；b、萃取物包合取螞蟻與千年健混合萃取物，用質量百分比濃度為10-30%的乙醇溶解，另取螞蟻與千年健的混合萃取物重量4-8倍量的e-環(huán)糊精，加入0-環(huán)糊精重量2-4倍量的水研勻，倒入膠體磨中，緩慢連續(xù)滴加螞蟻與千年健混合萃取物溶液，碾磨-包合20-40分鐘，傾出，冷藏靜置，濾過，真空干燥，即得混合萃取物的包合物；c、醇提將重樓、黃芪、三七用質量百分比濃度為70-90%的乙醇提取；d、水提醇提后所得藥渣、老鸛草與螞蟻和千年健C02超臨界萃取的萃余物進行水提；e、混合、干燥、粉碎將上述醇提液濃縮成浸膏后干燥、粉碎成醇提取物干粉，水提液濃縮成浸膏后干燥，粉碎成水提物干粉；將螞蟻千年健混合萃取物包合物、水提物干粉、醇提取物干粉混合，加適量輔料，常規(guī)方法制成所需劑型。所述的治療類風濕性關節(jié)炎的中藥組合物的制備工藝，優(yōu)選螞蟻8.5-9.0重量份、黃芪2.0-2.5重量份、三七1.0-1.5重量份、千年健1重量份、老鸛草1重量份、重樓1.5-2.0重量份為原料藥。上述工藝具體包括以下步驟a、C02超臨界萃取將螞蟻和千年健粉成粗粉后置于萃取釜中進^^C02超臨界萃取，萃取壓力為24Mpa，萃取溫度為60'C，萃取時間為90min，收集螞蟻與千年健混合萃取物；b、萃取物包合取螞蟻與千年健混合萃取物，用質量百分比濃度為10%的乙醇溶解，另取螞蟻與千年健的混合萃取物重量6倍量的e-環(huán)糊精，加入e-環(huán)糊精重量2倍量的水研勻，倒入膠體磨中，緩慢連續(xù)滴加螞蟻與千年健混合萃取物溶液，碾磨包合30分鐘，傾出，冷藏靜置，濾過，真空干燥，即得混合萃取物的包合物；c、醇提將重樓、黃芪、三七用質量百分比濃度為80%的乙醇8倍量提取2次，每次2h;d、水提醇提后所得藥渣、老鸛草與螞蟻和千年健C02超臨界萃取的萃余物采用10倍量水提取2次，每次lh;6e、混合、干燥、粉碎將上述醇提液濃縮成浸膏后干燥、粉碎成醇提取物干粉，水提液濃縮成浸膏后干燥，粉碎成水提物干粉；將螞蟻千年健混合萃取物包合物、水提物干粉、醇提取物干粉混合，加適量輔料，常規(guī)方法制成所需劑型。本發(fā)明治療類風濕性關節(jié)炎的中藥組合物的具體制備工藝^l程如圖1所示。本發(fā)明的有益效果通過本發(fā)明工藝制備得到的中藥組合物，功能主治未發(fā)生變化，但鎮(zhèn)痛與抗凝血、.抗炎效果要明顯優(yōu)于老工藝。這主要是因為發(fā)明人在工藝確定之先，借鑒藥物物質基礎研究的理論，明確藥物抗炎、鎮(zhèn)痛的有效部位，為最終產(chǎn)品的良好療效奠定了基礎。工藝研究過程中，采用科學的統(tǒng)計學實驗方法，結合生產(chǎn)實際，制定合理的評價指標、評分體系，這保證了藥效成分最大程度的保留在產(chǎn)品中。最終的藥效比較實驗證明，本發(fā)明工藝制備得到的中藥組合物的療效優(yōu)于老工藝產(chǎn)品，顯著提高產(chǎn)品的科技含量和核心競爭力。本工藝中針對不同的原料采用不同的制備工藝，使各原料的有效成分充分提取出來，增加了藥效，具體體現(xiàn)在以下幾個方面(一)C02超臨界萃取工藝研究1、試驗方法將千年健粉碎成粗粉，稱取千年健粉19.16g，螞蟻170g投入lL萃取釜中，加熱萃取釜和解析釜，達到預定溫度，送入一定量的C02氣，調節(jié)各釜壓力后開始循環(huán)萃取，其中解析釜I壓力為8.0士0.5MPa,溫度為5(TC;解析釜II壓力為5.O土0.5MPa,溫度為37°C。按照正交設計安排進行試驗，以螞蟻千年健油得率為評價指標，考察各因素水平對萃取效果的影響，得出最佳工藝條件。2、螞蟻、千年健超臨界萃取工藝研究的正交試驗設計通過預試驗，發(fā)現(xiàn)對螞蟻千年健萃取物超臨界C02萃取得率影響較大的因素有萃取壓力、萃取溫度、萃取時間，以這三個因素為考察對象。選擇L9(3"正交設計表，安排試驗。因素水平表見表1。表1螞蟻、千年健超臨界萃取因素水平表水平因素A.萃取壓力(MPa)B.萃取溫度('C)C.萃取時間(min)136±0.54090230±0.55060324±0.56030以得油率為指標，極差分析結果OA〉B,即影響因素排列順序為萃取時間>萃取壓力>萃取溫度。各因素與水平之間的最佳組合為A3B3d，確定最佳工藝為:萃取壓力為24MPa，萃取溫度為60。C，萃取時間為90min。(二)P-環(huán)糊精包合工藝研究1、實驗方法按照正交實驗的安排，取一定量的p-環(huán)糊精，加入規(guī)定倍量的水研勻，倒入膠體磨中，開動機器，緩慢連續(xù)加入揮發(fā)油，碾磨一定時間，于40'C真空干燥24小時，粉碎，用無水乙醇洗滌，40'C回風干燥，即得包合物。2、正交實驗設計影響膠體磨法包合效果的主要因素有物料比例(A)、加水量(B)、包合時間(C)、醇用量(D)等四個因素，選擇采用L9(3"正交設計表，以包合物收率、包合物油利用率、包合物含油率為評價指標，并采用綜合評分法，分析優(yōu)選最佳工藝條件，因素水平劃分及正交實驗安排及結果見表2。表2螞蟻、千年健超臨界萃取物包合正交實驗因素水平表水平一因素_A.(mL:g)B.(倍)C.(min)D.