專利名稱：一種治療hbv-gn的中藥有效部位及其制劑的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種用于HBV-GN的中藥有效部位及其制劑的制備方法，屬于中藥制 劑領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
乙型肝炎病毒相關(guān)性腎炎(h印atitis B virus associated glomerulonephritis, HBV-GN)是由乙型肝炎病毒(HBV)誘發(fā)的腎小球腎炎。HBV-GN常見 的病理類型為膜性腎病(MN)、膜增生性腎小球腎炎(MPGN)、IgA腎病(IgAN)及系膜增生性 腎小球腎炎(MsPGN)。GBV-GN的發(fā)病機(jī)制復(fù)雜多變，目前提出的可能的發(fā)病機(jī)制主要有免 疫復(fù)合物引起的損傷、細(xì)胞免疫、病毒對(duì)腎臟的直接作用、自身免疫及遺傳因素等。國(guó)內(nèi)外 學(xué)者認(rèn)為HBV感染的多種病理類型中，最常見的是MN，其次為MPGN、IgAN、MsPGN、局灶階段 性腎小球硬化(FSGS)和硬化性腎炎(SGN)。HBV-GN的臨床表現(xiàn)與相同病理類型的原發(fā)性 腎小球腎炎相似，有鏡下血尿、肉眼血尿、腎病綜合征(NS)、高血壓及肝功能異常，與原發(fā)性 腎小球腎炎不同的是，HBV-GN患者在診斷中血清HBV抗原呈陽(yáng)性并且腎切片中有HBV抗原 或腎組織切片有HBV抗原而血清HBV抗原檢測(cè)陰性。目前治療HBV-GN的西藥主要分為免疫抑制劑類藥物和抗病毒類藥物兩大類，而 以糖皮質(zhì)激素、嗎替麥考酚酯(MMF)、來(lái)氟米特為代表的免疫抑制劑為主要的治療方法，此 類藥物雖然在原發(fā)性及與免疫相關(guān)的繼發(fā)腎臟疾病的治療中起著非常重要的作用，但卻存 在誘導(dǎo)HBV復(fù)制而加重病情的副作用。中醫(yī)將HBV-GN的主要病因歸為濕熱毒邪，“邪之所湊，其氣必虛”，人體正氣不足是 導(dǎo)致該病發(fā)生的根本原因，故本病多呈正虛邪實(shí)，氣虛為本，濕熱郁阻為標(biāo)。研究發(fā)現(xiàn)本病 初起濕熱蘊(yùn)結(jié)于肝，下及于腎；中期濕熱瘀毒互結(jié)；后期則漸至木乘脾土和肝病及腎，導(dǎo)致 肝、脾、腎三臟功能失調(diào)。HBV-GN的中醫(yī)病理特點(diǎn)表現(xiàn)為毒侵、正虛、氣郁、血阻。從中醫(yī)的整體觀念、辨證論治的原則出發(fā)，HBV-GN屬于本虛標(biāo)實(shí)之證，治療的藥物 如果能標(biāo)本兼顧，驅(qū)除濕熱之邪的同時(shí)又能扶助臟器之正氣，則將在治療HBV-GN上實(shí)現(xiàn)重 大的突破。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的之一在于提供一種安全、有效的治療HBV-GN的中藥制劑。本發(fā)明研究人員根據(jù)HBV-GN的病理病變特點(diǎn)，選用了具有清熱解毒、涼血平肝功 效的筋骨草作為研究對(duì)象，通過(guò)藥理藥效試驗(yàn)從中篩選出了具有治療HBV-GN作用的有效 部位，并進(jìn)一步對(duì)該有效部位的制劑工藝進(jìn)行了研究。本發(fā)明中，所用的原料藥為筋骨草。筋骨草(Ajuga decumbens Thimb.)，又名金 瘡小草、白毛夏枯草、苦草等，為唇形科植物。主要分布在秦嶺以南各省，民間主要用于止咳 化痰、清熱、涼血、消腫、解毒、腹瀉、肝炎、疔毒癤腫、外傷出血等。筋骨草性味苦寒，按中醫(yī) 藥理論，苦能燥濕解毒、寒能清熱瀉火，其對(duì)多種細(xì)菌具有抑制功能。研究發(fā)現(xiàn)服用筋骨草
