專利名稱：取代的苯并二氫吡喃衍生物及其抗腫瘤用途的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及抗增殖與促凋亡化合物。更具體的，本發(fā)明涉及基于取代的苯并二氫 吡喃的化合物及衍生物，及其作為細胞抗增殖，促凋亡及免疫調節(jié)的用途。
背景技術：
抗癌治療中最大的挑戰(zhàn)在于所述治療劑的選擇性，有效的抗癌藥物必須對惡性細 胞有高度的選擇性，同時對正常細胞無有害作用。不幸的是，迄今為止，已知大多數(shù)抗癌藥， 尤其是化學治療劑家簇的抗癌藥，具有高毒性，這導致患者體內所不希望的副作用，以及悲 哀的是這種副作用通常如此嚴重，以至于患者無法忍受這種副作用，引起患者一般健康狀 況的惡化，或者消極的影響患者的生活質量，開發(fā)更具選擇性和無毒性的治療劑已成為尋 求新的抗癌治療的新趨勢。由于微量營養(yǎng)素代表對正常細胞和組織具有有益作用的天然化合物，所有人們將 巨大的希望賦予將其作為治療劑。這些微量營養(yǎng)素之一是維生素E的酸性酯。目前國內外 研究很熱門的半合成維生素E衍生物酯之一是維生素E琥珀酸酯，它是維生素E酯類抗腫 瘤活性較好的酯之一，據(jù)報道是無毒的。細胞增殖與細胞凋亡的生物學是極其復雜的，涉及多種胞內信號傳導途徑和多種 相互作用的基因產物，癌癥細胞可顯示多種細胞增殖正常調控的缺陷，從而使它們的數(shù)量 增加。另外，癌癥細胞顯示與通過多步過程除去異常細胞有關的機制的缺陷，因此，失控的 細胞增殖和對引起死亡的信號途徑的抑制聯(lián)合起來，使癌癥細胞同時具有生長和存活的優(yōu) 勢。細胞數(shù)量是否增加由負作用與正作用的生長調節(jié)基因產物的表達平衡，以及是否 存在功能性細胞死亡信號傳遞途徑?jīng)Q定。負作用的生長調節(jié)基因能封阻在細胞循環(huán)中的細 胞，正作用生長調節(jié)基因刺激細胞循環(huán)前進。和凋亡有關的基因可以是促凋亡或抗凋亡的， 兩者之間的動態(tài)平衡決定一個細胞是生存還是凋亡。大多數(shù)癌癥，不論他們是雄性專一的，如前列腺或睪丸癌，或雌性專一的，如乳腺 癌、卵巢癌或宮頸癌，或他們相等的影響雄性或雌性，如肝癌、肺癌和皮膚癌，隨時間產生越 來越多的基因損傷和后隨事件，并最終變得高度轉移性并難以治療。已證明，手術摘除局部 癌癥僅在癌癥未擴散超過原發(fā)病變時是有效的，一旦癌癥已擴散到其他組織和器官時，手 術程序必須補充其他更專一性的程序，來根除患病的或惡性的細胞。大部分常用治療患病 的或惡性的細胞補充程序，如化療或生物照射，不能局限于腫瘤細胞，并且雖然它們具有對 惡性細胞有較大的破壞作用，還是常常在一定程序上影響正常細胞。已有生育酚、生育三烯酚和維生素E的一些衍生物作為促凋亡藥劑和DNA合成抑 制劑。結構上，維生素E是由苯并二氫吡喃醇頭部和烷基側鏈構成。針對維生素E及其衍 生物的生物學作用而言，維生素E琥珀酸酯以其特有的抗腫瘤功效和低毒性的特點引起研 究者廣泛的關注。體外研究發(fā)現(xiàn)，a-維生素E琥珀酸酯可抑制多種腫瘤細胞的生長，其中 包括人單核細胞、人胃癌細胞SGC-7901、人乳腺癌細胞、人肝癌HepG2細胞等。動物實驗還
