專利名稱:新型σ-丁內(nèi)酰胺之藥物組分的制備方法及醫(yī)藥應(yīng)用的制作方法
本發(fā)明介紹一個(gè)新型藥理活性的苯基和芐基取代的δ-丁內(nèi)酰胺(在下文稱為“黃皮酰胺”)的制備，包括這類化合物從蕓香科黃皮屬類植物分離，黃皮酰胺的某些衍生物及它們作為缺氧保護(hù)劑和抗健忘劑的應(yīng)用。本發(fā)明還介紹了含有黃皮酰胺或其衍生物的藥物組分的制備方法。
已有報(bào)導(dǎo)蕓香科非州黃皮在非州的某一地區(qū)作為草藥。(I.Mester等人，Planta Medica32(1)81，1977)。也有報(bào)導(dǎo);印度黃皮的粗提物對(duì)心血管有作用，并且從五葉黃皮中分離的兩個(gè)香豆素衍生物clausmarins A和B具有解痙作用(Dhan PraKash等人，Phytochem.17，1194，1978;Aboo Shoeb等人，J.C.S.Chem.Commun.281，1978)。已從不同種屬的黃皮根、莖等中分離出了約50種組份。這些組份的大多數(shù)是香豆素咔唑和萜烯的衍生物;據(jù)報(bào)導(dǎo)到目前為止僅有兩個(gè)直鏈羧酸酰胺存在于黃皮屬植物的葉中(S.R.Johns等人，Aust.J.Chem.20，2795，1967;Dhan PraRosh等人，Indian J.Chem.Sect.B19B(12)，1975)。
現(xiàn)已知榔色黃皮葉中含有一種δ-丁內(nèi)酰胺，它含有一個(gè)苯基和一個(gè)芐基取代物，是以兩種立體異構(gòu)體存在的(“黃皮酰胺”和“化合物(9)”)榔色黃皮葉中還含有一種在結(jié)構(gòu)上十分相近的二環(huán)丁內(nèi)酰胺。還發(fā)現(xiàn)黃皮酰胺及其衍生物具有多種有價(jià)值的藥理性質(zhì)。化學(xué)衍生法和光譜數(shù)據(jù)已證實(shí)了這些化合物的結(jié)構(gòu)。
本發(fā)明提出通式(Ⅰ)為
的化合物，式中;
R為1-10碳的烷基，芳基和芳烷基。
R1表示氫，具有1至10個(gè)碳原子的一個(gè)烷基，芳基或芳烷基，具有1至18個(gè)碳原子的一個(gè)?；?，或者與R3一起表示一個(gè)化學(xué)鍵;
R2表示氫或者與R3一起表示氧;
R3表示氫、羥基、1至10個(gè)碳原子的烷氧基，苯氧基或苯烷氧基團(tuán)，具有1至18個(gè)碳原子的酰氧基，與R1或R4一起表示一個(gè)化學(xué)鍵，或者與R2一起表示氧;
R4是氫，與R3一起表示一個(gè)化學(xué)鍵或與R5同;
R5和R6是相同或不同;表示氫，1至10個(gè)碳原子的烷基，芳香基或芳香基團(tuán)，具有1至10個(gè)碳原子的一個(gè)烷氧基、苯氧基或苯烷氧基，1至18碳?；?、CF3、OCF3、硝基、羥基、鹵素、氨基，1-4碳烷基取代的二烷胺基、羧基、SO3H或1-18碳的酰胺基。
在上述定義中，“烷基”和“烷氧基”最好含1至6個(gè)碳原子，并且特別指著甲基或甲氧基，“芳基”，“芳烷基”，“苯氧基”和“芳烷氧基”最好分別為苯基、芐基、苯氧基和芐氧基，“?；弊詈煤?至4個(gè)碳原子并且特別是乙?；?。
根據(jù)通式(Ⅰ)的首選化合物為R為甲基;
R1是氫，烷基，?；蚺cR3一起表示一個(gè)化學(xué)鍵;
R2是氫;
R3表示羥基、烷氧基，酰氧基或分別與R1，或R4，一起表示化學(xué)鍵。
R5和R6是氫。
上述可以從榔色黃皮葉中分離出的化合物結(jié)構(gòu)式如下
“黃皮酰胺”
“化合物(9)” “化合物(0)”(X-射線衍射證實(shí)了該立體化學(xué))本發(fā)明也提出了黃皮酰胺的分離方法，該方法包括下列步驟a)用沸水浸潤(rùn)榔色黃皮的葉，b)將濃縮的提取液與吸附劑(如硅膠、氧化鋁，砂子，矽藻土，纖維素或多聚酰胺)混合，c)用有機(jī)溶劑，如氯仿、乙酸乙酯，醚、二氯甲烷和氯乙烯，最好為氯仿，提取上述吸附劑。
