專利名稱：提取異硫氰酸酯的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明的實(shí)施方案涉及從植物材料中提取異硫氰酸酯的方法。更具體但不排外地講，本發(fā)明的實(shí)施方案涉及從芥菜種子和芥菜種子精油中提取主要的濕氣敏感性異硫氰酸酯的方法。
背景技術(shù)：
消費(fèi)品能夠?yàn)槲⑸锏目焖偕L提供良好的環(huán)境。在生產(chǎn)或包裝過程中，這種暴露可能并且確實(shí)經(jīng)常導(dǎo)致產(chǎn)品無意地接種了微生物。隨后，腐敗微生物例如食品中的腐敗微生物經(jīng)攝取產(chǎn)品提供的營養(yǎng)成分而快速増殖。防腐劑如山梨酸鹽、苯甲酸鹽、有機(jī)酸及其混合物已經(jīng)用于各種產(chǎn)品，特別是食品和飲料，以提供一定的微生物抑制度。然而其中某些有效抑制微生物生長劑量的防腐劑會(huì) 給產(chǎn)品帶來異味，從而造成產(chǎn)品不適用于其指定用途。類似地，天然防腐劑如游霉素在很多情況下用于食品和飲料產(chǎn)品中，以抑制微生物生長。遺憾的是，雖然這些天然防腐劑可有效地抵抗酵母或細(xì)菌，但是它們可能不能有效抵抗兩者。已經(jīng)公開，包含異硫氰酸酯的芥菜植物精油在口腔治療中以及對于特定食品表現(xiàn)出抗細(xì)菌和抗真菌功效。參見例如Sekiyama等人的1994年8月2日公布的轉(zhuǎn)讓給NipponSanso Corp.的美國專利5，334，373 ;和Madaus等人的1976年12月21日公布的美國專利3，998，964。芥菜精油中的異硫氰酸酯化合物是提供抗微生物效果的活性試劑。來源于白芥菜或黃芥菜植物(Sinapis alba或Brassica alba)的精油也提供上述抗細(xì)菌和抗真菌有益效果。此外，異硫氰酸酯化合物在較低用量下是有效的抗微生物劑。存在于白芥菜精油中的主要的異硫氰酸酷、4-羥基芐基異硫氰酸酯(4-HBITC)是濕氣敏感性化合物，其暴露于水分下數(shù)小時(shí)內(nèi)開始降解(即水解)。當(dāng)降解吋，4-羥基芐基異硫氰酸酯形成4-羥基芐醇等化合物。然而，從芥菜植物中分離和提取白芥菜精油存在問題。與揮發(fā)性的并且可以蒸汽蒸餾的大多數(shù)其它植物精油不同，白芥菜精油在大氣壓下不揮發(fā)，并且需要通過采用溶劑或方法如超臨界流體提取將它從種子中提取出來。此外，與大多數(shù)其它植物精油不同，白芥菜精油較不穩(wěn)定，當(dāng)暴露于水分時(shí)尤其如此。該不穩(wěn)定性要求附加的條件，當(dāng)精油生成吋，將其從芥菜種子中提取出來，并且其后即刻穩(wěn)定，以保持其抗微生物特性。目前，芥菜處理工業(yè)主要利用白芥菜粉末，而精油很大程度上被忽視。事實(shí)上，為利用沒有芥菜“熱”敏性的白芥菜粉末，使磨碎的芥菜粉末經(jīng)歷熱去活化步驟。這里有意將黑芥子酶(其催化4-羥基芐基異硫氰酸酯由其前體4-羥基芐基葡糖異硫氰酸酯形成)去活化，因此當(dāng)該粉末與潮濕的食品如肉和香腸混合時(shí)，所述精油不會(huì)形成。此外，由于4-羥基芐基異硫氰酸酯的不穩(wěn)定性，無論是作為天然產(chǎn)物還是作為純化學(xué)品，其當(dāng)前均無法商購獲得。因此，基于上述全部理由，白芥菜精油在本領(lǐng)域沒有因其抗細(xì)菌和抗真菌效果而被廣泛知曉或廣泛利用。然而，本發(fā)明人已驚奇地發(fā)現(xiàn)，在一個(gè)實(shí)施方案中，通過向磨碎的脫脂芥菜種子中加入水以產(chǎn)生白芥菜精油，使用溶劑或超臨界流體提取白芥菜精油，通過移除溶劑和殘余水分干燥精油，然后將所得白芥菜精油與吸濕性載體緊密混合，包含于其中的濕氣敏感性異硫氰酸酯化合物能夠被穩(wěn)定。因此，白芥菜精油與吸濕性載體的共混物隨后能夠用作固體食品的有效抗細(xì)菌劑和抗真菌劑。較大規(guī)模制備白芥菜精油中所涉及的按比例放大問題和白芥菜精油的不穩(wěn)定性未被參與提取精油的其它人所認(rèn)識到。例如，所涉及的ー些公布描述第一溶劑提取步驟，以移除芥菜油的不揮發(fā)性組分或甘油三酯組分，然后在用水活化前將脫脂芥菜種子除溶剤，以生成活性組分4-羥基芐基異硫氰酸酷。制備WMEO的其它早期嘗試包括下列步驟，如所涉及領(lǐng)域中所述。如DE2046756A中所述，第一溶劑提取磨碎的芥菜種子以移除所有不揮發(fā)性油，干燥所述種子，用水潤濕并且使生成4-HBITC的反應(yīng)進(jìn)行至多24小時(shí)，用丙酮提取濕芥菜種子殘余物，減壓移除丙酮，并且用96%こ醇提取殘余物以獲得活性組分4-HBITC的溶液。GB 224524描述，從芥菜種子中溶劑提取或壓出不揮發(fā)性油，然后加入水以形成糊狀物質(zhì)，使其反應(yīng)24小時(shí)至48小吋，以使白芥子硫苷前體轉(zhuǎn)化成白芥子硫苷芥菜油。擠壓該糊狀物質(zhì)以移除水、黑芥子酶、芥子酸硫酸氫鹽、糖和痕量的4-HBITC之后，用こ醚溶劑提取殘余物以及壓過的提取物，并且減壓移除醚，以獲得白芥子硫苷油。US 6824796描述了從葉菜和根莖如山葵中提取異硫氰酸酯的方法。此處，通過在水中碾磨植物材料將黑芥子酶催化劑活化后，使用植物油 作為異硫氰酸酯的溶剤?？茖W(xué)文獻(xiàn)還描述了基于下列的方法首先使用溶劑將芥菜種子脫月旨，然后干燥種子以使其去除任何殘余溶劑，在水中壓碎脫脂的種子，并且在溶劑的存在下使反應(yīng)進(jìn)行約 24 小時(shí)(Borek, V. & Morra, M. J. , 2005, “ Ionic thiocyanate productionirom 4-hydroxybenzyl glucosinolate contained in Sinapis alba meal，，， Journal oiAgricultural and Food Chemistry, 53,8650-8654 ；Vaughn, S. V.和 Berhow, M. A, 2005,“Glucosinolate hydrolysis products from various plant sources pH effects,isolation and purification，，，Industrial Crops and Products,紅，193-202)。在所有這些實(shí)例中，黑芥子酶體系的全部潛力未被利用，而且由此提取方法的時(shí)間和其它物流不提供切實(shí)可行的條件，以經(jīng)濟(jì)的方式獲得任何エ業(yè)規(guī)模量的白芥菜種子精油。上文的ー些方法使整個(gè)過程増加非常高的成本以及處理另ー溶劑移除和蒸發(fā)步驟的額外負(fù)擔(dān)。另ー些方法沒有嘗試通過加入已知的黑芥子酶活化劑如抗壞血酸來加速反應(yīng)，從而使得大規(guī)模エ藝非常低效和耗吋。文獻(xiàn)中也沒有展示通過采用適當(dāng)比率的部分脫脂芥菜種子、水和こ酸こ酯而能夠?qū)崿F(xiàn)的過程效率，所述比率使得低速離心步驟能夠分離出包含白芥菜精油的溶剤。發(fā)明概述一個(gè)實(shí)施方案涉及產(chǎn)生精油的方法。它能夠包括提供包含葡糖異硫氰酸酯前體和黑芥子酶的植物材料，其中所述植物材料包含不揮發(fā)性油；降低所述植物材料的粒度以產(chǎn)生粉末；通過使用水溶劑和促進(jìn)劑活化所述黑芥子酶以形成漿液，其中所述黑芥子酶催化所述葡糖異硫氰酸酯前體產(chǎn)生包含異硫氰酸酯的精油；并且將所述漿液分離成精油和殘余溶劑。另ー個(gè)實(shí)施方案涉及產(chǎn)生精油的方法。它能夠包括提供包含前體白芥子硫苷和黑芥子酶的芥菜種子，其中所述芥菜種子包含不揮發(fā)性油；任選地，降低所述芥菜種子中的不揮發(fā)性油含量；降低所述種子的粒度以產(chǎn)生芥菜粉末；通過使用水溶劑和促進(jìn)劑活化所述黑芥子酶以形成漿液，其中所述黑芥子酶催化所述白芥子硫苷前體產(chǎn)生包含異硫氰酸酯的精油；并且將所述漿液分離成精油和殘余溶劑。所述精油能夠?yàn)榘捉娌司?，其能夠包含濕氣敏感性異硫氰酸酯化合物，所述化合物能夠?yàn)?-羥基芐基異硫氰酸酷。發(fā)明詳述I.定義除非另外指明，本文所用的所有百分比、比率和比例均按重量計(jì)。