專(zhuān)利名稱(chēng):蜱疫苗的制作方法
本發(fā)明涉及抗原組合物，特別是涉及用于控制動(dòng)物身上蜱侵染的疫苗。
在許多國(guó)家，控制動(dòng)物、特別是牛身上的蜱侵染具有十分重要的經(jīng)濟(jì)意義。即使輕度侵染也可造成肉類(lèi)和牛奶產(chǎn)量降低及獸皮損壞，而對(duì)于較重的侵染則必須除去蜱，以避免牛的死亡。蜱還是傳病媒介，例如它可攜帶能導(dǎo)致“蜱熱”爆發(fā)的巴貝氏梨漿蟲(chóng)。
傳統(tǒng)的控制方法包括用各種化學(xué)物質(zhì)噴灑和浸泡，如用DDT、氯化烴、氨基甲酸酯、有機(jī)磷酸鹽，擬除蟲(chóng)菊酯及脒等類(lèi)化學(xué)物質(zhì)。這些化學(xué)物質(zhì)中大多數(shù)都只具有有限的商品使用期限，因?yàn)闀?huì)出現(xiàn)各種具有抗藥性的蜱。某些情況下，可通過(guò)增加噴灑和浸泡液中化學(xué)物質(zhì)的濃度，來(lái)擴(kuò)大特定化學(xué)物質(zhì)的可用性，但這樣一來(lái)便增加了成本，并?？稍谂Ｉ砩暇哂卸拘跃C合癥。一般噴灑和浸泡處理需要每三至四周重復(fù)一次，并且要付出額外一些繁重勞動(dòng)，包括集中動(dòng)物及將其拉入或引出浸泡或噴藥地點(diǎn)。
另外還有一些與使用這些化學(xué)物質(zhì)有關(guān)的困難。將化學(xué)物質(zhì)用于地上一個(gè)混凝土的浸泡缸中時(shí)，即可有牛的糞尿引起的很大程度的污染，從而導(dǎo)致化學(xué)物質(zhì)分解，進(jìn)而造成額外的損失，并且需要定期進(jìn)行化學(xué)分析，以監(jiān)測(cè)活性成分的水平。需要定期打掃浸泡缸而使得工人會(huì)接觸到有潛在危害的化學(xué)物質(zhì)。再者，尚須小心處理浸泡液以避免危害環(huán)境。
使用化學(xué)物質(zhì)的再一個(gè)困難是為了消滅新出現(xiàn)的抗藥性蜱而尋找新的有效化學(xué)物質(zhì)的工作越來(lái)越難了。這一困難的部分原因是因?yàn)楹苌俚幕瘜W(xué)物質(zhì)殘留在宿主動(dòng)物的肉和奶中，而又希望這些殘留物不會(huì)對(duì)肉、奶的消費(fèi)者造成危害。
因此近幾十年來(lái)，人們一直盼望著找出可替代的安全而有效的控制牛的蜱侵染的方法。畜牧管理方法如牧場(chǎng)輪換產(chǎn)生有限的效果，并且在大多數(shù)情況下不是很容易就能得到所需要的場(chǎng)地的。繁殖抗蜱牛的嘗試已搞了許多年，但成就不大。在某些地區(qū)還開(kāi)展滅蜱運(yùn)動(dòng)并取得有限的成功，但花費(fèi)很大，在很大區(qū)域中滅蜱也是不實(shí)際的。
現(xiàn)在，我們已發(fā)現(xiàn)了一種有效地控制蜱的方法，它不需要使用危險(xiǎn)的化學(xué)物質(zhì)，并且單獨(dú)一次處理可長(zhǎng)期有效，故不必要定期集合動(dòng)物。該方法依靠動(dòng)物的免疫系統(tǒng)來(lái)阻止蜱在動(dòng)物身上存活或發(fā)育。