d)濃縮有機(jī)洗脫液。
e)用冷卻的C1-C6-醇或C2-C6-酮(例如甲醇)洗滌液濃縮物。
另外，本發(fā)明提出化合物(O)的分離方法，該方法包括下述步驟a)用沸水浸潤(rùn)榔色黃皮的葉;
b)在濃縮的提取液中加入稀酸(例如HCl);
c)將上清液通過陽離子交換樹脂，最好為H+型;
d)用堿，最好是氨水浸潤(rùn)樹脂;
e)用有機(jī)溶劑，諸如乙醚、三氯甲烷，二氯甲烷、C1-C6醇的乙酸酯或C2-C6酮，最好是乙醚提取樹脂;
f)用三氯甲烷、一氯甲烷、乙醚或三氯甲烷/甲醇混合物作為洗脫劑，在二氧化硅或氧化鋁層析分離濃縮提取物;
g)收集濃縮Rf值與化合物(0)相應(yīng)的洗脫液，(硅膠為吸附劑，氯仿為洗脫劑時(shí)，Rf＝0.8)。
本發(fā)明還提出分離化合物(g)的方法，該方法由下述步驟組成a)用沸水浸潤(rùn)榔色黃皮葉;
b)將稀酸(如鹽酸)加到濃縮過的提取液中;
c)上清液通過陽離子交換樹脂，最好是H+-型;
d)用堿，例如氨水浸潤(rùn)樹脂;
e)用有機(jī)溶劑，諸如醚、三氯甲烷、二氯甲烷、C1-C6-醇的乙酸酯或C2-C6-酮提取樹脂;
f)在SiO2或Al2O3上進(jìn)行濃縮提取物的層析分離，三氯甲烷、二氯甲烷、醚或三氯甲烷/甲醇混合物作洗脫劑;
g)收集并濃縮Rf值與化合物(9)(硅膠吸附，氯仿洗脫，Rf＝0.2)相應(yīng)的洗脫液(如通過TLC監(jiān)測(cè))。
我們認(rèn)為，用上述分離方法得到的粗產(chǎn)物最好在醇。(例如甲醇或乙醇)中重結(jié)晶。
根據(jù)通式(Ⅰ)的黃皮酰胺的衍生物，化合物(9)和化合物(0)可以由人們已知的還原法(例如，催化氫化)，氧化法(例如，用氧化鉻)，酯化法和醚化法來合成。
本發(fā)明還提出含有通式(Ⅰ)作為有效成分的藥物組份和藥劑以及其的制備方法。
本發(fā)明還提出通式(Ⅰ)的化合物用于治療缺氧癥和健忘癥。
在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中，通式(Ⅰ)的化合物具有顯著的保護(hù)大腦缺氧和抗健忘作用，該作用明顯強(qiáng)于2-吡咯烷酮乙酰胺(Piracetam)。在大腦的治療和nootrpics范圍內(nèi)，2-吡咯烷酮乙酰胺(Piracetam)是最接近地有關(guān)的化合物結(jié)構(gòu)。
2-吡咯烷酮乙酰胺(Piracetam)即使在高量時(shí)，動(dòng)物在他們的行為方面也不顯示任何重要改變。這種缺氧保護(hù)作用顯然不是由于一種非特異的鎮(zhèn)靜作用而引起的，(后者因此而引起降低對(duì)氧的需求。)我們發(fā)現(xiàn)(Ⅰ)式化合物的急性毒性是很低的。
按照本發(fā)明藥制組方可以成膏狀、膠體、糊狀、乳狀、噴霧(包括懸乳微粒)，洗劑，乳濁液，溶液，以及水或非水稀釋劑中的乳膠，糖漿，顆?；蚍勰?。
該配方最好制成無菌等滲水溶液或制成片劑，膠囊，藥丸和栓劑，本發(fā)明的化合物可單獨(dú)用藥或與稀釋劑混合。
該稀釋劑應(yīng)用到藥物組成(例如制粒)，適應(yīng)形成片劑，糖衣丸，膠囊和藥丸包括下列在該配方中所用的適于制成片劑，糖衣片、膠囊，丸劑的稀釋劑(如制粒)(a)填料，例如，淀粉、糖、硅酸;
(b)粘合劑，例如，纖維素衍生物，藻酸鹽，明膠和聚乙烯吡咯烷酮;
(c)保溫劑，例如，甘油;
(d)崩解劑，例如，瓊脂，碳酸鈣和碳酸氫鈉;
(e)吸收促進(jìn)劑，例如，四價(jià)銨化合物;
(f)表面活性劑，例如，鯨蠟醇;
(g)吸附載體，例如，高嶺土和膨潤(rùn)土;
(h)潤(rùn)滑劑，例如，滑石粉，硬脂酸鈣和硬脂酸鎂和固態(tài)的聚乙烯乙二醇。
由本發(fā)明的藥用成分制造平體藥片、糖衣藥丸，膠囊和藥丸的成形可以用通常的包衣，包裹物和保護(hù)基質(zhì)，上述這些可以含有遮光劑。這樣制成的上述藥物有效成份可以只在或絕大部分在腸道釋放，而且有可能維持很長(zhǎng)時(shí)間。包衣、包裹物和保護(hù)片基可以用聚合材料和石蠟制備。