應(yīng)當(dāng)理解，在本說明書中給出的每ー上限值包括每ー個(gè)下限值，即如同上述下限值在本文中所明確表示的。在本說明書全文中給出的每ー最小數(shù)值限度將包括每ー較高數(shù)值限度，如同該較高數(shù)值限度在本文中被明確表示。在本說明書全文中給出的每ー數(shù)值范圍將包括包含于該較寬數(shù)值范圍內(nèi)的每ー較窄數(shù)值范圍，如同該較窄數(shù)值范圍在本文中被明確表不。所有項(xiàng)目的列表，例如成分的列表，均旨在作為并應(yīng)當(dāng)被解釋為馬庫什(Markush) 群組。因此，所有的列表均可被理解和解釋為“選自由”項(xiàng)目的列表“以及它們的組合和混合物組成的組”的項(xiàng)目。本文引用的是本發(fā)明所用的包括多種成分的組分的商品名。本文的發(fā)明者不旨在限于某ー商品名的物質(zhì)。在本文的描述中與以商品名引用的那些材料等價(jià)的材料(如以不同的名稱或參考號從不同來源得到的那些)可以被取代和應(yīng)用。本文的組合物和方法可包括本文所描述的任何特征或?qū)嵤┓桨福蚧旧嫌善浣M成，或由其組成。在本公開的多個(gè)實(shí)施方案的描述中，公開了多個(gè)實(shí)施方案或獨(dú)特的特征。對于本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來說顯而易見的是，這些實(shí)施方案和特征的所有組合都是可能的并可導(dǎo)致本公開的優(yōu)選實(shí)施。雖然只舉例說明和描述了本發(fā)明的多種實(shí)施方案和個(gè)別特征，在不脫離本發(fā)明實(shí)質(zhì)和范圍的條件下，可以對其進(jìn)行各種改變和變型。還顯而易見的是，前述公開中提出的實(shí)施方案和特征的所有組合都是可能的并可導(dǎo)致本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施。如本文所用，當(dāng)用于權(quán)利要求或說明書中時(shí)，包括“所述(the) ”、“ー個(gè)(a和an) ”的冠詞被理解為是指一個(gè)或更多個(gè)受權(quán)利要求書保護(hù)或受說明書保護(hù)的物質(zhì)。如本文所用，術(shù)語“包括”、“包含”和“涵蓋”旨在為非限制性的。如本文所用，術(shù)語“多個(gè)”是指ー個(gè)以上的。如本文所用，術(shù)語“抗微生物效果”是指產(chǎn)品抑制微生物的生長，移除微生物和/或換句話講減少微生物的存在，所述微生物包括例如酵母、細(xì)菌、霉菌和/或真菌，優(yōu)選酵母和/或細(xì)菌。如本文所用，“精油”涉及能夠從植物中蒸餾或提取出的所有化合物組合，所述油衍生自所述化合物組合，并且所述化合物組合給出該植物特有的芳香。參見例如H. McGee的“On Food and Cooking”，Charles Scribner’s Sons, 154-157 (1984)。根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施方案，所述精油優(yōu)選源自白芥菜或黃芥菜植物(Sinapis alba或Brassica alba),其能夠產(chǎn)生濕氣敏感性異硫氰酸酯化合物，并且更具體地講為4-羥基芐基異硫氰酸酯(4-HBITC)。如本文所用，術(shù)語“濕氣敏感性”是指異硫氰酸酯化合物在水的存在下降解。該降解通過水解反應(yīng)進(jìn)行，因此隨著水存在下儲藏時(shí)間的推移，導(dǎo)致活性異硫氰酸酯抗微生物劑含量減少。測定濕氣敏感性的方法示于下文測試方法部分中。濕氣敏感性異硫氰酸酯的特征在干，當(dāng)懸浮在PH為約3. 6的磷酸鹽緩沖水溶液中并且溫度為約20°C至約23°C且時(shí)間超過24小時(shí)的時(shí)候，異硫氰酸酯化合物的濃度至少減少起始濃度的約20%。濕氣敏感性化合物的ー個(gè)實(shí)例為4-羥基芐基異硫氰酸酷。如本文所用，與相應(yīng)的精油有關(guān)的術(shù)語“天然組分”涉及得自天然存在的精油的本發(fā)明所用組分。如本文所用，術(shù)語“基本上不含”是指包含小于約0. 05重量％ (即小于約500份
每ー百萬份)。II.方法的實(shí)施方案 本發(fā)明的實(shí)施方案涉及從植物材料中提取異硫氰酸酯的方法。在ー個(gè)方面中，本發(fā)明的實(shí)施方案涉及從植物中提取油的方法。本發(fā)明的實(shí)施方案涉及從芥菜種子和芥菜種子精油中提取主要的濕氣敏感性異硫氰酸酯的方法。A.異硫氰酸酯化合物根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施方案，所述方法包括從植物中提取精油。此類油可包括白芥菜精油(WMEO)。此類白芥菜精油可包含異硫氰酸酯化合物，其可為濕氣敏感性化合物。因此，本文公開的實(shí)施方案可包括從來源于芥菜植物的白芥菜精油中提取濕氣敏感性異硫氰酸酷化合物(即具有-N = C = S部分的化合物)，如化合物4-羥基芐基異硫氰酸酷。以前已經(jīng)確定此類化合物在食品中具有有益的抗微生物活性。參見轉(zhuǎn)讓給The Procter & GambleCompany的美國專利7,658,961。已知,經(jīng)常將這些化合物與已知的防腐劑苯甲酸、山梨酸或它們的鹽聯(lián)合使用，和/或可將濕氣敏感性異硫氰酸酯化合物如白芥菜精油中的4-羥基芐基異硫氰酸酯與吸收、吸取和結(jié)合水分的吸濕性載體組合，而不使用這些已知的防腐剤。雖然本文公開方法的實(shí)施方案能夠提取任何濕氣敏感性異硫氰酸酷，但是4-羥基芐基異硫氰酸酯(4-HBITC)的提取是其ー個(gè)具體的實(shí)施方案。在本發(fā)明的實(shí)施方案中，包含濕氣敏感性異硫氰酸酯化合物的組分可為白芥菜或黃芥菜族(Sinapis alba或Brassica alba)的精油、精油的天然組分、或精油的合成組分(均更詳細(xì)描述于下文中)。已知，植物中的蕓苔族是具有約2000個(gè)物種和超過300個(gè)屬的小族(參見例如由A. S. Naidu 編輯的“Natural Food Antimicrobial Systems”, CRC Press LLC,第 399-416頁，2000)。作為另外一種選擇，包含濕氣敏感性異硫氰酸酯化合物的組分可為精油、精油的天然組分、或精油的合成組分，所述精油為可產(chǎn)生濕氣敏感性異硫氰酸酯化合物的任何其它族植物的精油。參見例如由0. R. Fennema編輯的“Food Chemistry”, Marcel Dekker,Inc ,第 602-603 頁(1985),和“Naturally Occurring Antimicrobials in Food, Councilfor Agricultural Science and Technology”第 31-32 頁(1998)。如本領(lǐng)域已知，可將例如任何蕓苔屬物種的種子和/或花朵勻化、磨碎、碾碎、壓制或換句話講破壞，以活化相應(yīng)精油的一個(gè)或多個(gè)前體(例如葡糖異硫氰酸酷)。已知從所述油開始的異硫氰酸酯化合物的生產(chǎn)通過在例如勻化、碾磨、粉碎、壓制或換句話講破壞植物、它們的種子和/或花朵的基礎(chǔ)上的酶催化而發(fā)生。參見例如1994年I月20日公布的Concannon 的 WO 94/01121,和 Brown 等人的“Glucosinolate-Containing Plant Tissuesas Bioherbicides，，，Journal of Agricultural Food Chemistry,第 43 卷,第 3070-3074頁(1995)。通常已知在與葡糖異硫氰酸酯相互作用后參與異硫氰酸酯化合物生產(chǎn)的酶是黑芥子酶，其還被稱為硫葡糖苷酶(并且具有酶分類號EC 3. 2. 3. I)。已知黑芥子酶對各種葡糖異硫氰酸酯是非特異性的。