使用控制牛蜱的抗性牛已作為用化學(xué)物質(zhì)控制蜱的一種輔助方法提出。在產(chǎn)生抗性之前，一般需經(jīng)蜱侵染的刺激，這種刺激是“獲得性”的，并且推測(cè)是免疫學(xué)機(jī)制介導(dǎo)的。然而每只牛身上所產(chǎn)生的抗性程度是一種根據(jù)動(dòng)物的種屬而有很大變異的遺傳特性。有些種，例如Zebu種和部分Zebu種雜交種可產(chǎn)生高水平抗性。而其它的，例如英國(guó)種則保有很大程度的敏感性。盡管進(jìn)行了廣泛的選擇性繁殖，但這種天然抗性尚不能成為化學(xué)物質(zhì)控制蜱的一種令人滿(mǎn)意的可替代的或輔助的方法。
已有人提出了發(fā)展蜱疫苗的可能性。研究工作者們已使用了全蜱勻漿，唾液抗原，消化道相關(guān)抗原以及某些純化的蛋白質(zhì)或酶〔見(jiàn)Allen和Humphries，Nature(1979)280，491-493〕，且有些產(chǎn)生了重要的、但與化學(xué)控制方法比較仍顯得不足的免疫性。已對(duì)這種有限的成功作了各種實(shí)驗(yàn)解釋。例如，不能期望疫苗產(chǎn)生比先天獲得性抗性(其為有關(guān)動(dòng)物種的特性)的更大的抗性、全蜱勻漿包含有免疫抑制成分，以及只有純化的抗原是不夠的，而需與其它抗原協(xié)同作用。
澳大利亞書(shū)45936號(hào)(1985)公開(kāi)了一種通過(guò)純化全蜱粗提取物制備蜱抗原的方法，但其所報(bào)告的有用抗原分離物的水平很低。
本發(fā)明的給牛注射抗牛蜱疫苗的方法，可使只有很小程度天然抗性為特征的本地種牛產(chǎn)生高的、可長(zhǎng)期維持的抗性水平。由于該疫苗的效能而使其成為一種替代化學(xué)控制的十分令人滿(mǎn)意的控制方法，而且具有不需頻繁治療的優(yōu)點(diǎn)。
據(jù)此，我們提供了一種包括由蜱的集合神經(jīng)節(jié)(Synganglion)得到之抗原物質(zhì)的抗原組合物。
已發(fā)現(xiàn)得自集合神經(jīng)節(jié)(即蜱的中樞神經(jīng)系統(tǒng))的抗原物質(zhì)可增大并改善由其它抗原-如由蜱消化道制得的抗原的保護(hù)作用。雖然我們并不太希望由于討論我們發(fā)明的可能基礎(chǔ)而受限制，但很可能在全蜱體內(nèi)存在著干擾有效的免疫反應(yīng)、而反過(guò)來(lái)又受集合神經(jīng)抗原刺激的物質(zhì)。因此，在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案中我們提供了一種含有得自蜱的集合神經(jīng)節(jié)和消化道之抗原的混合物。
本發(fā)明的另一個(gè)方面，我們提供了一種由成令蜱的集合神經(jīng)節(jié)或其它神經(jīng)組織得到的抗原制成的，可保護(hù)溫血?jiǎng)游锩馐茯缜秩镜囊呙?。將解剖出的組織制成勻漿，以超聲波處理并離心。所得抗原混合物包含水溶性物質(zhì)以及顆粒物。我們已發(fā)現(xiàn)顆粒部分具有更強(qiáng)的抗原性。
本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選方面是，抗原性物質(zhì)是由幼蜱得到的。這種方法的優(yōu)點(diǎn)在于，與稚蟲(chóng)或成蟲(chóng)比較，幼蜱的集合神經(jīng)節(jié)占體重的較高比例?？捎媚ニ榛騽驖{或其它破壞蜱蟲(chóng)體方法處理幼蜱，之后用適當(dāng)?shù)暮橘|(zhì)提取，用適當(dāng)?shù)姆椒ㄈ纾H合層析、凝膠滲透層析，離子交換層析，疏水性凝膠層析、電泳，聚膠電泳選擇性沉淀等方法分離，最后濃縮得到富含抗原成分的抗原物質(zhì)。
