專利名稱：在低濃度游離氨基酸下生產(chǎn)棒酸的發(fā)酵工藝的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及在含有碳源和氮源的適當培養(yǎng)基上，由鏈霉菌屬的菌株發(fā)酵生產(chǎn)次級代謝產(chǎn)物的領域。
背景技術：
鏈霉菌屬的微生物發(fā)酵產(chǎn)生大量的多種不同的次級代謝產(chǎn)物，例如β-內(nèi)酰胺類、聚酮類化合物以及大環(huán)內(nèi)酯類，如棒酸、匹馬菌素和紅霉素。棒酸是重要的β-內(nèi)酰胺酶抑制劑，由屬于鏈霉菌屬的多種微生物菌株產(chǎn)生，諸如帶小棒鏈霉菌(S.clavuligerus) ATCC 27064、S.jumonjinensis(英國專利1563103)、桂濱鏈霉菌(S.katsurahamanus)IFO13716 FERM 3944(日本專利83009679B)和鏈霉菌屬的株P6621 FERM2804(日本專利申請55162993A)。
已經(jīng)能夠大量生產(chǎn)棒酸，并且生產(chǎn)條件正在進行不斷的優(yōu)化，以便提高產(chǎn)量及終產(chǎn)物的純度。已經(jīng)進行了關于連續(xù)發(fā)酵(GB 1508977)、對分批工藝中碳的補料(EP-182522)、低濃度氨的維持(WO 96/18743和Romero J.，Liras P.和Martin J.F.，應用微生物學和生物技術(Appl.Microbiol.Biotechnol.(1984)，第20卷，318-325)、生長和生產(chǎn)期間發(fā)酵培養(yǎng)基中磷酸鹽濃度的降低(Romero(1984)，參見上文，Lebrihi A.，Germain P.和Lefebre G.，應用微生物學和生物技術(1987)，第26卷，130-135和國際專利申請WO 97/19187和WO 97/39137)方面的棒酸生產(chǎn)的優(yōu)化。就碳源而言，已知與甘油相比甘油三酯類是優(yōu)選的碳源(Butterworth(1984)；工業(yè)抗生素生物技術(Biotecnology of Industrialantibiotics)，E.J.Vandamme，第一版，Marcel Dekker公司225-235頁和專利申請WO 97/19187)。
就氮源而言，Brana A.F.，Paiva N.和Demain A.L.已經(jīng)進行了大量研究，普通微生物學雜志(J.of General Microbiology(1986)，第132卷，1305-1317。已發(fā)現(xiàn)在含有一種氨基酸的培養(yǎng)基上的生長比以氨作為唯一氮源的生長迅速。
而且，在含有氨作為唯一氮源的培養(yǎng)基上，最大比生長速率小于每小時0.05，Brana(1986)參見上文，以及Aharonowitz Y.和Demain A.L.加拿大微生物學雜志(Can.J.Microbiol.)(1979)，第25卷，61-67，而在含有至少一種氨基酸(如，天冬酰胺、天冬氨酸、谷氨酸、谷氨酰胺、丙氨酸、組氨酸、脯氨酸、蘇氨酸或者精氨酸)的培養(yǎng)基中，最大比生長速率大于每小時0.05。因此，優(yōu)選使用含有一種或者多種氨基酸的培養(yǎng)基。與只含有氨的無機培養(yǎng)基相比，在這種培養(yǎng)基中生物量的生產(chǎn)花費的時間較少，這理所當然比較慢的生產(chǎn)工藝更具有優(yōu)勢。