3后，臨床檢測(cè)到白細(xì)胞增加，血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶活力顯著下降，表明筋骨草對(duì)病毒性疾病確有 療效° (Jiangsu New Medical College. Dictionary of Chinese Materia Medica(中藥大 辭典)[Μ]· Shanghai =Shanghai People's Publishing House, 1997)筋骨草中含有多種環(huán) 烯醚萜、黃酮、植物留酮、留酮、二萜等化合物(郭新東，等，筋骨草的化學(xué)成分研究[J]，中 草藥，2005，36 (5) :646-648)。本發(fā)明中治療HBV-GN的有效部位化學(xué)成分主要為筋骨草中的黃酮類和苷類化合 物。體內(nèi)藥效學(xué)研究發(fā)現(xiàn)，筋骨草經(jīng)提取純化獲得的有效部位，具有明顯的降低尿蛋白、保 護(hù)腎功能、保肝、抗炎、降脂活性，進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)該有效部位化學(xué)成分主要為黃酮類和苷類。本發(fā)明治療HBV-GN的藥物，所制成的單元制劑形式為口服給藥制劑，優(yōu)選為片 劑、顆粒劑、膠囊劑、丸劑、酊劑或口服液中的任意一種，更優(yōu)選為膠囊劑。本發(fā)明中，制劑過(guò)程中，除原料藥活性成分外，還含有制藥上可接受的賦形劑。其 中賦形劑為制成各種劑型所需要的賦形劑，填充劑如乳糖、糊精、微晶纖維、淀粉等；崩解 劑如交聯(lián)聚維酮，交聯(lián)羧甲基纖維素鈉、羧甲基淀粉鈉等，粘合劑如淀粉漿、淀粉漿鈉、羥丙 甲纖維素、聚維酮等，表面活性劑如十 二烷基磺酸鈉，潤(rùn)滑劑如硬脂酸鎂、滑石粉、聚乙二醇 等，還可以有助懸劑、助溶劑、矯味劑、防腐劑等，具體選用什么賦形劑搭配，根據(jù)制劑而定， 制成普通的制劑時(shí)，選用何種賦形劑是本領(lǐng)域技術(shù)人員根據(jù)現(xiàn)有技術(shù)就能知道的。本發(fā)明的再一目的在于提供一種制備本發(fā)明所述治療HBV-GN藥物的制備方法， 包括如下步驟取一定量的筋骨草粉碎成粗粉，取一定量的筋骨草，粉碎成粗粉，待用；加 原料藥重量6-12倍的水浸泡30min，再煎煮提取2_4次，每次l_3h，過(guò)濾，合并所有濾液，濾 液減壓濃縮成浸膏；浸膏處理后上大孔樹脂柱，6-12倍量的水沖柱，棄去洗脫液，再用6-12 倍量的20% -60%的乙醇沖柱，收集洗脫液，減壓濃縮即得有效部位。本發(fā)明中，獲取原料藥有效部位的方法還可以為取一定量的筋骨草，粉碎成粗 粉，待用；加原料藥重量6-12倍的20% -60%乙醇回流提取，2-4次，每次l_3h，過(guò)濾，合并 所有濾液，濾液減壓濃縮成浸膏；浸膏處理后上大孔樹脂柱，6-12倍量的水沖柱，棄去洗 脫液，再用6-12倍量的20%-60%的乙醇沖柱，收集洗脫液，減壓濃縮即得有效部位。加入 所需的輔料適量，按照常規(guī)的制劑工藝制成所需的劑型。
具體實(shí)施例方式以下從制備實(shí)施例來(lái)進(jìn)一步說(shuō)明本發(fā)明的制備方法，以下所列舉的實(shí)施例，并不 是為了限制本發(fā)明的具體實(shí)施方式