在本發(fā)明的另一實(shí)施方案中，抗原物質(zhì)是在蜱胚中抗原物質(zhì)最初合成時(shí)，破壞發(fā)育中的蜱卵制得的。
亦可在適當(dāng)?shù)乃拗魃矬w，包括細(xì)菌，酵母和其他微生物，以及培養(yǎng)的哺乳動(dòng)物細(xì)胞中通過(guò)克隆和表達(dá)蜱的遺傳物質(zhì)得到這些抗原物質(zhì)。
在本發(fā)明的進(jìn)一步的實(shí)施方案中，以集合神經(jīng)節(jié)為特征的抗原物質(zhì)是經(jīng)體外培養(yǎng)蜱細(xì)胞或與其它動(dòng)物細(xì)胞雜交的蜱細(xì)胞制得的。
在本發(fā)明的進(jìn)一步的實(shí)施方案中，抗原物質(zhì)-包括但不僅限于以含集合神經(jīng)節(jié)為特征的抗原物質(zhì)，是通過(guò)親合層析或免疫沉淀，或者使用業(yè)經(jīng)蜱抗原物質(zhì)成功地免疫的溫血?jiǎng)游锏难蹇贵w、或者使用可與蜱抗原物質(zhì)特異結(jié)合的單克隆抗體制得的。
在本發(fā)明的進(jìn)一步實(shí)施方案中，抗原物質(zhì)是通過(guò)其結(jié)合于固定化的配體制得的，這些配體則是與神經(jīng)系統(tǒng)的已知功能分子-如神經(jīng)遞質(zhì)分子，或神經(jīng)系統(tǒng)特異的生長(zhǎng)因子，或其各自的衍生物相關(guān)聯(lián)的。
在本發(fā)明的更進(jìn)一步的實(shí)施方案中，是將得自其它蜱組織的免疫抑制成分失活，之后加到抗原混合物中，以引起抗抑制反應(yīng)。
將抗原物質(zhì)與一種或多種本領(lǐng)域內(nèi)普通技術(shù)人員已知的佐劑結(jié)合，如皂甙(或衍生物，或相關(guān)物質(zhì))，胞壁酰基二肽、海藻糖霉菌酸酯、弗氏完全佐劑，弗氏不完全佐劑、其它油包水型乳劑、雙重乳劑、葡聚糖、二乙氨乙基-葡聚糖、明礬、磷酸鋁、氫氧化鋁、皂土、酵母聚糖、聚電鮮質(zhì)、松香油、磷酸鈣、魚(yú)精蛋白、肌氨酸、甘油、山梨醇、丙二醇、可依其注冊(cè)商標(biāo)“Carbopol”購(gòu)得的羧乙烯基聚基合物、不揮發(fā)油類(lèi)以及較高級(jí)脂肪酸的合成脂。已發(fā)現(xiàn)皂甙是特別有效的佐劑。
可用一種適當(dāng)?shù)姆栏瘎┨幚砜乖镔|(zhì)，如用苯酚、“Phenonip”、甲醛、丙二醇、甘油、對(duì)羥苯甲酸脂，苯甲酸和其鈉鹽，六氯酚、季銨殺菌劑、疊氮鈉以及乙基汞硫代水楊酸鈉(或以其注冊(cè)商標(biāo)“Merthiolate”(硫柳汞)可購(gòu)得的形式)。
在配制之前或配制以后，可將抗原物質(zhì)經(jīng)過(guò)濾，照射或化學(xué)處理進(jìn)行滅菌。
可將抗原物質(zhì)與適當(dāng)載體進(jìn)行化學(xué)或物理連接，如與膠乳顆粒，免疫源性大分子，瓊脂糖微球等連接，或者可以配制成為與?；蚱渌麆?dòng)物抗體復(fù)合的抗原。
亦可用一種適當(dāng)?shù)囊种苿?、調(diào)節(jié)劑、交聯(lián)劑或變性劑，或加熱或照射方法處理抗原物質(zhì)以便保持或提高其免疫源效力。
亦可將抗原物質(zhì)與其它治療劑，例如驅(qū)蠕蟲(chóng)劑、驅(qū)吸血蟲(chóng)劑及其它疫苗結(jié)合使用，驅(qū)蠕蟲(chóng)劑如左旋咪唑或其治療上可接受的鹽，疫苗如梭狀芽胞桿菌疫苗。
