專(zhuān)利名稱：一種用于治療人乳頭瘤病毒感染引起的疾病的噴劑及制備的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，具體地說(shuō)是一種用于治療人乳頭瘤病毒感染引起的疾病的噴劑及制備。
背景技術(shù)：
人用狂犬病純化疫苗(KI)在臨床使用過(guò)程中，發(fā)現(xiàn)其作為一種生物抗原刺激機(jī)體后，可誘發(fā)機(jī)體產(chǎn)生強(qiáng)有力的免疫反應(yīng)，(抗原特異性免疫；非抗原特異性免疫)而宿主的免疫反應(yīng)，對(duì)控制相關(guān)病變具有十分重要的作用。大量的文獻(xiàn)研究資料證明人體自身免疫力低下與癌癥的發(fā)生有著相當(dāng)密切的聯(lián)系，一旦機(jī)體免疫力降低，各種疾病可以乘隙而入。臨床的資料又證明，在腫瘤病毒與人類(lèi)疾病關(guān)系的研究中，只有人乳頭瘤病毒 (humanpapilloma virus,HPV)與人類(lèi)腫瘤的關(guān)系最為明確。1995年WHO和IARC已將HPV 確定為是宮頸癌的病因。HPV主要侵犯人皮膚粘膜的上皮組織，引起皮膚粘膜上皮的良惡性增生，墨西哥醫(yī)學(xué)專(zhuān)家指出，人乳頭狀瘤病毒(HPV)潛伏期很長(zhǎng)，女性感染這種病毒后如果發(fā)現(xiàn)早、診治及時(shí)，可防止病毒誘發(fā)宮頸癌。目前HPV已分離出100多型，根據(jù)誘發(fā)病變性質(zhì)的不同，將 HPV 分為13 種高危型 HPV(16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、68)， 低危型HPV主要包括HPV(6、11、32、40、42、43、54、MM8)。高危型HPV病毒幾乎是所有宮頸癌的元兇，在細(xì)胞學(xué)和分子生物學(xué)方面也獲得了人乳頭狀瘤病毒致癌的有力證據(jù)。大量研究表明，高危型人乳頭瘤病毒(HPV)感染是宮頸癌的主要病因，臨床病理檢查中，宮頸癌患者幾乎100%的有高危型人乳頭瘤病毒(HPV)的感染，高危型HPV(16、18)亞型與腎惡性腫瘤有關(guān)(其中腎乳頭狀癌的HPV(16、18)基因陽(yáng)性率明顯高于腎透明細(xì)胞癌和腎顆粒癌)， 證實(shí)了高危型HPV感染是腎癌的重要致癌原因，有資料證明了食管鱗癌與E6癌基因蛋白的關(guān)系。低危型HPV與某些性病有關(guān)，包括生殖器皰疹、尖銳濕疣以及宮頸糜爛、慢性宮頸炎等，其中HPV6和11是最常見(jiàn)的低危型HPV，90%的生殖道尖銳濕疣與之有關(guān)。目前抑制人乳頭瘤病毒及治療人乳頭瘤病毒感染引起的腫瘤和采用人用狂犬病純化疫苗治療性病的外用劑型及制備方法還尚未見(jiàn)報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種用于治療人乳頭瘤病毒及治療人乳頭瘤病毒感染引起的腫瘤和性病的噴劑及其制備方法，采用本發(fā)明除對(duì)腫瘤具有明顯的治療作用、無(wú)毒副作用外，本發(fā)明噴劑可保存人用狂犬病純化疫苗的生物活性并對(duì)人體沒(méi)有造成任何負(fù)面損傷，使局部用藥成為可能，本發(fā)明所說(shuō)的局部用藥均指的是直接往感染病患處用藥。本發(fā)明技術(shù)方案如下本發(fā)明噴劑的制備方法本發(fā)明的成份為Iml的人用狂犬病純化疫苗，加為0.01g/ml的殼聚糖-醋酸溶液至IOml制成，其中所述0. 005 0. 015g/ml殼聚糖-醋酸為IOg殼聚糖及IOOOml醋酸溶液。
制備人用狂犬病純化疫苗的病毒株為但不限于狂犬病毒PM株、PV株、CTN株或AG