這個(gè)組份也可以與一個(gè)或多個(gè)上述稀釋劑一起以微囊的形式制劑。
上述藥學(xué)成分和藥劑的生產(chǎn)，可以通過在工藝上人們所知道的任何方法進(jìn)行，例如，把有活性的組分與稀釋劑混合形成一種藥學(xué)組方(例如，濕粒)再做成劑形(例如片劑)。
本發(fā)明提出的藥物組方最好含總組分重量的0.1至99.5%的有效成分，最佳為0.5至95%。
本發(fā)明的治療服用最佳劑量是每天0.001毫克至0.2毫克的有效成分。
下面的實(shí)例對(duì)這個(gè)發(fā)明作一說明例1.
黃皮酰胺的分離八十公斤干燥的SReeLs榔色黃皮葉首先與水煮沸。將該提取液濃縮得到18公斤的糖漿狀粗品，該糖漿狀粗品液與硅膠混合，用氯仿提取。該氯仿提取液被濃縮得到一褐色糖漿狀物，用冷甲醇洗該褐色糖漿狀液，如此獲得的黃色粉末用甲醇重結(jié)晶，得到黃皮酰胺的白色針狀結(jié)晶。
黃皮酰胺白色針狀結(jié)晶，m.p.239-40℃〔α〕21D0.00(0.53在甲醇中)，經(jīng)元素分析和高分辨質(zhì)譜測(cè)定(M+297、1364);分子式為C18H19NO3可溶于熱甲醇中，DMSO和DMF，僅僅微溶于一般的有機(jī)溶劑，例如CHCL3，CH2CL2，醚，乙酸乙酯，等。
IRγKBrmaxcm-13400，3310(OH)，1680(酰胺)，1600，1580，1490，1450，740，690(芳環(huán)的單取代)。
UVλMeoHmaxnm(Lgε)257(2.70)。
高分辨率MS m/z297.1364(M+，C18H18NO3)，298.1448(C18H20NO3)，191.0946(C11H13NO2)，190.0881(C11H12NO2)，174.0912(C11H12NO)，162.0924(C10H12NO)，144.0815(C10H10N)，134.0687(C9H10O)，133.0646(C9H9O)。
元素分析得出C＝72.39，H＝6.39，N＝4.51表1，H1-NMR;化學(xué)位移及黃皮酰胺的歸屬ppm 氫3.05(S;3H) N-CH33.50(dd，J＝10.8;1H) C4-H3.90(d，J＝10;1H) C3-H)4.30(dd，J＝8.2;1H) C5-H4.65(d，J＝2;1H) C7-H4.70-5.40(m;2H) OH
6.50-6.70(m;2H) 芳香H6.90-7.30(m;8H) 芳香H)13C-NMR數(shù)據(jù)在下面表9中給出，X-射線衍射數(shù)據(jù)同樣證實(shí)了黃皮酰胺的化學(xué)結(jié)構(gòu)。
例2化合物(0)和化合物(9)的分離。
80公斤的干燥的SKecLs榔色黃皮(Lcur)葉用水煮沸。濃縮該浸液，得到18公斤的糖漿狀粗品。16公斤的該糖漿狀粗品用0.06NHCL(80L)處理和上層清液通過濕的H+-型的陽離子交換樹脂柱(由48公斤的Na+-形式陽離子交換樹脂轉(zhuǎn)換而成。然后用去離子水洗該樹脂，用2%氨水(32.2L)處理和最后用(60L)乙醚萃取。濃縮該醚提取物的氯仿溶液被用氯仿作為洗脫劑在硅膠柱(不同的比率從100∶1至20∶1)上反復(fù)處理。收集并濃縮Rf＝0.8(化合物(0))和Rf＝0.20(化合物(9))的洗脫液。得到的結(jié)晶體用甲醇重結(jié)晶，得到0.18克的白色梭狀結(jié)晶，溶點(diǎn)，164-6℃，(化合物(0))和3.31克的方形結(jié)晶，m.p.205～6℃(化合物(9))化合特(0)〔α〕24.5D＝-40°(0.225in MeOH)元素分析理論值(C18H17NO2) 實(shí)驗(yàn)值C 77.42 77.06H 6.09 6.13N 5.02 4.76