在未預先公開的國際申請WO 98/37179中描述了精氨酸是棒酸生產(chǎn)以及頭孢菌素生產(chǎn)的(例如來自帶小棒鏈霉菌的頭孢霉素C)發(fā)酵配料(Aharonowitz y.和Demain A.L.，參見上文)。除此之外，在分批工藝中谷氨酸抑制棒酸的形成(Romero(1984)，參見上文)，所以不能夠直接使用谷氨酸或谷氨酰胺。
而且，甚至更為普遍的是使用蛋白質(zhì)作為氨基酸的來源，因為這比使用單個氨基酸便宜得多。顯而易見的缺點是蛋白質(zhì)的不均一性，以及一般與這些復合營養(yǎng)物相關的不可再現(xiàn)的質(zhì)量。棒酸生產(chǎn)所使用的典型復合氮源是用于帶小棒鏈霉菌(EP 0 182 522 B1和WO 97/19187)的魚粉、大豆粉、花生粉，用于S.jumonjinensis(英國專利1563103)的大豆粉，用于鏈霉菌的種P6621 FERM 2804(WO 97/39137+日本專利申請55162993)的大豆粉和玉米漿，以及用于桂濱鏈霉菌(日本專利83009679B)的大豆粉和棉籽粉。在一篇綜述文章中，報道了大豆蛋白質(zhì)是棒酸生產(chǎn)最重要的蛋白質(zhì)(Butterworth(1984)，參見上文)。
此處，我們描述在產(chǎn)生次級代謝產(chǎn)物的鏈霉菌屬的發(fā)酵液中，優(yōu)選富含谷氨酸和脯氨酸的水解蛋白質(zhì)的令人驚奇的有利應用，以及谷蛋白水解產(chǎn)物與酪蛋白水解產(chǎn)物在這個方面的特定優(yōu)勢。另外，我們還描述了使用特定的氨基酸來源(尤其是將谷氨酸)作為生產(chǎn)這些化合物的分批-補料工藝中的補料營養(yǎng)物質(zhì)的出乎意料的有利應用。
附圖描述

圖1低水平游離谷氨酸下分批發(fā)酵中棒酸的效價。
圖2低水平游離谷氨酸下分批-補料(fed-batch)發(fā)酵中棒酸的效價。
發(fā)明概述本發(fā)明提供了一種通過將一種能產(chǎn)生次級代謝產(chǎn)物的鏈霉菌屬菌株在適當?shù)呐囵B(yǎng)基上發(fā)酵來生產(chǎn)次級代謝產(chǎn)物的方法，方法是將游離氨基酸濃度維持在低于5克/升發(fā)酵液，優(yōu)選地，低于2.5克/升，更優(yōu)選地，低于0.5克/升發(fā)酵液來產(chǎn)生次級代謝產(chǎn)物，前提是排除了向帶小棒鏈霉菌發(fā)酵液中加入4g/L濃度游離天冬氨酸的情況。這種工藝尤其有利于生產(chǎn)β-內(nèi)酰胺類、聚酮類化合物以及大環(huán)內(nèi)酯類，優(yōu)選地，棒酸、匹馬菌素、紅霉素、制霉菌素或兩性霉素。根據(jù)本發(fā)明的一個方面，以分批-補料或者連續(xù)方式應用一種或者多種氨基酸，優(yōu)選谷氨酸或者脯氨酸以在發(fā)酵液中維持這樣低的濃度。根據(jù)本發(fā)明的另一個方面，除氨基酸本身以外，還可以分批、分批-補料、半連續(xù)或者連續(xù)方式加入蛋白質(zhì)水解產(chǎn)物，更優(yōu)選地，谷蛋白水解產(chǎn)物或者酪蛋白水解產(chǎn)物，最優(yōu)選地小麥谷蛋白水解產(chǎn)物。