4證實維生素E琥珀酸酯可抑制B (a)P誘導的小鼠前胃腫瘤的生長；此外，a_維生素E琥 珀酸酯對裸鼠體內植入的人乳腺癌細胞、黑色素瘤細胞等的生長和轉移均有抑制作用。腫 瘤的化學治療劑大多是通過細胞毒作用殺死腫瘤細胞的，但同時對機體正常組織細胞也有 殺傷作用，因而其抗腫瘤作用的特異性差、毒副作用較大。作為腫瘤化學預防/治療劑，維 生素E琥珀酸酯的主要特點是特異性地對腫瘤細胞生長抑制，而對正常細胞和組織卻沒有 毒性作用。對蛋白激酶C的研究已證實，惡性腫瘤細胞無限增殖及惡性浸潤的特性通常與 PKC的激活有關。PKC亞基具有獨特的結構特性，其N末端為富含半胱氨酸的鋅指結構域， 易被氧化而激活PKC，促進細胞增殖和腫瘤形成；而C末端為具有反應活性的半胱氨酸，是 抗氧化劑作用的靶點，這些半胱氨酸的修飾可導致PKC的活性降低。PKC的激活需靠其自 身的磷酸化，而PKC的失活原因之一是依賴蛋白磷酸化酶2A的去磷酸化作用。a-維生素E 琥珀酸酯分子中色滿環(huán)結構域一方面可與PKC的C末端半胱氨酸作用使PKC活性降低，另 一方面還可通過激活PP2A使PKC去磷酸化而失活。生育三烯酚屬于類異戊二烯植物化學族，此類異戊二化合物有一個共同的甲羥戊 酸前體，含有一個親脂鏈，并通過異戊二烯代謝途徑代謝。目前，已證實類異戊二烯類化合 物通過抑制HMGCoA還原酶活性，表現(xiàn)出抑癌特性。流行病學調查顯示植物性食物的攝入量 與癌癥的發(fā)生有強負相關。生育三烯酚廣泛存在于來源于單子葉植物的谷類、植物油等農 產品中。和其他的植物化學劑一樣，提供藥理學劑量有明顯抗腫瘤、抗突變活性。多數(shù)研究 結果表明，生育三烯酚較生育酚抗腫瘤活性強，兩者的基本化學結構相同，即長的葉綠基側 鏈連接在色原烷醇環(huán)1號位上。而二者的主要區(qū)別在于葉綠基側鏈是否含有不飽和鍵；其 次是它們各自結合在色原烷醇環(huán)上的甲基數(shù)目。因此推測生育三烯酚與生育酚側鏈是否含 有不飽和鍵和/或甲基數(shù)目是決定生育酚與生育三烯酚抗增殖、促進細胞程序性死亡的關 鍵因素?，F(xiàn)有技術的缺陷在于，缺乏在各種各樣的病理生理狀況下抑制不希望的或失控的 細胞增殖，而對正常細胞沒有或幾乎沒有影響的有效辦法，本發(fā)明填補本領域這一長期存 在的需要。

發(fā)明內容
本發(fā)明的目的在于彌補現(xiàn)有技術中存在的不足之處，而提供一種新的取代的苯并 二氫吡喃化合物及衍生物或其藥用鹽或其水合物或溶劑物，所要解決的技術問題是運用 3D構效關系和苯并二氫吡喃類化合的ADMET性質來改善和創(chuàng)造出比目前維生素E琥珀酸酯 體內不穩(wěn)定及到達腫瘤部位不理想的一系列新化合物。本發(fā)明的目的是通過以下措施實現(xiàn)的申請人:根據(jù)本一系列化合物的3D、4D、5D、6D構效關系的基礎知識，結合計算機對 化合物的ADMET性質模擬而對苯并二氫吡喃的母核進行一系列結構變化，通過大量辛苦的 創(chuàng)造性勞動與多次試驗結果得到由以下通式(I)表示的一種取代的苯并二氫吡喃化合物 及衍生物或其藥用鹽或其水合物或溶劑物 其中R選自氫原子或C1 C6的直鏈或支鏈烷烴、甲氧?；惐蚣籽貂；趸?異丙基、甲氧?；惗』蚣籽貂；趸惗』⒓籽貂；囟』蚣籽貂；h(huán)丁基 ’η為 1 5，表示為單鍵或雙鍵。優(yōu)選R為氫原子或甲氧?；惐蚣籽貂；惗』菫? 3。本發(fā)明的另一目的是提供實施本發(fā)明的最佳形式化合物I1 :(+)-2，5，7，8_四甲基-(2R-(4R，8R，12-三甲基十三烷基)苯并二氫吡 喃-6-基氧基)_乙基磷酸酯；I2 :(+)-2，5，7，8_四甲基-(2R-(4R，8R，12-三甲基十三烷基)苯并二氫吡 喃-6-基氧基)_丙基磷酸酯；I3 :(+)-2，5，7，8-四甲基-(2R-(4，8，12-三甲基-3，，7，，11，-三烯十三烷基)苯
并二氫吡喃-6-基氧基)-乙基磷酸酯；I4 :(+)-2，5，7，8_ 四甲基-(2R-(4，8，12-三甲基-3，，7，，11，-三烯十三烷基)苯