株。 用于治療人乳頭瘤病毒感染引起的疾病的噴劑的制備方法，按如下步驟操作首先，配制殼聚糖_醋酸溶液1)制備0. 3 1. 0%醋酸溶液將冰醋酸3 10體積份加入至1000體積份容量瓶中，加純水至刻度，得到體積百分濃度為0. 3 的醋酸溶液；2)制備殼聚糖-醋酸溶液稱取殼聚糖10 30g加入至IOOOml容量瓶中，加上述的醋酸溶液，完全溶解至刻度，制成0. 01 0. 03g/ml的殼聚糖-醋酸溶液；3)根據(jù)殼聚糖-醋酸溶液的pH值選用體積摩爾濃度為0. lmol/L的氫氧化鈉溶液或0. lmol/L的醋酸溶液調(diào)節(jié)pH至3. 8 5. 0 ；其次，配制疫苗溶液取活性單位為5IU 20IU的人用狂犬病純化疫苗1ml，加殼聚糖-醋酸溶液稀釋至IOml，獲得活性濃度為5IU 20IU/10ml的疫苗溶液，根據(jù)殼聚糖-醋酸溶液的pH值選用體積摩爾濃度為0. lmol/L的氫氧化鈉溶液或0. lmol/L的醋酸溶液調(diào)節(jié)pH至3. 8 5. 0， 優(yōu)選PH值為4. 9 5.0。其中所述人用狂犬病純化疫苗可以為溶液型或凍干型。其中所述冰醋酸采用分析純或化學(xué)純。其中所述純水采用重蒸餾水。本發(fā)明的噴劑用于治療人乳頭瘤病毒感染引起的宮頸癌、人乳頭瘤病毒感染引起的生殖器皰疹或生殖器尖銳濕疣、人乳頭瘤病毒感染引起宮頸糜爛、人乳頭瘤病毒感染引起的慢性宮頸炎。本發(fā)明的噴劑為外用劑型。本發(fā)明具有如下有益效果1.使用帶有正離子并能在酸性條件下可完全溶解的殼聚糖作為粘附劑，使人用狂犬病純化疫苗完全溶解，并使本發(fā)明的噴劑噴出之后具有好的氣霧性，從而使藥物噴出后均勻覆蓋于病灶粘膜表層，有利于機(jī)體對(duì)藥物的吸收。2.本發(fā)明外用噴劑及制備方法著重對(duì)由HPV感染引起的宮頸癌患者、生殖器皰疹和尖銳濕疣患者、宮頸糜爛、慢性宮頸炎，HPV感染人群進(jìn)行跟蹤治療(Tc亞群檢測(cè)、HPV檢測(cè)及臨床癥狀的改善)，均取得良好的臨床效果。3.采用本發(fā)明主要成分為人用狂犬病純化疫苗，通過(guò)對(duì)人宮頸癌Hela人源性腫瘤細(xì)胞的體外MTT法檢測(cè)實(shí)驗(yàn)證明本發(fā)明主要成份人用狂犬病純化疫苗對(duì)腫瘤細(xì)胞的直接殺傷作用。通過(guò)裸鼠移植性腫瘤抑瘤實(shí)驗(yàn)得知主要成份人用狂犬病純化疫苗局部注射對(duì)裸鼠異種移植瘤人宮頸癌Hela腫瘤生長(zhǎng)顯示明顯抑制作用。本發(fā)明在對(duì)機(jī)體免疫調(diào)節(jié)作用中使小鼠單核細(xì)胞、腹腔吞噬細(xì)胞的吞噬能力增強(qiáng)，說(shuō)明對(duì)網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)吞噬功能具有明顯的激活、增強(qiáng)作用。所以本發(fā)明發(fā)現(xiàn)人用狂犬病疫苗可誘發(fā)機(jī)體產(chǎn)生強(qiáng)有力的免疫反應(yīng)，HPV感染者經(jīng)系統(tǒng)治療后(未經(jīng)其它治療途徑)，HPV檢測(cè)陽(yáng)轉(zhuǎn)陰。4.本發(fā)明的毒理實(shí)驗(yàn)證明該外用劑和皮膚重復(fù)接觸中致敏反應(yīng)強(qiáng)度為弱致敏性。小鼠以及家兔急性毒性實(shí)驗(yàn)未見(jiàn)明顯毒性反應(yīng)。小鼠微核實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明小鼠肌肉注射給藥< 375U+25mg/kg劑量下未誘發(fā)骨髓嗜多染紅細(xì)胞微核率的增高。