(%)21:6330203_^_^__30包合物含油率=包合物含油量/包合物重乂100%油利用率-包合物含油量/揮發(fā)油投入量X100%3、包合物中螞蟻千年健油的含量測定方法經(jīng)過預實驗得知，采用水蒸汽蒸餾法，螞蟻千年健油空白回收率僅為40%，不適合用來計算螞蟻千年健油的利用率。而采用有機溶劑提取法，由于不能直接得到油，且螞蟻千年健油無對照品，故采用紫外分光光度法，以螞蟻千年健油為對照，評價包合效果。(1)UV檢測波長的測定精密稱取包合物O.lg，加25mL無水乙醇超聲30min，過濾，取續(xù)濾液，于紫外-可見分光光度計下掃描(l卯600nm)，與未被包合的螞蟻千年健油的掃描譜圖進4于比較，可見包合前后螞蟻千年健油在217nm與282nm處均有最大吸收，確定以282nm附近的最大吸收峰強度評價包合效果。(2)脫包溶劑的選擇精密稱取包合物2g，分別加入25mL無水乙醇、二氯甲烷、醋酸乙酯、石油醚(609(TC)，稱重，超聲30min，冷卻后再稱重，用相應的溶劑補足減失的重量，過濾，取續(xù)濾液于紫外-可見分光光度計下掃描(190600nm)，觀察吸收峰的強弱，由圖譜可知，無水乙醇的脫包能力最強，故確定脫包溶劑為無水乙醇。(3)標準曲線的制備精密稱取相對密度為0.94的螞蟻千年健油lg,以無水乙醇溶解并定容至100mL，配成10mg/mL的儲備液，分別吸取儲備液5mL、4mL、3mL、2mL、lmL以無水乙醇定容至10mL，在282nm處測定吸收度，以螞蟻千年健油的濃度為橫坐標，以吸光度值為縱坐標，繪制標準曲線。得回歸方程:Y-0.220C+0.020,I^-0.999，表明螞蟻千年健油濃度在lmg/mL5mg/mL范圍內線性關系良好，結果見圖2。4、螞蟻、千年健油包合結果及分析包合物得率、含油率和油利用率為指標，分別選取最高者作為IOO分，其余按公式計算得分y/=100—最高值+》，然后對三個指標賦與不同的權重。結合生產(chǎn)實際要求分別賦予包合物得率權重系數(shù)為0.2，含油率及油利用率權重系數(shù)分別為0.4。計算結果表明極差分析結果D〉A〉B〉C,即影響因素排列順序為溶媒含醇量>物料比例>加水倍量>包合時間。各因素與水平之間的最佳組合為A2B^2Di，以C項作為誤差項，進一步進行方差分析，各因素對實驗結果的影響均不顯著。包合最佳因素組合為物料比例1:6，加入2倍量的水，包合30min,溶媒含醇量為10%。5、包合物的表征(1)紫外掃描法在水中加入螞蟻千年健油，超聲30min，配制成螞蟻千年健油飽和溶液；按照螞蟻千年健油與P-環(huán)糊精比例1:6，配制成混合溶液；以相同質量螞蟻千年健油包合物配制成脫包后溶液；根據(jù)所用油量，按比例取卩-環(huán)糊精配制成溶液。將樣品進行紫外掃描，以波長為橫軸(200nm600nm)，吸收度為縱軸，掃描圖譜見圖3。(2)差示掃描量熱法(DSC)分別對卩-環(huán)糊精、螞蟻千年健油p-環(huán)糊精包合物、螞蟻千年健超臨界油、P-環(huán)糊精與螞蟻千年健超臨界油的物理混合物進行DSC掃描。結果螞蟻千年健油沒有吸熱峰或放熱峰，6-環(huán)糊精在113.8'C及223.9'C有兩個吸熱峰，熱焓值分別為-334.lj/g及-6.554J/g，物理混合物在128.3'C及226.1'C有兩個吸熱峰，熱焓值分別為-266.7J/g及-4.0767J/g，包合物在117.6'C及224.3'C有兩個吸熱峰，其熱焓值為-240.7J/g及-2.095J/g，與混合物及P-環(huán)糊精相比有所升高且峰向左移，表明經(jīng)e-環(huán)糊精包合后形成了新的物相。(三)醇提工藝研究1、正交試驗安排與結果通過預實驗確定提取因素水平，采用L9(3"正交試驗安排表，進行正交試驗并測定結果，以干膏得率、黃芪甲苷含量、重樓皂苷I含量及三七皂苷R,含量為指標，以綜合評分為評價指標確定最佳工藝。表3醇提正交實驗因素水平表<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>2、結果分析，以干膏重、黃芪甲苷含量、重樓皂苷I含量、三七皂苷R!含量為指標，分別選取最高者作為、00分，其余按公式計算得分yi'=100—最高值+"，然后對三個指標賦與不同的權重。結合生產(chǎn)實際要求分別賦予干膏重、重樓皂苷I、三七皂苷R,權重系數(shù)分別為0.2,黃芪甲甘權重系數(shù)為0.4，由極差分析可知，各因素對該指標的影響大小排列為D>C〉B〉A，均無顯著性差異，D因素的水平優(yōu)劣排列如下3>2>1,其中1和3水平具顯著性差異，1和2，2和3水平無顯著性差異。C因素的水平優(yōu)劣排列如下2>3>1,各水平間均無顯著性差異。B因素的水平優(yōu)劣排列如下2>3>1，各水平間均無顯著性差異。A因素的水平優(yōu)劣排列如下2>1>3,各水平間均無顯著性差異。以綜合評分為指標的工藝為A2B2C2D3，從生產(chǎn)成本耗時等方面考慮，確定最佳工藝條件為A2B2C3D2,B卩乙醇濃度80%8倍量，提取2次，每次2h。(四)水提工藝研究1、正交實驗設計與結果采用L9(3"正交試驗安排表，進行正交試驗并測定結果，以所得干膏得率、氨基酸含量(相對于?；撬岬暮?為指標，以綜合評分為評價指標確定最佳工藝。表4正交試驗因素水平表因素水平加水倍量提取時間提取次數(shù)(A)(B)(c)18倍lh1次210倍1.5h2次312倍2h3次2、正交實驗結果優(yōu)化所得的最佳工藝AzB^2。