并二氫吡喃-6-基氧基)-丙基磷酸酯；I5 :(+)-2，5，7，8_四甲基-(2R-(4R，8R，12-三甲基十三烷基)苯并二氫吡 喃-6-基氧基)-乙基磷酸[雙_ (異丙氧基酰氧基甲氧基)]酯；I6 :(+)-2，5，7，8_四甲基-(2R-(4R，8R，12-三甲基十三烷基)苯并二氫吡 喃-6-基氧基)-丙基磷酸[雙_ (異丙氧基酰氧基甲氧基)]酯；I7 :(+)-2，5，7，8-四甲基-(2R_(4，8，12-三甲基 _3，，7，，11，-三烯十三烷基)苯 并二氫吡喃-6-基氧基)-乙基磷酸[雙_ (異丙氧基酰氧基甲氧基)]酯；I8 :(+)-2，5，7，8_ 四甲基-(2R-(4，8，12-三甲基-3，，7，，11，-三烯十三烷基)苯 并二氫吡喃-6-基氧基)_丙基磷酸[雙_(異丙氧基酰氧基甲氧基)]酯I9 :(+)-2，5，7，8_四甲基-(2R-(4R，8R，12-三甲基十三烷基)苯并二氫吡 喃-6-基氧基)-乙基磷酸[雙_ (2-乙基丁酰氧基甲氧基)]酯；I10 :(+)-2，5，7，8_四甲基-(2R-(4R，8R，12-三甲基十三烷基)苯并二氫吡 喃-6-基氧基)-丙基磷酸[雙_ (2-乙基丁酰氧基甲氧基)]酯；I11 :(+)-2，5，7，8-四甲基-(2R_(4，8，12-三甲基-3，，7，，11，-三烯十三烷基)苯 并二氫吡喃-6-基氧基)_乙基磷酸[雙-(2-乙基丁酰氧基甲氧基)]酯；I12 :(+)-2，5，7，8-四甲基-(2R_(4，8，12-三甲基 _3，，7，，11，-三烯十三烷基)苯 并二氫吡喃-6-基氧基)-丙基磷酸[雙_ (2-乙基丁酰氧基甲氧基)]酯；本發(fā)明的又一目的是提供實施本發(fā)明的最佳形式化合物中化合物I1 I4的可藥 用鹽為鈉鹽或鉀鹽或氨丁三醇鹽或叔丁胺鹽或葡甲胺鹽或乙醇胺鹽或乙二胺鹽或哌嗪鹽 或賴氨酸鹽或精氨酸鹽，作為鹽存在時，上述化合物無論形成哪種鹽都包含在本發(fā)明范圍
6之內。以上述通式(I)表示的本發(fā)明一種取代的苯并二氫吡喃化合物及衍生物及其鹽， 特別是最佳形式化合物I1 I12，可以以水合物或溶劑物的形式存在，無論哪一種都包含在 本發(fā)明范圍之內。作為獲得的溶劑物的溶劑，有甲醇、乙醇、異丙醇、丙酮、乙酸乙酯、異丙醚寸。本發(fā)明提供生育酚、生育三烯酚衍生物及其同系物，利用醚鍵將良好的藥代團連 接于生育酚、生育三烯酚化合物中，可產生新的內用抗癌化合物。本發(fā)明藥代動力學設計的化合物具有提高的治療指數(shù)，并且是癌細胞生長的強大 抑制劑，即它們具有高的抗腫瘤活性而具有極小的副作用?？捎帽景l(fā)明的這些化合物和方法治療腫瘤病，腫瘤病的代表為卵巢癌、喉癌、子宮 內膜癌、膀胱癌、肺癌、胃癌、乳腺癌、睪丸癌、前列腺癌、神經(jīng)膠質瘤、纖維肉瘤、骨髓瘤、白 血病、結腸癌、腎癌、胰臟癌和鱗狀細胞癌?？赏ㄟ^口腔、外用、眼內、鼻內、胃腸道外、靜脈內、肌肉內、皮下和任何其它合適途 徑施用本發(fā)明的化合物及組合物，施用的劑量可視年齡、疾病的臨床階段和程度，或個體的 遺傳因素、部位、重量、同時治療的種類，病理或惡性狀況的性質而定。可以膠囊、片劑、溶 液、混懸液、軟膠囊等用于口服形式，溶液、混懸液與脂肪乳劑等無菌液體形式注射給藥， 優(yōu)選用任何惰性載體與合適的增溶劑，如鹽水或磷酸鹽緩沖液，或其它化合物中使用的本 發(fā)明具有合適溶解性的載體，如乙醇、丙酮或DMSO。特別考慮，可用新的本發(fā)明基于苯并二氫吡喃的化合物及其衍生物制備藥物組合 物。就此，藥物組合物含有本發(fā)明新穎化合物和藥學上可接受的載體。本領域一般技術人 員不需要試驗即可確定施用本發(fā)明的化合物或衍生物的劑量和途徑。以用上述通式(I)表示的本發(fā)明一種取代的苯并二氫吡喃化合物及衍生物，可以 以水合物或溶劑物的形式存在，無論哪一種都包含在本發(fā)明范圍之內。作為獲得的溶劑物 的溶劑，有甲醇、乙醇、丙醇、異丙醇、正丁醇等。