發(fā)明詳述本發(fā)明描述通過以分批-補料或者連續(xù)方式應用所述氨基酸或者通過以任一方式應用蛋白質(zhì)水解產(chǎn)物的方法利用缺乏游離氨基酸的培養(yǎng)基。
本發(fā)明的申請中，將蛋白質(zhì)定義為具有用分子量大于20,000道爾頓來表示其大小的氨基酸多聚體，它沒有經(jīng)過任何方式的將蛋白質(zhì)降解成較小片段的加工。將蛋白質(zhì)水解產(chǎn)物定義為具有平均大小在300至20,000道爾頓之間的氨基酸多聚體，并且游離的氨基酸含量低于總氨基酸的30％。這些蛋白質(zhì)水解產(chǎn)物可通過相應蛋白質(zhì)的酶促水解或化學水解而產(chǎn)生?；蛘咄ㄟ^在工藝中采用非水解蛋白質(zhì)作為原料，采用增強了蛋白酶活性的菌株來實現(xiàn)使用水解蛋白質(zhì)的優(yōu)勢。而且，在本申請中，谷氨酸代表glutam類化合物，例如谷氨酸和谷氨酰胺。本申請中，將蛋白質(zhì)提取物定義為具有低于300道爾頓分子量的蛋白質(zhì)水解產(chǎn)物，并且其中30％以上的氨基酸以游離氨基酸存在。
當某種蛋白質(zhì)或者其水解產(chǎn)物被定義為富含谷氨酸時，這就意味著大于15％的氨基酸成分是由谷氨酸和谷氨酰胺組成。所描述的富含谷氨酸的蛋白質(zhì)是酪蛋白(21％)和小麥谷蛋白(35％)。
根據(jù)本發(fā)明的一個方面，令人驚奇地發(fā)現(xiàn)當培養(yǎng)基中含有蛋白質(zhì)水解產(chǎn)物時，尤其是所述水解產(chǎn)物來源于小麥谷蛋白或者酪蛋白時，棒酸的產(chǎn)量非常高。因為當使用其它蛋白質(zhì)來源如酵母和玉米的蛋白質(zhì)提取物時，尤其是在與肽(＜30％游離氨基酸)相比高水解度(35％)時，生產(chǎn)水平大大地下降，這表明蛋白質(zhì)水解產(chǎn)物應該優(yōu)選地含有低于30％的游離氨基酸，甚至更優(yōu)選地，低于5％的游離氨基酸，最優(yōu)選地低于1％的游離氨基酸?？梢匀魏渭恿闲问?，即分批、分批-補料、連續(xù)或者半連續(xù)形式，使用和補加優(yōu)選地富含谷氨酸的蛋白質(zhì)水解產(chǎn)物。半連續(xù)加料是指連續(xù)向發(fā)酵液中加入營養(yǎng)物質(zhì)，同時間歇地移出少量的發(fā)酵液。
發(fā)酵培養(yǎng)基可以是含有(NH4)2SO4、游離氨基酸、KH2PO4、MgSO4.7H2O、CaCl.2H2O、3-(N-瑪啉代)丙磺酸、甘油、琥珀酸鈉和微量元素溶液，并具有低濃度氨基酸的確定培養(yǎng)基，或者因含有蛋白質(zhì)水解產(chǎn)物而形成的復合培養(yǎng)基。本發(fā)明的一部分也包括復合培養(yǎng)基的使用，例如將蛋白質(zhì)水解產(chǎn)物加入到堅果粉、蔬菜粉、種子粉、谷物粉、如那些在發(fā)酵工業(yè)中有用的草粉、大豆粉、Iineseed粉、花生粉、馬鈴薯粉、向日葵、豌豆或者菜豆粉、棉籽粉、小麥谷蛋白、全麥、稻米粉中，其中游離氨基酸的濃度低。培養(yǎng)基還可按照所要求達到的最佳結(jié)果，含有多種來源或多種肽大小的蛋白質(zhì)水解產(chǎn)物混合物與所述粉末的混合物。
除野生型菌株之外，在本發(fā)明工藝中，還可以使用能夠在化學成分上確定的培養(yǎng)基中發(fā)酵的微生物菌株，和/或使用通過將目的親本菌株經(jīng)過使用物理方法，(例如紫外線照射)或者適當?shù)幕瘜W誘變劑(例如N-甲基-N’-硝基-N-亞硝基胍或甲磺酸乙酯)的經(jīng)典誘變處理而得到的改良微生物菌株。同樣還可對目的親本菌株應用重組DNA技術，由此用一種或多種目的功能基因轉(zhuǎn)化親本菌株。
