專利名稱：蒼耳七中2-酮型-β-二氫沉香呋喃倍半萜類化合物其制備方法及應用的制作方法
技術領域：
本發(fā)明屬于醫(yī)藥技術領域，涉及一種抗腫瘤化合物，具體地說，涉及一種蒼耳七中2-酮型-β - 二氫沉香呋喃倍半萜類新化合物其制備方法及應用。
背景技術：
惡性腫瘤是嚴重危害人類生命的疾病，其死亡率僅次于心腦血管疾病，且發(fā)生率有逐年上升的趨勢?？鼓[瘤藥物研究多年來一直是世界藥學研究的熱點和重點。抗腫瘤化學藥物因毒副作用大，而使其臨床應用受到很大限制，因此近年來從天然產(chǎn)物中尋找新的具有抗腫瘤活性的藥物受到人們越來越多的關注。目前，天然的二氫沉香呋喃類化合物主要從衛(wèi)矛科植物中得到。近幾十年來，先后有數(shù)百種β - 二氫沉香呋·喃類化合物從衛(wèi)矛科南蛇藤屬、衛(wèi)矛屬和雷公藤屬等植物中分離得到，這些化合物結構新穎，類型多樣，具有多種生物活性，如胃毒、麻醉、拒食等殺蟲活性、細胞毒性，免疫抑制，抗癌促進，抗HIV，抗結核病毒活性及對腫瘤細胞多藥抗性修復等活性等。β - 二氫沉香呋喃類化合物廣泛應用于醫(yī)藥和農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中，如美登木、昆明山海棠、苦皮藤、雷公藤等。在南美，美登木屬植物的根皮提取物常被用于治療潰瘍、炎癥、消化不良及其他一些腸胃紊亂癥狀。第一個β_二氫沉香呋喃類殺蟲活性成分雷公藤堿的分離鑒定掀起了人們對該類化合物的研究熱潮。研究表明，具有很強殺蟲能力的主要成分為β_ 二氫沉香呋喃多元酯，值得注意的是該類化合物都是以4-β羥基為核心結構，對一些農(nóng)業(yè)害蟲具有較強的毒殺、麻醉和拒食活性。β - 二氫沉香呋喃類化合物雖然母體結構簡單，但取代基數(shù)量從2取代到9取代不定，且取代類型復雜多樣，故該類化合物結構類型復雜多樣。現(xiàn)有的具有殺蟲、抗腫瘤等活性的二氫沉香呋喃類化合物大多數(shù)以4-β羥基為核心結構，而少見2-酮型-β-二氫沉香呋喃類化合物結構，并且對2-酮型-β - 二氫沉香呋喃類化合物的抗抗腫瘤活性研究未見報道。

發(fā)明內容
本發(fā)明的目的在于彌補現(xiàn)有技術的空白，提供一種蒼耳七中2-酮型-β-二氫沉香呋喃倍半萜類化合物其制備方法及應用。該化合物是從一種二氫沉香呋喃類化合物
的新植物來源----虎耳草科蒼耳七植物(Parnassia wightiana Wall)中分離得到的一個
新的2-酮型-β-二氫沉香呋喃倍半萜類化合物?；衔锩Q為:(1S，4R，5S，6R，7R，8S，9S，I OR) -1 β -乙酰氧基-6 β，9 β - 二苯甲酰氧基-2-酮基-8 β -羥基-β - 二氫沉香呋喃。通過對該化合物的人體腫瘤細胞抗增殖實驗，發(fā)現(xiàn)該化合物是一種新的具有高選擇性、低毒副作用的天然抗腫瘤化合物。其具體技術方案為:
一種蒼耳七中2-酮型-β-二氫沉香呋喃倍半萜類化合物，具體為(1S，4R，5S，6R, 7R, 8S, 9S, I OR) -1 β -乙酸氧基 _6 β，9 β - _-苯甲酸氧基 ~2~ 酮基-8 β -輕基-β - _.氫沉香呋喃。所述化合物為白色粉末，分子式為C31H34O9，電噴霧電離質譜(ES1-MS):m/ζ550.22[M]+，高分辨電噴霧電離質譜(HR-ES1-MS):m/z573.2115 [M+Na] +。一種蒼耳七中2-酮型_β - 二氫沉香呋喃倍半萜類化合物的制備方法，包括以下步驟:蒼耳七全草干重1250g，用95%的乙醇進行室溫浸提，共提取5次，每次12h，旋轉蒸干后得到乙醇相浸膏；將乙醇相浸膏懸浮于水，依次分別用石油醚，乙酸乙酯，正丁醇進行萃??