專利名稱：無痛疫苗組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明是共同未決美國專利申請07/701，918(申請日為5/17/91)的部分后續(xù)申請。
按照疾病控制中心的建議，患者疫苗接種的耐受性是一個重要因素。據(jù)報道，目前有用的活減毒病毒疫苗組合物可引起疼痛。例如據(jù)報導(dǎo)含有M-M-R Ⅱ疫苗的三價麻疹、流行性腮腺炎和風(fēng)疹病毒在接種時引起了疼痛(PDR 1990，第1402頁)。這種疼痛應(yīng)答是由疫苗穩(wěn)定劑的弱酸性pH值引起的。根據(jù)最終進(jìn)行的試驗，本發(fā)明制成了降低的磷酸鹽濃度的組合物，該組合物可減少疼痛，同時保持了病毒的穩(wěn)定性。
適用于制備本發(fā)明組合物的活減毒病毒和制備這些病毒的方法是本領(lǐng)域已知的。例如美國專利3，555，149公開了流行性腮腺炎病毒及其制備方法。Enders，J.F.等人〔Proc.Soc.Exp.Biol.Med.86，227(1954)〕報道了麻疹病毒的Edmonston菌株，而風(fēng)疹病毒是已知的，例如RA27/3Wistar菌株。一般的說來，減弱毒性的病毒可利用在體外細(xì)胞培養(yǎng)體系中分離毒性病毒制得，該技術(shù)是本領(lǐng)域眾所周知的。
減毒活病毒疫苗的穩(wěn)定劑是本領(lǐng)域已知的，并且用于保持冷藏或凍干疫苗的活力。已知的低磷酸鹽穩(wěn)定劑包括SPGA，它含有0.218M蔗糖、0.0038M磷酸二氫鉀、0.0072M磷酸氫二鉀、0.0049M谷氨酸一鈉和1%白蛋白。在現(xiàn)有技術(shù)的三價的MMR 制劑中大約加入了0.076M磷酸鹽緩沖液。
雖然低磷酸鹽病毒穩(wěn)定劑是本領(lǐng)域已知的，目前使用的例如三價麻疹、流行性腮腺炎和風(fēng)疹組合物仍含有大約0.075M或更多的磷酸鹽。在使用該組合物時，超過大約0.075M的磷酸鹽含量會引起疼痛感并沒有被認(rèn)識到。通過用無效對照劑組合物仔細(xì)地進(jìn)行試驗(每次除去一種與受試者應(yīng)答相關(guān)的組分)，設(shè)計出一種新的組合物，該組合物能減少疼痛性。通過進(jìn)行完整的疫苗試驗，我們發(fā)現(xiàn)在使疫苗具有減少的疼痛性的同時，能保持病毒的活力。
本發(fā)明是一種新的組合物，該組合物含有活減毒麻疹、流行性腮腺炎、風(fēng)疹、脊髓灰質(zhì)炎、肝炎、流行性感冒或其它病毒或者這些病毒的結(jié)合，以及疫苗穩(wěn)定劑，該穩(wěn)定劑具有有限量的磷酸鹽，該磷酸鹽具有足夠的緩沖能力，在每升中含有大約0.005到少于0.075mol的磷酸鹽，以使pH值保持在6.0～7.0，但是含有這樣多量磷酸鹽的組合物在接種時不致于引起疼痛。
本發(fā)明新的組合物含有在如下所述穩(wěn)定劑中的任何活減毒病毒。優(yōu)選的病毒是按照本領(lǐng)域已知的方法制備的減毒活麻疹、流行性腮腺炎、風(fēng)疹、A型肝炎、流行性感冒、還原病毒(rotavirue)、或脊髓灰質(zhì)炎病毒。在優(yōu)選的實施方案中，該組合物除了含有穩(wěn)定劑以外，還含有2-4個上述的減毒活病毒的混合物。
該組合物具有足夠量的磷酸鹽緩沖液以使PH值保持在6.0至7.0之間，而又不至于在接種這種新的疫苗組合物時產(chǎn)生疼痛。為實現(xiàn)本發(fā)明的目的，合適的磷酸鹽緩沖液的濃度范圍是大于約0.005M并小于約0.075M磷酸鹽，在PH約6.0至7.0之間起緩沖作用。在本發(fā)明優(yōu)選的實施方案中，該組合物含有大約0.0075M的磷酸鹽，其PH值為6-7。該組合物還含有本領(lǐng)域已知的其他可接受的組分以穩(wěn)定疫苗的活病毒組分和減毒病毒。