，本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員，可以很容易根據(jù)本發(fā)明的所 允許的范圍，做出合理的改變替換。實(shí)施例1稱取一定量的筋骨草全草，粉碎成粗粉，待用；加原料藥重量6-12倍的20%-60% 乙醇回流提取，2-4次，每次l_3h，過(guò)濾，合并所有濾液，濾液減壓濃縮成浸膏；浸膏處理后 上大孔樹脂柱，6-12倍量的水沖柱，棄去洗脫液，再用6-12倍量的20% -60%的乙醇沖柱， 收集洗脫液，減壓濃縮即得有效部位，干燥，以1 0.5-2的比例加入淀粉，混合均勻，用乙 醇作為潤(rùn)濕劑制成軟材，過(guò)篩制粒，置烘箱干燥得干燥顆粒，然后灌裝入0. 4g規(guī)格的硬膠 囊中，密封，包裝即得膠囊劑。
實(shí)施例2稱取一定量的筋骨草全草，粉碎成粗粉，待用；加原料藥重量6-12倍的20%-60% 乙醇回流提取，2-4次，每次l_3h，過(guò)濾，合并所有濾液，濾液減壓濃縮成浸膏；浸膏處理后 上大孔樹脂柱，6-12倍量的水沖柱，棄去洗脫液，再用6-12倍量的20% -60%的乙醇沖柱， 收集洗脫液，減壓濃縮即得有效部位，干燥，加入蔗糖粉、淀粉，混合均勻，用乙醇作為潤(rùn)濕 劑制成軟材，過(guò)篩制粒，置烘箱干燥，加入硬脂酸鎂，混勻，整粒，壓成，分裝，即得片劑。以下從藥理實(shí)施例來(lái)進(jìn)一步說(shuō)明本發(fā)明的有益效果，在下列實(shí)施例中，所用的制 劑為實(shí)施例1處方制備得到的膠囊劑，在藥品名稱上我們稱取為JGC。1. JGC對(duì)HBV-GN形態(tài)的影響 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物BALB/c小鼠，體重80 20g，質(zhì)量合格，購(gòu)于北京軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院動(dòng)物 中心。合格證號(hào)SCXK-(軍)2007-004。動(dòng)物模型的制備動(dòng)物自由飲食分籠飼養(yǎng)。觀察1周查尿常規(guī)無(wú)異常后，經(jīng)腹腔注 射加佐劑的含HBV-DNA復(fù)制的人血清0. 2ml/次，每周2次，連續(xù)4周。動(dòng)物隨機(jī)分為3組，每組10只。實(shí)驗(yàn)期間大鼠均自由攝食和飲水。(1).空白對(duì)照組不予處理；(2).模型組灌胃等體積的生理鹽水；(3) ·筋骨草劑量組灌胃0. 02g/kg · d ；實(shí)驗(yàn)方法于注射血清前1周及注射后2、4、6、8周各查尿常規(guī)和4、6、8周查血清 乙肝病毒標(biāo)志物各1次。以反射排尿法取尿.用尿紙條進(jìn)行尿蛋白半定量(+ ^ 0. lg/L， ++彡0. 39g/L，+++彡0. 9/L，++++彡1. Og/L)檢測(cè)。酶標(biāo)法測(cè)定乙肝病毒標(biāo)志物。于第6、 8周末，兩組各處死5只動(dòng)物取腎組織以10%福爾馬林固定，常規(guī)脫水，透明包埋，制2mm厚 切片，染色，光鏡下觀察腎小球和腎小管的改變，用HMIAS圖文分析系統(tǒng)，每片選10個(gè)小球， 計(jì)算總增殖面積(ECM)與腎小球總面積之比。實(shí)驗(yàn)結(jié)果注射加佐劑的含HBV-DNA復(fù)制的人血清后的第1周，模型組部分小鼠 即出現(xiàn)蛋白尿，定性(彡++)；第4周時(shí)10只小鼠均出現(xiàn)尿蛋白，定性在(++ +++)，一直 持續(xù)至笫8周實(shí)驗(yàn)結(jié)束。