一種制備高純度丹參酮化合物的雙柱循環(huán)分離系統(tǒng)及其方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及制備高純度丹參酮化合物的雙柱循環(huán)分離系統(tǒng)及其方法，雙柱循環(huán)分離系統(tǒng)包括三個(gè)逆流色譜柱，三個(gè)泵，三個(gè)檢測(cè)器，三個(gè)收集器和三個(gè)六通閥。以第一逆流色譜柱做起始分離柱，第二逆流色譜柱和第三逆流色譜柱做相互獨(dú)立的循環(huán)分離柱，通過(guò)調(diào)節(jié)第二六通閥和第三六通閥即可實(shí)現(xiàn)丹參酮類化合物多維循環(huán)分離。丹參酮類化合物包括二氫丹參酮Ⅰ、三葉鼠尾酮B和甲基丹參酮酯。本發(fā)明提取分離簡(jiǎn)單、時(shí)間短，產(chǎn)物純度高，可連續(xù)化操作，適于工業(yè)化生產(chǎn)。
【專利說(shuō)明】一種制備高純度丹參酮化合物的雙柱循環(huán)分離系統(tǒng)及其方
法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種制備高純度丹參酮化合物的雙柱循環(huán)分離系統(tǒng)及其方法。
【背景技術(shù)】
[0002]逆流色譜(Counter-current chromatography CCC)是一種不需要固體支持物的液液分配色譜，因此可以避免固體支持物帶來(lái)的缺點(diǎn)，例如樣品損失，活性變化，拖尾以及污染。相比于高效液相色譜(High performance liquid chromatography HPLC), CCC 擁有更大的制備裝載量和更好的選擇性。因此，從微量分析到制備分離甚至工業(yè)生產(chǎn)，CCC仍是一種重要的分離純化技術(shù)。然而，逆流色譜的分辨率仍然遠(yuǎn)遠(yuǎn)小于HPLC、氣相色譜(Gaschromatography GC)和毛細(xì)管電泳(Capillary electrophoresis CE)。但是研究者米取了很多方法改善這一缺點(diǎn)，到目前為止，已經(jīng)在柱子排列順序，提高離心力，采用不同形狀繞線圈等方面進(jìn)行了改進(jìn)。
[0003]通常情況下，增加柱子長(zhǎng)度會(huì)提高分離效率，但是單純?cè)黾又拥奈锢黹L(zhǎng)度不僅需要占用更大空間，同時(shí)需要耗費(fèi)更多成本增加儀器及溶劑。循環(huán)分離則是一種有效的解決方法，它沒(méi)有增加柱子的物理長(zhǎng)度，而是將尾端洗脫液進(jìn)入首端進(jìn)行循環(huán)分離，這樣既可以節(jié)省空間，又可以節(jié)約試劑，循環(huán)分離最大的風(fēng)險(xiǎn)是分開(kāi)的物質(zhì)因循環(huán)后導(dǎo)致混合在一起，因此如何避免返混是利用循環(huán)分離的最大技術(shù)難點(diǎn)?，F(xiàn)有的循環(huán)色譜多是用單柱進(jìn)行循環(huán)，同時(shí)采用填充柱色譜，柱尾端壓力較大導(dǎo)致材料要求高，也因死吸附等使樣品容易損失；有些循環(huán)分離中沒(méi)有將檢測(cè)器放在循環(huán)中，因此無(wú)法實(shí)時(shí)檢測(cè)分離情況。