通過參考在附圖中說明的本發(fā)明化合物的一般制造方法，其中獲得、簡要總結在 詳細的、更特定的本發(fā)明描述可被理解為本發(fā)明的上述特征、優(yōu)點和目的，這附圖構成了本 說明書的一部分。然而還注意，

了本發(fā)明的優(yōu)選例，因此不被看著是限制本發(fā)明。圖1實施本發(fā)明化合物的一般制造方法。
本發(fā)明的再一目的是提供實施本發(fā)明化合物的一般制造方法(圖1)上述的制造方法，只表示制造本發(fā)明的通式((I)化合物的方法之一例。本發(fā)明 化合物的制造方法并不僅限于這些方法，在本說明書的實施例中，由于更具體地說明了本 發(fā)明化合物的制造方法，所以，本領域的人員，根據(jù)上述說明和具體實施例的說明，根據(jù)需 要，對此加以適當?shù)男薷?，就能制造出包括在上述通?I)的化合物或它們的鹽。本發(fā)明的優(yōu)點本發(fā)明針對設計和有效使用能專一性靶向癌細胞，并下調生長刺激信號、或上調 生長抑制信號、或下調存活信號和/或上調死亡信號的新穎化合物，更具體地，本發(fā)明創(chuàng)造 了激活生長抑制因子、觸發(fā)死亡信號傳遞途徑并抑制DNA合成的新穎化合物，并確定了其
-^ ΚδΟΟΜΗζ,αχη/ΓΙ^,ρρπι)δ 0. 91 0. 96(12扎雙重峰，23、24、26、27號氫)；δ 1. 38 1. 45 (3Η，多重峰，25、 28、29 號氫)；δ 1. 38 1. 67(18Η，多重峰，11、12、13、15、16、17、19、20、22 號氫)；δ 1. 69 1. 72 (3Η，多重峰，21 號氫)；δ 1. 86 (2Η，三重峰，8 號氫)；δ 2. 11,2. 24,2. 36 (9Η，單峰，30、 32、33 號氫)；δ2· 78 (2Η，三重峰，7 號氫)；δ 4. 62 4. 8I (4Η，三重峰，34、35 號氫)；特征。本發(fā)明具有重要的產業(yè)化應用開發(fā)價值，是對人類研究抗腫瘤藥物的重大貢獻本 發(fā)明提供的制備方法原料安全易得、生產所需設備普通、生產方法簡單易行，具有良好的市 場前景。
具體實施例方式下面的實施例可以對本發(fā)明進行進一步的描述，然而，這些實施例不應作為對本 發(fā)明范圍的限制。實施例1 :(+)-2，5，7，8_四甲基-(2R_(4R，8R，12-三甲基十三烷基)苯并二氫口比 喃-6-基氧基)_乙基磷酸酯(化合物II)的制備在500ml三口圓底燒瓶中，安裝電動攪拌器、溫度計，向其中加入43g天然維生素E 和250mlDMF，攪拌下，加入Ilg細粉狀的氫氧化鈉固體，在10°C 15°C下攪拌20min，通過 恒壓加料漏斗滴入18g 2-溴乙醇，保持溫度10°C 15°C劇烈攪拌15小時，然后用IN的鹽 酸溶液調節(jié)PH值8 9，并用400ml X 2的乙醚萃取，合并萃取液，飽和氯化鈉溶液IOOml X 2 洗滌，無水硫酸鈉干燥，過濾除去干燥劑，濃縮至干，得淺黃色固體35g，收率75 %，直接用 于下一步反應。於250ml三口圓底燒瓶，安裝電動攪拌器、溫度計，向其中加入60ml吡啶，冷卻至 0°C 5°C，滴入25ml三氯氧磷，攪拌，然后滴入34g上步所得的產物溶于20ml吡啶的溶液， 滴入完畢，保持室溫攪拌6小時，薄層鑒別反應完全，然后滴入3. 5N的鹽酸溶液70ml，攪拌 15min，靜置，抽濾，固體用水洗滌至中性，用80%乙醇重結晶，真空50°C干燥，得類白色固 體 32g，收率 81. 3%。HPLC 含量 98. 3%。