經(jīng)過(guò)檢驗(yàn)，第4與笫2周、笫6與第4周相比較，均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 (P <0.05)；而正常對(duì)照組小鼠尿蛋白始終呈(一)。酶標(biāo)法檢測(cè)乙肝病毒標(biāo)志物，血清 HBsAg、HBcAg等呈陽(yáng)性。光鏡可見，模型組可見腎小球明顯增大，球內(nèi)細(xì)胞數(shù)增多，系膜區(qū)面積增寬，部分 腎小球毛細(xì)血管腔受壓變狹，腎間質(zhì)有炎性細(xì)胞浸潤(rùn)。筋骨草組腎小球腫脹較輕，腎小球大 小變化較模型組減輕，系膜細(xì)胞輕度增生，部分系膜區(qū)增寬，血管腔有輕度擠壓現(xiàn)象，但毛 細(xì)血管基底膜無(wú)明顯變化，腎小管及腎間質(zhì)無(wú)明顯變化。說(shuō)明筋骨草組腎臟病理?yè)p傷明顯 比模型組輕。2. JGC對(duì)系膜增生性腎炎大鼠肝腎功能的影響實(shí)驗(yàn)動(dòng)物SD大鼠，體重180 200g，質(zhì)量合格，購(gòu)于北京軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院動(dòng)物中 心。合格證號(hào)SCXK-(軍)2007-004。動(dòng)物模型的制備除正常對(duì)照組外，其余各組均腹腔注射戊巴比妥鈉(30mg/kg) 麻醉，常規(guī)消毒后，通過(guò)背側(cè)切除左側(cè)腎臟，休養(yǎng)1周。預(yù)免疫實(shí)驗(yàn)組大鼠足墊皮下注射弗 氏完全佐劑0. Img加3mg小牛血清白蛋白(BSA)，在1周末、2周末時(shí)分別加強(qiáng)1次；3周末
5時(shí)腹腔注射BSA 4次，劑量分別為每只0. 5,1. 0,1. 5,3. Omg，每次間隔Ih ；注射次日晨再加 強(qiáng)1次(2. Omg/只)。免疫預(yù)免疫后每日腹腔注射BSA，從每只Img劑量開始，以每日Img 量增加至5mg為止，繼續(xù)每周加量lmg，至IOmg為止。存活大鼠于造模第5周末進(jìn)行尿蛋白 檢測(cè)，出現(xiàn)明顯蛋白尿者進(jìn)入實(shí)驗(yàn)，于造模第6周開始給藥，每日1次，連續(xù)6周。動(dòng)物隨機(jī)分為4組，每組10只。實(shí)驗(yàn)期間大鼠均自由攝食和飲水。(1).空白對(duì)照組不予處理；(2).模型組灌胃等體積的生理鹽水；(3) ·雷公藤組灌胃0. 018g/kg · d，作陽(yáng)性對(duì)照；(4) ·筋骨草劑量組灌胃1. 08g/kg · d ；實(shí)驗(yàn)方法于末次給藥后將大鼠置清潔代謝籠中，留取24h尿液，用考馬斯亮藍(lán)法 進(jìn)行24h蛋白尿定量檢測(cè)，于次日從心臟取血測(cè)定血肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)、谷氨酸氨基 轉(zhuǎn)移酶(ALT)含量。數(shù)據(jù)處理各組測(cè)定的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以表示，組間差異用t檢驗(yàn)進(jìn)行顯著性分析。表IJGC對(duì)大鼠24h蛋白尿的影響G 土s)
組別劑量(g/kg)尿蛋白正常對(duì)照組-9. 85 ±4. 26模型組-35. 42±9. 63''雷公藤組0. 01816. 21±7. 64·δδ筋骨草劑量組1. 0817. 53±6. 57·δδ與正常對(duì)照組相比*P < 0. 05，< 0. 01 ；與模型組比較，Δ P < 0. 05，ΔΔ P < 0. 01。表2JGC對(duì)大鼠肝腎功能的影響G±s)