因此，本文的實(shí)施方案可涉及包含葡糖異硫氰酸酯前體和黑芥子酶的任何植物材料，一個(gè)非限制性實(shí)例為芥菜種子。在具體的實(shí)施方案中，包含濕氣敏感性異硫氰酸酯化合物的植物材料是預(yù)想的。植物材料可包括十字花科(Brassicaceae)(以前為Cruciferae),并且ロ包括介米(Brassica nigra, Brassica juncea, Brassica hirta 或bmapis alba)、卷ンLi、米(Brassica oleracea；(B. oleracea var. botrytis)、抱^1 甘
(B. oleracea var. gemmifera) >(B. oleracea var. italicaノ 、大頭米(B. oleracea
var. gongylodes)、芥末(或日本山葵)(Wasabia japonica)、低芥酸菜籽(B. napus)和蕪菁(B.rapa)。其它非限制性實(shí)例包括其它植物材料，如刺山柑(白花菜科)和辣木科。B.提取方法因此，本文公開了從芥菜植物精油中提取異硫氰酸酯化合物的方法實(shí)施方案。在一個(gè)實(shí)施方案中，由白芥菜或黃芥菜(Sinapis alba)提供包含約5%至約35%的4_羥基 芐基異硫氰酸酯(4-HBITC)的白芥菜精油(WMEO)?？芍频冒s10%至約30%的4-羥基芐基異硫氰酸酯(4-HBITC)的WME0?？芍频冒s15%至約27%的4-羥基芐基異硫氰酸酷(4-HBITC)的WME0。可制得包含約22%至約28%的4-羥基芐基異硫氰酸酯(4-HBITC)的WME0。其它實(shí)施方案包括包含白芥菜精油的組合物，所述白芥菜精油包含約30%至約
35%的4-羥基芐基異硫氰酸酯(4-HBITC)，然而可制得包含約30 %至約35 %的4-羥基芐基異硫氰酸酯(4-HBITC)的白芥菜精油。白芥菜精油中的該活性化合物4-HBITC為濕氣敏感性化合物，其暴露于水分下數(shù)小時(shí)內(nèi)開始降解(即水解)。因此，4-HBITC在中性pH下非常易于水解。如所述，白芥菜種子包含其前體白芥子硫苷和黑芥子酶(硫代葡萄糖苷水解酶)。當(dāng)通過加入水活化時(shí)，形成濕的芥菜種子，黑芥子酶催化白芥子硫苷的降解，獲得4-羥基芐基異硫氰酸酷。在適當(dāng)?shù)姆磻?yīng)時(shí)間后，4-HBITC和其它脂溶性材料轉(zhuǎn)移到溶劑層中，然后可與濕芥菜種子中分離。接著可在低溫下減壓移除溶剤，以獲得包含4-HBITC的WMEO。根據(jù)均轉(zhuǎn)讓給 The Procter & Gamble Company 的 US6, 361，812B1 ；US 6, 558, 723B2 ；US 7，105，190B2和US 7，658，961，可為干性的該4-HBITC配制劑可用作防腐剤。提取方法可包括下列一般步驟，所有步驟不是必須需要的，并且所有步驟描述于下文中1)冷擠壓或溶劑提取芥菜種子，以移除不揮發(fā)性油；2)壓碎脂肪減少或無脂肪的芥菜種子，以獲得脫脂白芥菜粉末；3)將脫脂白芥菜粉末加入到包含活化劑抗壞血酸的溶劑和水的混合物中；4)使黑芥子酶催化的白芥子硫苷水解反應(yīng)發(fā)生一段時(shí)間，并且使4-羥基芐基異硫氰酸酯溶于溶劑中；5)使包含4-羥基芐基異硫氰酸酯的溶劑與濕脫脂芥菜粉末分離；6)減壓移除溶剤，以獲得包含4-羥基芐基異硫氰酸酯的白芥菜精油；并且7)干燥濕脫脂芥菜粉末，以獲得低溫烘干(deheated)并脫脂的芥菜粉。在一個(gè)實(shí)施方案中，可首先將白芥菜種子冷壓，以盡可能多的移除種子油，而不增加壓榨餅的溫度。在一個(gè)實(shí)施方案中，壓榨餅的溫度可低于約70°C，以確保壓榨餅中保留黑芥子酶活性。將所述壓榨餅?zāi)ニ楹?，在一個(gè)實(shí)施方案中可使其潤濕，以致使黑芥子酶活化，催化白芥子硫苷至4-HBITC的水解。在一個(gè)實(shí)施方案中，可使用約I毫摩爾的抗壞血酸作為黑芥子酶的有效活化劑。起反應(yīng)的濕芥菜體系中可混入溶剤，這可確保當(dāng)使用こ酸こ酯溶劑時(shí)，由所述反應(yīng)制得的4-HBITC將轉(zhuǎn)移到親脂性こ酸こ酯層中。反應(yīng)時(shí)間后，在一個(gè)實(shí)施方案中，在約4小時(shí)的反應(yīng)時(shí)間后，可分離出こ酸こ酯層。壓榨餅水こ酸こ酯比率可為約I : 0.3 : 2，以避免形成穩(wěn)定的乳液，并且具有足夠的水以使酶活化?？赏ㄟ^離心將包含4-HBITC和殘余芥菜油的こ政こ酯從反應(yīng)體系中移出，并且立即真空蒸發(fā)以獲得WMEO。此處，在一個(gè)實(shí)施方案中，可避免干燥こ酸こ酷。然后可使WMEO保持冷凍，以避免4-HBITC降解。然而，如US 7，658，961中所提出的，可實(shí)施WMEO在麥芽糊精上的包覆，以使其能夠貯藏于冷藏溫度或室溫下。現(xiàn)在更具體地描述如本文所述的提取方法的實(shí)施方案。i.減少油含暈在一個(gè)實(shí)施方案中，提供后，可降低包含前體白芥子硫苷和黑芥子酶的芥菜種子不揮發(fā)性油的含量。芥菜種子的不揮發(fā)性油含量為約26重量％至約28重量％。不揮發(fā)性油含量由存在于芥菜種子中的甘油三酯構(gòu)成。含量降低后，芥菜種子的不揮發(fā)性油含量可為約2%至約10%，或約4%至約9%，或約6%至約8%。降低油含量可包括機(jī)械壓榨，如冷榨或溶劑提取芥菜種子以移除不揮發(fā)性油，然后將脂肪減少或無脂肪的芥菜種子壓碎，以獲得脫脂白芥菜粉末。 在一個(gè)實(shí)施方案中，可采用機(jī)械壓榨如冷榨以降低不揮發(fā)性油含量。如本領(lǐng)域所熟知的，冷榨可一般涉及使待冷榨的物體經(jīng)受溫度和壓カ。在一個(gè)實(shí)施方案中，冷榨可包括使芥菜種子經(jīng)受如上所述的壓力和溫度，并且不使用溶劑提取，從種子中提取精油。該實(shí)施方案可被稱為“榨油”，并且可不采用溶劑提取。壓榨后，移除盡可能多的油。在此類實(shí)施方案中，可將溫度保持等于或低于約70°C，或低于約50°C。該溫度可保留黑芥子酶活性。當(dāng)油被提取或壓榨后，油以及油提取后留下的壓餅可如下文所公開的進(jìn)行處理。在一個(gè)實(shí)施方案中，可將壓餅壓碎、研磨，或換句話講通過降低粒度加工成芥菜粉末。如所述，可通過例如冷榨將芥菜種子機(jī)械壓搾。該壓榨可制得壓制的包含精油的芥菜種子粉餅。一般來講，芥菜種子具有約26%至約28%的油含量，和約6%至約7%的含水量。通過冷榨或壓碎芥菜種子，由于含水量不足以維持酶作用，因此不會(huì)發(fā)生黑芥子酶催化的葡糖異硫氰酸酯水解反應(yīng)。因此，芥菜種子提供供壓出或排出不揮發(fā)性油的良好來源。搾油可在許多不同類型的機(jī)器中進(jìn)行，以制得脫脂粉末。在一個(gè)實(shí)施方案中，單螺桿壓機(jī)可在壓榨壓榨筒內(nèi)的芥菜種子。單螺桿壓機(jī)可包括具有榨筒的螺桿一端處的進(jìn)料料斗，其中將種子壓榨以擠出油的另一端處的沖頭，以及介于料斗和沖頭之間的有孔部分。有孔部分使壓榨的油能夠流出。壓制的芥菜種子形成脫脂壓餅，其能夠被擠壓或迫使通過沖頭內(nèi)的噴嘴，并且當(dāng)它離開機(jī)器時(shí)可形成連續(xù)圓柱形粒料。這些機(jī)器的大熱容量能夠防止壓餅溫度升得遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過有益于擠壓芥菜種子的約60°C至約65°C。此時(shí)，脫脂壓餅可具有約6-8 %的殘余脂肪，并且還包含前體白芥子硫苷和酶黑芥子酶。在一個(gè)實(shí)施方案中，擠壓步驟期間壓餅經(jīng)受的溫度不足以使黑芥子酶變性。接著，脫脂芥菜可以圓柱形粒料形式離開壓榨機(jī)，所述粒料可被研磨成細(xì)粉，其在一個(gè)實(shí)施方案中可成為方法下ー步的原材料。在另ー個(gè)實(shí)施方案中，可使用稱為籠型擠壓機(jī)的ー類螺桿壓機(jī)。在該實(shí)施方案中，具有擠壓螺桿的榨筒可從靠近進(jìn)料料斗的點(diǎn)開槽至榨筒的末端。擠壓螺桿可對著這些狹槽擠壓芥菜種子以壓出油，所述油可經(jīng)由縱向狹槽與植物碎屑一起離開榨筒?？烧{(diào)節(jié)狹槽間隔和擠壓螺桿壓カ件，以獲得最清澈的油，和具有可能最低油含量的脫脂壓餅。長擠壓區(qū)域產(chǎn)生大量摩擦，和由此產(chǎn)生的熱。