MS :m/z (M+) 554. 39 (100% )實施例2 :(+)-2，5，7，8-四甲基-(2R_(4R，8R，12-三甲基十三烷基)苯并二氫吡 喃-6-基氧基)-丙基磷酸酯(化合物I2)的制備用實施例1相同的方法，使用3-溴丙醇代替2-溴乙醇，合成了目標化合物。
1H-WR(SOC)MHz, CDC1/TMS，ppm)δ 0. 89 — 0. 97 (12Η,雙重峰，23、24、38、39 號氫)；δ 1. 42 1. 56 (3Η,多重峰，25、 40、41 號氫)；δ 1. 39 1. 62(18Η，多重峰，11、12、13、15、16、17、19、20、22 號氫)；δ 1. 69 — 1. 72 (3Η，多重峰，37 號氫)；δ 1. 91 (2Η，三重峰，8 號氫)；δ 2. 21,2. 30,2. 39 (9Η，單峰，42、 43、44 號氫)；δ 2.83 (2Η，三重峰，7 號氫)；δ 4. 62 4. 81 (6Η，三重峰，34、35、45 號氫)；MS :m/z (M+) 568. 42 (100% )實施例3 (+) -2，5，7，8-四甲基-(2R- (4，8，12-三甲基 _3，，7，，11，-三烯十三烷 基)苯并二氫吡喃-6-基氧基)_乙基磷酸酯(化合物I3)的制備用實施例1相同的方法，使用生育三烯酚代替維生素E，合成了目標化合物。
1H-WR(SOi)MHz, CDC1/TMS，ppm)δ 1. 79 1. 86(12Η,雙重峰，23、24、26、27 號氫)；δ 5. 51 5. 56 (3Η,多重峰， 13、17、22 號氫)；δ 1. 98 2· 31(12Η,多重峰，11、12、15、16、19、20 號氫)；δ 2. 34 (3Η,單 峰，21 號氫)；δ 2. 01 (2Η，三重峰，8 號氫)；δ 2. 11,2. 24,2. 30 (9Η，單峰，32、33、30 號氫)； δ 2· % (2Η，三重峰，7號氫)；6 4.45 4.62(4扎三重峰，34、35號氫)；MS :m/z (M+) 548. 76 (100% )實施例4 :(+)-2，5，7，8-四甲基-(2R_(4，8，12-三甲基-3，，7，，11，-三烯十三烷 基)苯并二氫吡喃-6-基氧基)_丙基磷酸酯(化合物I4)的制備用實施例3相同的方法，使用3-溴丙醇代替2-溴乙醇，合成了目標化合物。
MS :m/z (M+) 562. 40(100% )實施例5 :(+)-2，5，7，8-四甲基-(2R_(4R，8R，12-三甲基十三烷基)苯并二氫吡 喃-6-基氧基)_乙基磷酸酯二鈉鹽(化合物I1)的制備於250ml三口圓底燒瓶，安裝電動攪拌器、溫度計，加入IOg化合物I1和200ml無 水乙醚，攪拌，室溫下，加入3. 5g甲醇鈉，攪拌1小時，過濾，固體用少量乙醚洗滌，真空50°C 干燥即得化合物I1的二鈉鹽?；衔?2、13、I4的二鈉鹽及化合物Ip 12、13、I4的氨丁三醇鹽、賴氨酸鹽、精氨酸 鹽、鉀鹽等如法炮制。實施例6 :(+)-2，5，7，8_四甲基-(2R_(4R，8R，12-三甲基十三烷基)苯并二氫吡
喃-6-基氧基)_乙基磷酸[雙_(異丙氧基酰氧基甲氧基)]酯(化合物I5)的制備 在N2保護下在反應器中加入1-甲基-2-吡咯烷酮(NMP) 200g、上步制備的化合物