5.在本發(fā)明陰道刺激試驗(yàn)中，通過(guò)則定家兔或大鼠連續(xù)陰道給藥后未見(jiàn)明顯血管充血和水腫等異常改變。多次給藥刺激試驗(yàn)也證明本發(fā)明外用劑對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物陰道黏膜無(wú)明顯刺激反應(yīng)。 6.在對(duì)家兔連續(xù)給藥12周長(zhǎng)期毒性試驗(yàn)中，確定出無(wú)毒性反應(yīng)的用藥劑量，為臨床人用劑量提供了參考。


圖1本發(fā)明疫苗溶液對(duì)人宮頸癌Hela細(xì)胞周期分布的影響。
具體實(shí)施例方式下面通過(guò)實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步說(shuō)明，本發(fā)明并不受這些實(shí)施例的限制。制劑實(shí)施例1本發(fā)明噴劑成分按體積比計(jì)，成份為Iml的人用狂犬病純化疫苗，加質(zhì)量體積濃度為0. 01g/ml殼聚糖-醋酸溶液稀釋至10ml。具體配備方法如下1.配制殼聚糖_醋酸溶液(pH = 3. 2)(1)制備0. 3%的醋酸溶液將冰醋酸3ml (分析純)加入至IOOOml容量瓶中，力口純水至刻度，這里的純水采用重蒸餾水，得到體積百分濃度為0. 3%的醋酸溶液；(2)制備質(zhì)量體積濃度為0. 01g/ml的殼聚糖-醋酸溶液稱取殼聚糖IOg加入至上述的醋酸溶液完全溶解至1000ml，溶液不允許出現(xiàn)不溶性顆?；虿蝗芪铮瞥少|(zhì)量體積濃度為0. 01g/ml的殼聚糖-醋酸溶液；(3)根據(jù)殼聚糖_醋酸溶液的PH值選用體積摩爾濃度為0. lmol/L的氫氧化鈉溶液或者體積摩爾濃度為0. lmol/L的醋酸溶液調(diào)節(jié)pH值至3. 2。2.疫苗溶液配制取活性單位為5IU的溶液型人用狂犬病純化疫苗Iml (本實(shí)施例采用兩支，每支 0. 5ml, 2. 5IU)溶液加入至IOml量瓶中，人用狂犬病純化疫苗制備病毒株采用狂犬病毒PM 株，加殼聚糖-醋酸溶液稀釋至10ml。獲得活性濃度為5IU/10ml的疫苗溶液。根據(jù)疫苗溶液的PH值選用體積摩爾濃度為0. lmol/L的氫氧化鈉溶液或體積摩爾濃度為0. lmol/L 的醋酸溶液調(diào)節(jié)PH值至3. 2，溶液具有澄明度。說(shuō)明pH值保持在3. 8到5. 0之間，如pH值超過(guò)5. 0或低于3. 8殼聚糖與醋酸脫離，溶液變成不透明狀，成份發(fā)生了改變，在使用時(shí)，噴出的溶液將不呈現(xiàn)霧狀。制劑實(shí)施例2與實(shí)施例1不同之處在于1.配制殼聚糖-醋酸溶液(pH = 4. 9)制備0.4%的醋酸溶液采用的冰醋酸4ml為(化學(xué)純)；用體積摩爾濃度為 0. lmol/L的氫氧化鈉溶液或者體積摩爾濃度為0. lmol/L的醋酸溶液調(diào)節(jié)pH值至4. 9。制備質(zhì)量體積濃度為0. 02g/ml的殼聚糖-醋酸溶液稱取殼聚糖20g加入至上述的醋酸溶液完全溶解至1000ml，溶液不允許出現(xiàn)不溶性顆?；虿蝗芪铮瞥少|(zhì)量體積濃度為0. 02g/ml的殼聚糖-醋酸溶液。2.疫苗溶液配制 取活性單位為15IU的凍干型人用狂犬病純化疫苗Iml (本實(shí)施例采用兩支，每支 0. 5ml，7.5IU)加入至IOml量瓶中，人用狂犬病純化疫苗的制備病毒株為狂犬病毒PV株。 加殼聚糖-醋酸溶液稀釋至10ml。獲得活性濃度為15IU/10ml的疫苗溶液。用體積摩爾濃度為0. lmol/L的氫氧化鈉溶液或體積摩爾濃度為0. lmol/L的醋酸溶液調(diào)節(jié)pH值至4. 9， 溶液具有澄明度。制劑實(shí)施例3與實(shí)施例1不同之處在于1.配制殼聚糖_醋酸溶液(pH = 5. 