3、氨基酸的含量測定(1)?；撬釋φ掌啡芤旱呐渲?012.2g，至于10mL容量瓶中，用水溶解后定容至刻度，搖勻，作為儲備液精密吸取儲備液5mL，至于25mL容量瓶中，用水定容至刻度，得0.244mg/mL的?；撬釋φ掌啡芤海瑐溆?。(2)供試品溶液的制備精密稱取水提干膏粉5g，加入50mL蒸餾水，加熱煮沸后，3000r/min離心5min過濾，濾液用蒸餾水定容至lOOmL,備用。(3)磷酸鹽緩沖液的配制精密稱取磷酸氫二鈉4.37g，磷酸二氫鈉1.22g，加水溶解，并稀釋至100mL容量瓶中，得pH為6.4的磷酸鹽緩沖液，備用。(4)2%茚三酮溶液的配制精密稱取茚三酮lg，放入含有熱水的燒杯中，使其溶解后，定量轉入50mL的量瓶中，定容至刻度，即得，備用。(5)UV波長掃描精密吸取牛磺酸對照品溶液、供試品溶液各2mL,分別加入lmL2。/。茚三酮溶液和lmL磷酸鹽緩沖液，分別放入25mL、50mL容量瓶中，置沸水裕中加熱20min，取出迅速冷卻至室溫后，用水定容至刻度，搖勻，靜置15min后，于紫外-可見分光光度計下(190800nm)進行波長掃描，對照品及樣品在401nm、569nm處有最大吸收，空白溶液無影響，確定波長為569nm。(6)標準曲線的制備取5個25mL的容量瓶并編號，精密吸取上述牛磺酸對照品溶液0.5mL、1.0mL、1.5mL、2.0mL、2.5mL于容量瓶中，各加入2%茚三酮溶液lmL，磷酸鹽緩沖液lmL，置沸水裕中加熱20min，取出迅速冷卻至室溫后，用水定容至刻度，搖勻，靜置15min后，在569nm處測定吸光度A，以吸光度為縱坐標(Y)，以濃度(C)為橫坐標，建立標準曲線，得回歸方程Y=74.98C—0.165,F0.983,表明?；撬嵩跐舛?.88嗎/mL24.4嗎/mL范圍內線性關系良好。見圖4.(7)成型工藝研究堆密度的測定堆密度是指單位容積微粉或顆粒的重量。稱取一定重量的微粉，裝入10mL量筒中，以固定高度落下數(shù)次(每次保證試驗條件一致)，使松緊適宜，以重量及容積計算其堆密度。_表5微粉堆密度測定結果_試驗號微粉重(g)體積(mL)堆密度(g/mL)平均堆密度<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>根據(jù)微粉堆密度的測定結果，我們采用各部分干膏直接打粉后裝入o號膠囊方法裝樣。4、結論本實驗采用超臨界C02萃取技術對螞蟻千年健進行混合萃取，即能提取低沸點的易揮發(fā)油,避免破壞具有植物特征的香味成分,萜烯類組分也不易損失，又能提取出動物藥中較多的醇、酯、不飽和脂肪酸及熱不穩(wěn)定組分，大大提高了萃取物得率，縮短了提取時間。采用本工藝制備p-環(huán)糊精包合物，物料利用率高。(五)質量研究本發(fā)明組合物中黃芪為臣藥，其中黃芪甲苷為主要活性成分，為更好地控制制劑質量，選用黃芪甲苷為含量測定的指標成分。1、儀器與試藥高效液相色譜儀(日本島津,帶自動進樣器)；Hypersil-ODS柱(4.6x250mm,5pm);LC-Solution色譜工作站；PL-ELS2100蒸發(fā)光散射檢測器(英國)；黃芪甲苷對照品(0781-9908,中國藥品生物制品檢定所)；本發(fā)明組合物(按實施例l方法制備得到)；乙腈為色譜純；其余試劑均為分析純。含量測定(1)供試品溶液制備方法的考察通過査閱文獻以及預試驗可知，由于中成藥成分復雜，雖然采用大孔吸附樹脂附集洗脫，但其脂溶性成分等不能完全除去，故本試驗主要考察了以下四種供試品制備方法。見表6。_表6考察供試品溶液制備方法表_序樣品含量供試品溶液制備方法號(ug/g)甲醇冷浸過夜，索式提取4h，提取液回收甲醇至干，用水飽和正丁醇振搖提取，氨試液洗滌，正丁醇液蒸干，通1過D101型大孔吸附大孔吸附樹脂柱，棄去水液和40%乙424.18醇液，收集70%乙醇洗脫液，蒸干，甲醇定容，作為供試品溶液。加三氯甲烷適量，索式提取至無色，棄去提取液，濾紙筒揮干溶劑，再置于索式提取器中，其余步驟同l。甲醇冷浸過夜，索式提取4h,用水飽和正丁醇振搖提取，氨試液洗滌，正丁醇液蒸干，殘渣水溶解后用三氯甲烷萃取，水層揮去三氯甲垸后過DIOI型大孔吸附大孔吸附樹脂柱，.其余步驟同l。甲醇冷浸過夜，索式提取4h，用水飽和正丁醇振搖提取，氨試液洗滌，正丁醇液蒸干，甲醇定容。綜合分析，方法2中黃芪甲苷提取不完全，方法1和方法4未經(jīng)三氯甲烷脫脂，脂溶性成分過多，影響分離度及峰形的美觀度，并且方法4中未經(jīng)D101型大孔吸附樹脂處理的樣品中雜質較多，容易損害色譜柱，綜合以上幾點，方法3效果最好。但從圖譜上看，水溶性成分仍較多，除雜不完全，故又增大了水及40%乙醇的洗脫用量，達到了滿意的效果。(2)色譜條件的優(yōu)選1)對照品溶液的制備精密稱取黃芪甲苷對照品適量，加甲醇制成每lmL含0.2mg黃芪甲苷的對照品溶液，即得。2)供試品溶液的制備精密稱取本發(fā)明組合物內容物約2g,加甲醇適量冷浸過夜，索式提取4h，提取液回收甲醇至干，用水飽和正丁醇振搖提取4次，每次20mL,合并正丁醇層，用氨試液洗滌兩次，每次20mL，正丁醇液蒸干，殘渣加10mL水使溶解，用三氯甲烷lOmL萃取1次，揮去三氯甲垸，通過DIOI型大孔吸附樹脂柱，用50mL水洗脫，棄去水液，繼用150mL40。/。乙醇洗脫，棄去40%洗脫液，再用80mL70。/。