亦可將抗原物質(zhì)與免疫刺激劑，如左旋咪唑，bestatin、tuftsin、植物血凝素、細(xì)菌脂多糖、多核苷酸、雙二乙氨乙基芴酮、香菇糖、異丙肌苷、溶血卵磷酯等，或者與免疫調(diào)節(jié)激素如白細(xì)胞間素、Ieukotrienes等，或與天然轉(zhuǎn)移因子的組合物聯(lián)合使用。
可將抗原物質(zhì)凍干或干燥或濃縮，使用前用一種適當(dāng)?shù)囊后w介質(zhì)(如滅菌鹽水)重新配成需要的濃度，必要時(shí)可加入一種或多種佐劑或上面提到的其它附加物質(zhì)。
用所述的任一種方法配制的抗原物質(zhì)在下文中稱(chēng)為疫苗。
動(dòng)物所用疫苗的量應(yīng)根據(jù)動(dòng)物體重及抗原物質(zhì)特殊制劑的相對(duì)活性確定。足夠保護(hù)動(dòng)物的抗原配制的疫苗，較好是含疫苗體積為1至10毫升，更好含有1至5毫升。所需要的抗原物質(zhì)的量是很小的，含有不大于2毫升蛋白(用于牛較好是10-1000微克，更好是50-500微克)的抗原物質(zhì)的典型樣品足以有效地免疫動(dòng)物，以抵抗蜱的侵染。對(duì)于其他動(dòng)物，如狗或家禽則使用相對(duì)較小的劑量。
疫苗的優(yōu)選給藥方式是經(jīng)胃腸道外。這里所用的“胃腸道外”這個(gè)術(shù)語(yǔ)是指靜脈內(nèi)，肌肉內(nèi)、皮內(nèi)及皮下注射。最方便的給藥方法是肌肉內(nèi)注射?？墒褂脤?duì)牛作其它治療應(yīng)用的常規(guī)注射槍。
該疫苗可用于控制、消除或防止各種蜱的侵染，包括牛蜱屬、扁頭蜱屬、硬蜱屬、玻眼蜱屬、花蜱屬、革蜱屬及血蜱屬的侵染。
亦可將該疫苗裝入特殊裝置內(nèi)，植入或接觸于動(dòng)物的某一部位，以緩釋或可控釋放的形式給藥。
由本發(fā)明提供的控制蜱的新方法具有許多優(yōu)點(diǎn)。如上所述，本發(fā)明的方法可避免使用有害的化學(xué)物質(zhì)，因而避免了維護(hù)和清洗浸泡缸及噴灑裝置的困難，此外尚有其他一些優(yōu)點(diǎn)。
其它優(yōu)點(diǎn)包括容易進(jìn)行控制蜱與其它治療的聯(lián)合處理、節(jié)省給藥所需要的勞動(dòng)強(qiáng)度，消除了毒性殺昆蟲(chóng)劑擴(kuò)散到環(huán)境中去的危害、防止抗藥性蜱種的產(chǎn)生以及具有長(zhǎng)時(shí)期保護(hù)作用等。這一長(zhǎng)保護(hù)期對(duì)于減小定期處理是有利的，而且因?yàn)閯?dòng)物在每一個(gè)新的蜱滋生季節(jié)開(kāi)始時(shí)即受保護(hù)，這時(shí)牧場(chǎng)中蜱的數(shù)目很少并很可能被忽略，故有一長(zhǎng)保護(hù)期也是有利的。在絕大多數(shù)情況下，接種疫苗的動(dòng)物均可足以在全年內(nèi)免受蜱的侵染。
疫苗的作用不僅能減少被侵染牛身上蜱的產(chǎn)生，而且也降低存活蜱的生命力和繁殖力，從而產(chǎn)生很少的卵，且總的成活力很低。這一現(xiàn)象便有力地證明了進(jìn)行廣泛的疫苗接種在降低蜱對(duì)牧場(chǎng)的污染中所起的作用。