0)制備1. 0%醋酸溶液采用的冰醋酸IOml為化學(xué)純；用體積摩爾濃度為0. lmol/L 的氫氧化鈉溶液或體積摩爾濃度為0. lmol/L的醋酸溶液調(diào)節(jié)pH至5. 0。制備質(zhì)量體積濃度為0. 03g/ml的殼聚糖-醋酸溶液稱取殼聚糖30g加入至上述的醋酸溶液完全溶解至1000ml，溶液不允許出現(xiàn)不溶性顆?；虿蝗芪?，制成質(zhì)量體積濃度為0. 03g/ml的殼聚糖-醋酸溶液。2.疫苗溶液配制取活性單位為IOIU的溶液型人用狂犬病純化疫苗Iml (本實(shí)施例采用兩支，每支 0. 5ml, 5IU)溶液加入至IOml量瓶中，人用狂犬病純化疫苗的制備病毒株為狂犬病毒CTN 株。加殼聚糖-醋酸溶液稀釋至10ml。獲得濃度為lOIU/lOml的疫苗溶液。用體積摩爾濃度為0. lmol/L的氫氧化鈉溶液或體積摩爾濃度為0. lmol/L的醋酸溶液調(diào)節(jié)pH值至5. 0， 溶液具有澄明度。制劑實(shí)施例4與實(shí)施例1不同之處在于1.配制殼聚糖_醋酸溶液(pH = 4. 2)制備0. 4%醋酸溶液采用的冰醋酸4ml為化學(xué)純；用體積摩爾濃度為0. lmol/L的氫氧化鈉溶液或體積摩爾濃度為0. lmol/L的醋酸溶液調(diào)節(jié)pH至4. 2。2.疫苗溶液配制取活性單位為20IU的溶液型人用狂犬病純化疫苗Iml (本實(shí)施例采用兩支，每支 0. 5ml,10IU)溶液加入至IOml量瓶中，其中人用狂犬病純化疫苗的制備病毒株為狂犬病毒 AG株。加殼聚糖-醋酸溶液稀釋至10ml。獲得濃度為20IU/10ml的疫苗溶液。用體積摩爾濃度為0. lmol/L的氫氧化鈉溶液或體積摩爾濃度為0. lmol/L的醋酸溶液調(diào)節(jié)pH值至 4. 2，溶液具有澄明度。制劑實(shí)施例5與實(shí)施例1不同之處在于1.配制殼聚糖_醋酸溶液(pH = 4. 9)制備0. 4%醋酸溶液采用的冰醋酸4ml為化學(xué)純；用體積摩爾濃度為0. lmol/L的氫氧化鈉溶液或體積摩爾濃度為0. lmol/L的醋酸溶液調(diào)節(jié)pH至4. 9。2.疫苗溶液配制取活性單位15IU的溶液型人用狂犬病純化疫苗Iml (本實(shí)施例采用兩支，每支0. 5ml, 7. 5IU)溶液加入至IOml量瓶中，人用狂犬病純化疫苗的制備病毒株為狂犬病毒PM 株。加殼聚糖-醋酸溶液稀釋至10ml。獲得濃度為15IU/10ml的疫苗溶液。用體積摩爾濃度為0. lmol/L的氫氧化鈉溶液或體積摩爾濃度為0. lmol/L的醋酸溶液調(diào)節(jié)pH值至4. 9， 溶液具有澄明度。病情治療案例一孫某某 病理診斷宮頸鱗癌前變，CINII ；經(jīng)宮頸椎切術(shù)后，HPV陽(yáng)性，干擾素針劑注射及干擾素藥膏局部用藥治療2個(gè)月，HPV依然陽(yáng)性。具體臨床用量取制劑實(shí)施例4中活性濃度為20IU/10ml經(jīng)本發(fā)明噴劑局部用藥， 每日4次，一次一噴(140 μ 1)，用藥45天，停藥20天后做HPV檢測(cè)，結(jié)果顯示為陽(yáng)轉(zhuǎn)陰。病情治療案例二 周某某病理診斷宮頸鱗癌，II期B ；術(shù)后化療兩個(gè)周期，HPV檢測(cè)為陽(yáng)性。具體臨床用量取制劑實(shí)施例5中活性濃度為15IU/10ml的本發(fā)明噴劑外用，每日 4次，一次一噴(140 μ 1)，20天為一個(gè)療程，共兩個(gè)療程，停藥20天后做HPV檢測(cè)，結(jié)果顯示為陽(yáng)轉(zhuǎn)陰。