[0004]丹參(Salvia miltiorrhiza Bunge)是唇形科植物丹參的干燥根和莖，始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，被列為上品。其味苦，性微寒，歸心、肝二經(jīng)，具有活血通絡(luò)，祛瘀止痛、涼血消癰、除煩安神等功效，中醫(yī)有“一味丹參飲，功同四物湯”之說(shuō)。丹參酮(Tanshinones)是丹參中具有橙黃色和橙紅色特征的脂溶性二萜類化合物，按其結(jié)構(gòu)不同分為丹參酮1、丹參酮II A、丹參酮II B、隱丹參酮、二氫丹參酮1、羥基丹參酮、丹參酮甲酯、異丹參酮、異隱丹參酮等10多種成分。由于醌類成分已被還原成二酚類衍生物，后者又被氧化為醌，因此起到電子傳遞的作用。它們作為新陳代新的產(chǎn)物，通過(guò)促進(jìn)或干擾生物多種生化反應(yīng)，表現(xiàn)出多種生物活性。藥理活性研究表明，丹參酮在抗腫瘤、心血管疾病、抗菌消炎等方面均有良好的治療作用。
[0005]丹參酮易溶于乙醇、甲醇等有機(jī)溶劑。傳統(tǒng)的制備方法是粉碎浸泡提取后用柱層析(薄層色譜、硅膠柱色譜、制備液相色譜)反復(fù)富集純化，但是這些制備方法經(jīng)常耗時(shí)而且會(huì)因?yàn)橹盍系奈蕉斐蓸悠窊p失，專利CN200610017897.4提供一種用正相硅膠柱、乙酸乙酯、苯、氯仿、60-90規(guī)格的石油醚多次提取的方法分離丹參酮，其分離次數(shù)過(guò)多，操作繁瑣，且使用了苯、氯仿等對(duì)環(huán)境污染較大的溶劑；專利CN201210549910.6中提供的丹參酮提取物及其水溶物的制備方法中只是用乙醇浸提、回流提取、減壓濃縮、純水洗滌等步驟，得到的產(chǎn)物中丹參酮II A含量?jī)H有10.0%?15.0%，隱丹參酮物質(zhì)含量為8.0%?11.0%。
【發(fā)明內(nèi)容】

[0006]本發(fā)明的目的是針對(duì)上述現(xiàn)有丹參酮分離制備過(guò)程中分離流程長(zhǎng)、所用溶劑環(huán)境危害性大、回收率不高等缺陷，而提供一種提取分離簡(jiǎn)單、可連續(xù)化操作的制備高純度丹參酮化合物的雙柱循環(huán)分離系統(tǒng)及其方法。
[0007]本發(fā)明的目的是這樣實(shí)現(xiàn)的:
[0008]本發(fā)明的制備高純度丹參酮化合物的雙柱循環(huán)分離系統(tǒng)，包括三個(gè)逆流色譜柱，三個(gè)泵，三個(gè)檢測(cè)器，三個(gè)收集器和三個(gè)六通閥；其中第一六通閥做進(jìn)樣閥，該進(jìn)樣閥與第一逆流色譜柱首端及第一泵相連，第一逆流色譜柱的尾端與第一檢測(cè)器的輸入端相連，第一檢測(cè)器的輸出端與第二六通閥的第II節(jié)點(diǎn)相連，第二六通閥的第I節(jié)點(diǎn)與第一收集器相連；第二六通閥的第III節(jié)點(diǎn)與第二泵的輸入端相連，第二泵的輸出端與第二逆流色譜柱的首端相連，第二逆流色譜柱的尾端與第二檢測(cè)器的輸入端相連，第二檢測(cè)器的輸出端與第三六通閥的第I節(jié)點(diǎn)相連，第三六通閥的第二節(jié)點(diǎn)與第二收集器相連；第三六通閥的第V節(jié)點(diǎn)與盛裝流動(dòng)相容器相連，第三六通閥的第VI節(jié)點(diǎn)與第三泵的輸入端相連，第三泵的輸出端與第三逆流色譜柱的首端相連，第三逆流色譜柱的尾端與第三檢測(cè)器的輸入端相連，第三檢測(cè)器的輸出端與第二六通閥的第IV節(jié)點(diǎn)相連，第二六通閥的第V節(jié)點(diǎn)與第三收集器相連。