組別劑量ALTBUNScr(g/kg)(U/L)(mmol/L)(umol/L)正常對(duì)照組--53. 61 ±10. 329. 56 士 2. 0142. 05 ±12. 36模型組-60. 05 ±13. 0518. 76±3. 25"’65.21±15.81·雷公藤組0. 01885. 64±15. 3Γ'δδ12. 65±2. 83'aa46. 29±10. 23.Δ筋骨草劑量組1.0859. 10±9. 2514. 32±2. 67'δ51.69±8. 02*a 與正常對(duì)照組相比*P < 0. 05，< 0. 01 ；與模型組比較，Δ P < 0. 05，ΔΔ P < 0. 01。 由表1可知，與正常對(duì)照組相比，模型組尿蛋白顯著增高(P < 0. 01)，表明造模成 功。筋骨草組和雷公藤組尿蛋白明顯低于模型組(P < 0.01)。雖然筋骨草組尿蛋白略高于
6雷公藤組，但無(wú)顯著差異(P > 0. 05)。而由表2可知，與正常對(duì)照組相比，模型組BUN、Scr 明顯升高(P <0.05)，而ALT兩者之間無(wú)明顯差異(P >0.05)。與模型組相比，筋骨草組 顯著降低BUN、Scr (P < 0. 05)，與雷公藤組相比無(wú)明顯差異(P > 0. 05)，而ALT明顯低于 雷公藤組(P < 0. 01)。因此，實(shí)驗(yàn)表明，經(jīng)筋骨草治療后的模型大鼠，可顯著降低尿蛋白、血 BUN、Scr，且與雷公藤組相比，均無(wú)顯著差異，說(shuō)明筋骨草有降尿蛋白、保護(hù)腎功能方面的作 用；而筋骨草組較雷公藤組的ALT顯著降低，說(shuō)明筋骨草在治療過(guò)程中無(wú)明顯肝損害作用。3. JGC對(duì)免疫復(fù)合物性腎炎大鼠血脂的影響實(shí)驗(yàn)動(dòng)物SD大鼠，體重180 200g，質(zhì)量合格，購(gòu)于北京軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院動(dòng)物中 心。合格證號(hào)SCXK-(軍)2007-004。動(dòng)物模型的制備預(yù)免疫取離子化的牛血清白蛋白(C-BSA) 1!^，加入0. 5ml PBS 中，與等量的弗氏不完全佐劑混勻成乳白色懸液，在大鼠雙側(cè)腋下，腹股溝作多點(diǎn)皮下注 射。免疫預(yù)免疫1周后，每只大鼠尾靜脈注射C-BSA 2. 5mg (溶于Iml pH 7. 4PBS)，3次/ 周，共3周。動(dòng)物隨機(jī)分為4組，每組10只。實(shí)驗(yàn)期間大鼠均自由攝食和飲水。(1).空白對(duì)照組不予處理；(2).模型組灌胃等體積的生理鹽水；(3) ·雷公藤組灌胃0. 018g/kg · d，作陽(yáng)性對(duì)照；(4) ·筋骨草劑量組灌胃1. 08g/kg · d ；實(shí)驗(yàn)方法在實(shí)驗(yàn)第3，4，8周末將大鼠放人代謝籠中收集24h尿液，以雙縮脲法測(cè) 定尿蛋白含量。于實(shí)驗(yàn)8周末處死大鼠前采血測(cè)定白蛋白、甘油三酯及膽固醇。數(shù)據(jù)處理各組測(cè)定的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以i ±s表示，組間差異用t檢驗(yàn)進(jìn)行顯著性分析。表3大鼠尿蛋白的檢測(cè)結(jié)果G 士s)