對(duì)于牛蜱侵染來(lái)說(shuō)，微小牛蜱(Boophilus microplus)在其整個(gè)生活周期中只有單一的宿主，延長(zhǎng)的保護(hù)期也將具有穩(wěn)定降低牧場(chǎng)中染蜱水平的作用，而且這一作用將會(huì)逐年累積。對(duì)于多宿主蜱也會(huì)出現(xiàn)相似的效果。
下述實(shí)施例旨在進(jìn)一步闡明，而不是限定本發(fā)明。
實(shí)施例Ⅰ兩頭以前沒(méi)有接觸過(guò)蜱的悔福特牛，接種用蜱成蟲(chóng)(微小牛蜱)的消化道和集合神經(jīng)節(jié)勻漿制得的抗原制劑。將蜱成蟲(chóng)之消化道和集合神經(jīng)節(jié)的勻漿離心得到微粒和水溶性部分。將微粒部分用皂甙(Quil A)配成懸浮液給藥。水溶性部分則用弗氏不完全佐劑乳化，并將此兩部分分別在不同部位注射于牛的皮下。在試驗(yàn)的0天、14天和45天分三次注射疫苗?？扇苄钥乖鞍酌看巫⑸?00微克，微?？乖鞍讋t三天分別注射350、100和100微克。
在同一時(shí)間有一對(duì)牛只注射佐劑，而第三對(duì)牛則不作處理。
在第62、69、76、83和90天，每次用20，000只幼蜱攻擊牛。
計(jì)數(shù)所有牛身上掉下來(lái)的成蟲(chóng)蜱并進(jìn)行保溫，直到產(chǎn)卵結(jié)束。并記錄大小和外觀上不正常的蜱并單獨(dú)保溫。
下表中給出了正常與異常蜱以及產(chǎn)卵的總累積數(shù)。與對(duì)照牛比較，疫苗接種牛的各統(tǒng)計(jì)數(shù)字的降低情況如下
蜱總數(shù) 降低85%正常蜱數(shù) 降低96%卵總數(shù) 降低98%正常蜱的平均重量 降低50%正常蜱所產(chǎn)卵的平均重量 降低66%表1蜱總數(shù) 正常蜱數(shù) 卵(克)佐劑對(duì)照 30，200 25，120 2，239接種消化道和集合神經(jīng) 4，900 910 50節(jié)疫苗實(shí)施例Ⅱ由親合層析法由幼蜱勻漿中提取保護(hù)性抗原，制備蜱疫苗。
提 綱A)抗血清的產(chǎn)生由成蟲(chóng)蜱解剖出消化道和集合神經(jīng)節(jié)并用這些器官制備疫苗，之后給牛注射牛已被蜱侵染并表現(xiàn)有強(qiáng)的免疫反應(yīng)B)制備親合層析柱由(A)所述免疫牛制備血清，由血清中提取抗體并結(jié)合于層析載體上C)層析提取抗原將幼蜱制勻漿并分離成可溶性部分和微顆粒部分;
將這兩部分加樣于(B)步驟中制得的固定化的血清抗體上;
洗脫與固定化抗體結(jié)合的抗原并配制成疫苗。
D)接種接種了得自(C)之抗原的牛產(chǎn)生了顯著的抗蜱侵染的免疫力，而在疫苗接種中使用整體幼蜱勻漿則無(wú)效A)抗血清的產(chǎn)生收集蜱的器官由2頭悔福特牛身上手工收集脫皮的早令成、蟲(chóng)(生活周期的14-17天)雌性蜱(Boophilus microplus)。將蜱包埋于石臘中并解剖出下列器官1. 集合神經(jīng)節(jié)2. 消化道將器官在干冰上急速冷凍并儲(chǔ)存于-20℃?zhèn)溆谩?br>制備抗原(1)將消化道懸浮于PH7.2，含有132.5mM Nacl和1mMNa2EDTA的25mM Tris緩沖液(抗原緩沖液)中，并在手動(dòng)Dowse勻漿器中制成勻漿。將勻漿液30-60秒脈沖超聲波爆破沖擊10分鐘。之后以600g離心10分鐘。將沉淀的顆粒物在等部分上清液中再次勻漿并依上述條件繼續(xù)超聲處理5分鐘。合并經(jīng)過(guò)超聲處理的制備物并于15，000g離心20分鐘，之后丟去細(xì)胞團(tuán)塊。將上清液以100，000g離心1小時(shí)。保留如此得到的上清液(可溶性蛋白部分)，并將膜的沉淀團(tuán)塊經(jīng)勻化懸浮于抗原緩沖液內(nèi)。可溶性部分和膜部分均儲(chǔ)存于-20℃?zhèn)溆?。上述所有步驟均于冰浴中進(jìn)行。