在上述的混合物中還可以加入任何可同化的碳源，如糖，例如葡萄糖、果糖、蔗糖、麥芽糖、乳糖；或者多糖，例如淀粉、麥芽糖糊精和菊糖或其它果糖多聚體；甘油三酯類，例如豆油、向日葵油、橄欖油、三油酸酯等；(多元)醇類，例如乙醇、丙醇、甘油、甘露醇；或者有機酸類或其鹽，例如乙酸、丙酸、琥珀酸、乙二酸、丙二酸、檸檬酸、乳酸、葡糖酸等。
還可以在培養(yǎng)基中加入無機氮源，例如，氨和/或硝酸或者它們的任何一種鹽。也可以使用ureum。而且還可以在培養(yǎng)基中添加維生素和多種無機陰離子，例如，硫酸根離子、磷酸根離子、氯離子、硼酸根離子、鉬酸根離子、碘酸根離子或者它們的鹽，以及陽離子，鉀、鈉、鋅、錳、鎂、鐵、銅、鈷、鎳等。
通過從預培養(yǎng)物或者種子培養(yǎng)物發(fā)酵中，以占主發(fā)酵培養(yǎng)基大約1％至50％，尤其是5％至20％的體積來接種，開始發(fā)酵。該工藝可以持續(xù)大約24至400小時，尤其是48至168小時。溫度將維持在20℃至40℃之間，優(yōu)選25℃至35℃之間，甚至更為優(yōu)選在26℃至30℃之間。通過用堿性物質(zhì)(例如氨、氫氧化鈉、氫氧化鉀、氫氧化鈣)或者有機堿(例如，賴氨酸、精氨酸和組氨酸)以及酸性物質(zhì)(例如非有機酸，如硫酸和鹽酸)滴定，可將pH維持在pH6至8?；蛘咭部梢允褂糜袡C酸例如，谷氨酸、檸檬酸、葡糖酸或乙酸等。
可以通過改變?nèi)肟跉怏w中的氧濃度、過壓的使用、改變攪拌速度和氣流將溶解氧濃度控制在最佳的范圍。范圍可在0％至100％空氣飽和度之間變動。
該工藝還可以通過控制多種非生長限制性營養(yǎng)物質(zhì)的最適濃度來進行。依據(jù)所選生長限制性營養(yǎng)物質(zhì)，這些生長非限制性營養(yǎng)物質(zhì)可能含有任何相關的碳源、氮源、磷源、硫源或氧。
二氧化碳應該維持在無毒性的濃度，方法是通過例如增加穿過發(fā)酵罐的氣流，以便使出口氣體中的二氧化碳濃度低于5％，優(yōu)選地低于2.5％。
發(fā)酵可通過分批、分批-補料、或(半)連續(xù)發(fā)酵工藝的方式來進行。
當然，由本發(fā)明的發(fā)酵工藝生成的不純棒酸的回收，以及通過本領域公知的方法隨后將其轉(zhuǎn)化成藥學可接受的鹽，均構成本發(fā)明的一個方面。最有利的方法之一是通過加入相應的胺鹽形成化合物，例如，N，N，N’，N’-四甲基乙二胺、1，3-雙(二甲氨基)-2-丙醇、叔丁胺、叔辛胺、二苯甲基胺和雙((2-二甲氨基)乙基)醚，將不純的棒酸轉(zhuǎn)化為它的氨基鹽，并且將棒酸胺與無毒的藥學可接受的鹽(例如乙基己酸鉀)反應以生成相應的純凈鹽，例如棒酸鉀。
實施例1比較使用蛋白質(zhì)、蛋白質(zhì)水解產(chǎn)物和蛋白質(zhì)提取物的棒酸分批發(fā)酵通過多輪經(jīng)典誘變(紫外線、亞硝基胍(NTG))以及在搖瓶培養(yǎng)中采用本領域公知的咪唑方法測定棒酸產(chǎn)量進行選育，來改良帶小棒鏈霉菌ATCC 27064以用于棒酸的生產(chǎn)。將在胰胨豆胨內(nèi)湯培養(yǎng)基(TSB-培養(yǎng)基)中，28℃下在轉(zhuǎn)速為280轉(zhuǎn)/分的搖床培養(yǎng)箱中生長48小時的該菌株營養(yǎng)菌絲在-80℃下冷凍保存。