；乙酸乙酯萃取物用水懸浮后，分別用石油醚、乙醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取，得C-E-1 (石油醚提取層)、C-E-2 (乙醚提取層)、C-E-3 (乙酸乙酯提取層)、C_E_4 (正丁醇提取層)，利用制備高效液相色譜(HPLC)對C-E-3組分進行分離，得到C-E-3-1 C-E-3-6六個組分，對C-E-3-5組分再次利用制備高效液相色譜(HPLC)進行分離純化，得到蒼耳七中2-酮型-β - 二氫沉香呋喃倍半萜類化合物。 本發(fā)明所述蒼耳七中2-酮型-β - 二氫沉香呋喃倍半萜類化合物在制備抗腫瘤藥物中的應用。與現(xiàn)有技術相比，本發(fā)明的有益效果為:本發(fā)明為一種新的從虎耳草科蒼耳七植物中分離得到的抗腫瘤化合物(1S，4R，5S，6R，7R，8S，9S，I OR)-1 β -乙酰氧基-6 β，9 β - 二苯甲酰氧基 _2_ 酮基-8 β -羥基-β - 二氫沉香呋喃。該化合物用于抑制人體肝癌細胞和人體乳腺癌細胞增殖的應用，從而為抗腫瘤新藥提供新的先導化合物或者活性成分，并對開發(fā)利用蒼耳七植物資源提供了重要的理論依據(jù)。本發(fā)明的初步體外抗腫瘤實驗結果表明，該化合物能抑制腫瘤細胞株的生長。在以人體肝癌細胞株H印G2和人體乳腺癌細胞株MDA-10為靶細胞的MTT還原法檢測抗腫瘤活性試驗中，該化合物的IC5tl分別為16.92μΜ和13.27 μ Μ，表明該化合物可用于制備抗腫瘤新型藥物。


圖1為本發(fā)明蒼耳七中2-酮型_β - 二氫沉香呋喃倍半萜類化合物的結構式。
具體實施例方式下面結合附圖和具體實施方式
對本發(fā)明的技術方案作進一步詳細地說明。本發(fā)明提供了一種新的從虎耳草科蒼耳七植物中分離得到的抗腫瘤化合物(1S，4R, 5S，6R，7R，8S，9S，10R) -1 β -乙酰氧基 _6 β，9 β - 二苯甲酰氧基-2-酮基-8 β -羥基-β _ 二氫沉香呋喃，其結構式如圖1所不。該化合物為白色粉末，分子式為C31H34O9。電噴霧電離質譜(ES1-MS):m/z550.22[M]+，高分辨電噴霧電離質譜(HR-ES1-MS):m/z573.2115 [M+Na] +。利用一維核磁共振譜(ID-NMR)和二維核磁共振譜(2D-NMR)和圓二色譜(CD)確定了其結構和絕對構型。

實施例1:化合物的制備一、提取
蒼耳七全草干重1250g，用95 %的乙醇進行室溫浸提，共提取5次，每次12h。旋轉蒸干后得到乙醇相浸膏，然后懸浮于水，依次分別用石油醚，乙酸乙酯，正丁醇進行萃取，得到石油醚相36.43g、乙酸乙酯相9.52g、正丁醇相13.0Og和水相35.37g。二、粗分蒼耳七乙酸乙酯萃取物用水懸浮后，分別用石油醚、乙醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取，得C-E-1 (石油醚提取層)、C-E-2 (乙醚提取層)、C-E-3 (乙酸乙酯提取層，5g)、C_E_4 (正丁醇提取層)。三、分離取C-E-3浸膏5g，用甲醇:四氫呋喃(50: 50)40ml溶解，0.45 μ m濾膜過濾，利用高壓制備液相在室溫下進行制備，檢測波長為214/254nm，流速為100ml/min，進樣量
4.5ml ο進行梯度洗脫，其中流動相A為lOmmol/L NH4HCO3水溶液，B為乙腈。流動相設置為:0-15min, B從45%增加到85% ;15_20min, B從85%增加到95% ；20-24min, B 從 95%下降到 45%。將該組分分為六個部分，分別標記為:C-E-3_1 (0-2.8min)、C-E-3-2 (2.8-5.5min)、C-E-3-3 (5.5-1 2.0min)、C-E-3-4 (12.0-15.0min)、C-E-3-5(15.0-18.0min)、C-E-3_6(18.0-23.0min)。將分得的樣品在 60°C蒸去有機溶劑以及大部分水，再冷凍干燥得到固體粉末。