此類擠壓機(jī)的熱容量低，因此壓餅趨于溫?zé)嶂林炼嗉s80°C至約85°C的溫度。因此，在一些實(shí)施方案中，脫脂壓餅的黑芥子酶活性可能因溫度的這種升高而受到不利的影響。如果當(dāng)壓餅從擠壓機(jī)離開時(shí)溫度為約70°C至約75°C，它可被稍后冷卻，從而保持足夠的酶活性以在壓餅潤濕時(shí)催化白芥子硫苷的水解。脫脂壓餅可包含至多17%的殘余脂肪。使用籠型螺桿壓機(jī)的另一個(gè)變化是將芥菜種子分成兩批?？蓪⒃撆械牡谝慌鷶D壓，使得壓餅溫度不升高超過約65°C至約70°C，而可將第二片擠壓以使除油最大化，而不考慮壓餅溫度。如此，當(dāng)擠壓后將兩批再合并時(shí)，最終殘余油含量可大大低于17%，并且在潤濕時(shí)，合并的壓餅以及第一批中的黑芥子酶將是活性的，并且能夠?qū)膳械陌捉孀恿蜍账獬?-羥基芐基異硫氰酸酯。根據(jù)水解反應(yīng)催化所需的酶活性，可改變兩批的比例。例如，可將芥菜種子分成三批?？墒乖撆械膬膳?jīng)歷更高溫度的擠壓步驟，而可使第三批經(jīng)歷較低溫度的擠壓步驟，從而保留該第三批的酶活性?？蓪⑷俸喜⒁垣@得遠(yuǎn)遠(yuǎn)小于17%的最終殘余油含量，和足以將所有批次中的白芥子硫苷催化水解成4-羥基芐基異硫氰酸酯的酶活性。由上文方法降低油含量后，提供了脫脂芥菜壓餅或粉末，并且進(jìn)行進(jìn)一步處理。
用溶劑處理然后可處理粉末或壓餅，以提取殘余的不揮發(fā)性油并且活化黑芥子酶。此類處理可通過加入溶劑和促進(jìn)劑來進(jìn)行。溶劑可包括水溶劑、乙酸乙酯、水、以及它們的組合和混合物。溶劑可與粉末或壓餅一起加入到反應(yīng)容器中以形成反應(yīng)混合物。加入溶劑和促進(jìn)劑后，黑芥子酶將被活化，并且芥菜粉餅或粉末與溶劑和促進(jìn)劑形成漿液。黑芥子酶可催化白芥子硫苷前體產(chǎn)生包含異硫氰酸酯的精油。如本文所述，精油可為WME0，并且異硫氰酸酯可為濕氣敏感性異硫氰酸酯如4-HBITC?？捎糜谔崛〔糠置撝娌藟猴炛袣堄嗖粨]發(fā)性油以及生成的4-羥基芐基異硫氰酸酯的溶劑包括但不限于乙酸乙酯、己烷、庚烷、甲基戊烷、二氯甲烷和氯仿。在一個(gè)實(shí)施方案中，使用乙酸乙酯。乙酸乙酯不是水溶性的，因此可易于經(jīng)由簡單的離心步驟從反應(yīng)混合物中移除。此外，乙酸乙酯與水形成低沸共沸物，其具有91. 53%乙酸乙酯和8. 47%水的組成，沸點(diǎn)為70. 4°C，與純乙酸乙酯的77. 2°C形成對比。該形成使得分離出的乙酸乙酯能夠無需預(yù)干燥步驟而從最終溶劑移除步驟中去除，這是因?yàn)樗尤氲乃瑯佑膳c乙酸乙酯形成的共沸物移除。用于從溶劑中移除水的干燥劑在重新使用之前必須再生，并且需要將它們加熱并且在使用前保存在干燥條件下。除了水以外，干燥劑的再生還釋放出殘余的溶齊U，并且此類蒸氣不能放空到大氣中，因此需要蒸氣滌氣和溶劑回收步驟，這增加了復(fù)雜性和成本。使用乙酸乙酯作為溶劑的額外有益效果在于，乙酸乙酯與水形成的共沸物將乙酸乙酯沸點(diǎn)降低約7°C，從而能夠在較低溫度下蒸發(fā)。溶劑能夠在反應(yīng)槽中與所需量的水混合，并且可將部分脫脂的粉化芥菜壓餅在混合下加入到所述槽中，以確保充分潤濕。在另一個(gè)實(shí)施方案中，可使部分脫脂的粉化芥菜壓餅首先與干燥的活化劑/促進(jìn)劑混合，以確保同質(zhì)，并且在混合容器中用所需量的水潤濕。然后可將溶劑加入到該混合容器中，并且首先在高速下混合以確保同質(zhì)，然后在低速下混合以保持漿液為懸浮態(tài)，以供反應(yīng)發(fā)生，并且使4-羥基芐基異硫氰酸酯轉(zhuǎn)移到溶劑中。在其它實(shí)施方案中，可使用乙酸乙酯和水的組合。乙酸乙酯和水的具體量可變化。在使用部分脫脂芥菜壓餅的實(shí)施方案中，脫脂芥菜壓餅內(nèi)容物中的脂肪可與所用溶劑量有關(guān)。在一個(gè)實(shí)施方案中，脫脂芥菜壓餅可具有高達(dá)17%的脂肪含量。在該實(shí)施方案中，加入的水可保持小于約40%，同時(shí)乙酸乙酯最大含量為用于形成芥菜漿液的部分脫脂芥菜壓餅重量的2倍。該實(shí)施方案可避免形成穩(wěn)定的乳液。在一個(gè)實(shí)施方案中，可避免形成乳液，以能夠經(jīng)由下文所述的簡單離心步驟，將乙酸乙酯從反應(yīng)混合物中分離出來。因此，在一個(gè)實(shí)施方案中，控制適當(dāng)量的水分，使得反應(yīng)開始，并且在乙酸乙酯和白芥菜粉末之間分配，但不過度而形成乳液。此外，選擇脫脂白芥菜水乙酸乙酯比率，以提供足夠的水，使當(dāng)潤濕的脫脂芥菜壓餅與乙酸乙酯混合時(shí)，黑芥子酶催化的白芥子硫苷至4-羥基芐基異硫氰酸酯的水解反應(yīng)有效發(fā)生，并且還避免形成上述穩(wěn)定乳液。此外，在一個(gè)實(shí)施方案中，PDMS :水乙酸乙酯的比率可為約I : 0.4 : 1.8。因此，在一個(gè)實(shí)施方案中，基于重量，脫脂芥菜壓餅與水以及乙酸乙酯的比率可為I份脫脂芥菜壓餅0. 4份水1. 8份乙酸乙酯。在另一個(gè)實(shí)施方案中，PDMS 水乙酸乙酯的比率按重量計(jì)可為約I : O. 25 : I. 5至約I : O. 5 : 3。 還可使用促進(jìn)劑。促進(jìn)劑是使由黑芥子酶催化的反應(yīng)加速的物質(zhì)。在一個(gè)實(shí)施方案中，促進(jìn)劑可為抗壞血酸。在其它實(shí)施方案中，可使用金屬鹽?？杉尤虢橛诩sO. 75毫摩爾至約3毫摩爾之間，或約I. O毫摩爾至約2. 5毫摩爾之間，I. 5毫摩爾至約2. O毫摩爾之間，或約I. O毫摩爾的促進(jìn)劑。所用促進(jìn)劑的量能夠適當(dāng)活化黑芥子酶。較低的量可能不提供黑芥子酶的適當(dāng)活化，而較高的量可與4-HBITC反應(yīng)形成稱為抗壞血酸原的化合物，其可降低4-HBITC的收率?？梢蛳铝性蚨褂眠@些促進(jìn)劑。黑芥子酶或硫代葡萄糖苷水解酶(E. C. 3. 2. I. 147)為具有可接納促進(jìn)劑如抗壞血酸分子的一個(gè)或多個(gè)位點(diǎn)的酶。從工藝可行性角度上看，加入低濃度例如約ImM的抗壞血酸如本文所公開那些，可使反應(yīng)速率有利進(jìn)行。不存在活化劑時(shí)，約21°C室溫下，溶劑中4-HBITC的最大濃度出現(xiàn)在包含部分脫脂白芥菜、水和溶劑的反應(yīng)漿液中約24小時(shí)后。加入促進(jìn)劑如抗壞血酸后，類似反應(yīng)體系中的最大濃度在約3-4小時(shí)內(nèi)達(dá)到，并且該濃度在接下來的20-22小時(shí)內(nèi)保持不變，提供足夠?qū)挼臅r(shí)間窗以離心并且分離大規(guī)模生產(chǎn)體系中的與水不混溶的有機(jī)溶劑。在一個(gè)實(shí)施方案中，部分脫脂芥菜種子(PDMS)可直接加入到溶劑混合物中以形成漿液。通過在反應(yīng)容器中將部分脫脂芥菜種子直接加入到溶劑如乙酸乙酯-水混合物中，然后加入促進(jìn)劑，工藝可因避免了麻煩的預(yù)潤濕步驟而提速。當(dāng)用水潤濕時(shí)，PDMS趨于形成團(tuán)塊，相比之下，當(dāng)PDMS易于潤濕并且易于分散形成易于攪拌的漿液時(shí)加入到乙酸乙酯-水混合物可使?jié){液反應(yīng)特定的反應(yīng)時(shí)間。在一個(gè)實(shí)施方案中，反應(yīng)時(shí)間可為約4小時(shí)。在另一個(gè)實(shí)施方案中，反應(yīng)時(shí)間可為至多約4小時(shí)。在另一個(gè)實(shí)施方案中，反應(yīng)時(shí)間可為約3小時(shí)至約5小時(shí)。在另一個(gè)實(shí)施方案中，反應(yīng)時(shí)間可為約2小時(shí)至約6小時(shí)。在另一個(gè)實(shí)施方案中，反應(yīng)時(shí)間可為約I小時(shí)至約8小時(shí)。在另一個(gè)實(shí)施方案中，反應(yīng)時(shí)間可為至少約I小時(shí)。此外，在一個(gè)實(shí)施方案中，將纖維素酶類酶加入到PDMS中，也可提高該反應(yīng)階段期間4-HBITC的收率。