高分辨率MS(M++1)＝280，1371IRγKBrmaxcm-11690(酰胺-羧基)，3080，3060，3010，1600，1500，750，730，705，700UVλMeOHmaxnm(Lgε)209(4.35)，257(2.60)表21H-NMR(在氘代氯仿中)化合物(0)的化學(xué)位移和歸屬，ppm 氫2.95(S;3H) N-CH33.60(S;1H) C4-H4.09(S;1H) C5-H4.81(S;1H) C3-H5.00(S;1H) C7-H7.10-7.50(m;10H) 芳香H13C-NMR的數(shù)據(jù)在表9中給出化合物(9)〔α〕19D＝0.00(0.29在甲醇中)元素分析理論值(C18H19NO3) 實(shí)驗(yàn)值C 72.76 73.00H 6.45 6.46N 4.72 4.50高分辨率MS(M++1)＝298.1453(C18H20NO3)IRγKBrmaxcm-13440，3340(OH)，1600(酰胺-羰基)，3060，3030，1600，1490，750，770(單基取代苯)UVλMeOHmaxnm(Lgε)258(2.59)表31H-NMR(在DMSO中);化學(xué)位移和歸屬ppm 氫2.90(S;3H) N-CH33.07(t;J＝7;1H) C4-H3.89(m;2H) C3-H;
C5-H5.00(dd，J＝5.3;1H) C7-H5.53(d，J＝7;1H) C3-OH;在D2O的加入后消失5.73(d，J＝5;1H) C7-OH;在D2O的加入后消失6.75-6.93(m;2H) 芳香H6.95-7.33(m;8H) 芳香H13C-NMR的數(shù)據(jù)在下表9中給出例3黃皮酰胺的衍生物的合成具有的通式
(立體化學(xué)與前述給出的黃皮酰胺本身相同)a)化合物(Ⅰ)R1＝CH3CO-;R2＝CH3COO-;R3＝R4＝H600毫克的黃皮酰胺被溶解在10毫升的無水吡啶和醋酸酐的混合物(1∶1)中。在室溫下攪拌反應(yīng)混合物24小時(shí)后，將該反應(yīng)物傾注到30的冰水中，和用乙醚液萃取三次，隨后用2%HCl(15ml)和水(25ml，20ml，15ml)洗滌醚萃取液。用Na2SO4干燥和除去溶劑得到750毫克的半透明糖漿狀液。該反應(yīng)粗產(chǎn)物在甲醇中重結(jié)晶得到570毫克的白色方體結(jié)晶，m.p.165-7℃。
元素分析理論值(C22H23NO5) 實(shí)驗(yàn)值C 69.29 69.12H 6.04 6.04N 3.67 3.68IRγKBrmaxcm-11735(酰胺-羰基)，1715(肩峰，酯羰基)，1700(酰胺-羰基)，1215(C-O)。
MS m/z(%)382(M++1;0.5)，261(0.3)，232(17)，172(100)，144(9)，91(8)，43(40)。
表41H-NMR(在氘代氯仿中);化學(xué)位移和歸屬ppm 氫1.88(S;3H) CH3COO1.98(S;3H) CH3COO2.59(S;3H) N-CH3表4(續(xù))ppm 氫4.07(dd，J＝10.8;1H) C4-H4.43(dd，J＝8.2;1H) C5-H5.72(d，J＝10;1H) C3-H5.74(d，J＝21H) C7-H6.08-7.50(m;10H) 芳香Hb)化合物(Ⅳ)R1＝CH3CO-;R2＝R3＝R4＝H500mg的化合物(Ⅰ)在40ml甲醇中，用200mg pd/c作催化劑，20大氣壓下，40℃，催化氫化7.5小時(shí)，除去催化劑和溶劑，得到464mg半透明漿狀粗品，在SiO2上層析得非晶形化合物(Ⅳ)，薄層層析，Rf＝0.58(SiO2鋪板，展開劑苯/甲醇95∶5)。
IRγfilmmaxcm-11740(酯-羰基)，1710(酰胺-羰基)，1203(C-O)。
表51H-NMR(在氘代氯仿中);化學(xué)位移和歸屬。