(2)將集合神經(jīng)節(jié)用一研棒加壓通過(guò)一細(xì)孔網(wǎng)。將細(xì)胞懸液收集于抗原緩沖液內(nèi)并于-20℃冷凍備用。
配制疫苗將可溶性蛋白部分和細(xì)胞懸液加等體積弗氏不完全佐劑乳化。將膜蛋白部分懸浮于含有1毫克皂甙(Quil A)/毫升的抗原緩沖液中。所有疫苗制劑均于免疫接種的當(dāng)天配成。
接種疫苗按表2中所列的方案和劑量，使用18號(hào)針頭肌肉內(nèi)注射疫苗制品。在頸部右側(cè)的中三分之一處接種膜制劑，在頸部左側(cè)的中三分之一處接種可溶性蛋白制劑，而細(xì)胞懸液則注射于左右腿的半膜肌和半腱肌的中三分之一內(nèi)。對(duì)照組動(dòng)物為未接種者或只接受佐劑加鹽水者。在實(shí)驗(yàn)的第0、14和42天接種。
血樣采集以規(guī)定的間隔期由頸靜脈采血;離心收集血清并于-20℃保存攻擊試驗(yàn)使牛接觸蜱幼蟲(chóng)(10天令;每次侵染20，000只)即每七天共5次將幼蜱放在牛身上進(jìn)行侵染。收集和計(jì)數(shù)所有正常和受損的蜱，并確定它們生產(chǎn)的卵和幼蟲(chóng)。
結(jié) 果表 3
由疫苗產(chǎn)生的百分保護(hù)正常蜱 95%總蜱 84%卵 97%B)制備親合層析柱于室溫下用50%硫酸銨沉淀采自免疫牛的血清4小時(shí)。之后對(duì)親合偶聯(lián)緩沖液0.1MNaHCO3，0.5M NaCl(pH8.5)廣泛透析。將100毫克免疫球蛋白(Igs)偶聯(lián)于10毫升溴化氰活化過(guò)的葡聚糖4B凝膠上。用0.2M甘氨酸緩沖液(PH8.0)封閉其余反應(yīng)性部位。偶連并洗滌后，將凝膠裝入15毫升柱。已證明其對(duì)蜱高度敏感的對(duì)照組動(dòng)物的正常Igs，也被偶聯(lián)于凝膠上，并按前述方法制備層析柱。此外，用0.2M甘氨酸緩沖液(PH8.0)封閉活化的葡聚糖4B凝膠，并用于控制蛋白質(zhì)在凝膠上的非特異性吸附。
C)層析提取抗原由一組雌性蜱收集在其7天產(chǎn)卵期間產(chǎn)出的大量卵(10-100克)并在容器內(nèi)孵化。將10天令的幼蟲(chóng)冷凍1小時(shí)，從卵碎屑分離并按前述方法提取消化道疫苗(見(jiàn)A)。
在親合緩沖液(PBS，PH7.4)內(nèi)透析抗原并將50毫克抗原蛋白加樣于已裝好的親和層析柱。使抗原在柱上保溫30分鐘，之后用PBS(PH7.4)以20毫升/小時(shí)的流速?gòu)氐紫粗?，直?80nm處重新出現(xiàn)基線O.D.讀數(shù)。再以甘氨酸緩沖液(0.1M，PH2.8)上柱，收集各管，直到測(cè)得的O.D.讀數(shù)再次出現(xiàn)基線水平。將層析柱儲(chǔ)存于含有疊氮鈉的Tris緩沖液中，第二天用高和低PH緩沖液循環(huán)再生以這種方法分別層析由幼蜱勻漿制得的微粒和可溶性部分。首先用Triton X-100處理微粒部分，但不離心?？扇芪镔|(zhì)和微粒物質(zhì)是相繼按類(lèi)一同被洗脫的。