iii·分離此外，可接著實(shí)施分離步驟?？蓪?shí)施分離步驟，以從反應(yīng)混合物中分離出溶劑，使得漿液分離成濾餅、精油和殘余溶劑，其中精油和殘余溶劑可為富含精油的溶劑，其隨后分離成精油和殘余溶劑。在生成4-HBITC的上述水解反應(yīng)完成后，可將漿液分離。在一個(gè)實(shí)施方案中，可將漿液分離成濾餅、精油和殘余溶劑，其中精油和殘余溶劑可為富含精油的溶劑，其隨后分離成精油和殘余溶劑。因此，可從濕芥菜濾餅中出分離出包含所有4-HBITC的溶劑如乙酸乙酯(如果使用的話)，然后如下文所述進(jìn)一步分離，以獲得精油。該分離可由如本領(lǐng)域已知的任何分離技術(shù)實(shí)現(xiàn)。例如，該分離技術(shù)可包括離心或過濾。在一些實(shí)施方案中，可進(jìn)行過濾、批量或連續(xù)離心。在一個(gè)實(shí)施方案中，可在上述反應(yīng)之后立即進(jìn)行分離。在另一個(gè)實(shí)施方案中，可在反應(yīng)后約I小時(shí)內(nèi)進(jìn)行分離。在另一個(gè)實(shí)施方案中，可在反應(yīng)后約2小時(shí)內(nèi)進(jìn)行分離。在一個(gè)實(shí)施方案中，可在密閉過濾體系內(nèi)進(jìn)行過濾?？墒褂迷撁荛]過濾體系，因?yàn)橐宜嵋阴ナ菗]發(fā)性的，并且一般應(yīng)控制，以使向大氣中的蒸發(fā)最小化。由于乙酸乙酯的揮發(fā)特性，還可使用密閉容器內(nèi)包含濾餅的過濾器。一些實(shí)施方案包括立式和臥式葉片過濾器、 濾過器、燭形過濾器、以及具有類似設(shè)計(jì)的其中可在密閉或封閉環(huán)境中實(shí)現(xiàn)過濾的過濾器。在另一個(gè)實(shí)施方案中，可實(shí)施離心。在一個(gè)實(shí)施方案中，濕芥菜漿液在分離前可具有約30%至約39%的可移除固體(懸浮固體)材料。在一個(gè)實(shí)施方案中，濕芥菜漿液在分離前可具有約32%至約35%的可移除固體(懸浮固體)材料。在一個(gè)實(shí)施方案中，濕芥菜漿液在分離前可具有約33%至約34%的可移除固體(懸浮固體)材料。在該固體含量下，一個(gè)分離實(shí)施方案可包括潷析離心機(jī)。潷析離心機(jī)可包括旋轉(zhuǎn)的圓柱形臥式筒體，所述筒體一端具有圓柱段，并且另一端具有徑向傾斜錐形段，并且在上述兩段之間具有傾斜度較小的任選段。在筒體的錐形段中可整合渦殼，并且可分離驅(qū)動(dòng)。濕芥菜和溶劑混合物(濕芥菜漿液)可通過被布置居中的進(jìn)料管進(jìn)入分離空間，所述進(jìn)料管通過筒體的圓柱段伸入。濕芥菜漿液可在離心力作用下旋甩到內(nèi)筒壁上。可與筒殼以不同速率旋轉(zhuǎn)的渦殼可將分離出的芥菜固體傳送至筒錐段，其中固體通過筒端排放口排出。也可同時(shí)分離出乙酸乙酯溶劑物流，并且可在圓柱端離開潷析器。排放出的濕芥菜固體可直接落在以低真空運(yùn)作的連續(xù)帶式烘干機(jī)上。烘干機(jī)內(nèi)的溫度可保持在約70°C至約75°C，使得從芥菜中蒸發(fā)出濕乙酸乙酯，之后蒸發(fā)出水。低真空可產(chǎn)生足夠的拉力，迫使乙酸乙酯蒸氣和水蒸氣向真空源移動(dòng)。包含乙酸乙酯蒸氣的輸出蒸氣和水蒸氣可均接觸冷卻旋管，所述冷卻旋管將兩種蒸氣冷凝成它們的液體形式?？蓪⒗淠囊后w抽到分離槽中，其中乙酸乙酯和水分離。乙酸乙酯可被回收以提取下批芥菜種子?？稍谠撜婵蘸娓蓹C(jī)中將濕芥菜干燥并且完全除溶劑。在一個(gè)實(shí)施方案中，可將濕芥菜粉餅分離成如本文所述的低溫烘干并脫脂的芥菜粉和殘余溶劑。芥菜粉可如本文所述使用。在一個(gè)實(shí)施方案中，在離心出殘余濕芥菜粉餅后，乙酸乙酯可在蒸發(fā)前在干燥劑如無水硫酸鈉上干燥以移除殘余的水。然而，在另一個(gè)實(shí)施方案中，已發(fā)現(xiàn)由于乙酸乙酯與約8%的水形成共沸物，所得沸點(diǎn)降為約8°C，因此直接蒸發(fā)潮濕的乙酸乙酯獲得WME0，而不形成水層。采用此分離技術(shù)，可使芥菜固體與溶劑物流分離。然后，溶劑物流可包含溶劑如乙酸乙酯中含4-HBITC的WMEO濃縮溶液，然后可在蒸發(fā)形成精油和殘余溶劑之前貯存于槽中。iv.講一步分離因此，在一個(gè)實(shí)施方案中，可實(shí)施自溶劑物流中進(jìn)一步分離溶劑如乙酸乙酯，獲得殘余溶劑和包含4-HBITC的含WMEO精油。在一個(gè)實(shí)施方案中，蒸發(fā)可在較低的壓力和溫度下進(jìn)行，以避免對WMEO的不利熱效應(yīng)?？刹捎萌舾深愋偷恼婵照舭l(fā)。在一個(gè)實(shí)施方案中，蒸發(fā)可經(jīng)由蒸發(fā)器單程移除約99%或更多的乙酸乙酯，從而使對WMEO的熱降解效應(yīng)最小化，因此可產(chǎn)生4-HBITC?？墒褂枚喾N蒸發(fā)器以達(dá)到該目的。升膜式蒸發(fā)器、降膜式蒸發(fā)器、離心式蒸發(fā)器是可使用的蒸發(fā)器。因此，在一個(gè)實(shí)施方案中，該蒸發(fā)可獲得精油。在一個(gè)實(shí)施方案中，通過包含約5 %至約35%的4-羥基芐基異硫氰酸酯(4-HBITC)的白芥菜精油(WMEO)。在其它實(shí)施方案中，制得包含約10%至約30%的4-HBITC的WME0。在其它實(shí)施方案中，制得包含約15%至約27%的4-HBITC的WME0。在其它實(shí)施方案中，制得包含約22%至約28%的4-HBITC的 WMEO0V.講一步富集在一個(gè)實(shí)施方案中，可發(fā)生白芥菜精油中4-HBITC的進(jìn)一步富集。在一些實(shí)施方案中，可存在富集的需要，因此對于需要較高風(fēng)味品質(zhì)的應(yīng)用，對白芥菜精油作凈化。為支持這些應(yīng)用，可如下進(jìn)一步純化WMEO :首先將WMEO與己烷、庚烷或甲基戊烷以一份WMEO比約I. 2至約I. 3份己烷、庚烷或甲基戊烷的比率混合。此類混合可移除WMEO中的一些甘油三酯材料，并且可致使包含大部分4-HBITC的下層油層與己烷分離?？蓪⒃撎崛≈貜?fù)一次至兩次或更多次，以確保WMEO進(jìn)一步富集。然后可將己烷層合并，并且重復(fù)用無水甲醇提取以移除己烷層中的4-HBITC。然后可合并甲醇層和原下層油層，并且減壓蒸發(fā)，以獲得高度富集的WME0，其具有約30重量％至約80重量％的4-HBITC。高度富集的WMEO可包含約35重量％至約75重量％的4-HBITC。高度富集的WMEO可包含約45重量％至約70重量％的4-HBITC。高度富集的WMEO可包含約49重量％至約65重量％的4-耶11^。高度富集的WMEO可包含約45重量％至約55重量％的4-HBITC。高度富集的WMEO可包含約35重量％至約80重量％的4-HBITC。高度富集的WMEO可包含約40重量％至約80重量％的4-HBITC。高度富集的WMEO可包含約45重量％至約80重量％的4-HBITC。高度富集的WMEO可包含約50重量％至約80重量％的4-HBITC。之后，此高度純化的WMEO可適于加入到需要較高風(fēng)味品質(zhì)的食物和飲料產(chǎn)品中。在另一個(gè)實(shí)施方案中，為易于分配并且為確保較大的穩(wěn)定性，可接著使WMEO與水溶性吸濕物質(zhì)如麥芽糊精以適宜的比率混合。由于WMEO現(xiàn)富含4-HBITC，因此WMEO與麥芽糊精的比率小于I : 9。在一個(gè)實(shí)施方案中，范圍可為約I : 6至約I : 9。包含一種或更多種濕氣敏感性異硫氰酸酯化合物(優(yōu)選4-羥基芐基異硫氰酸酯)的精油自身可隨后用于例如 US 6，361，812B1 ；US 6，558，723B2 ；US 7，105，190B2 和 US7,658,961中所述的組合物和方法中。vi.講一步處理如本文參考文獻(xiàn)中所述，可對WMEO和/或4-HBITC實(shí)施其它處理。在一個(gè)實(shí)施方案中，可實(shí)施WMEO冷凍。此類冷凍可保存精油?？稍诘瓦_(dá)約_25°C下實(shí)施冷凍。