[0009]利用本發(fā)明的雙柱循環(huán)分離系統(tǒng)制備高純度丹參酮化合物的方法，該丹參酮類化合物包括結(jié)構(gòu)式(I) 二氫丹參酮1、結(jié)構(gòu)式(2)三葉鼠尾酮B和結(jié)構(gòu)式(3)甲基丹參酮酯，
[0010]
CuCu
⑴ (2) (d)
[0011]其制備包括以下步驟:
[0012](I)將丹參根莖粉碎后，用體積濃度95%的乙醇充分浸泡提?。?br> [0013](2)減壓濃縮乙醇提取液，得到的濃縮物用正相硅膠拌樣，再依次用石油醚、乙酸乙酯、甲醇和水進(jìn)行洗脫，得到富含二氫丹參酮1、三葉鼠尾酮B和甲基丹參酮酯的丹參酮提取物；
[0014](3)配制四元溶劑體系:將正己烷、乙酸乙酯、甲醇和水按體積百分比分別為68.70%、24.91%, 3.64%和2.75%配制的四元溶劑體系作為上相，按體積百分比分別為2.53%,24.77%,49.04%和23.66%配制的四元溶劑體系作為下相，將配制好的上下相分別加入到三個(gè)逆流色譜柱中，加入到每個(gè)逆流色譜柱中上相的量為其柱體積的60%，下相的量為其柱體積的40%，其中上相做固定相，下相做流動(dòng)相；
[0015](4)將步驟(2)制得的富含二氫丹參酮1、三葉鼠尾酮B和甲基丹參酮酯的丹參酮提取物首先經(jīng)過(guò)第一逆流色譜柱進(jìn)行第一維分離，得到含有二氫丹參酮1、三葉鼠尾酮B和甲基丹參酮酯的洗脫液；
[0016](5)觀察第一檢測(cè)器，當(dāng)含有二氫丹參酮I的洗脫液從第一逆流色譜柱開(kāi)始被洗出后，調(diào)節(jié)第二六通閥將第一逆流色譜柱的尾端與第二逆流色譜柱的首端連接，在線直接將含二氫丹參酮1、三葉鼠尾酮B和甲基丹參酮酯的洗脫液轉(zhuǎn)入第二逆流色譜柱中，觀察第一檢測(cè)器(4)，當(dāng)洗脫液完全進(jìn)入第二逆流色譜柱后，調(diào)節(jié)第二六通閥將第一逆流色譜柱的尾端與第二逆流色譜柱的首端斷開(kāi)，同時(shí)將第二逆流色譜柱的首端與第三逆流色譜柱的尾端連接，使二氫丹參酮1、三葉鼠尾酮B和甲基丹參酮酯在第二逆流色譜柱中進(jìn)行第二維分離；
[0017](6)觀察第二檢測(cè)器，當(dāng)含二氫丹參酮I的洗脫液從第二逆流色譜柱開(kāi)始被洗出后，調(diào)節(jié)第三六通閥將第二逆流色譜柱與第三逆流色譜柱連接，在線直接將含二氫丹參酮
1、三葉鼠尾酮B和甲基丹參酮酯的洗脫液轉(zhuǎn)入第三逆流色譜柱進(jìn)行第三維分離；
[0018](7)觀察第三檢測(cè)器，當(dāng)含二氫丹參酮I的洗脫液從第三逆流色譜柱開(kāi)始洗出后，通過(guò)第二六通閥將第三逆流色譜柱的尾端與第二逆流色譜柱的首端連接，使二氫丹參酮
1、三葉鼠尾酮B和甲基丹參酮酯進(jìn)入第二逆流色譜柱進(jìn)行第一次循環(huán)分離；
[0019](8)觀察第二檢測(cè)器，當(dāng)含二氫丹參酮1、三葉鼠尾酮B的洗脫液從第二逆流色譜柱洗出后，再次通過(guò)第三六通閥進(jìn)入第三逆流色譜柱分離；觀察第二檢測(cè)器，當(dāng)含甲基丹參酮酯的洗脫液從第二逆流色譜柱洗出后，調(diào)節(jié)第三六通閥將第二逆流色譜柱的尾端與第三逆流色譜柱的首端斷開(kāi)，第二收集器收集第二逆流色譜柱中的甲基丹參酮酯；