ppm 氫2.10(S;3H) CH3COO2.49(dd，J＝2.8;2H) C7-H2.56(S;3H) N-CH33.78-4.18(m;2H) C4-H，C5-H6.03(d，J＝10;1H) C3-H6.78-7.00(m;2H) 芳香H7.11-7.51(m;8H) 芳香HMS m/z(%)324(M+1;37)，264(M-60;4)，232(M-91;39)，172(M-60-91;100)，91(39)。
c)化合物(Ⅴ)R1＝R2＝R3＝R4＝H50毫克的化合物(Ⅳ)在2毫升的2%KOH-MeOH中，水浴上加熱50分鐘。加入2毫升的水，5毫升的氯仿和2毫升的甲醇。分離氯仿層，用Na2SO4干燥，濃縮，得到一半透明糖漿狀粗品，該粗品通過加醚析出結(jié)晶，得到白色粒狀結(jié)晶，m.p.123-5℃。
IRγKBrmaxcm-13290(OH)，1680(酰胺-羰基)MS m/z(%)282(M+1;5)，190(
;100)，162(190-CO;38)，134(47)，91(42)d)化合物(Ⅵ)R1＝R4＝H;R2+R3＝0，
1.5克的黃皮酰胺在20毫升的吡啶溶液中被用30毫升的Conforth′s試劑氧化，該Conforth′s試劑的制備，是將3克CrO3溶于3ml水中，然后將此溶液加到27ml冰冷卻的吡啶中。該混合物放置過夜，然后傾注到100毫升的水中，用乙醚提取。該醚溶液用水洗兩次，Na2SO4干燥。除去溶劑，剩余物用甲醇重結(jié)晶。得到白色梭形晶體的m.p.207-10℃。
〔α〕25D＝0.00(0.26在CHCL3中)IRγKBrmaxcm-13260(OH)，1690(芳香酮)，1670(酰胺-羰基)，3060，3040，1600，1500，UVλMeOHmaxnm(Lgε)205(4.31)，252(4.07)MS m/z(%)295(M+;1)，190(
;100)，162(190-CO;45)，134(70)，133(40)，105(35)，91(20)，77(50)。
表61H-NMR在氘代氯仿中;化學(xué)位移和歸屬ppm 氫2.01(br;1H) OH2.92(S;3H) N-CH33.86(t，J＝8;1H) C4-H4.95(d，J＝8;1H) C5-H5.40(d，J＝8;1H) C3-He)化合物(Ⅶ)R1＝R2＝H;R3+R4＝化學(xué)鍵150毫克的黃皮酰胺在30毫升的6NHCL中，在封閉管內(nèi)，在105℃，水解24小時(shí)。最后，白色薄片在溶液中出現(xiàn)。過濾該混合物，用醚(60毫升，50毫升和40毫升)抽提濾液三次。該醚萃取液被合在一起用水洗一次。干燥之后，醚揮發(fā)干得到半透明糖漿狀粗品在醚中結(jié)晶，該粗品用醚重結(jié)晶。得到白色針狀晶體，m.p.188-90℃。
高分辨率的MS279，1176〔理論值(C18H17NO2)279，1259〕MS m/z(%)279(M，100)IRγKBrmaxcm-13300(OH)，1680(酰胺-羰基)，1600，1490，768，750，710。
UVλMeOHmaxnm(Lgε)220(3.60)，263(2.(2.90)。
表71H-NMR在氘代氯仿中;化學(xué)位移和歸屬ppm 氫2.57(S;1H) OH(加入D2O消失)2.96(S;3H) N-CH33.99(m;1H)4.36(m;3H)6.90-7.55(m;9H) 芳香H下面表9中給出13C-NMR數(shù)據(jù)。
f)化合物(Ⅷ)R1＝CH3CO-;R2＝H;R3+R4＝化學(xué)鍵
15毫克的化合物(Ⅶ)溶解在1.5毫升的醋酸酐/吡啶中(1)。該混合物在室溫放置兩天。然后減壓蒸除揮發(fā)物，殘余物溶解在3毫升的氯仿溶液中。用2毫升的10%NH4OH液洗該氯仿溶液，接著用2毫升的水洗該氯仿溶液三次，除去溶劑。得到白色無定形固體，m.p.148-51℃。
IRγfilmmaxcm-11745(酯-羧基)，1710(酰胺-羰基)，1230(C-O)，3060，3030，1600，1500，750，720，700。
MS m/z(%)321(M+;5)，279(30)，261(M-CH3COO;100)。