病情治療案例三安某臨床診斷生殖器皰疹，HPV陽(yáng)性；具體臨床用量取制劑實(shí)施例3中活性濃度為lOIU/lOml的本發(fā)明噴劑外用，每日4次，一次一噴(140 μ 1)，20天為一個(gè)療程，共三個(gè)療程，停藥后皰疹消失，停藥20天后做HPV檢測(cè)，結(jié)果顯示為陽(yáng)轉(zhuǎn)陰。病情治療案例四田某某臨床診斷生殖器尖銳濕疣，HPV陽(yáng)性；具體臨床用量取制劑實(shí)施例4中活性濃度為20IU/10ml的本發(fā)明噴劑外用，每日 6次，一次一噴(140 μ 1)，20天為一個(gè)療程，共四個(gè)療程，停藥后疣體干癟部分脫落，停藥20 天后做HPV檢測(cè)，結(jié)果顯示為陽(yáng)轉(zhuǎn)陰。病情治療案例四許某某臨床診斷宮頸糜爛，HPV陽(yáng)性；具體臨床用量取制劑實(shí)施例1中活性濃度為5IU/10ml的本發(fā)明噴劑外用，每日 6次，一次一噴(140 μ 1)，20天為一個(gè)療程，共四個(gè)療程，停藥后檢查宮頸粘膜恢復(fù)正常，停藥20天后做HPV檢測(cè)，結(jié)果顯示為陽(yáng)轉(zhuǎn)陰。病情治療案例四白某臨床診斷慢性宮頸炎，HPV陽(yáng)性；具體臨床用量取制劑實(shí)施例2中活性濃度為15IU/10ml的本發(fā)明噴劑外用，每日 6次，一次一噴(140 μ 1)，30天為一個(gè)療程，共四個(gè)療程，停藥后炎癥消失，停藥20天后做 HPV檢測(cè)，結(jié)果顯示為陽(yáng)轉(zhuǎn)陰。實(shí)驗(yàn)實(shí)施例本發(fā)明對(duì)腫瘤細(xì)胞的起到直接殺傷的作用通過(guò)如下實(shí)驗(yàn)可以得到進(jìn)一步了解。實(shí)驗(yàn)實(shí)施例1對(duì)人源性腫瘤細(xì)胞的體外MTT法檢測(cè)實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)試劑與藥品
本發(fā)明外用噴劑，根據(jù)實(shí)際需要選用不同的活性濃度。陽(yáng)性對(duì)照藥氟尿嘧啶注射液，批號(hào)050806，為上海旭東海普藥業(yè)有限公司產(chǎn)品。細(xì)胞株 Hela(人宮頸癌細(xì)胞)由中國(guó)醫(yī)科院藥物研究所培養(yǎng)傳代。儀器BI0RAD 550型酶標(biāo)儀實(shí)驗(yàn)方法四氮唑鹽[3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyl-tetrazolium bromide,MTT]還原法。收集生長(zhǎng)良好的腫瘤細(xì)胞，于96孔培養(yǎng)板內(nèi)接種，培養(yǎng)24小時(shí)后加藥。受試樣品培養(yǎng)4天。用550型酶標(biāo)儀在檢測(cè)波長(zhǎng)540nm，參考波長(zhǎng)405nm下測(cè)定個(gè)孔的吸光度(OD) 值。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)經(jīng)處理得到半數(shù)抑制濃度(IC50)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示本發(fā)明所采用的主要成分為人用狂犬病純化疫苗對(duì)HelaIC5ci <0. lIU/ml。表明了本發(fā)明主要成份為人用狂犬病純化疫苗對(duì)人源癌細(xì)胞均有體外增殖抑制作用。實(shí)驗(yàn)實(shí)施例2利用流式細(xì)胞儀對(duì)人宮頸癌Hela細(xì)胞周期分布產(chǎn)生影響的測(cè)試。實(shí)驗(yàn)試劑與藥品本發(fā)明疫苗溶液，根據(jù)實(shí)際需要選用不同的活性濃度。