[0020](9)觀察第三檢測(cè)器，進(jìn)入第三逆流色譜柱分離的二氫丹參酮I和三葉鼠尾酮B從第三逆流色譜柱尾端洗出后，調(diào)節(jié)第二六通閥將第二逆流色譜柱首端與第三逆流色譜柱尾端斷開(kāi)，第三收集器收集第三逆流色譜柱中的二氫丹參酮I和三葉鼠尾酮B。
[0021]本發(fā)明的有益效果在于:
[0022]I)采用循環(huán)分離，不僅可以節(jié)省溶劑，也可以簡(jiǎn)化尋找合適溶劑系統(tǒng)的過(guò)程，從而可以使用樣品溶解度大的溶劑以加大上樣量，提高了單位時(shí)間的產(chǎn)量；
[0023]2)采用雙柱循環(huán)分離，能夠滿足不增加分離柱物理長(zhǎng)度的情況下實(shí)現(xiàn)復(fù)雜樣品的純化，同時(shí)降低了循環(huán)分離中已分開(kāi)樣品交叉污染的風(fēng)險(xiǎn)；
[0024]3)通過(guò)設(shè)計(jì)儀器組合使得三維分離與循環(huán)分離結(jié)合在一起，通過(guò)調(diào)節(jié)第二六通閥與第三六通閥即可實(shí)現(xiàn)三維分離與循環(huán)分離的切換，操作簡(jiǎn)單，節(jié)省分離時(shí)間。
[0025]4)分離柱即可用逆流色譜，也可用常見(jiàn)的高效液相色譜，應(yīng)用范圍廣。
【專利附圖】

【附圖說(shuō)明】
[0026]圖1為雙柱循環(huán)分離系統(tǒng)示意圖，圖中:A1為第一逆流色譜柱，BI為第二逆流色譜柱，Cl為第三逆流色譜柱，I為第一泵，2為第二泵，3為第三泵，4為第一檢測(cè)器，5為第二檢測(cè)器，6為第三檢測(cè)器，7為第一收集器，8為第二收集器，9為第三收集器，10為第一六通閥，11為第二六通閥，12為第三六通閥，13為盛裝流動(dòng)相的容器。
[0027]圖2為六通閥處于位置I狀態(tài)示意圖；
[0028]圖3為六通閥處于位置2狀態(tài)示意圖；
[0029]圖4為實(shí)施例樣品HPLC分析圖，圖中:1為二氫丹參酮I，2為三葉鼠尾酮B, 3為甲基丹參酮酯；
[0030]圖5為實(shí)施例分離過(guò)程在線檢測(cè)示意圖，其中:圖(a)Al體系分離；圖(13)81體系分離；圖(0)(:1體系分離。
[0031]圖6為純化的二氫丹參酮I液相色譜分析。
[0032]圖7為純化的三葉鼠尾酮B液相色譜分析。
[0033]圖8為純化的甲基丹參酮酯液相色譜分析。
【具體實(shí)施方式】 [0034]下面通過(guò)具體的實(shí)施例對(duì)本發(fā)明的技術(shù)方案作進(jìn)一步的描述。
[0035]參照?qǐng)D1，本發(fā)明的制備高純度丹參酮化合物的雙柱循環(huán)分離系統(tǒng)，包括三個(gè)逆流色譜柱Al、B1、Cl，三個(gè)泵1、2、3，三個(gè)檢測(cè)器4、5、6，三個(gè)收集器7、8、9和三個(gè)六通閥10、