三乙胺15g，攪拌30min，然后加入氯甲基_2_丙基碳酸酯30g，攪拌加熱至55 650C，在該溫度下控制不會把反應器物料攪飛濺的情況下，攪拌反應6h。用HPLC跟蹤確認 反應完全后，將混合物用乙酸乙酯150ml稀釋，冷卻至25°C，盡量快速冷卻，并保持反應器 內物料溫度在25°C，在該溫度攪拌約30min。將混合物中固體過濾，濾渣用乙酸乙酯150ml 洗滌，在15 25°C將有機相合并，并用水(150mlX2)提取，分相，合并水相用乙酸乙酯 (150ml X 2)進行逆提取，合并全部有機相，室溫攪拌下用水200ml洗滌(防乳化)，無水硫 酸鈉干燥，過濾除去干燥劑，濾液真空濃縮至干，真空50°C干燥，得淡黃色油狀液體，室溫固 化為固體10. 5g，收率73. l%o HPLC含量98. 0%。 1H-WR(SOi)MHz, CDC1/TMS，ppm)δ 0.93 1.05(12H，雙重峰，側鏈支鏈甲基氫)；δ 1. 38 1. 40 (3Η，多重峰，側鏈 叔碳氫)；δ 1.41 1. 70 (18Η，多重峰，側鏈亞甲基氫)；δ 1. 72 1. 80 (3Η，多重峰，2號 甲基氫)；δ 1.89 (2Η，三重峰，3號亞甲基氫)；δ2. 12、2. 21、2. 30(9Η，單峰，5，7，8號氫)； δ 2. 93 (2Η，三重峰，4號氫)；δ 4. 60 4. 76 (4Η，三重峰，乙基側鏈號氫)；δ 1. 38 (12Η，雙 重峰，異丙基甲基氫)；S 5. 67 5.72 (2Η，多重峰，異丙基叔碳氫)MS :m/z (M+) 786. 52 (100% )實施例7 :(+)-2，5，7，8-四甲基-(2R_(4R，8R，12-三甲基十三烷基)苯并二氫口比 喃-6-基氧基)_丙基磷酸[雙_(異丙氧基酰氧基甲氧基)]酯(化合物I6)的制備參照實施例6的合成法，使用化合物I2代替化合物I1，制得目標化合物。
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實施例8 :(+)-2，5，7，8_ 四甲基 _(2R-(4，8，12-三甲基-3，，7，，11，-三烯十三烷
基)苯并二氫吡喃-6-基氧基)-乙基磷酸[雙-(異丙氧基酰氧基甲氧基)]酯(化合物 I7)的制備參照實施例6的合成法，使用化合物I3代替化合物I1，制得目標化合物。
MS :m/z (M+) 780. 46 (100% )實施例9 (+) -2，5，7，8_ 四甲基-(2R- (4，8，12-三甲基 _3，，7，，11，-三烯十三烷
基)苯并二氫吡喃-6-基氧基)-丙基磷酸[雙-(異丙氧基酰氧基甲氧基)]酯(化合物 I8)的制備參照實施例6的合成法，使用化合物I4代替化合物I1，制得目標化合物。
MS :m/z (M+) 794. 58 (100% )實施例10:(+)-2，5，7，8-四甲基-(21 -(41 ，81 ，12-三甲基十三烷基)苯并二氫吡 喃-6-基氧基)_乙基磷酸[雙-(2-乙基丁酰氧基甲氧基)]酯(化合物I9)的制備參照實施例6的合成法，使用2-乙基丁氯甲酯代替氯甲基-2-丙基碳酸酯，制得
目標化合物。 MS :m/z (M+) 838. 65實施例11 :(+)-2，5，7，8-四甲基-(21 -(41 ，81 ，12-三甲基十三烷基)苯并二氫吡 喃-6-基氧基)_丙基磷酸[雙-(2-乙基丁酰氧基甲氧基)]酯(化合物Iltl)的制備參照實施例10的合成法，使用化合物I2代替化合物I1，制得目標化合物。
MS :m/z (M+) 852. 61實施例12 :(+)-2，5，7，8_ 四甲基-(2R-(4，8，12-三甲基 _3，，7，，11，-三烯十三 烷基)苯并二氫吡喃-6-基氧基)-乙基磷酸[雙-(2-乙基丁酰氧基甲氧基)]酯(化合 物I11)的制備；
參照實施例10的合成法，使用化合物I3代替化合物I1，制得目標化合物。
MS :m/z (M+) 832. 95實施例13 :(+)-2，5，7，8_ 四甲基-(2R-(4，8，12-三甲基 _3，，7，，11，-三烯十三 烷基)苯并二氫吡喃-6-基氧基)-乙基磷酸[雙-(2-乙基丁酰氧基甲氧基)]酯(化合 物I12)的制備；參照實施例10的合成法，使用化合物I4代替化合物I1，制得目標化合物。