乙醇洗脫，收集70%乙醇洗脫液，蒸干，殘渣用甲醇定容至2mL，作為供試品溶液。3)星點設計通過預試驗可知，HPLC-ELSD測定黃芪甲苷含量的主要影響因素有流動相乙腈與水的比例(X!)、蒸發(fā)室溫度'C(X2)及其氮氣流速SLM(X3)，確定其各最大值最小值后，根據(jù)星點設計的原理，各因素設置5個水平，用代碼值士a、±1、±0來表示，a=1.732，因素及水平見表7，具體實驗方案安排見表8。表7星點設計因素水平表因素水平-1.732-10+1+1.73230:7033.17:66.8337.5:62.541.83:58.1745:55x26072.6890107.32120x31.21.561.82.152.4表8星點試驗安排及效應值試驗號ABC峰面積分離度對稱度OD預測值1-1_1_11192671.3151.1100.260.282I_1-14218091.0381.13400.014-11_11427231.2621.0960.290.31411_1675641.1511.0330.190.21-1-11607841.5171.0340.290.3061-111242081.0381.13200.0147_111523卯1.5360.837-0.11-0.09481111410971.0360.99300據(jù)9-1.7320一053827l鳥0.8880-0.018101.732003577861.1431.1520.090.067110-1.7320140253U621.0820.260.241201.7320132674U831.153-0.005-0.0231300-1.7326831341.1351.0170.540.5314001.7323卯401.3110.9300-0.01615200001840141.13231.08630.260.26注實驗1520號為重復實驗，故用均值表示4)數(shù)據(jù)處理將峰面積、分離度、對稱度均標準化為01之間的歸一值，各指標"歸一值"求算幾何平均數(shù)，得總評"歸一值"(OD)。公式如下00=(山(12...(1101為指標數(shù)，dmin=(ymax-yi)/(ymax-;Tmin)，^nax-(K-:Tmin)/(yhiax-ymin),峰面積、分離度取值越大越好，對稱度為11-對稱度I取值越小越好。5)模型擬合采用designexpert7.1得到回歸方程，y=-43.28+2.7A—0.16B+22.32C—0.15AB—1.07AC—0.05BC—0.04A2+0.12B2+0.05ABC+0.03A2B+0.016A2C—0.05AB2(i2=0.9876，/^々=0.9662)。方差分析得出，模型方差尸<0.05，說明該模型具有顯著性，且B、C、AB、BC、A2、B2、ABC、A2B、A2C、A^均具有顯著性，故本實驗以此方程作為分析及預測的模型，未將模型進行進一步簡化，固定三個自變量之一為中值，以總評"歸一值"為因變量，相對于另二個自變量的效應面三維圖見圖57。6)藥材的含量測定按2005年版《中國藥典》方法制備黃芪藥材供試品溶液，按上述色譜條件，對3個批號不同來源藥材進行測定，每個批號平行制備2份，進樣20nl，每份進2針。結果藥材的平均含量為1.683mgf1。(表中數(shù)值為每份的平均值)。7)樣品的含量測定分別取3個批號的本發(fā)明組合物，按上述供試品溶液制備方法進行制備，每個批號平行制備2份，按確定好的色譜條件測定，進樣20pl，每份進2針。結果樣品的平均含量為344.71pg'g—1(表中數(shù)值為每份的平均值)。<table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>8)本發(fā)明組合物中黃芪甲苷含量標準設定根據(jù)藥材含量計算，樣品中黃芪甲苷的平均轉移率為61%，《中國藥典》2005版一部規(guī)定黃芪藥材的含量限度為含黃芪甲苷(C41H68014)不得少于0.04%，按此數(shù)據(jù)計算，將原藥材的含量限度折算到制劑為110ngf1，考慮生產(chǎn)實際情況將其下浮20%，依照上述操作，設定本品lg含黃芪甲苷(C41H68014)不得少于0.088mg。結論在供試品制備方法考察時，考慮到三氯甲垸的毒性，本試驗中我們曾把三氯甲烷換成極性相似而毒性稍弱的二氯甲垸，但脫脂效果不理想，故選擇三氯甲烷進行脫脂。采用星點設計-效應面法優(yōu)選HPLC-ELSD測定黃芪甲苷的色譜條件，用優(yōu)選出的色譜條件進行含量測定時，分離度，對稱度效果均較好，此法既能較好地保證試驗精度又可以分析各因素之間的相互作用，同時試驗次數(shù)也較少，在模型建立上采用非線性數(shù)學模型擬合，復合相關系數(shù)較高，預測值更接近真實值。為星點設計-效應面法在優(yōu)選色譜條件的應用上提供了可行性依據(jù)。(六)藥效實驗研究根據(jù)臨床功能主治滋補肝腎，活血化瘀，消腫止痛，用于風寒濕痹引起的關節(jié)疼痛，腫脹，手足不溫，四肢麻木，肩臂腰腿疼痛，研究處方中各味藥材的不同提取方法產(chǎn)物的鎮(zhèn)痛、抗炎和抗凝血幾個方面的作用，驗證其與臨床主治有關的藥效學作用，并與原工藝制劑比較驗證新工藝制劑的有效性。1、實驗動物昆明種小鼠(中國人民解放軍第二軍醫(yī)大學實驗動物中心，雌雄各半)。