冷凍后，可將WMEO放入到麥芽糊精或任何其它吸濕性載體中，并且如例如US 6，361，812B1 ；US6，558，723B2 ；US 7，105，190B2 和 US 7，658，961 中所述使用。III.杭微牛物功效白芥菜精油中4-羥基芐基異硫氰酸酯的濃度取決于起始部分脫脂白芥菜壓餅的脂肪含量。該特性適用，因?yàn)槿軇┤芙馑脻窠娌朔勰┲械乃兄苄圆牧希⑶野捉娌司徒M成為起始部分脫脂白芥菜壓餅中4-羥基芐基異硫氰酸酯和殘余脂溶性材料的總和。例如，如果使用未經(jīng)任何脫脂并且具有約26-28%初始脂肪含量的完整芥菜種子作為原料，則WMEO中的4-HBITC濃度為約5-6%;當(dāng)使用具有約17. 5%脂肪含量的部分脫脂白芥菜粉末作為原料時(shí)，WMEO中的4-HBITC濃度為約10. 1% ;當(dāng)起始部分脫脂白芥菜中的脂肪含量為約14%時(shí)，WMEO中的4-HBITC濃度為約15. 5-15. 9% ;當(dāng)起始脫脂白芥菜中的脂肪含量為約8. 2%時(shí)，所得WMEO中的4-HBITC濃度為約24% ;最后當(dāng)起始部分脫脂白芥菜中的脂肪含量為約6-7%時(shí)，WMEO中的4-HBITC濃度為約26%。不受理論的束縛，起始部分脫脂白芥菜中的脂肪含量與WMEO中4-HBITC濃度大致線性相關(guān)。如果起始白芥菜壓餅是完全脫脂的，則WMEO中4-HBITC濃度可達(dá)到高達(dá)約90%。本發(fā)明人已驚奇地發(fā)現(xiàn)，WMEO的抗微 生物效果范圍取決于其中4-羥基芐基異硫氰酸酯的濃度。例如，4-羥基芐基異硫氰酸酯濃度為約5-6%的WMEO僅能夠有效抵抗革蘭氏陰性菌生物體，并且已發(fā)現(xiàn)對革蘭氏陽性菌生物體的生長基本上無效應(yīng)。當(dāng)WMEO中4-羥基芐基異硫氰酸酯濃度為約15%時(shí)，除了觀測到對革蘭氏陰性菌生物體的持續(xù)抑制效應(yīng)以外，還觀測到對革蘭氏陽性菌生物體的顯著但有限的抑制效應(yīng)。當(dāng)WMEO中4-羥基芐基異硫氰酸酯濃度為約24%時(shí)，觀察到非常顯著的對革蘭氏陰性菌和革蘭氏陽性菌生物體的抑制效應(yīng)。不受理論的束縛，本發(fā)明人相信，除了 WMEO中4-HBITC以外還存在的不揮發(fā)性芥菜油對4-HBITC施加分配效應(yīng)，這可減緩或防止其釋放到含水介質(zhì)中，這是對抗微生物的作用所需的。革蘭氏陰性菌微生物具有由脂多糖構(gòu)成的細(xì)胞壁，而革蘭氏陽性菌微生物具有主要由肽聚糖類分子構(gòu)成的細(xì)胞壁。脂多糖類結(jié)構(gòu)中具有高含量的脂質(zhì)，本發(fā)明人相信疏水性化合物如4-HBITC將與該結(jié)構(gòu)密切締合，而肽聚糖類結(jié)構(gòu)中不存在脂質(zhì)，致使此類締合較少。因此，為增強(qiáng)其活性范圍，而且為需要較高風(fēng)味品質(zhì)的應(yīng)用，可實(shí)施具有較低濃度4-HBITC的白芥菜精油的進(jìn)一步富集和凈化。為支持這些應(yīng)用，可如下進(jìn)一步純化WMEO :首先使WMEO與己烷或甲基戊烷以I份WMEO與約I. 2至約I. 3份己烷或甲基戊烷的比率混合，以移除WMEO中的一些甘油三酯材料，并且使包含大部分4-HBITC的下層油層與己烷分離?？蓪⒃撎崛≈貜?fù)一次至兩次以上，以確保WMEO進(jìn)一步富集。然后可將己烷層合并，并且重復(fù)用無水甲醇提取以移除己烷層中的4-HBITC。然后可合并甲醇層和原下層油層，并且減壓蒸發(fā)，以獲得高度富集的具有大于50%的4-HBITC的WME0。此高度純化的WMEO適于加入到需要較高風(fēng)味品質(zhì)的食物和飲料產(chǎn)品中。為易于分配并且為確保較大的穩(wěn)定性，可接著使WMEO與水溶性吸濕物質(zhì)如麥芽糊精以適宜的比率混合。由于WMEO現(xiàn)富含4-HBITC，因此WMEO與麥芽糊精的比率可小于約I : 9。IV.粉末所得低溫烘干并脫脂的干燥芥菜粉可具有約42 %，或約35 %至約45 %，或約35 %至約45%，或約38%至約43%的蛋白質(zhì)含量。所述粉末可具有約2. 5%，或約1%至約5%，和約2%至約4%的脂肪含量。由于移除白芥菜精油的處理，沒有改變具有乳化特性的芥菜種子粘液，并且所得低溫烘干并脫脂的芥菜粉可用于原指定用途，作為肉制品的乳化劑，具有脂肪低的附加有益效果。與低溫烘干的仍具有未遭損壞的白芥子硫苷前體的接觸來自食品供應(yīng)中另一來源的葡萄糖苷酶時(shí)可產(chǎn)生不可取的“熱”的芥菜粉不同，如本文公開的低溫烘干并脫脂的芥菜粉在接觸其它食物源時(shí)將不產(chǎn)生任何“熱”。此外，低溫烘干并脫脂的芥菜粉中的高蛋白質(zhì)含量可使其自身增加其它用途，作為富含蛋白質(zhì)產(chǎn)品中的蛋白質(zhì)源。采用芥菜蛋白質(zhì)的早期方法涉及使用多種溶液從芥菜種子中提取出蛋白質(zhì)組分，從而減弱蛋白質(zhì)組分的乳化特性。本文所述方法允許食物處理者具有靈活性，使用低溫烘干并脫脂的整個(gè)芥菜，或單獨(dú)使用蛋白質(zhì)，沒有因意外活化黑芥子酶體系而產(chǎn)生不可接受的“熱”的風(fēng)險(xiǎn)。因此，本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案涉及低溫烘干并脫脂的芥菜粉。干燥得自上文分離步驟的濕芥菜壓餅后，以良好收率形成脫脂并低溫烘干的芥菜粉。該低溫烘干并脫脂的芥菜粉不存在白芥子硫苷，因?yàn)樗邪捉孀恿蜍找驯凰獬?-羥基芐基異硫氰酸酯，并且黑芥子酶因干燥步驟而被大幅度變性。因此，一個(gè)實(shí)施方案包括低溫烘干并脫脂的芥菜粉。低溫烘干并脫脂的芥菜粉可基本上不含白芥子硫苷，和/或基本上所有的黑芥子酶可被變性。與芥菜粉末相關(guān)的涉及其粘液的乳化特性被充分保留于低溫烘干并脫脂的芥菜粉中。所得低溫烘干并脫脂的芥菜粉可具有約42 %，或約35 %至約45 %，或約35 %至約45 %，或 約38%至約43%的蛋白質(zhì)含量。所述粉末可具有約2. 5%，或約1%至約5%，和約2%至約4%的脂肪含量。由于低溫烘干并脫脂的芥菜粉基本上沒有白芥子硫苷，和/或黑芥子酶已被變性，因此將不出現(xiàn)與濕芥菜粉末相關(guān)的熱覺。因此，芥菜粉末可用于需要乳化劑或高蛋白質(zhì)組分的許多情形。例如，所述粉末可用作當(dāng)前所用芥菜粉末的替代物。具體實(shí)例包括用于肉糜如香腸中；在高蛋白質(zhì)巴型產(chǎn)品中用作與大豆和低芥酸菜籽粗粉相似的高蛋白質(zhì)來源；以及在寵物食品中用作高蛋白質(zhì)組分。存在未發(fā)現(xiàn)充分分布于植物界中的較大量硫氨基酸如胱氨酸和甲硫氨酸以及賴氨酸，應(yīng)增加蛋白質(zhì)組分的品質(zhì)。最后，考慮到若干高價(jià)值組分來源于該低溫烘干并脫脂的芥菜粉，它是非常經(jīng)濟(jì)的。IV.用于測定4-羥基芐基異硫氰酸酯并且鑒定濕氣敏感性異硫氰酸酯化合物的測試方法可采用超臨界流體色譜法測定防腐劑組合物中4-羥基芐基異硫氰酸酯的量。首先將精確稱量的防腐劑組合物溶解在相容的溶劑如乙酸乙酯或乙酸乙酯和乙醇的混合物中，或者固體防腐劑組合物用乙酸乙酯反復(fù)提取。經(jīng)由超臨界流體色譜法,采用具有以下修正的Buskov, S.等人的“Supercriticalfluid chromatography as a method of analysis for the determination of4-hydroxybenzylglucosinolate degradation products，，(Journal of Biochemical andBiophysical Methods,第43卷,第157-174頁,2000),分析這些溶液。使用配備光電二極管陣列檢測器的 Berger SFC 3D 體系(Berger Instruments Inc. , Newark, DE)進(jìn)行分析。將包含對輕基苯甲酸丁酯的乙酸乙酯溶液(IOml)作為內(nèi)標(biāo),注入到Cyano柱(15cmX5mm內(nèi)徑，5 μ m粒度，Phenomenex, Torrance, CA)中。爐溫為50°C。移動(dòng)相為使用4% MeOH作為調(diào)節(jié)劑的CO2，其維持在200巴壓力下并且以2mL/min速率泵送。在226和252nm處檢測洗脫液。4-羥基芐基異硫氰酸酯在約3. Smin處洗脫。其特征可通過用以下方式制得的合成4-羥基芐基異硫氰酸酯純樣本色譜法確認(rèn)。
