專利名稱：一種高純度、高增殖力、高細(xì)胞毒活性的cik細(xì)胞的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于體外細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)領(lǐng)域，具體是一種高純度、高增殖力、高細(xì)胞毒活性的CIK細(xì)胞的制備方法。該方法對(duì)患者單個(gè)核細(xì)胞體外培養(yǎng)前采用MiniMACS間接免疫磁珠正向分選的方法去除Treg細(xì)胞，培養(yǎng)過(guò)程中加入Treg細(xì)胞抑制劑IL-21，以抑制Treg細(xì)胞的產(chǎn)生。除常規(guī)加入IFN-γ、⑶3單抗、IL-2外，同時(shí)還加入有絲分裂原(PHA)促淋巴細(xì)胞增殖，加入亞硒酸鈉以提高CIK細(xì)胞的細(xì)胞毒性。獲得的CIK細(xì)胞包括⑶3+⑶56+雙陽(yáng)性、⑶4+、⑶8+的擴(kuò)增倍數(shù)達(dá)到400倍，總比率達(dá)到83% -95% ；同時(shí)去除了⑶4+⑶25+Treg 細(xì)胞。具有更強(qiáng)的抗腫瘤、抗病毒作用。
背景技術(shù)：
過(guò)繼性細(xì)胞免疫治療是指通過(guò)輸注自身或同種特異性、非特異性抗腫瘤免疫效應(yīng)細(xì)胞，直接殺傷腫瘤細(xì)胞或病毒的治療方法。過(guò)繼性細(xì)胞免疫治療已進(jìn)入臨床應(yīng)用，并成為繼手術(shù)、放療、化療后的第四大腫瘤治療方法，特別是過(guò)繼免疫治療中的CIK細(xì)胞治療，因具有細(xì)胞增殖速度快、殺傷活性高、臨床應(yīng)用副作用小等優(yōu)點(diǎn)已廣泛應(yīng)用于臨床。CIK細(xì)胞(Cytokine hduced Killer)最初是指在正常人體外周血中只占
的⑶3+⑶56+T淋巴細(xì)胞。臨床應(yīng)用的CIK細(xì)胞是經(jīng)體外擴(kuò)增的，以⑶3+⑶56+、⑶3+⑶8+、⑶4+ 為主的異質(zhì)性細(xì)胞群，是一種高效的具有廣譜殺瘤活力的免疫效應(yīng)細(xì)胞，也是目前國(guó)際上公認(rèn)的最有效的腫瘤生物治療細(xì)胞之一。臨床上單獨(dú)應(yīng)用體外培養(yǎng)的各類效應(yīng)性T細(xì)胞治療實(shí)體瘤的總體有效率均未超過(guò)30%。其中腫瘤患者存在免疫抑制因素是重要原因。近年來(lái)腫瘤免疫抑制網(wǎng)絡(luò)的重要節(jié)點(diǎn)-CD4+CD25+F0xp3+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(regulatory T cells,Treg)的作用日益受到重視。在荷瘤機(jī)體內(nèi)，Treg細(xì)胞數(shù)量明顯升高。越來(lái)越多的證據(jù)表明，荷瘤機(jī)體內(nèi)Treg細(xì)胞的增加成為導(dǎo)致腫瘤免疫逃逸和限制腫瘤免疫治療療效的重要原因之一。所以對(duì)Treg調(diào)控成為腫瘤免疫治療的重要環(huán)節(jié)。天然Treg是一個(gè)具有免疫調(diào)節(jié)作用的T淋巴細(xì)亞群，約占⑶4+T細(xì)胞的 5% _10%，起著維持機(jī)體自身免疫耐受的作用。而當(dāng)機(jī)體內(nèi)Treg數(shù)量增多或功能增強(qiáng)時(shí)， 機(jī)體就會(huì)處于一種高度免疫耐受的狀態(tài)?，F(xiàn)已證實(shí)，各種腫瘤患者均能檢測(cè)到Treg數(shù)量有增多趨勢(shì)。