2、試驗藥物(以下稱玄七通痹膠囊)玄七通痹膠囊(新工藝，按照實施例l方法制備得到)(南京中山制藥有限公司，批號081201;玄七通痹膠囊(老工藝，將螞蟻687.5g、黃芪187.5g、三七95g、千年健77.5g、老鸛草77.5g、重樓125g，按配方取黃芪粉碎成細粉，按配方取螞蟻、三七、重樓、老鸛草、千年健加6倍量的60%乙醇浸泡2小時，然后微沸回流提取3小時，冷卻后放出提取液，再次按4倍量加入60%乙醇，微沸回流提取3小時，冷卻后放出提取液，重復提取3次，合并提取液，靜置得上清液；將上清液濃縮至5(TC時相對密度為1.20-1.25,得稠膏加入備用的黃芪粉，與所得稠膏混合均勻，于60-65'C干燥，得干浸膏粉碎，過篩，力口適量輔料，混勻，制成膠囊劑)(南京中山制藥有限公司，批號070501);各味藥材系列提取物(南京中山制藥有限公司自制，批號、代號見表3.1);羧甲基纖維素鈉(中國醫(yī)藥集團上?；瘜W試劑公司，批號F20020928);角叉菜膠(sigma公司，批號122kl444);氯化鈉注射液(南京小營制藥廠，批號:2004L02603);阿司匹林(南京白敬宇制藥有限責任公司，批號050611);芬必得(中美天津史克制藥有限公司，批號05040122);其他試劑為分析純。表10各味藥材系列提取物藥物名稱代號性狀超臨界螞蟻油P-cd包合物A組乳白色粉末超臨界螞蟻藥渣水提浸膏粉B組褐色粉末千年健油P-cd包合物C組乳白色粉末千年健水提浸膏粉D組淺黃色粉末三七醇提浸膏粉E組淺黃色粉末三七超細'粉F組乳白色粉末老鸛草水提浸膏粉G組褐色粉末老鸛草醇提浸膏粉H組褐色粉末重樓+黃芪水提浸膏粉I組褐色粉末重樓+黃芪醇提藥渣水提浸膏粉J組褐色粉末3、動物模型的建立與實驗方法1)動物分組各藥效實驗根據(jù)受試藥物分組，預實驗設定為對照組(0.5%CMC-Na)、陽性藥組(芬必得、阿司匹林)、受試藥物組(以下簡稱為代號)若干。新工藝玄七通痹膠囊藥效驗證實驗設定根據(jù)受試藥物分為4組，分別為對照組(0.5%CMC-Na)、陽性藥組(阿司匹林)、受試藥物組(新老工藝玄七通痹膠囊)。動物所用藥物臨床等效劑量以mg/kg-mg/n^轉換因子換算，結合實際，人、小鼠體重分別以50kg、20g計，按體表面積折算成小鼠等效用量為2.45g/kg，老工藝為1.49g/kg。2)小鼠醋酸扭體法鎮(zhèn)痛試驗取健康昆明小鼠，按體重隨機分組，根據(jù)玄七通痹膠囊臨床生藥用量，分別按組給予陽性藥(布洛芬，給藥量:100mg/kg)、空白(0.5。/。CMC-Na,給藥量為0.3ml/10g)、各味藥材系列提取物、玄七老工藝(給藥量為1.49g/kg)、玄七新工藝(給藥量為2.45g/kg)，每天給藥一次，連續(xù)給藥12天。末次給藥前禁食12小時，然后給藥45min后，腹腔注射0.6%醋酸溶液，0.2mL/只，觀察小鼠15min內的扭體次數(shù)。3)角叉菜膠致大鼠足趾腫脹的抑制作用試驗取健康昆明小鼠，按體重隨機分組，根據(jù)玄七通痹膠囊臨床生藥用量，分別按組給予陽性藥(阿司匹林，給藥量200mg/kg)、空白(CMC-Na給藥量2.5g/kg)、各味藥材系列提取物、玄七老工藝(給藥量為1.49g/kg)、玄七新工藝(給藥量為2.45g/kg)，每天給藥一次，連續(xù)給藥12夭。末次給藥前禁食12小時，給藥1小時后，在小鼠的右后足皮下注射ie/。角叉菜膠0.03mL，4h后分別剪下左右足稱重，計算腫脹度。然后致炎足充分剪碎，于2mL生理鹽水中浸泡12小時，3000r/min離心5min，取上清液以備測定前列腺素2(PGE2)含量(PGE2含量以吸光度表示，并換算為單位足重的含量)。腫脹度=(致炎足重-正常足重>100%+正常足重4)二甲苯致小鼠耳腫脹的抑制作用試驗取健康昆明小鼠，按體重隨機分組，連續(xù)灌胃給藥6天，禁食12小時過夜，第7天再給藥一次，l小時后，在小鼠右耳的前后兩面均勻涂布二甲苯0.05mL，左耳不做任何處理。各組分別于致炎后60分鐘脫頸椎處死小鼠，剪下雙耳用7mm直徑打孔器分別在雙耳相同部位打下圓耳片,電子天平稱質量。計算腫脹度及腫脹抑制率，比較給藥組與對照組差異情況，進行t檢驗。計算公式為腫脹度(mg)-右耳片質量(mg)-左耳片質量(mg)腫脹抑制率=(對照組腫脹度-給藥組腫脹度)+對照組腫脹度乂100%。5)毛細管法測定小鼠凝血時間試驗取健康昆明小鼠，按體重隨機分組，根據(jù)玄七通痹膠囊臨床生藥用量，分別按組給予陽性藥(阿司匹林，給藥量36mg/kg)、空白(0.5。/。CMC-Na，給藥量為0.3mL/10g)、各味藥材系列提取物、玄七老工藝(給藥量為1.49g/kg)、玄七新工藝(給藥量為2.45g/kg)，每天給藥一次，連續(xù)給藥12天。末次給藥前禁食12小時，然后給藥后50分鐘眼球取血，用毛細管法測量凝血時間。組別(生認i).纖注*:P<0.05**:P<0.01;與對照組比較(t檢驗)。