表8H-NMR在代氯仿中化學(xué)位移和歸屬ppm 氫2.22(S;3H) CH3COOH3.09(S;3H) N-CH34.00(dd，J＝7.2;1H) C5-H4.34(dd，J＝7.3;1H) C4-H4.51(d，J＝2;1H) C7-H5.30(d，J＝3;1H) C3-H7.00-7.80(m;9H) 芳香H例4化合物(9)的衍生物的合成a)將150mg的化合物(9)溶于8毫升的乙酸酐/吡啶(1)中，室溫下攪拌此溶液2天，將反應(yīng)混合物倒入水中，用氯仿提取，除去氯仿，殘余物用甲醇重結(jié)晶，得到135mg的醋酸酯(方體結(jié)晶)，m.p.125-6℃。
b)在2毫升吡啶中的150毫克的化合物(9)用3毫升的Confort'h試劑氧化，該試劑是由在0.3毫升的H2O中的0.3克CrO3加入到2.7毫升的冰冷吡啶而制備的。該混合物靜止過液然后傾注進(jìn)10毫升水用乙醚提取，醚溶液用水洗三次，并用Na2SO4干燥，除去溶劑后，剩余物用甲醇再結(jié)晶，得到57毫克的結(jié)晶固體，m.p.202-205℃。
表913C-NMR(在CDCL3中);黃皮酰胺，(Ⅶ)，化合物(0)及化合物(9)的化學(xué)位移和歸屬碳 黃皮酰胺 (Ⅶ) (0) (9)(ppm) (ppm) (ppm) (ppm)2 173.6 174.6 172.2 172.73 68.9 75.6 80.3 69.34 49.9 55.9 50.7 46.75 65.3 72.2 70.7 68.46 30.4 29.0 27.3 28.27 71.9 51.5 82.5 77.31′ 136.0 134.9 133.3 140.52′ 143.41″ 140.5 141.6 139.1 141.8芳香的 126.3 128.9 125.4 125.9碳 128.9 124.9 128.5 128.5
例5本發(fā)明提出的化合物對(duì)肝功能的影響在整個(gè)實(shí)驗(yàn)中采用體重為18～22克的雄性昆明種鼠。待試的化合物懸浮在5%吐溫80中，然后用管飼法口服給藥，5%吐溫80溶液的載體同相同的方法給與對(duì)照組的鼠。在體外實(shí)驗(yàn)中，化合物溶解在二甲基甲酰胺中，然后直接加進(jìn)培養(yǎng)混合物。
肝毒學(xué)(hepatotoxicity)所采用的參數(shù)包括血清氨基轉(zhuǎn)移酶(SGPT)，肝三酸甘油脂和肝切片的病理檢驗(yàn)。肝損傷主要由發(fā)炎和壞死的程度來記錄，并將其分成0至4級(jí)。
a)保護(hù)肝的作用試驗(yàn)鼠分成三組，對(duì)照組喂載體。其它兩組分別給予每個(gè)化合物的兩個(gè)劑量(250mg/kg)，間隔為8小時(shí)。第二次喂進(jìn)化合物后24小時(shí)，按10ml/kg皮下注射溶解在植物油中的0.1%Ccl4，禁食16小時(shí)，然后斷頭殺死。測(cè)定SGPT和肝炎脂物。做肝切片供病理觀察。
如表9所示，黃皮酰胺和化合物(0)兩者都明顯地減輕了CCl4中毒鼠的SGPT程度。
b)黃皮酰胺對(duì)CCL4，硫代乙酰胺和撲熱息痛的保護(hù)作用。
抗CCL4肝毒理學(xué)的實(shí)驗(yàn)程序與上述過程相同。所采用的活性化合物的劑量是125mg/kg和250mg/kg。列于表10的數(shù)據(jù)表明，125mg/kg和250mg/kg劑量的黃皮酰胺顯著地降低了CCL4引起的SGPT的提高。肝損傷、諸如用250mg/kg的化合物治療的鼠的肝炎和肝壞死低于對(duì)照鼠，肝脂沒有降低。
在另一實(shí)驗(yàn)中，首先每天給鼠注射三次10mg/kg在植物油中的0.15%CCL4。第一次注射CCL4后，從第二天到第五天開始用黃皮酰胺(250mg/kg，每天治療鼠。在試驗(yàn)的第七天進(jìn)行SGPT的測(cè)定和肝切片的病理檢驗(yàn)。所得結(jié)果表明該化合物有明顯抑制SGPT的降低作用，但并不影響肝損傷(見表11)。