取C-E-3-5粉末用甲醇15ml溶解，0.45um濾膜過濾，利用Waters高壓制備液相配合2767收集器，2545主 泵，515補償泵，2489紫外雙波長檢測器在室溫下進行制備，檢測波長為214/254nm，流速為30ml/min，進樣量1.0ml，進行梯度洗脫。流動相A為0.1 % NH3H2O水溶液，B為乙腈。流動相設置為:0_20min，B從54%增加至Ij 64% ；20-25min, B 從 64%增加到 95%。將該組分分為六個部分，分別標記為:C-E-3-5_l (11.13min)、C-E-3-5-2(I1.93min)、C-E-3-5-3(13.20min)、C-E-3-5-4(15.92min)、C-E-3-5-5(17.25min)、C-E-3-5_6 (18.0lmin)。將分得的樣品于60°C蒸去有機溶劑以及大部分水，再冷凍干燥得到固體粉末，其中C-E-3-5-5(110mg)為我們所獲得新單體化合物。四、化合物結構鑒定該化合物通過一維核磁共振譜(ID-NMR)、二維核磁共振譜(2D-NMR)、質譜(MS)、紅外光譜(IR)、紫外光譜(UV)和圓二色譜(CD)等方法進行了結構分析和鑒定。1H和13C的核磁數(shù)據(jù)見表I。Tablel.化合物的1H和13C核磁數(shù)據(jù)(CDC13)
權利要求
1.一種蒼耳七中2-酮型-β-二氫沉香呋喃倍半萜類化合物，具體為(1S，4R，5S，6R, 7R, 8S, 9S, I OR) -1 β -乙酸氧基 _6 β，9 β - _-苯甲酸氧基 ~2~ 酮基-8 β -輕基-β - _.氫沉香呋喃，所述化合物為白色粉末，分子式為C31H34O9 ;電噴霧電離質譜(ES1-MS):m/ζ550.22[M]+，高分辨電噴霧電離質譜(HR-ES1-MS):m/z573.2115 [M+Na] +。
2.—種權利要求1所述蒼耳七中2-酮型-β - 二氫沉香呋喃倍半萜類化合物的制備方法，其特征在于，包括以下步驟:蒼耳七全草干重1250g，用95%的乙醇進行室溫浸提，共提取5次，每次12h，旋轉蒸干后得到乙醇相浸膏；將乙醇相浸膏懸浮于水，依次分別用石油醚，乙酸乙酯，正丁醇進行萃?。灰宜嵋阴ポ腿∥镉盟畱腋『?，分別用石油醚、乙醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取，得C-E-1石油醚提取層、C-E-2乙醚提取層、C-E-3乙酸乙酯提取層、C-E-4正丁醇提取層，利用高壓制備液相對C-E-3組分進行分離，得到C-E-3-1到C-E-3-6六個組分，對C-E-3-5組分再次利用高壓制備液相進行分離純化，得到蒼耳七中2-酮型-β - 二氫沉香呋喃倍半萜類化合物。
3.權利要求1所述蒼耳七中2-酮型-β- 二氫沉香呋喃倍半萜類化合物在制備抗腫瘤藥物中的 應用。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種蒼耳七中2-酮型-β-二氫沉香呋喃倍半萜類化合物其制備方法及應用，具體為從虎耳草科蒼耳七植物中分離得到一種新的β-二氫沉香呋喃倍半萜類化合物，其分子式為C31H34O9。經(jīng)現(xiàn)代光譜分析，確定了該化合物的化學結構及立體構型，命名為(1S，4R，5S，6R，7R，8S，9S，10R)-1β-乙酰氧基-6β，9β-二苯甲酰氧基-2-酮基-8β-羥基-β-二氫沉香呋喃。體外抗腫瘤試驗表明，該化合物對HepG2人體肝癌細胞和MDA-10人體乳腺癌細胞增殖具有明顯的抑制作用。本發(fā)明可為研究新的抗腫瘤藥物提供先導化合物，并對開發(fā)利用β-二氫沉香呋喃類化合物的新植物來源-虎耳草科蒼耳七植物提供了重要的理論依據(jù)。
文檔編號A61P35/00GK103073529SQ201310023928
公開日2013年5月1日 申請日期2013年1月3日 優(yōu)先權日2013年1月3日
發(fā)明者王冬梅, 李登武, 浦文君, 劉建軍 申請人:西北農(nóng)林科技大學