MS :m/z (M+) 846. 67生物活性測定1、本研究應用人胃癌SGC-7901細胞驗證了本發(fā)明的各化合物與維生素E琥珀酸 酯對照品抑制其生長的作用，同時.HPLC法檢查DNA瓊脂糖凝膠電泳誘導SGC-7901細胞發(fā) 生凋亡的結果。
所有測試細胞系均采用已建立的標準條件，所有化合物均采用乙醇溶解，然后再 稀釋至0. 5%。①、材料與儀器人胃癌細胞SGC-7901，購自上海市腫瘤研究所；維生素E琥珀酸 酯自制；噻唑藍購自Sigma公司，RPMI-1640培養(yǎng)基、小牛血清購自Gibco公司，高效液相色 譜儀為Waters2690型。②、細胞存活率的檢測(MTT法)將SGC-7901細胞以每孔5000個接種于96孔板中，于5% CO2，培養(yǎng)箱中用1640 培養(yǎng)液常規(guī)培養(yǎng)24h。設對照組和化合物試驗組，將試驗組培養(yǎng)液分別換成含5，10，20ug/ ml的合成化合物應用液的培養(yǎng)液，連續(xù)培養(yǎng)6d。各劑量組每天分別取細胞8孔，加入5mg/ mlMTTO. 02ml，培養(yǎng)4h，吸出培養(yǎng)液，加入0. 2ml 二甲基亞砜(DMSO)，搖動10后，用酶標儀在 570nm波長下測定其吸光度(A)值，并以各處理組細胞每天平均A值與對照組相比，計算存 活率，繪制生長抑制曲線。③、DNA瓊脂糖凝膠電泳將生長至對數(shù)生長期的SGC 7901細胞(至少1 X IO6個)，用空白對照液和5， 10，20 μ g/ml的個合成品應用液連續(xù)培養(yǎng)48h，收集細胞，用PBS洗滌細胞2次，常規(guī)抽提 DNA，進行瓊脂糖凝膠電泳，觀察DNA斷裂后形成的梯形條帶。④、結果
2、確定誘導細胞凋亡的有效濃度(EC5tl μ g/ml)選用癌細胞庫中乳腺癌、HMEC, A-549、骨髓瘤、C-170、T470、HL-60、HT-29這幾個 細胞進行測試，按照已建立的標準，在37°C、5% CO2、補充了胎牛血清的標準培養(yǎng)基中培養(yǎng)， 用胰蛋白酶分離粘著在塑料上的細胞，洗滌，計數(shù)，直接在實驗室中使用。常規(guī)檢查所有細 胞，以確認沒有支原體感染。
結論本發(fā)明的化合物，通過醚鍵結合后的化合物對細胞凋亡的作用是極端有效 的。
權利要求
一種取代的苯并二氫吡喃化合物及衍生物，其特征在于由以下通式(Ⅰ)所示的化合物或其藥用鹽或其水合物或溶劑物其中R選自氫原子或C1～C6的直鏈或支鏈烷烴、甲氧?；惐蚣籽貂；趸惐⒓籽貂；惗』蚣籽貂；趸惗』?、甲氧?；囟』蚣籽貂；h(huán)丁基；n為1～5，表示為單鍵或雙鍵。FSA00000215453700011.tif,FSA00000215453700012.tif
2.根據(jù)權利要求1所述的一種取代的苯并二氫吡喃化合物及衍生物，或其可藥用鹽、 水合物或溶劑化物，其特征在于n為1 3。
3.根據(jù)權利要求或1或2所述的一種取代的苯并二氫吡喃化合物及衍生物，其特征在 于R選自氫原子或甲氧?；惐蚣籽貂；趸惐⒓籽貂；惗』蚣籽貂；?氧基異丁基、甲氧?；囟』蚣籽貂；h(huán)丁基。
4.根據(jù)權利要求1 3所述的一種取代的苯并二氫吡喃化合物及衍生物，其特征在于 R為氫原子時，該化合物所選自的可藥用堿根鹽選自鈉鹽或鉀鹽或氨丁三醇鹽或叔丁胺鹽 或葡甲胺鹽或乙醇胺鹽或乙二胺鹽或哌嗪鹽或賴氨酸鹽或精氨酸鹽。