D)對(duì)牛的疫苗接種按配制消化道抗原(見(jiàn)上述(A))的方法配制經(jīng)過(guò)親合層析的幼蟲(chóng)抗原，于第0、28、和42天以每頭動(dòng)物500微克蛋白的總量給牛注射。
結(jié)果表4疫苗組 百分保護(hù)(總蜱) (卵)全幼蟲(chóng)均漿 16% 25%(可溶性+微顆粒)全幼蟲(chóng)勻漿經(jīng)親合純化部分 65% 84%(可溶性+微顆粒)
實(shí)施例Ⅲ基于解剖出的蜱器官所制疫苗的效力方法按實(shí)施例Ⅱ(A)所述方法，由成蟲(chóng)蜱解剖出消化道和集合神經(jīng)節(jié)。
制備疫苗并按實(shí)施例Ⅱ(D)和表5中所列述的方法，將消化道制劑(可溶性和微顆粒部分)或集合神經(jīng)節(jié)(細(xì)胞懸浮液)或兩者一起注射于被試牛。
用蜱侵染牛并按實(shí)施例Ⅱ(A)所述方法確定免疫性結(jié)果(a)在實(shí)驗(yàn)的第56天開(kāi)始的對(duì)連續(xù)3周攻擊的百分保護(hù)總蜱 卵集合神經(jīng)節(jié)加消化道 79% 91%只用消化道抗原 88% 96%(b)在第一次疫苗接種后約6個(gè)月時(shí)對(duì)自然侵染的百分保護(hù)集合神經(jīng)節(jié)加消化道 65%(蜱)只用消化道抗原 〔-20%〕可見(jiàn)，雖然在第56天時(shí)由使用集合神經(jīng)節(jié)加消化道抗原所產(chǎn)生的保護(hù)與單獨(dú)使用消化道的差不多，但在六個(gè)月的長(zhǎng)期保護(hù)作用卻顯著高于只用消化道抗原。
這些結(jié)果更詳細(xì)地在圖1中表明。
圖1是由兩組疫苗接種牛身上掉下的蜱的累積數(shù)與由對(duì)照牛身上掉下的積累蜱數(shù)的比例。
組1是用得自集合神經(jīng)節(jié)及消化道的抗原作疫苗接種的。組2是用只由消化道提取的抗原作疫苗接種的。以20，000個(gè)微小牛蜱幼蟲(chóng)“脈沖”侵染兩個(gè)疫苗接種組及對(duì)照組動(dòng)物，以檢定免疫性(百分保護(hù))水平;同時(shí)也通過(guò)蜱侵染之牧場(chǎng)的自然侵染情況檢定。
結(jié)果表明，對(duì)于“脈沖”和自然蜱攻擊來(lái)說(shuō)。組1(集合神經(jīng)節(jié)加消化道)相對(duì)于組2(只用消化道)提高了長(zhǎng)期保護(hù)作用。在對(duì)照組也表現(xiàn)有某種程度的自然免疫力。
權(quán)利要求
1.一種包含得自蜱之集合神經(jīng)節(jié)的抗原物質(zhì)的抗原組合物。
2.根據(jù)權(quán)利要求
1的組合物，其中含集合神經(jīng)節(jié)的抗原物質(zhì)是由蜱幼蟲(chóng)得到的。
3.根據(jù)權(quán)利要求
1或2的組合物，其進(jìn)一步包含由蜱之消化道得到的抗原物質(zhì)。
4.根據(jù)前述權(quán)利要求
中任一項(xiàng)的組合物，其中抗原物質(zhì)業(yè)經(jīng)親合層析基質(zhì)純化，所說(shuō)的親合層析基質(zhì)已結(jié)合有抗蜱抗原物質(zhì)的抗體。
5.根據(jù)前述權(quán)利要求
中任一項(xiàng)的組合物，其中蜱是微小牛蜱(Boophilus microplus)
6.根據(jù)前述權(quán)利要求