試驗結果表明，A組、C組、F組的角叉菜膠足趾腫脹的抑制作用與對照組比較有極顯著差異(PO.Ol)，D組、G組、H組、I組、J組的角叉菜膠足趾腫脹的抑制作用與對184、預試驗結果及分析1)各味藥材系列提取物的醋酸扭體鎮(zhèn)痛試驗實驗結果試驗結果以15min內扭體反應次數(shù)表示，統(tǒng)計學檢驗采用組間t檢驗，結果見表ll,表11各味藥材系列提取物醋酸扭體鎮(zhèn)痛試驗實驗結果組別(生藥量g/kg)動物數(shù)扭，_反應次數(shù)1±SZ)對照組.2.23737.45.45.37.37.6.6101010101010101010101021.0±7.84.7±1.3**2.8±0.9**12.3±3.4**11.3±2.2**4.7±1.6**10.8±4.7**10.5±2.1**19.5±5.28.8±2.0**7.6±2.5**注**:PO.01;與對照組比較(t檢驗)。實驗結果表明，H組小鼠扭體反應數(shù)與對照組比較無顯著差異(P>0.05);其余各組均與對照組比較有極顯著差異(PO.Ol)。2)各味藥材系列提取物的角叉菜膠致小鼠足趾腫脹的抑制作用試驗結果試驗結果以腫脹度(％)表示，統(tǒng)計學檢驗采用組間t檢驗，結果見表12。表12各味藥材系列提取物的角叉菜膠致小鼠足趾腫脹的抑制作用試驗結果對照組1021.9±8.33.2109.3±2.6**3.21016.5±6.50.371012.4±3.4**0,371014.4±3.0*0.451017.9±4,50.451012.3±3.2**0.371015.1±4.9*0.371015.5±4.4*0.61015.8±3.3*0.61015.1±4.9*33TOOOOoooo組組組組組組組組組組ABCDEFGHIJ組組組組組組組組組組ABCDEFGHIJ照組比較有顯著差異(P<0.05),B組和E組的角叉菜膠足趾腫脹的抑制作用與對照組比較無顯著差異。3)各味藥材系列提取物的二甲苯致小鼠耳腫脹的抑制作用試驗試驗結果以腫脹度(％)表示，統(tǒng)計學檢驗采用組間t檢驗，結果見表13。表13各味藥材系列提取物對二甲苯致小鼠耳腫脹的抑制作用試驗結果組別:^ff^(生藥量g/kg)義士S"對照組10122.8±46.03.21072.2±32.2*3.210142.0±33.60.371061.4±29.9**0.371057.0±22.5**0.451096.6±38.20.451026.3土12.6**0.371072.6±32.5*0.3710103.2±33.30.61035.1±13.8**0.61050.6+19.3**注*:P<0.05，**:P<0.01;與對照組比較(t檢驗)結果表明，C組、D組、F組、I組和J組的耳腫脹度與對照組比較有極顯著差異(PO.Ol)，A組和G組的耳腫脹度與對照組比較有顯著差異(P<0.05)，B組、E組和H組的耳腫脹度與對照組比較無顯著差異(P>0.05)。4)各味藥材系列提取物的毛細管法測定小鼠凝血時間試驗結果實驗結果以凝血時間表示，結果見表14。表14各味藥材系列提取物毛細管法測定小鼠凝血時間試驗結果組別對照組給藥量(生藥量g/kg)動物數(shù)凝血時間s1048.8±20.43.21092.0±26.1**3.21077.2±29.9*0.371056.1±22.10.371047.2土17.10.451069.7±32.00.451074.5±32.2*0.3710109.7±35.9**0.371067.3±28.50.610145.0±38.9**0.61098.2±43.6**注*:PO.05,**:PO.01;與對照組比較(t檢驗)組組組組組組組組組組ABCDEFGHIJ組組組組組組組組組組ABCDEFGHIJ結果表明，A組、G組、I組和J組的凝血時間與對照組比較有極顯著差異(PO.Ol)，B組和F組的凝血時間與對照組比較有顯著差異(PO.05),而其余各組的凝血時間與對照組比較無顯著差異(P>0.05)。5、新工藝玄七通痹膠囊藥效驗證實驗結果1)醋酸扭體法小鼠鎮(zhèn)痛試驗試驗結果以15min內扭體反應次數(shù)為指標，統(tǒng)計學采用組間t檢驗，結果見表15。表15新工藝玄七通痹膠囊醋酸扭體法小鼠鎮(zhèn)痛試驗實驗結果<table>tableseeoriginaldocumentpage20</column></row><table>注:**:PO.01,與對照組比較(t檢驗)，&&:PO.01,與老工藝比較(t檢驗)結果表明，布洛芬、新工藝、老工藝的小鼠扭體反應數(shù)與對照組比較均有顯著差異(PO.Ol)，新工藝與老工藝比較，新工藝能顯著抑制小鼠的扭體反應次數(shù)(PO.Ol)。說明玄七通痹膠囊新工藝的鎮(zhèn)痛效果要明顯優(yōu)于老工藝。2)角叉菜膠致小鼠足趾腫脹的抑制作用試驗結果實驗結果以腫脹度表示，結果見表16。表16玄七通痹膠囊對角叉菜膠致小鼠足趾腫脹的抑制作用實驗結果<table>tableseeoriginaldocumentpage20</column></row><table>注**:PO.01;與對照組比較(t檢驗);&:PO.05，與老工藝比較(t檢驗)結果表明，阿司匹林、新工藝、老工藝的角叉菜膠足趾腫脹的抑制作用與對照組比較有極顯著差異(P<0.01)，新工藝對角叉菜膠足趾腫脹的抑制作用與老工藝比較有顯著差異(P<0.05)。說明玄七通痹膠囊新工藝的抗炎效果要優(yōu)于老工藝。3)毛細管法測定小鼠凝血時間試驗結果實驗結果以凝血時間表示，結果見表17。表17.