11、12 ;其中第一六通閥10做進(jìn)樣閥，該進(jìn)樣閥與第一逆流色譜柱Al首端及第一泵I相連，第一逆流色譜柱Al的尾端與第一檢測(cè)器4的輸入端相連，第一檢測(cè)器4的輸出端與第二六通閥11的第II節(jié)點(diǎn)相連，第二六通閥11的第I節(jié)點(diǎn)與第一收集器7相連；第二六通閥11的第III節(jié)點(diǎn)與第二泵2的輸入端相連，第二泵2的輸出端與第二逆流色譜柱BI的首端相連，第二逆流色譜柱BI的尾端與第二檢測(cè)器5的輸入端相連，第二檢測(cè)器5的輸出端與第三六通閥12的第I節(jié)點(diǎn)相連，第三六通閥12的第二節(jié)點(diǎn)與第二收集器8相連；第三六通閥12的第V節(jié)點(diǎn)與盛裝流動(dòng)相容器相連，第三六通閥12的第VI節(jié)點(diǎn)與第三泵3的輸入端相連，第三泵3的輸出端與第三逆流色譜柱Cl的首端相連，第三逆流色譜柱Cl的尾端與第三檢測(cè)器6的輸入端相連，第三檢測(cè)器6的輸出端與第二六通閥11的第IV節(jié)點(diǎn)相連，第二六通閥11的第V節(jié)點(diǎn)與第三收集器9相連。
[0036]實(shí)施例1
[0037]利用雙柱循環(huán)分離系統(tǒng)制備高純度丹參酮化合物的方法，該丹參酮類化合物包括結(jié)構(gòu)式(I) 二氫丹參酮1、結(jié)構(gòu)式(2)三葉鼠尾酮B和結(jié)構(gòu)式(3)甲基丹參酮酯，
[0038]
【權(quán)利要求】
1.一種制備高純度丹參酮化合物的雙柱循環(huán)分離系統(tǒng)，其特征在于包括三個(gè)逆流色譜柱(Al、B1、Cl)，三個(gè)泵(1、2、3)，三個(gè)檢測(cè)器(4、5、6)，三個(gè)收集器(7、8、9)和三個(gè)六通閥(10、11、12);其中第一六通閥(10)做進(jìn)樣閥，該進(jìn)樣閥與第一逆流色譜柱(Al)首端及第一泵(I)相連，第一逆流色譜柱(Al)的尾端與第一檢測(cè)器(4)的輸入端相連，第一檢測(cè)器(4)的輸出端與第二六通閥(11)的第II節(jié)點(diǎn)相連，第二六通閥(11)的第I節(jié)點(diǎn)與第一收集器(7)相連；第二六通閥(11)的第III節(jié)點(diǎn)與第二泵(2)的輸入端相連，第二泵(2)的輸出端與第二逆流色譜柱(BI)的首端相連，第二逆流色譜柱(BI)的尾端與第二檢測(cè)器(5)的輸入端相連，第二檢測(cè)器(5)的輸出端與第三六通閥(12)的第I節(jié)點(diǎn)相連，第三六通閥(12)的第二節(jié)點(diǎn)與第二收集器(8)相連；第三六通閥(12)的第V節(jié)點(diǎn)與盛裝流動(dòng)相容器相連，第三六通閥(12)的第VI節(jié)點(diǎn)與第三泵(3)的輸入端相連，第三泵(3)的輸出端與第三逆流色譜柱(Cl)的首端相連，第三逆流色譜柱(Cl)的尾端與第三檢測(cè)器(6)的輸入端相連，第三檢測(cè)器(6)的輸出端與第二六通閥(11)的第IV節(jié)點(diǎn)相連，第二六通閥(11)的第V節(jié)點(diǎn)與第三收集器(9)相連。
2.利用權(quán)利要求1所述的雙柱循環(huán)分離系統(tǒng)制備高純度丹參酮化合物的方法，該丹參酮類化合物包括結(jié)構(gòu)式(I) 二氫丹參酮1、結(jié)構(gòu)式(2)三葉鼠尾酮B和結(jié)構(gòu)式(3)甲基丹參酮酯，

【文檔編號(hào)】C07J73/00GK103736296SQ201310750245
【公開(kāi)日】2014年4月23日 申請(qǐng)日期:2013年12月30日 優(yōu)先權(quán)日:2013年12月30日
【發(fā)明者】吳世華, 孟杰 申請(qǐng)人:浙江大學(xué)