中任一項(xiàng)的組合物，其進(jìn)一步含有一種皂甙作為佐劑。
7.一種包含由蜱幼蟲(chóng)得到的抗原物質(zhì)的抗原組合物。
8.根據(jù)權(quán)利要求
7的組合物，其中抗原物質(zhì)是由蜱的集合神經(jīng)節(jié)和消化道得到的。
9.根據(jù)權(quán)利要求
7或8的組合物，其中抗原物質(zhì)是業(yè)已通過(guò)一親合層析基質(zhì)純化的，所說(shuō)的親合層析基質(zhì)上已結(jié)合有抗蜱抗原物質(zhì)的抗體。
10.根據(jù)權(quán)利要求
7、8或9的組合物，其中蜱是微小牛蜱(Boophilus microplus)。
11.根據(jù)權(quán)利要求
7至10中任一項(xiàng)的組合物，其進(jìn)一步包含一種皂甙作為佐劑。
12.一種包含由蜱得到的抗原物質(zhì)以及一種作為疫苗佐劑的皂甙的疫苗。
13.根據(jù)權(quán)利要求
12的疫苗，其中抗原物質(zhì)是由蜱的集合神經(jīng)節(jié)和消化道得到的。
14.根據(jù)權(quán)利要求
12或13的疫苗，其中抗原物質(zhì)業(yè)已通過(guò)親合層析基質(zhì)被純化，所說(shuō)的基質(zhì)上已結(jié)合了抗蜱抗原物質(zhì)的抗體。
15.根據(jù)權(quán)利要求
12、13或14的疫苗，其中蜱是微小牛蜱(Boophilus microplus)
16.根據(jù)權(quán)利要求
12至15中任一項(xiàng)的疫苗，其中抗原物質(zhì)是由蜱幼蟲(chóng)得到的。
17.一種生產(chǎn)由蜱得到的純化的抗原物質(zhì)的方法，其包括(1)制備一個(gè)已將抗蜱抗原物質(zhì)之抗體結(jié)合于其上的親合層析基質(zhì);(2)使蜱的粗提物通過(guò)該基質(zhì)，以在基質(zhì)上吸附蜱抗原;(3)從基質(zhì)上洗脫純化的抗原物質(zhì)。
18.根據(jù)權(quán)利要求
17的方法，其中蜱粗提物是由蜱幼蟲(chóng)得到的。
19.根據(jù)權(quán)利要求
17或18的方法，其中結(jié)合到親合層析基質(zhì)上的抗體是由已經(jīng)成功地進(jìn)行了抗蜱免疫之動(dòng)物的血清得到的。
20.根據(jù)權(quán)利要求
17、18或19的方法，其中結(jié)合到親合層析基質(zhì)的抗體是由蜱抗原物質(zhì)產(chǎn)生的單克隆抗體。
21.一種控制溫血?jiǎng)游锏尿缜秩镜姆椒ǎㄓ靡环N根據(jù)權(quán)利要求
1至16中任一項(xiàng)的抗原組合物或疫苗對(duì)動(dòng)物進(jìn)行免疫。
專(zhuān)利摘要
控制蜱對(duì)溫血?jiǎng)游锏那秩?，包括用含有由蜱集合神?jīng)節(jié)得到的抗原物質(zhì)的疫苗處理所說(shuō)的溫血?jiǎng)游铩ｒ缈乖镔|(zhì)是將蜱幼蟲(chóng)粗提物通過(guò)親合層析制得的。
文檔編號(hào)C07K14/435GK86105669SQ86105669
公開(kāi)日1987年3月4日 申請(qǐng)日期1986年7月3日
發(fā)明者約翰娜·帕特里夏·奧普德比克 申請(qǐng)人:庫(kù)珀斯動(dòng)物衛(wèi)生澳大利亞有限公司導(dǎo)出引文BiBTeX, EndNote, RefMan