玄七通痹膠囊毛細管法測定小鼠凝血時間試驗結果藥物給藥劑量(生藥量g/kg)動物數(shù)凝血時間(s)T土SD凝血時間延長率(％)對照組—1071.3±25.2一阿司匹林組0.03610141.1±44.7**97.9新工藝組4.8710150.0±18.0**&&110.4老工藝組4.8710117.1±27.4**64.2注**:PO.Ol，與對照組比較(t檢驗)；&&:PO.05，與老工藝比較(t檢驗)藥效篩選實驗結果表明，螞蟻超臨界油的P-環(huán)糊精包合物、重樓黃芪醇提物及其藥渣的水提物、三七超細粉、老鸛草水提物在抗炎、鎮(zhèn)痛、抗凝血方面均有顯著效果；而螞蟻超臨界后的藥渣在鎮(zhèn)痛、抗凝血方面具有顯著效果千年健油p-環(huán)糊精包合物及其水提物在抗炎、鎮(zhèn)痛方面具有明顯效果；三七醇提物有鎮(zhèn)痛作用；老鸛草醇提物在腳叉菜膠致炎試驗上有明顯效果。通過藥效篩選試驗，明確或驗證了螞蟻、千年健、黃芪、重樓、三七、老鸛草的藥用部位及藥理作用，對工藝路線的確定具有指導意義。阿司匹林、新工藝、老工藝的凝血時間與對照組比較有極顯著差異(PO.Ol),新工藝的凝血時間與老工藝比較有極顯著差異(PO.Ol)。說明玄七通痹膠囊新工藝的抗凝血效果要優(yōu)于老工藝。圖1為本發(fā)明治療類風濕性關節(jié)炎的中藥組合物制備工藝流程圖。圖2為螞蟻千年健油的標準曲線。圖3螞蟻千年健油紫外掃描圖譜其中，l為螞蟻千年健油；2為螞蟻千年健超臨界油與3-環(huán)糊精的物理混合物；3為脫包后螞蟻千年健油；4為p-環(huán)糊精。包合物檢査的紫外圖譜表明螞蟻千年健超臨界油、螞蟻千年健超臨界油與e-環(huán)糊精的物理混合物、包合物脫包后的螞蟻千年健油具紫外吸收，環(huán)糊精無紫外吸收，說明螞蟻千年健超臨界萃取物被p-環(huán)糊精包合后形成了包合物。且包合后螞蟻千^健超臨界萃取物的主要成分未發(fā)生變化。圖4牛磺酸的標準曲線。圖5星點設計模型擬合圖-1。從圖中可以看出，氮氣流速對OD值增加的影響不顯著；蒸發(fā)室溫度與氮氣流速的交互作用呈負性相關，也就是說隨著蒸發(fā)室溫度的升高，氮氣流速也降低，總評歸一值OD就會相應的增大，說明試驗中若要升高蒸發(fā)室的溫度，相應地也要降低氮氣的流速。從圖上可以直接讀取的較優(yōu)范圍為B:蒸發(fā)室溫度80。C100。C。圖6星點設計模型擬合圖-2。從圖中可以看出，以谷底蒸發(fā)室溫度90。C為界，當溫度大于9CTC時，隨著溫度的升高，流動相比例的降低，總評歸一值OD就會相應的增大；當溫度小于90'C時，隨著溫度的降低，流動相比例的降低，總評歸一值OD就會相應的增大。從圖上可以直接讀取的較優(yōu)范圍為A:乙腈31.535。圖7星點設計模型擬合圖-3。從圖中可以看出，當流動相乙腈增加到37.5時，OD值開始下降；AC呈負相關。綜合以上分析，再考慮到成本、耗時及儀器損耗等問題，最后預測出的最佳工藝為流動相乙腈-水(33:67)，蒸發(fā)室溫度90'C，氮氣流速1.4SLM。具體實施方式實施例l螞蟻687.5g、黃芪187.5g、三七95g、千年健77.5g、老鸛草77.5g、重樓125g，其特征在于該工藝包括以下步驟.-a、C02超臨界萃取按上述配方將螞蟻和千年健粉成粗粉后置于萃取釜中進行C02超臨界萃取，萃取壓力為24Mpa，萃取釜溫度為60'C，萃取時間為90min,收集螞蟻與千年健C02超臨界萃取的混合萃取物，備用；b、萃取物包合將螞蟻與千年健超臨界萃取的混合萃取物用質量百分比濃度為10%的乙醇溶解，另取螞蟻與千年健超臨界萃取的混合萃取物重量6倍量的e-環(huán)糊精，加入e-環(huán)糊精重量2倍量的水研勻，倒入膠體磨中，緩慢連續(xù)滴加螞蟻與千年健超臨界萃取的混合萃取物溶液，碾磨包合30分鐘，傾出，冷藏靜置36小時，濾過，4CTC真空干燥，即得萃取物包合物；c、醇提將重樓、黃芪、三七加入質量百分比濃度為80%乙醇，用量為重樓、黃芪、三七重量的8倍量，提取2次，每次2h;d、水提醇提后所得藥渣、螞蟻和千年健C02超臨界萃取的萃余物與老鸛草，采用藥渣、萃余物和老鸛草重量的10倍量水提取2次，每次lh;e、混合、干燥、粉碎將重樓、黃芪、三七醇提液濃縮成浸膏后60'C真空干燥、粉碎成120目干粉；水提液濃縮成浸膏后6(TC真空干燥，粉碎成120目千粉，備用；f、制粒將螞蟻千年健混合萃取物包合物、水提物干粉、醇提取物干粉混合后加適量輔料制成顆粒，再填充膠囊。實施例2螞蟻750g、黃芪180g、三七110g、千年健80g、老鸛草80g、重樓120g，其特征在于該工藝包括以下步驟-a、C02超臨界萃取按上述配方將螞蟻和千年健粉成粗粉后置于萃取釜中進行C02超臨界萃取，萃取壓力為36Mpa，萃取釜溫度為4(TC,萃取時間為30min，收集C02超臨界萃取的萃取物，備用；b、萃取物包合.將螞蟻與千年健超臨界萃取的混合萃取物用質量百分比濃度為30%的乙醇溶解，另取螞蟻與千年健超臨界萃取的混合萃取物重量8倍量的e-環(huán)糊精，加入e-環(huán)糊精重量4倍量的水研勻，倒入膠體磨中，緩慢連續(xù)滴加螞蟻與千年健超臨界萃取的混合萃取物溶液，碾磨包合40分鐘，傾出，冷藏靜置24小時，濾過，4(TC真空干燥，即得萃取物包合物；c、醇提將重樓、黃芪、三七加入80%乙醇8倍量提取2次，每次2h;d、水提醇提后所得藥渣、螞蟻和千年健C02超臨界萃取的萃余物與老鸛草采用10倍量水提取2次，每次lh;e、混合、干燥、粉碎將重樓、黃芪、三七醇提液濃縮成浸膏后60'C真空干燥、粉碎成120目千粉；水提液濃縮成浸膏后6(TC真空干燥，粉碎成120目干粉，備用；'f、制粒將螞蟻千年健混合萃取物包合物、水提物干粉、醇提取物干粉混合后加適量輔料，.