在硫代乙酰胺肝毒理學(xué)實(shí)驗(yàn)中，根據(jù)第一次實(shí)驗(yàn)的程序治療鼠，但使用硫代乙酰胺(50mg/kg)而不是使用CCL4。我們發(fā)現(xiàn)，黃皮酰胺明顯降低了SGPT水平(表12)。
用下述方法進(jìn)行抗-撲熱息痛肝毒理學(xué)的實(shí)驗(yàn)，第一天給鼠兩次黃皮酰胺(250mg/kg)接下去的第二天給與同樣劑量。最后一次給藥后6小時(shí)，按150mg/kg劑量給鼠皮下注射撲熱息痛。注射撲熱息痛后20小時(shí)，測(cè)定SGPT并檢驗(yàn)肝組織，黃皮酰胺明顯降低了SGPT的水平并減輕了肝損傷(見表13)c)對(duì)正常鼠的血清和肝氨基轉(zhuǎn)移酶(GPT)的影響。
分別給兩組鼠喂載體或250mg/kg的黃皮酰胺，每天一次，連續(xù)七天。最后一次喂藥后二十四小時(shí)，測(cè)定血清和肝GPT。如表14所示，用黃皮酰胺治療過的鼠的SGPT水平稍高于對(duì)照鼠的SGPT，但差別不明顯。對(duì)肝GPT，也得到了類似結(jié)果。
d)對(duì)肝微體細(xì)胞色素p-450誘導(dǎo)作用在Xenobioties的解毒過程中，肝微體細(xì)胞色素p-450起到關(guān)鍵作用。給試驗(yàn)鼠喂250mg/kg的黃皮酰胺，每天一次，連續(xù)3天。對(duì)照鼠接受載體。禁食過夜后殺死試驗(yàn)鼠。制備肝微粒，然后測(cè)定微粒單氧酶。
數(shù)據(jù)示于表15。肝細(xì)胞色素p-450，細(xì)胞色素b5，NADPH-細(xì)胞色素C還原酶，氨基比林脫甲酶和苯并芘羥化酶活性都明顯提高。
在另外的實(shí)驗(yàn)中，給試驗(yàn)鼠250mg/kg的黃皮酰胺。服該化合物后，在服藥后1小時(shí)和24小時(shí)皮下注射戊巴比妥鈉(50mg/kg)。由記錄正常反射的消逝和恢復(fù)間隔來估計(jì)睡眠時(shí)間。數(shù)據(jù)列于表16。在注射戊巴比妥前24小時(shí)服進(jìn)黃皮酰胺，鼠的睡眠時(shí)間明顯縮短，反之戊巴比妥注射前一小時(shí)服用該化合物，鼠的睡眠時(shí)間明顯延長(zhǎng)而不是縮短。然而，提前服該化合物并不影響由巴比妥誘導(dǎo)鼠的睡眠時(shí)間。因?yàn)榘捅韧撞⒉皇峭ㄟ^肝臟代謝的。這說明黃皮酰胺所致的戊巴比妥睡眠時(shí)間的延長(zhǎng)是由于抑制了肝的藥物代謝酶。所以，該化合物對(duì)肝微體細(xì)胞色素p-450具有兩相作用，即;先抑制后誘導(dǎo)。
e)急性中毒實(shí)驗(yàn)10只鼠按3克/kg黃皮酰胺劑量口服給藥，7天內(nèi)無死亡。
表9對(duì)Ccl4中毒鼠的SGPT程度的影響(每組9只鼠)。
SGPT單位% PX±SE對(duì)照組 1678±261 ＜0.01化合物(0) 391±94黃皮酰胺 617±323 ＜0.01
例6黃皮酰胺所致缺氧容限(動(dòng)物)的提高一群雄性鼠(體重20克)放置在分成兩室的塑料箱內(nèi)(箱的體積為15×28×40cm，相當(dāng)于每bos16.8升)。每一室內(nèi)放置20只老鼠。箱內(nèi)充入含3.5%氧氣和96.5%氮?dú)獾幕旌蠚怏w。充入體積為4升/分鐘。在進(jìn)行實(shí)驗(yàn)前30分鐘，口服試驗(yàn)物質(zhì)和載體。
充入缺氧混合氣開始后約7分鐘，動(dòng)物缺氧死亡。當(dāng)左邊室(對(duì)照動(dòng)物組)的三只動(dòng)物僅出現(xiàn)呼吸癥狀時(shí)，停止實(shí)驗(yàn)。打開箱子然后計(jì)算經(jīng)處理后的一組動(dòng)物仍然活著的個(gè)數(shù)。
根據(jù)Fishe和yates(1963)(Thomann等人，1975)提出的X2試驗(yàn)評(píng)價(jià)在兩組中存活動(dòng)物之間的差別。