細(xì)胞株采用實(shí)驗(yàn)實(shí)施例中的Hela細(xì)胞。結(jié)果提示人用狂犬病疫苗對(duì)人宮頸癌Hela細(xì)胞周期分布產(chǎn)生影響，人用狂犬病純化疫苗可使人宮頸癌細(xì)胞周期阻滯于G2/M期，提示人用狂犬病純化疫苗對(duì)腫瘤增殖抑制作用與誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞周期阻滯有關(guān)，參見(jiàn)圖1。藥物可通過(guò)誘導(dǎo)G2/M期周期阻滯抑制腫瘤細(xì)胞增殖(圖譜的第二個(gè)峰為周期阻滯抑制峰)。實(shí)驗(yàn)實(shí)施例3本發(fā)明疫苗溶液對(duì)人宮頸癌Hela裸鼠異種移植瘤生長(zhǎng)抑制作用。受試藥物制劑實(shí)施例1中疫苗溶液，活性單位為5IU/ml。實(shí)驗(yàn)材料1.裸鼠，北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司提供，合格證號(hào)SCXK (京)2007-0001。2.人宮頸癌細(xì)胞株Hela，自體外培養(yǎng)細(xì)胞接種于裸鼠成瘤。發(fā)明人傳代保存。3.飼養(yǎng)小鼠顆粒料，由沈陽(yáng)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物顆粒飼料廠提供。4.對(duì)照藥阿霉素批號(hào)060303B，提供單位浙江海正藥業(yè)股份有限公司，用生理藥水稀釋0. lmg/ml備用。實(shí)驗(yàn)方法選擇腫瘤生長(zhǎng)良好的荷瘤動(dòng)物，頸椎脫白處死。無(wú)菌條件下取出瘤塊，用手術(shù)刀切割成直徑2-3mm的瘤塊，套管針接種于裸鼠腋部皮下。7天后可見(jiàn)腫瘤生長(zhǎng)。用游標(biāo)卡尺測(cè)量腫瘤長(zhǎng)、寬徑，按瘤體積大小分層分組。每組7只動(dòng)物。設(shè)陰性對(duì)照組(不給藥)，本發(fā)明疫苗溶液0. 2ml腫瘤局部給藥1組，本發(fā)明疫苗溶液0. Iml腫瘤局部給藥加0. Iml肌肉注射給藥1組，本發(fā)明疫苗溶液0. lml.O. 2ml,0. 4ml肌肉注射給藥各1組。阿霉素5mg/ kg腹腔注射給藥作為陽(yáng)性對(duì)照。自分組當(dāng)日開(kāi)始給藥，每日1次，給藥20天。給藥后，每周2 3次對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物腫瘤的長(zhǎng)、寬徑及體重進(jìn)行測(cè)量記錄，觀察動(dòng)物腫瘤生長(zhǎng)及一般情況。20天之后將動(dòng)物處死后剝離腫瘤，稱瘤重，計(jì)算藥物對(duì)腫瘤生長(zhǎng)抑制率。計(jì)算腫瘤體積 (TV)及相對(duì)腫瘤體積(RTV)，比較各組動(dòng)物腫瘤重量、腫瘤體積、相對(duì)腫瘤體積(RTV)等指標(biāo)的統(tǒng)計(jì)學(xué)差別(見(jiàn)表1與表2)。解組織肉眼可見(jiàn)腫瘤周?chē)p度水腫，瘤組織塊體積小，表面有破潰或結(jié)痂。剝離腫瘤見(jiàn)腫瘤壁薄，內(nèi)容物為黃綠色豆渣樣。肌肉給藥改局部注射組的腫瘤則可見(jiàn)腫瘤包膜薄，瘤組織整體泛黃色，瘤組織質(zhì)軟，無(wú)張力。結(jié)論在實(shí)驗(yàn)選用的劑量范圍內(nèi)，本發(fā)明所采用的主要成份人用狂犬病純化疫苗局部給藥和局部肌肉注射給藥對(duì)裸鼠異種移植瘤人宮頸癌Hela腫瘤生長(zhǎng)顯示明顯抑制作用。表1本發(fā)明疫苗溶液對(duì)人宮頸癌Hela裸鼠異種移植瘤體重抑制作用
權(quán)利要求