Treg發(fā)揮免疫抑制功能可能通過(guò)以下途徑①Treg通過(guò)直接的細(xì)胞接觸來(lái)發(fā)揮作用，或通過(guò)分泌IL-10、TGF-β等抑制性細(xì)胞因子來(lái)抑制效應(yīng)細(xì)胞；②抑制效應(yīng)性⑶4+Τ 細(xì)胞、CD8+T細(xì)胞的活化、增殖；③或經(jīng)由穿孔素和顆粒酶B途徑直接殺傷CD4+T細(xì)胞、CD8+T 細(xì)胞；④抑制樹(shù)突狀細(xì)胞(DC)的功能，通過(guò)下調(diào)轉(zhuǎn)錄因子NF-κ B，抑制共刺激分子⑶80、 ⑶86、⑶40以及TNF-α、IL_12的產(chǎn)生；⑤減少CIK或NK細(xì)胞中表達(dá)的NKG2D受體的數(shù)量， 產(chǎn)生的TGF-β抑制NK細(xì)胞的細(xì)胞毒性；⑥抑制T細(xì)胞依賴的B細(xì)胞產(chǎn)生免疫球蛋白；⑦抑制免疫效應(yīng)細(xì)胞向腫瘤局部微環(huán)境聚集。Treg細(xì)胞的抑制作用，既發(fā)生在效應(yīng)細(xì)胞活化的最初啟動(dòng)階段，又發(fā)生在效應(yīng)性細(xì)胞發(fā)揮殺傷腫瘤細(xì)胞作用的最終效應(yīng)階段，Treg細(xì)胞對(duì)效應(yīng)性細(xì)胞增殖、殺瘤能力均有很強(qiáng)的抑制性。Treg在正常人體的外周血單核細(xì)胞(PBMC)中以小于5%的比率存在，但在腫瘤患者中這一比例提高。此外，體外培養(yǎng)CIK細(xì)胞時(shí)所用的IL-2能誘導(dǎo)Treg細(xì)胞增殖，并分泌大量IL-10，由此抑制CIK細(xì)胞增殖、降低其細(xì)胞殺傷能力。因此迫切需要除去培養(yǎng)前的 Treg細(xì)胞、培養(yǎng)過(guò)程中轉(zhuǎn)化的Treg細(xì)胞，以改善CIK細(xì)胞的殺傷能力。免疫磁珠(Immunomagnetic bead, 1MB)技術(shù)是由 John Ugelstar 等于 1979 年提出的一種免疫學(xué)技術(shù)。1MB為包被有單克隆抗體的球型磁性微粒，可特異性地與靶物質(zhì)結(jié)合使之具有磁響應(yīng)性。該技術(shù)被廣泛地應(yīng)用于醫(yī)學(xué)衛(wèi)生領(lǐng)域的許多方面，并由此引發(fā)了生物分離技術(shù)上的一次革命。1MB技術(shù)區(qū)別于流式細(xì)胞技術(shù)的一個(gè)最明顯的優(yōu)勢(shì)在于，它可以保證被分離靶細(xì)胞的形態(tài)和功能完整。免疫磁珠技術(shù)同時(shí)還具有靈敏度高、特異性高、檢測(cè)速度快、重復(fù)性好、操作簡(jiǎn)單和不需要昂貴的儀器設(shè)備等優(yōu)點(diǎn)。用1MB技術(shù)進(jìn)行細(xì)胞分離有兩種方式，一種是直接從細(xì)胞混合液中分離出靶細(xì)胞的方法稱為陽(yáng)性分離；用1MB去除無(wú)關(guān)細(xì)胞使靶細(xì)胞得以純化的方法稱為陰性分離。因此可以利用免疫磁珠將PBMC中的Treg細(xì)胞去除。2003年Rudensky等研究證明Foxp3在T細(xì)胞上特異性表達(dá)，且R)xp3為Treg細(xì)胞發(fā)育所必需，在調(diào)控T細(xì)胞的發(fā)育上起著非常重要的作用。Foxp3是Treg細(xì)胞發(fā)育的一個(gè)重要開(kāi)關(guān)。沒(méi)有1^即3就沒(méi)有Treg細(xì)胞，因此我們可以利用抑制R)xp3的活性，控制CIK 細(xì)胞培養(yǎng)中iTreg細(xì)胞的產(chǎn)生。IL-21是IL-2家族成員，主要由⑶4+T細(xì)胞分泌，在T細(xì)胞、NK細(xì)胞、B細(xì)胞上均發(fā)現(xiàn)其受體。IL-21能促進(jìn)T細(xì)胞、NK細(xì)胞的增殖和功能，以及能促進(jìn)CD8+細(xì)胞抗腫瘤作用。 IL-21可抑制⑶4+CD25+Treg的主要調(diào)節(jié)者轉(zhuǎn)錄因子R)xp3的表達(dá)，減少⑶4+T細(xì)胞分化形成Treg細(xì)胞，從而相應(yīng)地抑制Treg細(xì)胞的產(chǎn)生。