表9劑量 存活數(shù)/總的動(dòng)物數(shù) 作用(mg/kgp.o.) 對(duì)照組 黃皮酰胺 (%)10 9/60 19/60 19.630 9/60 31/60 41.1100 9/60 40/60 58.8P＝0.05表9表明，黃皮酰胺顯著提高缺氧容限，僅用極少的物質(zhì)(巴比妥類)口服100mg/kg存活率就可以提高59%例7黃皮酰胺對(duì)在缺氧條件下記憶力減退(老鼠)的影響裝置(39cm長(zhǎng)，21cm高，21cm寬)由兩室組成。一間由半透明塑料制成(長(zhǎng)29cm)而另一間除黑(長(zhǎng)10cm)。該裝置有一金屬柵網(wǎng)底，柵網(wǎng)與能提供20鈔1.6mA電流的刺激裝置連接。
兩間由門連接，門可以關(guān)閉。
將雄性老鼠(體重100-120克)放置在大間，然后允許老鼠查看該裝置的兩室三分鐘。
以后，將動(dòng)物放置進(jìn)小間(涂黑)，關(guān)閉連接門，進(jìn)行底振蕩，然后把動(dòng)物放進(jìn)氣密室，該氣密室內(nèi)充入含3.8%氧和96.2%氮的混合氣體。把動(dòng)物置于此種缺氧環(huán)境中，直到表現(xiàn)出表明即將出現(xiàn)呼吸衰竭的喘息為止(最長(zhǎng)為15分鐘)。
24小時(shí)后，老鼠再放回裝置的亮間。觀察時(shí)間為3分鐘。
在三組15只老鼠中進(jìn)行一次實(shí)驗(yàn)A組對(duì)照組，不經(jīng)受缺氧環(huán)境。
B組對(duì)照組，在第一次訓(xùn)練后接受缺氧環(huán)境。
C組服藥組，在第一次訓(xùn)練后接受缺氧環(huán)境。
評(píng)述動(dòng)物進(jìn)入暗間所需的時(shí)間用秒計(jì)算。
將兩個(gè)對(duì)照組之間的時(shí)間差看作100%(A-B＝100%)。
用百分?jǐn)?shù)(C-B＝X%)計(jì)算對(duì)照組B與服藥組C之間的時(shí)間差，X為待檢驗(yàn)物質(zhì)抗遺忘效果的度量。
黃皮酰胺 X(mg/kgp.o.) (%)3 4710 6530 100
權(quán)利要求
1.分離分
黃皮酰胺的方法，該方法包括如下步驟a)用沸水浸潤(rùn)榔色黃皮的葉子，b)混合濃縮的提取液與吸附劑，最好與硅膠混合，c)用有機(jī)溶劑，最好是三氯甲烷萃取吸附劑，d)濃縮有機(jī)洗脫液，e)用冷的C1-C6醇或C2-C6酮洗滌濃縮物。
2.分離化合物(0)和/或化合物(9)的方法，該方法包括
a)用沸水處理榔色黃皮的葉子，b)將稀酸加到濃縮的萃取液中，c)合格的上層清液通過陽離子交換樹脂，d)用堿、最好是氨水處理樹脂，e)用有機(jī)溶劑萃取樹脂，f)用三氯甲烷、二氯甲烷、乙醚或三氯甲烷/甲醇混合物作為洗脫劑，在二氧化硅或氧化鋁上色層分離濃縮的提取物，g)收集并濃縮分別相應(yīng)于化合物(0)或化合物(9)的Rf值的洗脫物。
3.根據(jù)權(quán)利要求
1或2所述的藥物組分的制備過程，其特征在于得到二黃皮酰胺用作活性組分。
4.根據(jù)權(quán)利要求
1或2所述的藥物組份的制備過程，其特點(diǎn)在于權(quán)利要求
1或2中任一項(xiàng)所述的化合物與稀釋劑和/或其它添加劑或輔助劑混合。
專利摘要
通過萃取榔色黃皮葉，然后進(jìn)行提純，得到純的黃皮酰胺，其分子式為
文檔編號(hào)C07D207/26GK85106973SQ85106973
公開日1987年4月1日 申請(qǐng)日期1985年9月17日
發(fā)明者陳延鏞, 楊明河, 黃量, 劉耕陶, 烏爾里克·本茲 申請(qǐng)人:中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥物研究所, 拜爾公司導(dǎo)出引文BiBTeX, EndNote, RefMan