麻疹病毒可以是從Ender′s減毒的Edmonston菌株得到的一個病毒的減毒系。病毒在低溫下通過在雞胚細(xì)胞培養(yǎng)物中多次傳代可以進(jìn)一步減毒。在已公開的穩(wěn)定劑中每劑應(yīng)含有約1，000或更多的TCID50(以指定的美國參考病毒(U.S.Reference Virus)的效價為根據(jù)的組織培養(yǎng)感染劑量)。最好一得到麻疹病毒就將其冷凍貯存在適宜的液體培養(yǎng)基中。
流行性腮腺炎病毒最好是流行性腮腺炎病毒的Jeryl Lynn菌株，適合在雞胚細(xì)胞培養(yǎng)物中繁殖。在已公開的穩(wěn)定劑中每劑應(yīng)含有大約20，000TCID50病毒。最好一得到流行性腮腺炎病毒就將其冷凍貯存在適宜的液體培養(yǎng)基中。用于冷凍貯存流行性腮腺炎病毒的一種培養(yǎng)基是上述的溶液A。
風(fēng)疹病毒是例如根據(jù)本領(lǐng)域的已知方法在人二倍體細(xì)胞(例如WI-38)培養(yǎng)物中生長的活減毒風(fēng)疹病毒的RA27/3菌株。在已公開的穩(wěn)定劑中每劑應(yīng)含有大約1，000TCID50。最好一得到風(fēng)疹病毒就將其冷凍在合適的液體培養(yǎng)基中。
在每種情況下，從培養(yǎng)物中得到病毒，其濃度應(yīng)足以根據(jù)一價或多價疫苗的最終制劑稀釋。當(dāng)加到病毒穩(wěn)定劑組分中時，病毒制劑可以含有殘余的培養(yǎng)基組分，形成了本發(fā)明新的組合物。如上述所用的細(xì)胞培養(yǎng)基和病毒貯存液或在制備本發(fā)明組合物中所遺留下來的生理鹽水為該組合物提供了少量的組分，例如人白蛋白、酚紅、碳酸氫鈉和培養(yǎng)基例如培養(yǎng)基199〔Morgan等人，Proc.Soc.Exp.Biol.& Med 731-8(1950)〕，Basal Madium Eagle，〔Eagle，Science 122501-504(1955);In Vitro 6，No.2(1970)〕;Dulbecco′s改性的Eagle′s培養(yǎng)基〔Dulbecco等人，Virology 8396(1959);Smith等人，J.Virol 12185-196(1960);In Vitro 6.No2(1970)〕;Minimal Essential Medium(Eagle)〔Science 130432(1959)〕;或RPMI培養(yǎng)基〔Moore等人In Vitro 6 No.2(1970)〕。
根據(jù)本發(fā)明的一個實施方案，一種病毒組合物含有高達(dá)25%體積的病毒。例如，25%的體積可以由10%的麻疹、10%的流行性腮腺炎和5%的風(fēng)疹病毒組成。大約7.5%的體積是0.1M磷酸鹽緩沖液，剩余的67.5%的體積是具有小于0.075M磷酸鹽的一種穩(wěn)定劑溶液。
在任一給定的加入磷酸鹽的實施方案中，能夠提供0.005-0.075M的最終磷酸鹽濃度的任何水與不同磷酸鹽儲備液的結(jié)合都是可行的。因此不是加入6.75%的蒸餾水和0.75%1M的磷酸鹽，而是加入7.5%0.1M的磷酸鹽同樣可以提供有效的0.0075M的最終磷酸鹽濃度。
在每種情況下，該組合物是通過混合適宜體積比率的各組分而制備的。然后可以將此完整的組合物冷凍或凍干。該組合物的優(yōu)選貯存方法是以凍干的狀態(tài)貯存。凍干制劑可以簡單地在接種以前立即用水使其復(fù)原。
我們已經(jīng)制成了本發(fā)明的疫苗組合物，并且我們發(fā)現(xiàn)本發(fā)明的疫苗組合物在保持各個病毒的穩(wěn)定性方面是有效的。由于低磷酸鹽緩沖液濃度，在接種疫苗時，本發(fā)明組合物具有最小的疼痛性，當(dāng)在該疫苗組合物中含有減毒相似物時，該疫苗在防止被病毒的有毒菌株感染方面是有效的。
以下所提供的實施例是本發(fā)明公開的擴(kuò)展，而不是將本發(fā)明限制在這些具體的實施例中。