因此我們利用免疫磁珠分選技術(shù)在CIK 細(xì)胞培養(yǎng)前去除Treg細(xì)胞，培養(yǎng)過(guò)程中加入IL-21，減少⑶4+T細(xì)胞的分化形成Treg細(xì)胞， 以提高CIK細(xì)胞的免疫治療效果。眾所周知IFN- γ、⑶3單抗、IL-2是刺激CIK的主要細(xì)胞因子，但前已述及IL_2能誘導(dǎo)Treg細(xì)胞增殖，并分泌大量IL-10，由此抑制CIK細(xì)胞增殖、降低其細(xì)胞殺傷能力。我們?cè)贑IK 細(xì)胞制備過(guò)程中也發(fā)現(xiàn)，加入IFN-Y刺激，PBMC會(huì)發(fā)生凋亡，影響了細(xì)胞的擴(kuò)增， 因此IL-2、IFN- γ不宜加入過(guò)多。而PHA對(duì)PBMC的誘導(dǎo)效果和IFN- γ相同，并且具有高效的促增殖作用，可作為T細(xì)胞的強(qiáng)激活劑，促進(jìn)免疫活性細(xì)胞前體向免疫活性細(xì)胞轉(zhuǎn)化。 因此我們推薦用PHA替代部分IFN- y。CIK細(xì)胞的毒性需要提高，亞硒酸鈉價(jià)格低廉，能提高CIK細(xì)胞的毒性，因此我們推薦在CIK細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)加入亞硒酸鈉。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明提供一種高純度、高增殖力、高細(xì)胞毒活性的CIK細(xì)胞的制備方法。解決現(xiàn)有方法制備的CIK細(xì)胞存在純度低、增殖力低、細(xì)胞毒活性低的缺點(diǎn)。本發(fā)明的技術(shù)方案是采集并分離患者外周血單個(gè)核細(xì)胞，先經(jīng)Mini MACS分選去除⑶4+CD25+Treg細(xì)胞，得到⑶3+、⑶4+、⑶8+的T細(xì)胞。將得到的細(xì)胞置于含有PHA、IFN- γ的培養(yǎng)液中，使懸浮液中的PHA濃度為100ng/ml,37°C,5% CO2的培養(yǎng)箱中孵育24h后，移至經(jīng)CD3單抗(1 μ g/ml) 包被的細(xì)胞培養(yǎng)瓶中，加入 IFN-y (1000U/ml)，48h 后加入 IL-2 (500U/ml)、IL-21 (lOOng/ml)，4天后補(bǔ)充含有亞硒酸鈉(0. 005mg/L)培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)7_14天，即可得到高純度、高增殖力、高細(xì)胞毒活性的CIK細(xì)胞。具體是(I)Ficoll密度梯度法分離患者抗凝血得到單個(gè)核細(xì)胞；(2)經(jīng)Mini MACS高強(qiáng)度磁珠分離柱(德國(guó)MACS公司)分離，除去CD4+CD25+Treg 細(xì)胞，獲得CD3+、CD4+、CD8.的T細(xì)胞；(3)含10%自身血漿的培養(yǎng)基重懸上述獲得的細(xì)胞，經(jīng)PHA(100ng/ml)活化，孵育 24h后，移至經(jīng)CD3單抗(1 μ g/ml)包被的細(xì)胞培養(yǎng)瓶中，加入IFN-γ (1000U/ml)；(4) 48h 后加 IL-2 (500U/ml)、IL-21 (100ng/ml)；(5) 4天后補(bǔ)充含有亞硒酸鈉(0. 005mg/L)的培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)7_14天，即可得到高純度、高增殖力、高細(xì)胞毒活性的CIK細(xì)胞。本發(fā)明所述的培養(yǎng)基為GT-551人淋巴細(xì)胞培養(yǎng)基或RPMI1640培養(yǎng)基，添加10% 自身血漿?