權(quán)利要求
一種治療HBV GN的中藥制劑，其特征是由筋骨草為原料藥制成。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的治療HBV-GN的中藥制劑，其特征是由筋骨草原料藥經(jīng)水回流 提取的浸膏制成。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的治療HBV-GN的中藥制劑，其特征是由筋骨草原料藥經(jīng)乙醇回 流提取的浸膏制成。
4.根據(jù)權(quán)利要求2、3所述的治療HBV-GN的中藥制劑，其特征是由2、3提取的浸膏過(guò)大 孔樹脂柱純化富集的活性成分制成。
5.根據(jù)權(quán)利要求1-4中任意一權(quán)利要求所述的治療HBV-GN的中藥制劑，其特征是所述 的制劑的單元給藥形式為口服制劑。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的治療HBV-GN的中藥制劑，其特征是所述的口服制劑為口服片 劑、膠囊劑、顆粒劑、丸劑或口服液中的任意一種。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的治療HBV-GN的中藥制劑，其特征是所述的口服制劑為膠囊劑。
8.一種制備權(quán)利要求1-4中任意一權(quán)利要求所述的治療HBV-GN的中藥制劑活性成 分的方法，其特征是包括如下步驟取一定量的筋骨草，粉碎成粗粉，待用；加原料藥重量 6-12倍的水浸泡30min，再煎煮提取2_4次，每次l_3h，過(guò)濾，合并所有濾液，濾液減壓濃 縮成浸膏；浸膏處理后上大孔樹脂柱，6-12倍量的水沖柱，棄去洗脫液，再用6-12倍量的 20% -60%的乙醇沖柱，收集洗脫液，減壓濃縮即得活性提取物。
9.一種制備權(quán)利要求1-4中任意一權(quán)利要求所述的治療HBV-GN的中藥制劑活性成 分的方法，其特征是包括如下步驟取一定量的筋骨草，粉碎成粗粉，待用；加原料藥重量 6-12倍的20 % -60 %乙醇回流提取，2-4次，每次l_3h，過(guò)濾，合并所有濾液，濾液減壓濃 縮成浸膏；浸膏處理后上大孔樹脂柱，6-12倍量的水沖柱，棄去洗脫液，再用6-12倍量的 20%-60%的乙醇沖柱，收集洗脫液，減壓濃縮即得活性提取物。
10.一種用途權(quán)利要求根據(jù)1-9任一權(quán)利要求所述中藥制劑，是用于治療HBV-GN常見 的病理類型膜性腎病(MN)、膜增生性腎小球腎炎(MPGN)、IgA腎病(IgAN)及系膜增生性腎 小球腎炎(MsPGN)中的用途。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種治療HBV-GN的中藥有效部位及其制劑的制備方法，具體由原料藥筋骨草制成，本發(fā)明處方通過(guò)乙醇回流提取，再通過(guò)大孔樹脂柱純化富集有效部位獲得活性成分，加入制藥上可接受的常規(guī)賦形劑，以常規(guī)的制劑工藝制成所需的口服制劑。本發(fā)明中藥制劑具有降低尿蛋白、保護(hù)腎功能、保肝、抗炎、降脂之功效，對(duì)HBV-GN具有較好的調(diào)理治療作用。
文檔編號(hào)A61K36/53GK101972298SQ20101052118
公開日2011年2月16日 申請(qǐng)日期2010年10月27日 優(yōu)先權(quán)日2010年10月27日
發(fā)明者方鑒, 秦睿, 韓亞南 申請(qǐng)人:大格國(guó)際醫(yī)藥科技(北京)有限公司;方鑒