實施例1一種三價，低磷酸鹽麻疹、流行性腮腺炎、風(fēng)疹疫苗的制備將三價麻疹、流行性腮腺炎、風(fēng)疹疫苗即M-M-R
Ⅱ與低磷酸鹽疫苗制劑即M-M-R
ⅡLP-1在接種以后注射部位的反應(yīng)進(jìn)行比較。兩種疫苗制備如下基準(zhǔn)低PO4溶液 M-M-R
Ⅱ M-M-R
ⅡLP-1低磷酸鹽穩(wěn)定劑 67.5% 67.5%風(fēng)疹溶液 5% 5%麻疹溶液 10% 10%流行性腮腺炎溶液 10% 10%1M磷酸鹽 7.5% 0.75%蒸餾水 0% 6.75%制備用于配制這些組合物的病毒儲備液，以使最終的制劑每劑中至少含有1000TCID50麻疹和風(fēng)疹病毒，并且每劑中至少含有20，000TCID50流行性腮腺炎病毒。所謂“基準(zhǔn)”MMRⅡ約含0.075摩爾/升的磷酸鹽，而低磷酸鹽MMRⅡ約含0.0075摩爾/升的磷酸鹽。用基準(zhǔn)組合物接種時產(chǎn)生疼痛，而用低磷酸鹽組合物接種時不產(chǎn)生疼痛。
在志愿者身上進(jìn)行的試驗表明，與基準(zhǔn)組合物相比低磷酸鹽疫苗減少了疼痛。對在高和低磷酸鹽組合物中的各個病毒進(jìn)行的分析表明在每種組合物中病毒的穩(wěn)定性差不多相等。
實施例2一種三價，低磷酸鹽麻疹、流行性腮腺炎、風(fēng)疹疫苗的制備通過用穩(wěn)定劑組分代替實施例1的M-M-R ⅡLP-1制劑中的水成分可以制成具有低磷酸鹽濃度的三價麻疹、流行性腮腺炎、風(fēng)疹疫苗即M-M-R ⅡLP-2，并將其與基準(zhǔn)M-M-R Ⅱ進(jìn)行比較基準(zhǔn)低PO4溶液 M-M-R Ⅱ M-M-R ⅡLP-2低磷酸鹽穩(wěn)定劑 67.5% 74.25%風(fēng)疹溶液 5% 5%麻疹溶液 10% 10%流行性腮腺炎溶液 10% 10%1M磷酸鹽 7.5% 0.75%制備用于配制這些組合物的病毒儲備液以使最終的制劑每劑至少含有1000TCID50的麻疹和風(fēng)疹病毒，并且每劑至少含有20，000TCID50的流行性腮腺炎病毒。
權(quán)利要求
1.疫苗組合物，該組合物含有減毒活麻疹、流行性腮腺炎和風(fēng)疹病毒；穩(wěn)定劑；和每升約0.005到少于約0.075摩爾的足以緩沖的磷酸鹽，以保持pH在6.0-7.0，但是該磷酸鹽含量不足以使該組合物在接種時產(chǎn)生疼痛。
2.根據(jù)權(quán)利要求1的組合物，最終的磷酸鹽濃度約為0.0075摩爾/升。
3.根據(jù)權(quán)利要求2的組合物，該組合物每劑至少含有1000TCID50麻疹和風(fēng)疹病毒并且至少含有20，000TCID50流行性腮腺炎病毒。
4.根據(jù)權(quán)利要求2的組合物，其中風(fēng)疹病毒占該組合物的5%、流行性腮腺炎病毒占該組合物的10%并且麻疹病毒占該組合物的10%。
5.權(quán)利要求1-4中任何一項的組合物的凍干形式。
6.用權(quán)利要求1的組合物對人體進(jìn)行接種以防止由麻疹、流行性腮腺炎、或風(fēng)疹病毒感染所引起的疾病的方法，以使得在接種部位產(chǎn)生最小的疼痛。
全文摘要
本發(fā)明的組合物含有活減毒病毒(包括麻疹、流行性腮腺炎或風(fēng)疹病毒，可以是單獨的或者是其結(jié)合)的一種無痛疫苗制劑。該疫苗具有一種穩(wěn)定劑組分，它可以包括該領(lǐng)域中已經(jīng)描述過的任何穩(wěn)定劑，但是要特別地限定在大于約0.005到少于約0.075M磷酸鹽濃度，在pH約6.0—7.0起緩沖作用。該組合物在接種時減少了疼痛性方面優(yōu)于已知的疫苗組合物。
文檔編號A61K9/00GK1068268SQ92104548
公開日1993年1月27日 申請日期1992年5月16日 優(yōu)先權(quán)日1991年5月17日
發(fā)明者P·J·普羅沃斯特, D·R·納蘭 申請人:麥克公司