；颊咄庵苎獑蝹€(gè)核細(xì)胞是采用Ficoll密度梯度離心法分離收集。所述的CD3+、 CD4+、CD8+的細(xì)胞是采用Mini MACS間接免疫磁珠負(fù)向分選方法去除Treg細(xì)胞后獲得的CIK 前期細(xì)胞。所述的IFN- γ濃度為1000U/ml，CD3單抗為1 μ g/ml ,IL-2為500U/ml、IL_21為 lOOng/ml，亞硒酸鈉為0. 005mg/L，依據(jù)單個(gè)核細(xì)胞的濃度不同，細(xì)胞繼續(xù)培養(yǎng)時(shí)間約7_14 天收集細(xì)胞。本發(fā)明的制備方法培養(yǎng)前使用磁珠分選去除Treg細(xì)胞，培養(yǎng)中加入IL-21抑制 iTreg細(xì)胞轉(zhuǎn)化。同時(shí)加入PHA以促進(jìn)CIK細(xì)胞增殖，加入亞硒酸鈉提高了 CIK細(xì)胞毒作用， 獲得的CIK細(xì)胞具有更佳的腫瘤治療效果。上述方法所得的CIK細(xì)胞，包括⑶3+CD56+雙陽(yáng)性、⑶4+、⑶8+的細(xì)胞總比率占 83% -95% ；同時(shí)去除了 CD4+CD25+Treg 細(xì)胞。上述方法所制得的CIK細(xì)胞，其能用于治療各種腫瘤、治療感染及其他免疫相關(guān)疾病的藥物中。本發(fā)明的有益效果是提高了體外擴(kuò)增的CIK細(xì)胞的數(shù)量、活性和純度，使CIK抗腫瘤作用增強(qiáng)。
具體實(shí)施例方式下面通過(guò)實(shí)施例具體描述本發(fā)明，但本發(fā)明并不受實(shí)施例的限制。下面實(shí)施例中未注明具體條件的實(shí)驗(yàn)方法，為遵照常規(guī)方法和廠家提供的操作說(shuō)明執(zhí)行。實(shí)施例1 :CIK細(xì)胞的制備1、外周血單個(gè)核細(xì)胞(PBMC)的制備用血細(xì)胞分離機(jī)無(wú)菌條件下采集患者抗凝血，1500rpm/min離心10分鐘吸取上層血漿，56°C滅活30分鐘后離心備用，用生理鹽水對(duì)倍稀釋血細(xì)胞沉淀，比重為1. 077的人淋巴細(xì)胞分離液與稀釋血按1 1. 5的比例加入離心管中，2000rpm/min離心15分鐘，小心抽取白細(xì)胞層，用生理鹽水清洗兩次，低速離心后得到PBMC。2、Mini MACS 去除 CD4+CD25+Treg 細(xì)胞取PBMC細(xì)胞懸液調(diào)整到適宜的細(xì)胞濃度，加入PE-Iabeled AntiHuman CD25，4°C 孵育30min后取出，以MACS專用PBS離心洗滌3次，再加入Anti-PE磁珠，同樣置4°C孵育 30min，過(guò)MACS柱，MACS柱內(nèi)為陽(yáng)性分選所得到的⑶4+⑶25+Treg細(xì)胞，洗脫下來(lái)的為去除Treg細(xì)胞所得到的⑶3+、⑶4+、⑶8+的CIK前期細(xì)胞。將得到的CIK前期細(xì)胞，置于含有 PHA, IFN-Y的培養(yǎng)液中，使懸浮液中的PHA濃度為lOOng/ml，37°C、5% CO2的培養(yǎng)箱中孵育24h后，移至經(jīng)⑶3單抗(lyg/ml)包被的細(xì)胞培養(yǎng)瓶中，加入IFN-γ濃度為1000U/ml， 4 后加入IL-2 (500U/ml)，同時(shí)加入IL-21 (lOOng/ml)，抑制培養(yǎng)過(guò)程中Treg細(xì)胞的產(chǎn)生。 4天后補(bǔ)充含有亞硒酸鈉(0. 005mg/L)培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)7_14天，即可得到高純度、高增殖力、高細(xì)胞毒活性的CIK細(xì)胞。