制成顆粒，再壓片。實施例3螞蟻750g、黃芪I80g、三七I10g、千年健80g、老鸛草80g、重樓120g，其特征在于該工藝包括以下步驟a、C02超臨界萃取按上述配方將螞蟻和千年健粉成粗粉后置于萃取釜中進行C02超臨界萃取，萃取壓力為30Mpa，萃取釜溫度為50'C，萃取時間為60min，收集C02超臨界萃取的萃取物，備用；b、萃取物包合將螞蟻與千年健超臨界萃取的混合萃取物用質量百分比濃度為30%的乙醇溶解，另取螞蟻與千年健超臨界萃取的混合萃取物重量4倍量的e-環(huán)糊精，加入e-環(huán)糊精重量2倍量的水研勻，倒入膠體磨中，緩慢連續(xù)滴加螞蟻與千年健超臨界萃取的混合萃取物溶液，碾磨包合20分鐘，傾出，冷藏靜置24小時，濾過，4(TC真空干燥，即得萃取物包合物；C、醇提將重樓、黃芪、三七加入80%乙醇8倍量提取2次，每次2h;d、水提醇提后所得藥渣與螞蟻和千年健C02超臨界萃取的萃余物、老鸛草采用IO倍量水提取2次，每次lh;e、混合、干燥、粉碎將重樓、黃芪、三七醇提液濃縮成浸膏后6(TC真空干燥、粉碎成120目干粉；水提液濃縮成浸膏后60'C真空干燥，粉碎成120目干粉，備用；f、制粒將螞蟻千年健混合萃取物包合物、水提物干粉、醇提取物干粉混合后，加入適量輔料，制成口服液。權利要求1、一種治療類風濕性關節(jié)炎的中藥組合物的制備工藝，選用螞蟻8-10重量份、黃芪2-3重量份、三七1-2重量份、千年健0.8-1.2重量份、老鸛草0.8-1.2重量份、重樓1-2重量份為原料藥，其特征在于該工藝包括以下步驟a、CO2超臨界萃取將螞蟻和千年健粉成粗粉后置于萃取釜中進行CO2超臨界萃取，萃取壓力為24-36Mpa，萃取溫度為40-60℃，萃取時間為30-90min，收集螞蟻與千年健混合萃取物；b、萃取物包合取螞蟻與千年健混合萃取物，用質量百分比濃度為10-30％的乙醇溶解，另取螞蟻與千年健的混合萃取物重量4-8倍量的β-環(huán)糊精，加入β-環(huán)糊精重量2-4倍量的水研勻，倒入膠體磨中，緩慢連續(xù)滴加螞蟻與千年健混合萃取物溶液，碾磨包合20-40分鐘，傾出，冷藏靜置，濾過，真空干燥，即得混合萃取物的包合物；c、醇提將重樓、黃芪、三七用質量百分比濃度為70-90％的乙醇提取；d、水提醇提后所得藥渣、老鸛草與螞蟻和千年健CO2超臨界萃取的萃余物進行水提；e、混合、干燥、粉碎將上述醇提液濃縮成浸膏后干燥、粉碎成醇提取物干粉，水提液濃縮成浸膏后干燥，粉碎成水提物干粉；將螞蟻千年健混合萃取物包合物、水提物干粉、醇提取物干粉混合，加適量輔料，常規(guī)方法制成所需劑型。2、根據(jù)權利要求1所述的治療類風濕性關節(jié)炎的中藥組合物的制備工藝，選用螞蟻8.5-9.0重量份、黃芪2.0-2.5重量份、三七1.0-L5重量份、千年健1重量份、老鸛草1重量份、重樓1.5-2.0重量份為原料藥。3、根據(jù)權利要求1所述的一種玄七通痹膠囊的制備工藝，其特征在于該工藝具體包括以下步驟a、C02超臨界萃取將螞蟻和千年健粉成粗粉后置于萃取釜中進行C02超臨界萃取，萃取壓力為24Mpa，萃取溫度為60'C，萃取時間為卯min,收集螞蟻與千年健混合萃取物；b、萃取物包合取螞蟻與千年健混合萃取物，用質量百分比濃度為10%的乙醇溶解，另取螞蟻與千年健的混合萃取物重量6倍量的P-環(huán)糊精，加入P-環(huán)糊精重量2倍量的水研勻，倒入膠體磨中，緩慢連續(xù)滴加螞蟻與千年健混合萃取物溶液，碾磨包合30分鐘，傾出，冷藏靜置，濾過，真空千燥，即得混合萃取物的包合物；c、醇提將重樓、黃芪、三七用質量百分比濃度為80%的乙醇8倍量提取2次，每次2h;d、水提醇提后所得藥渣、老鸛草與螞蟻和千年健C02超臨界萃取的萃余物釆用10倍量水提取2次，每次lh;e、混合、干燥、粉碎將上述醇提液濃縮成浸膏后干燥、粉碎成醇提取物干粉，水提液濃縮成浸膏后干燥，粉碎成水提物干粉；將螞蟻千年健混合萃取物包合物、水提物干粉、醇提取物干粉混合，加適量輔料，常規(guī)方法制成所需劑型。全文摘要本發(fā)明公開了一種治療類風濕性關節(jié)炎的中藥組合物的制備工藝，該工藝將螞蟻和千年健采用CO₂超臨界萃取后，所得萃取物采用β-環(huán)糊精制備成萃取物的包合物，將重樓、黃芪、三七加入濃度為70-90％的乙醇提取，醇提后所得藥渣與老鸛草、螞蟻和千年健CO₂超臨界萃取的萃余物水提，將重樓、黃芪、三七醇提液濃縮成浸膏后干燥、粉碎成醇提物干粉；水提液濃縮成浸膏后干燥，粉碎成水提物干粉；將螞蟻千年健混合萃取物的包合物、水提物干粉、醇提取物干粉混合后制成所需制劑。本發(fā)明中藥組合物是治療類風濕性關節(jié)炎的有效制劑，在抗炎、抗凝血、抗鎮(zhèn)痛方面均優(yōu)于原工藝制劑，顯著提高了產(chǎn)品的科技含量和核心競爭力。文檔編號A61K36/896GK101632776SQ20091018453公開日2010年1月27日申請日期2009年8月28日優(yōu)先權日2009年8月28日發(fā)明者付寶慧,徐云輝,濮存海,波王,趙開軍,磊陳申請人:南京中山制藥有限公司