改進(jìn)由Soledade, Μ. , Pedras, C.和 Smith, K. C.的題目為 “Sinalexin，phytoalexin from whole mustard elicited by destrucin B and Alternariabrassicane”(Phytochemistry, 46 (5),第 833-837 頁，1997)所述的方法，并且如下使用。在IOOmL圓底燒瓶中，將硫光氣(I. Ig, 9. 56mmol)溶于氯仿(20mL)中。隨后,將溶于甲醇(20mL)中的對羥基芐胺(400mg，3. 25mmol)和三乙胺(820mg，8. ImmoI)的溶液滴加到用冰浴保持在0-4°C的攪動(dòng)的溶液中。約30min后，加料結(jié)束，并且允許混合物在冰浴中再保留10分鐘。通過在硅膠60254上使用Fcc洗脫液作為移動(dòng)相的薄層色譜法，跟蹤該反應(yīng)。隨后，在45°C下真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)移除溶劑，并且將殘余物溶于二氯甲烷-乙酸乙酯(49+1 ；4mL)混合物中。通過快速柱層析進(jìn)一步純化所述化合物，其及其改進(jìn)由Still,W.C. ,Kahn,Μ.和Mitra A. , J.描述于 “Rapid chromatographic method for separation with moderateresolution”(Organic Chemistry, 14,第 2923-2925 頁，1978)中。用移動(dòng)相沖刷柱子后，將溶于移動(dòng)相(4mL)中的反應(yīng)產(chǎn)物放置在柱子頂部。通過以一定方式調(diào)整氬氣過壓以使得溶劑頂端以約2inch/min下降，以進(jìn)行洗脫。收集IOmL的等分試樣。目標(biāo)化合物通常在6-10部分洗脫出來。將該部分合并，并且在45°C下真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)移除溶劑后，獲得黃色的油(典型收率66%)。通過⑶Cl3中的H1-NMRXDCl3中的C13-NMR、以及電子轟擊模式下運(yùn) 行的GC-MS，證實(shí)4-羥基芐基異硫氰酸酯的結(jié)構(gòu)。通過在室溫下將包含異硫氰酸酯的材料懸浮于含水磷酸鹽緩沖液(pH為約3. 6)中，鑒定濕氣敏感性異硫氰酸酯化合物。充分搖動(dòng)所得懸浮液，并且將起點(diǎn)樣品移入分液漏斗中，并且用乙酸乙酯提取。再用兩體積乙酸乙酯重復(fù)該提取。將分離出的乙酸乙酯層合并，并且在無水硫酸鈉上干燥，并且在用超臨界流體色譜法分析起點(diǎn)異硫氰酸酯濃度前保持冷凍。為測定異硫氰酸酯化合物對水解降解的靈敏性，將異硫氰酸酯懸浮液在約20°C至約23°C的溫度下儲藏約24小時(shí)。在24小時(shí)后重復(fù)該提取過程，并且用超臨界流體色譜法測定殘余的異硫氰酸酯化合物的量。濕氣敏感性異硫氰酸酯化合物的特征在于，在約24小時(shí)后異硫氰酸酯的濃度與起點(diǎn)濃度或起始濃度相比降低至少約20%。VI.實(shí)施例實(shí)施例I通過將水加至磨碎的白芥菜種子，然后根據(jù)本領(lǐng)域描述的已知方法用超臨界二氧化碳提取精油，以產(chǎn)生白芥菜精油。提取后，經(jīng)由離心或真空下干燥，立即將殘余水分從精油中移除。所得白芥菜精油包含約25重量％的4-羥基芐基異硫氰酸酯。在室溫(約20-230C )下，將精油懸浮于含水磷酸鹽緩沖液(pH為約3. 6)中，并且如上文部分中所述，在起點(diǎn)和儲藏約24小時(shí)后測定4-羥基芐基異硫氰酸酯的含量。在24小時(shí)后，4-羥基芐基異硫氰酸酯含量的百分降低率為約72%。因此，4-羥基芐基異硫氰酸酯為濕氣敏感性異硫氰酸酯化合物。實(shí)施例2如下制備白芥菜精油首先使用Rosedowns Mini 200螺桿壓機(jī)裝置冷榨800kg白芥菜種子。所得壓餅在約75-78°C下離開壓機(jī)，并且由錘磨作用立即冷卻至室溫。壓餅的油含量為17%。將約340kg錘磨過的白芥菜壓餅加入到帶式共混機(jī)中，并且向其加入78g抗壞血酸，同時(shí)共混以確保均勻混合。在室溫下以小比例加入約102kg自來水，以確保壓餅均勻潤濕。在混合約10-15分鐘后，將潤濕且黑芥子酶活化的壓餅轉(zhuǎn)移到包含626kg乙酸乙酯的攪動(dòng)的溶劑槽中。在室溫下，活化的濕芥菜壓餅和乙酸乙酯漿液在密閉的溶劑槽中攪拌約4小時(shí)，以確保4-羥基芐基異硫氰酸酯自濕白芥菜壓餅產(chǎn)生并轉(zhuǎn)移到乙酸乙酯中。在反應(yīng)階段結(jié)束時(shí)，將濕白芥菜壓餅的乙酸乙酯漿液泵送至潷析離心機(jī)中，以使乙酸乙酯與濕白芥菜壓餅分離。乙酸乙酯層收集于靜態(tài)溶劑槽中，而將具有某些殘余乙酸乙酯的濕白芥菜壓餅直接轉(zhuǎn)移到真空輔助的帶式烘干機(jī)中。真空條件允許濕乙酸乙酯離開芥菜壓餅，并且冷凝于外部冷凝器中。分離出乙酸乙酯頂層，并且儲存以供再次使用，而將水層放出。芥菜壓餅繼續(xù)在連續(xù)帶上行進(jìn)至烘干機(jī)底部，此處不含溶劑的干燥芥菜壓餅經(jīng)由螺桿傳送裝置離開。對該低溫烘干并脫脂的芥菜粉進(jìn)行其總組成和其氨基酸組成的分析。將包含WMEO的乙酸乙酯層泵送至保持在約56cmHg真空下的升膜式蒸發(fā)器中，以從白芥菜精油中移除乙酸乙酯。蒸發(fā)步驟獲得約65. 5kg包含8. 4%的4-羥基芐基異硫氰酸酯的 WMEO。 實(shí)施例3
如下制備白芥菜精油首先使用KK8型單螺桿壓機(jī)(KERNKRAFT，Moosbauer andRieglsperger GbR. Germany)冷榨5kg白芥菜種子，以獲得具有6. 8%不揮發(fā)性油的白芥菜壓餅和約60°C的溫度。將壓餅錘磨，以提供均勻粉末，并且在秤盤上稱出151. 5g粉末。在配備頂部傳動(dòng)攪拌器的密閉混合容器中，使45. 5g自來水與305mL乙酸乙酯和O. 036g加入的抗壞血酸混合，同時(shí)攪拌。加入抗壞血酸后，立即將部分脫脂的芥菜粉末加入到混合容器中，并且高速混合以確保均勻分散。當(dāng)已形成均勻漿液時(shí)，將速率減慢，并且再持續(xù)混合4小時(shí)。此時(shí)將漿液從混合容器中移除并且離心，以使乙酸乙酯與部分脫脂的濕芥菜壓餅分離。從離心管中潷析出乙酸乙酯，并且減壓蒸發(fā)，獲得約9. 5g包含27%的4-羥基芐基異硫氰酸酯的白芥菜精油。實(shí)施例4通過根據(jù)以下制劑，將實(shí)施例2的白芥菜精油與麥芽糊精一起研磨，制備粉末狀防腐劑組合物。
重量％ 重量
白齊菜精油(得自實(shí)施例2)10.0% lO.Og
L0103J麥芽糊精(15 DE)90.0% 900g
總計(jì)100%IOOg將材料共混物緊密混合，或使用研缽和研杵研磨。所得防腐劑組合物中4-羥基芐基異硫氰酸酯的含量為約O. 84重量％。在室溫(約21. 1°C)下，粉末狀防腐劑組合物中的4-羥基芐基異硫氰酸酯的含量在防腐劑組合物儲藏期間保持穩(wěn)定。實(shí)施例5通過根據(jù)以下制劑，將實(shí)施例3的白芥菜精油與麥芽糊精一起研磨，制備粉末狀防腐劑組合物。
重量％ 重量
白齊菜精油(得自實(shí)施例2)10.0% 7
麥芽糊精(15 DE)90.0% 90.0