實(shí)施例2 =CIK細(xì)胞的性質(zhì)1. CIK細(xì)胞的形態(tài)學(xué)、細(xì)胞活力及免疫表型檢測(cè)加入PHA、INF_ γ后，大部分細(xì)胞仍呈懸浮狀態(tài)；3天后細(xì)胞體積增大，細(xì)胞逐漸聚集成團(tuán)，細(xì)胞透亮，胞質(zhì)豐富；第7天開(kāi)始，細(xì)胞開(kāi)始大量增殖，細(xì)胞形態(tài)多樣，細(xì)胞團(tuán)增多； 取培養(yǎng)10天的細(xì)胞100 μ 1，加入100 μ 1 0. 4%胎盤藍(lán)染色液，活細(xì)胞不被染色，死細(xì)胞被染成藍(lán)色。本發(fā)明制備的細(xì)胞活力大于90%。第14天可見(jiàn)少量死亡細(xì)胞。細(xì)胞流式檢測(cè)分析表明，CIK細(xì)胞屬于異質(zhì)細(xì)胞群，隨著培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng)，⑶4+、⑶8+、⑶3+CD56+T細(xì)胞比率明顯升高。2. CIK細(xì)胞純度、增殖力及免疫表型檢測(cè)分別取培養(yǎng)0、4、7、10天100 μ 1濃度約106/ml的細(xì)胞，分別加入檢測(cè)用鼠抗人 CD3-PerCP、CD4-FITC、CD8-PE、CD25-PE、CD56-APC 抗體 10 μ 1，室溫避光孵育 30 分鐘，用 PBS 洗滌兩次，流式細(xì)胞儀檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，本發(fā)明制備的細(xì)胞中CIK細(xì)胞擴(kuò)增近400倍，CD3+CD56+陽(yáng)性、⑶8+、⑶4+的T細(xì)胞總比率為(91. 2士2. 95) %,⑶3+56+細(xì)胞從(2. 1 士0. 4) %急速擴(kuò)增到(40. 8士3. 4)%,CD3+56+細(xì)胞在培養(yǎng)第10天達(dá)到峰值?；颊撷?+⑶25+ITreg細(xì)胞占外周血⑶4+T比例為(12. 5 士 1. 5) %，本發(fā)明制備的細(xì)胞中⑶4+⑶25+細(xì)胞占⑶4+T細(xì)胞的比例降至(1. 01 士 0. 86) % ο3. CIK細(xì)胞對(duì)B16黑色素細(xì)胞的殺傷作用檢測(cè)CIK細(xì)胞按效靶比例1 10、1 20,1 40加入B16黑色素瘤細(xì)胞接種M小時(shí)的96孔板內(nèi)，共同培養(yǎng)M小時(shí)后加入新鮮配制的5mg/ml的MTTlO μ 1，共同培養(yǎng)4小時(shí)， 離心吸棄上清液，每孔加DMS0100 μ 1振蕩溶解10分鐘，用酶標(biāo)檢測(cè)儀在570nm處測(cè)定吸光度A值。同時(shí)設(shè)空白對(duì)照、靶細(xì)胞對(duì)照、效應(yīng)細(xì)胞對(duì)照。每孔數(shù)值減去空白對(duì)照孔，求出3 個(gè)復(fù)孔的平均A值，以殺傷率計(jì)算效應(yīng)細(xì)胞的細(xì)胞毒活性，殺傷率(％)=[靶細(xì)胞對(duì)照A 值-(實(shí)驗(yàn)孔A值-效應(yīng)細(xì)胞對(duì)照A值)]/靶細(xì)胞對(duì)照A值X 100 %。結(jié)果顯示本發(fā)明制備的CIK細(xì)胞對(duì)B16黑色素瘤細(xì)胞的殺傷活性是常規(guī)方法制備的細(xì)胞的5倍，證實(shí)IL-21和聯(lián)用PHA、亞硒酸鈉對(duì)增強(qiáng)CIK細(xì)胞的抗腫瘤效應(yīng)有協(xié)同作用。
權(quán)利要求