1.一種用于治療人乳頭瘤病毒感染引起的疾病的噴劑，其特征在于成份為Irnl的人用狂犬病純化疫苗，加0. 01 0. 03g/ml的殼聚糖-醋酸溶液稀釋至IOml而制成。
2.按權(quán)利要求1所述的噴劑，其特征在于所述人用狂犬病純化疫苗的制備病毒株為但不限于狂犬病毒PM株、PV株、CTN株或AG株。
3.一種用于治療人乳頭瘤病毒感染引起的疾病的噴劑的制備方法，其特征在于按如下步驟操作首先，配制殼聚糖-醋酸溶液1)制備0.3 1. 0%醋酸溶液將冰醋酸3 10體積份加入至1000體積份容量瓶中， 加純水至刻度，得到體積百分濃度為0. 3 1. 0%的醋酸溶液；2)制備殼聚糖_醋酸溶液稱取殼聚糖10 30g加入至IOOOml容量瓶中，加上述的醋酸溶液，完全溶解至刻度，制成質(zhì)量體積濃度為0. 01 0. 03g/ml的殼聚糖-醋酸溶液；3)根據(jù)殼聚糖-醋酸溶液的pH值選用體積摩爾濃度為0.lmol/L的氫氧化鈉溶液或 0. lmol/L的醋酸溶液調(diào)節(jié)pH值至3. 8 5. 0 ；其次，配制疫苗溶液取活性單位為5IU 20IU的溶液型人用狂犬病純化疫苗或凍干型人用狂犬病純化疫苗1ml，加上述殼聚糖-醋酸溶液稀釋至10ml，獲得活性濃度為5IU 20IU/10ml的疫苗溶液，根據(jù)疫苗溶液的PH值選用體積摩爾濃度為0. lmol/L的氫氧化鈉溶液或0. lmol/L的醋酸溶液調(diào)節(jié)PH值至3. 8 5. 0，優(yōu)選pH值為4. 9 5. 0。
4.按權(quán)利要求3所述制備方法，其特征在于其中所述冰醋酸采用分析純或化學(xué)純。
5.按權(quán)利要求3所述制備方法，其特征在于其中所述純水采用重蒸餾水。
6.按權(quán)利要求1 2中任一項(xiàng)所述的噴劑，其特征在于所述的噴劑所治療的疾病為人乳頭瘤病毒感染引起的宮頸癌。
7.按權(quán)利要求1 2中任一項(xiàng)所述的噴劑，其特征在于所述的噴劑所治療的疾病為人乳頭瘤病毒感染引起的生殖器皰疹或生殖器尖銳濕疣。
8.按權(quán)利要求1 2中任一項(xiàng)所述的噴劑，其特征在于所述的噴劑所治療的疾病為人乳頭瘤病毒感染引起的宮頸糜爛。
9.按權(quán)利要求1 2中任一項(xiàng)所述的噴劑，其特征在于所述的噴劑所治療的疾病為人乳頭瘤病毒感染引起的慢性宮頸炎。
10.按權(quán)利要求1 2中任一項(xiàng)所述的噴劑，其特征在于所述的噴劑為外用劑型。
全文摘要
本發(fā)明涉及醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，具體地說(shuō)是一種治療人乳頭瘤病毒感染引起的疾病的噴劑及制備方法。按體積比計(jì)，其噴劑成份為1ml的人用狂犬病純化疫苗，9ml的制成質(zhì)量體積濃度為0.01～0.03g/ml殼聚糖-醋酸溶液；其中所述殼聚糖-醋酸溶液為10～30g殼聚糖加醋酸溶液完全溶解至1000ml。其制備先通過(guò)制備0.3～1.0％醋酸溶液再制備殼聚糖-醋酸溶液；然后取活性含量5IU～20IU的人用狂犬病疫苗溶液1體積份加入至10體積份量瓶中，加殼聚糖-醋酸溶液稀釋配制疫苗溶液。本發(fā)明著重對(duì)由HPV感染引起的宮頸癌患者、HPV感染人群進(jìn)行跟蹤治療(Tc亞群檢測(cè)、HPV檢測(cè)及臨床癥狀的改善)以及HPV感染引起的性病、宮頸糜爛、慢性宮頸炎，均取得良好的臨床效果。
文檔編號(hào)A61K39/205GK102166353SQ201010114710
公開(kāi)日2011年8月31日 申請(qǐng)日期2010年2月26日 優(yōu)先權(quán)日2010年2月26日
發(fā)明者孫介光, 孫雪然 申請(qǐng)人:孫介光, 孫雪然