5.根據(jù)權利要求1 4所述一種取代的苯并二氫吡喃化合物及衍生物其特征在于所 述的化合物優(yōu)選I1:(+)-2，5，7，8_四甲基-(2R-(4R，8R，12-三甲基十三烷基)苯并二氫吡喃_6_基氧 基)-乙基磷酸酯；I2 (+) -2，5，7，8-四甲基-(2R- (4R，8R，12-三甲基十三烷基)苯并二氫吡喃_6_基氧 基)_丙基磷酸酯；I3:(+)-2，5，7，8-四甲基-(2R-(4，8，12-三甲基-3，，7，，11，-三烯十三烷基)苯并二 氫吡喃-6-基氧基)-乙基磷酸酯；I4:(+)-2，5，7，8-四甲基-(2R-(4，8，12-三甲基-3，，7，，11，-三烯十三烷基)苯并二 氫吡喃-6-基氧基)-丙基磷酸酯；I5:(+)-2，5，7，8_四甲基-(2R-(4R，8R，12-三甲基十三烷基)苯并二氫吡喃_6_基氧 基)-乙基磷酸[雙-(異丙氧基酰氧基甲氧基)]酯；I6:(+)-2，5，7，8_四甲基-(2R-(4R，8R，12-三甲基十三烷基)苯并二氫吡喃_6_基氧 基)_丙基磷酸[雙_(異丙氧基酰氧基甲氧基)]酯；I7:(+)-2，5，7，8-四甲基-(2R-(4，8，12-三甲基-3，，7，，11，-三烯十三烷基)苯并二 氫吡喃-6-基氧基)-乙基磷酸[雙_ (異丙氧基酰氧基甲氧基)]酯；I8:(+)-2，5，7，8-四甲基-(2R-(4，8，12-三甲基-3，，7，，11，-三烯十三烷基)苯并二 氫吡喃-6-基氧基)_丙基磷酸[雙_(異丙氧基酰氧基甲氧基)]酯I9:(+)-2，5，7，8_四甲基-(2R-(4R，8R，12-三甲基十三烷基)苯并二氫吡喃_6_基氧基)-乙基磷酸[雙_ (2-乙基丁酰氧基甲氧基)]酯；110 (+) -2，5，7，8-四甲基-(2R- (4R，8R，12-三甲基十三烷基)苯并二氫吡喃_6_基氧 基)“丙基磷酸[雙_ (2-乙基丁酰氧基甲氧基)]酯；111 (+) _2，5，7，8-四甲基-(2R-(4，8，12-三甲基-3，，7，，11，-三烯十三烷基)苯并二 氫吡喃-6-基氧基)_乙基磷酸[雙-(2-乙基丁酰氧基甲氧基)]酯；112 (+) _2，5，7，8-四甲基-(2R- (4，8，12-三甲基-3，，7，，11，-三烯十三烷基)苯并二 氫吡喃-6-基氧基)_丙基磷酸[雙-(2-乙基丁酰氧基甲氧基)]酯；
6.如權利要求1 5所述的一種取代的苯并二氫吡喃化合物及衍生物，其特征在于 所述化合物顯示抗增殖作用，包括凋亡。DNA合成停滯、細胞循環(huán)停滯或細胞分化。
7.如權利要求1 5任一所述的一種取代的苯并二氫吡喃化合物及衍生物，其特征在 于所述的藥物施用選自口腔、外用、眼內、鼻內、胃腸道外、靜脈內、肌肉內或皮下。
8.如權利要求6所述的方法，其特征在于所述增殖疾病中的腫瘤選自卵巢癌、喉癌、 子宮內膜癌、膀胱癌、肺癌、胃癌、乳腺癌、睪丸癌、前列腺癌、神經(jīng)膠質瘤、纖維肉瘤、骨髓 瘤、白血病、結腸癌、腎癌、胰臟癌和鱗狀細胞癌。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種如通式(I)所示的取代的苯并二氫吡喃衍生物，其中R選自氫原子或C1～C6的直鏈或支鏈烷烴、甲氧酰基異丙基或甲氧?；趸惐?、甲氧?；惗』蚣籽貂；趸惗』?、甲氧酰基特丁基或甲氧?；h(huán)丁基；n為1～5，表示為單鍵或雙鍵。本發(fā)明還提供了在細胞中誘導凋亡的方法，包括施用含有該化合物的組合物。本發(fā)明藥代動力學設計的化合物具有提高的治療指數(shù)，并且是癌細胞生長的強大抑制劑，它們具有高的抗腫瘤活性而具有極小的副作用。
文檔編號A61P35/00GK101921294SQ20101024413
公開日2010年12月22日 申請日期2010年7月28日 優(yōu)先權日2010年7月28日
發(fā)明者周亞球, 徐奎 申請人:安徽省華康醫(yī)藥科技開發(fā)有限責任公司