1.一種高純度、高增殖力、高細(xì)胞毒活性的CIK細(xì)胞的制備方法，其特征在于采集并分離患者外周血單個(gè)核細(xì)胞，先經(jīng)Mini MACS分選去除⑶4+⑶25+Treg細(xì)胞，得到⑶3+、⑶4+、 ⑶8+的T細(xì)胞；將得到的細(xì)胞置于含有PHA、IFN- γ的培養(yǎng)液中，使懸浮液中的PHA濃度為 100ng/ml,37°C,5% CO2的培養(yǎng)箱中孵育24h后，移至經(jīng)CD3單抗(1 μ g/ml)包被的細(xì)胞培養(yǎng)瓶中，加入 IFN- y (1000U/ml)，48h 后加入 IL-2 (500U/ml)、IL-21 (100ng/ml)，4 天后補(bǔ)充含有亞硒酸鈉(0. 005mg/L)培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)7-14天，即可得到高純度、高增殖力、高細(xì)胞毒活性的CIK細(xì)胞。
2.如權(quán)利要求1所述的一種高純度、高增殖力、高細(xì)胞毒活性的CIK細(xì)胞的制備方法， 其特征在于培養(yǎng)前采用Mini MACS間接免疫磁珠正向分選的方法去除Treg細(xì)胞。培養(yǎng)中加入Treg細(xì)胞的調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)錄因子R)xp3的抑制劑IL-21，抑制Treg細(xì)胞的產(chǎn)生。
3.如權(quán)利要求1所述的一種高純度、高增殖力、高細(xì)胞毒活性的CIK細(xì)胞的制備方法， 其特征在于采用有絲分裂原PHA作為促T細(xì)胞增殖的強(qiáng)激活劑；采用亞硒酸鈉提高CIK細(xì)胞的細(xì)胞毒性。
4.如權(quán)利要求1所述的一種高純度、高增殖力、高細(xì)胞毒活性的CIK細(xì)胞的制備方法， 其特征在于所述的培養(yǎng)基是指GT-T551人淋巴細(xì)胞培養(yǎng)液或RPMI1640培養(yǎng)液，PHA終濃度為lOOng/ml，IFN-γ終濃度為1000U/ml，CD3單抗終濃度為1 μ g/ml、IL-2終濃度為 500U/ml、IL-21終濃度為100ng/ml，亞硒酸鈉終濃度為0. 005mg/L。
5.如權(quán)利要求1的方法所制得的CIK細(xì)胞，其特征在于CIK細(xì)胞包括⑶3+⑶56+雙陽(yáng)性、⑶4+、⑶8+的細(xì)胞總比率占83% -95% ；同時(shí)去除了⑶4+⑶25+Treg細(xì)胞。
6.如權(quán)利要求1的方法所制得的CIK細(xì)胞，其能用于治療各種腫瘤、治療感染及其他免疫相關(guān)疾病的藥物中。
全文摘要
本發(fā)明屬于體外細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)領(lǐng)域，具體是一種高純度、高增殖力、高細(xì)胞毒活性的CIK細(xì)胞的制備方法。該制備方法是采集并分離患者外周血單個(gè)核細(xì)胞，先經(jīng)Mini MACS免疫磁珠去除CD4+CD25+Treg細(xì)胞，分選得到CD3+、CD4+、CD8+的T細(xì)胞；將得到的細(xì)胞置于含有植物血凝素(PHA)的培養(yǎng)液中，使懸浮液中的PHA濃度為100ng/ml，37℃、5％CO2的培養(yǎng)條件下孵育24h后，移至經(jīng)CD3單抗(1μg/ml)包被的細(xì)胞培養(yǎng)瓶中，加入IFN-γ(1000U/ml)，48h后加入IL-2(500U/ml)、IL-21(100ng/ml)，4天后補(bǔ)充含有亞硒酸鈉(0.005mg/L)的培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)7-14天，即可得到高純度、高增殖力、高細(xì)胞毒活性的CIK細(xì)胞。本發(fā)明提高了體外擴(kuò)增的CIK細(xì)胞的數(shù)量、活性和純度，使CIK抗腫瘤作用增強(qiáng)。
文檔編號(hào)A61P37/02GK102154206SQ201110036490
公開(kāi)日2011年8月17日 申請(qǐng)日期2011年1月31日 優(yōu)先權(quán)日2011年1月31日
發(fā)明者劉俊杰, 徐為, 李慧中, 李連濤, 程乾, 章龍珍, 裴冬生, 鄭駿年, 陳菲菲 申請(qǐng)人:鄭駿年