總計(jì)100°/。IOOg 將材料共混物緊密混合，或使用研缽和研杵研磨。所得防腐劑組合物中4-羥基芐基異硫氰酸酯的含量為約2.6重量％。在室溫(約21. rc )下，粉末狀防腐劑組合物中的4-羥基芐基異硫氰酸酯的含量在防腐劑組合物儲藏期間保持穩(wěn)定。實(shí)施例6用生長在胰酪胨大豆瓊脂斜面(35°C下培養(yǎng))上的金黃色葡萄球菌(ATCC 6538)、腸炎沙門氏菌(ATCC 13076)、單核細(xì)胞增多性李斯特菌(ATCC 7644)以及生長在產(chǎn)氣莢膜梭菌(SFP)瓊脂斜面(厭氧條件下，35°C下培養(yǎng))上的產(chǎn)氣莢膜梭菌(ATCC 3624)培養(yǎng)物的20-24小時(shí)舊培養(yǎng)物，接種蛋白胨培養(yǎng)液(O. 5重量％，pH7. I)。起始計(jì)數(shù)介于IXlO5和IXlO7Cfu ml/1之間。將實(shí)施例4的粉末狀防腐劑組合物加入到接種的培養(yǎng)基中，以達(dá)到350mg Γ1的起始4-HBITC含量，并且充分搖晃。樣品儲存在6. 5°C下，并且根據(jù)USP26 (United States Pharmacopoeia, Rockville, MD, USA),在用 Letheen 中和一天后，放置在微生物含量測試(MCT)瓊脂上。微生物計(jì)數(shù)的平均對數(shù)降低對金黃色葡萄球菌而言為
2.23，對腸炎沙門氏菌而言為I. 61，對單核細(xì)胞增多性李斯特菌而言為O. 80，并且對產(chǎn)氣 莢膜梭菌而言為2.17。實(shí)施例7用金黃色葡萄球菌(ATCC 6538)、腸炎沙門氏菌(ATCC 13076)、單核細(xì)胞增多性李斯特菌(ATCC 7644)的20-24小時(shí)舊胰酪胨大豆瓊脂斜面，接種蛋白胨培養(yǎng)液(O. 5重量％，pH7. I)。產(chǎn)氣莢膜梭菌(ATCC3624)培養(yǎng)物生長在產(chǎn)氣莢膜梭菌(SFP)瓊脂斜面上，并且在厭氧條件下，35°C下培養(yǎng)。起始計(jì)數(shù)介于I X IO5 I X IO7Cfu ml/1之間。將實(shí)施例5的粉末狀防腐劑組合物加入到接種的培養(yǎng)基中，以達(dá)到360mg I/1的起始4-HBITC含量，并且充分搖晃。樣品儲存在6. 5°C下,并且根據(jù)USP 26 (United States Pharmacopoeia,Rockville，MD，USA)，在用Letheen中和一天后，放置在微生物含量測試(MCT)瓊脂上。微生物計(jì)數(shù)的平均對數(shù)降低對金黃色葡萄球菌而言為3. 95，對腸炎沙門氏菌而言為4. 93，對單核細(xì)胞增多性李斯特菌而言為4. 17，并且對產(chǎn)氣莢膜梭菌而言為5. 40。本文所公開的尺寸和數(shù)值不應(yīng)被理解為嚴(yán)格限于所述確切數(shù)值。相反，除非另外指明，每個(gè)上述尺寸旨在表示所述值以及該值附近的函數(shù)等效范圍。例如，所公開的尺寸“40_”旨在表示“約40_”。除非明確地不包括在內(nèi)或換句話講限制，本文所引用的每篇文獻(xiàn)，包括任何交叉引用的或相關(guān)的專利或?qū)＠暾?，均特此以引用方式全文并入本文。任何文獻(xiàn)的引用不是對其作為本文所公開的或受權(quán)利要求書保護(hù)的任何發(fā)明的現(xiàn)有技術(shù)，或者其單獨(dú)地或者與任何其它參考文獻(xiàn)的任何組合，或者參考、提出、建議或公開任何此類發(fā)明的認(rèn)可。此外，當(dāng)本發(fā)明中術(shù)語的任何含義或定義與以引用方式并入的文件中術(shù)語的任何含義或定義矛盾時(shí)，應(yīng)當(dāng)服從在本發(fā)明中賦予該術(shù)語的含義或定義。盡管已用具體實(shí)施方案來說明和描述了本發(fā)明，但是對那些本領(lǐng)域的技術(shù)人員顯而易見的是，在不脫離本發(fā)明的實(shí)質(zhì)和范圍的情況下可作出許多其它的改變和變型。因此，隨附權(quán)利要求書中旨在涵蓋本發(fā)明范圍內(nèi)的所有這些改變和變型。
權(quán)利要求
1.一種產(chǎn)生精油的方法，包括 a)提供包含葡糖異硫氰酸酯前體和黑芥子酶的植物材料，其中所述植物材料包含不揮發(fā)性油； c)降低所述植物材料的粒度以產(chǎn)生粉末； d)通過使用水溶劑和促進(jìn)劑活化所述黑芥子酶以形成漿液，其中所述黑芥子酶催化所述葡糖異硫氰酸酯前體產(chǎn)生包含異硫氰酸酯的精油； e)將所述漿液分離成精油和殘余溶劑。
2.—種產(chǎn)生精油的方法，包括 a)提供包含前體白芥子硫苷和黑芥子酶的芥菜種子，其中所述芥菜種子包含不揮發(fā)性油； b)任選地，降低所述芥菜種子中的不揮發(fā)性油含量； c)降低所述種子的粒度以產(chǎn)生芥菜粉末； d)通過使用水溶劑和促進(jìn)劑活化所述黑芥子酶以形成漿液，其中所述黑芥子酶催化所述白芥子硫苷前體產(chǎn)生包含異硫氰酸酯的精油； e)將所述漿液分離成精油和殘余溶劑。
3.如任一項(xiàng)前述權(quán)利要求所述的方法，并且其中精油包含白芥菜精油，更優(yōu)選地，其中所述精油包含濕氣敏感性異硫氰酸酯化合物，并且甚至更優(yōu)選地，其中所述精油包含4-羥基節(jié)基異硫氰1酸酷。
4.如任一項(xiàng)前述權(quán)利要求所述的方法，并且其中所述精油包含白芥菜精油，所述白芥菜精油包含約5%至約35%的4-羥基芐基異硫氰酸酯。
5.如任一項(xiàng)前述權(quán)利要求所述的方法，并且其中使所述芥菜種子中的不揮發(fā)性油含量從約26%至28%降低至約2%至約10%。
6.如任一項(xiàng)前述權(quán)利要求所述的方法，并且其中所述降低步驟在小于約70C下通過機(jī)械壓榨被執(zhí)行。
7.如任一項(xiàng)前述權(quán)利要求所述的方法，并且其中所述降低粒度包括由所述芥菜種子產(chǎn)生芥菜粉末。
8.如任一項(xiàng)前述權(quán)利要求所述的方法，并且其中所述水溶劑包含乙酸乙酯。
9.如任一項(xiàng)前述權(quán)利要求所述的方法，并且其中所述促進(jìn)劑包含濃度為約O.75毫摩爾至約3毫摩爾的抗壞血酸。
10.如任一項(xiàng)前述權(quán)利要求所述的方法，并且其中所述水溶劑包含乙酸乙酯和水，芥菜與水以及乙酸乙酯的比率按重量計(jì)為約1:0. 25:1. 5至約1:0. 5:3。
11.如任一項(xiàng)前述權(quán)利要求所述的方法，并且其中活化進(jìn)行約I小時(shí)至約8小時(shí)。
12.如任一項(xiàng)前述權(quán)利要求所述的方法，并且其中所述分離包括 1)將所述漿液分離成富含精油的溶劑和殘余的濕芥菜粉餅；并且 2)將所述富含精油的溶劑分離成精油和殘余溶劑，其中所述精油包含約5%至約35%的濕氣敏感性異硫氰酸酯化合物。
13.如任一項(xiàng)前述權(quán)利要求所述的方法，并且其中所述分離還包括將所述濕芥菜粉餅分離成低溫烘干并脫脂的芥菜粉和第二殘余溶劑。
14.一種產(chǎn)生精油的方法，包括a)提供包含前體白芥子硫苷和黑芥子酶的芥菜種子； b)降低所述種子的粒度以產(chǎn)生芥菜粉末； c)通過使用水溶劑和促進(jìn)劑活化所述黑芥子酶以形成漿液，其中所述黑芥子酶催化所述白芥子硫苷前體產(chǎn)生包含異硫氰酸酯的精油； d)將所述漿液分離成富含精油的溶劑和殘余的濕芥菜粉餅； e)將所述精油與所述溶劑分離； f)將所述精油分配到烴溶劑中； g)將所述富含異硫氰酸酯的油與所述烴溶劑分離。
15.如權(quán)利要求14所述的方法，并且其中所述精油包含白芥菜精油，并且其中所述白芥菜精油包含4-羥基芐基異硫氰酸酯。
全文摘要
產(chǎn)生精油的方法。所述精油能夠是白芥菜精油。所述白芥菜精油能夠包括濕氣敏感性異硫氰酸酯化合物。所述濕氣敏感性異硫氰酸酯化合物能夠是4-HBITC。所述精油能夠由芥菜種子產(chǎn)生，所述芥菜種子能夠包含前體白芥子硫苷和黑芥子酶。所述芥菜種子能夠降低成粉末。通過使用水溶劑和促進(jìn)劑活化所述黑芥子酶以形成漿液能夠被執(zhí)行，其中所述黑芥子酶催化所述白芥子硫苷前體產(chǎn)生包含異硫氰酸酯的精油。
文檔編號A61K36/31GK102811727SQ201180016867
公開日2012年12月5日 申請日期2011年3月22日 優(yōu)先權(quán)日2010年3月31日
發(fā)明者A.?？{亞克, S.A.文迪斯特, J.J.克斯特, P.H.佐滕達(dá)姆, J.R.D.戴維 申請人:寶潔公司