將1毫升冷凍的菌絲接種到100毫升經(jīng)滅菌的(30分鐘，121℃)的含有5-20克/升麥芽糖1 H2O、15-30克/升bacto胰蛋白胨、15-30克/升bacto蛋白胨、1-10克/升bacto豆胨、1-5克/升磷酸二氫鉀和0.2克/升合成防泡劑的預培養(yǎng)基中。
27℃至28℃培養(yǎng)72小時后，將2.5％的這種預培養(yǎng)物轉(zhuǎn)種到無菌的生產(chǎn)培養(yǎng)基中，其中含有2.5克所的復合氮源，例如蛋白質(zhì)、蛋白質(zhì)水解產(chǎn)物和/或蛋白質(zhì)提取物。生產(chǎn)培養(yǎng)基還含有50-100克/升甘油、5-20克/升大豆粉、0.5-2克/升磷酸二氫鉀、適當?shù)奈⒘吭鼗旌衔锖?.2-2克/升合成防泡劑。28℃及適當?shù)膿u動條件下培養(yǎng)4天后，收集培養(yǎng)物并通過標準的HPLC方法分析棒酸。
當比較分批工藝中不同的氮源時，令人驚奇地發(fā)現(xiàn)，與使用蛋白質(zhì)相比，使用蛋白質(zhì)水解產(chǎn)物增加棒酸產(chǎn)量至少10％。最好的蛋白質(zhì)水解產(chǎn)物來自谷蛋白，其次分別是來自酪蛋白和大豆蛋白(參見表1)。
表1.帶小棒鏈霉菌ATCC 27064的一株突變株在除大豆粉外還使用不同復合氮源時的棒酸產(chǎn)量。
實施例2在低水平游離谷氨酸培養(yǎng)基中的棒酸發(fā)酵棒酸的分批發(fā)酵將帶小棒鏈霉菌ATCC 27064在28℃的溫度下于轉(zhuǎn)速為220轉(zhuǎn)/分的搖床培養(yǎng)箱中預培養(yǎng)26小時，起始pH為6.8，培養(yǎng)基中含有5至30克/升甘油、5至30克/升大豆蛋白胨、2至6克/升氯化鈉，和0.5至3克/升碳酸鈣。
將預培養(yǎng)物以10％的體積接種到1升含有10-30克/升甘油、0.5至3克/升KH2PO4、1至3克/升(NH4)2SO4、15-25克/升谷氨酸單鈉、0.05至0.2克/升FeSO4.7H2O、0.1至1克/升MgSO4.7H2O、10-20克/升2-(N-瑪啉代)丙磺酸(MOPS)、0.2-1克/升basildon防泡劑，和適當?shù)奈⒘吭厝芤旱幕瘜W組分確定培養(yǎng)基中。用4N NaOH將pH調(diào)至6.8。在28℃的溫度下在轉(zhuǎn)速為220轉(zhuǎn)/分的搖床培養(yǎng)箱中將二次預培養(yǎng)物培養(yǎng)20小時，起始pH為6.8。
將二次預培養(yǎng)物以3.3％的體積接種到29升含有10-30克/升甘油、0.5至1克/升KH2PO4、0.5至3克/升(NH4)2SO4、10-30克/升谷氨酸單鈉、0.05-0.15克/升FeSO4.7H2O、0.1至1克/升MgSO4.7H2O、0.1-1克/升basildon防泡劑，和適當?shù)奈⒘吭厝芤旱幕瘜W組分確定培養(yǎng)基中。
發(fā)酵在30℃下進行，通過用4N NaOH和4N H2SO4滴定將pH控制在6.95至7.05。通過控制攪拌速率將溶解氧壓力維持在50％空氣飽和度之上或調(diào)整到50％的空氣飽和度。棒酸的分批-補料發(fā)酵將帶小棒鏈霉菌ATCC27064在28℃的溫度下在轉(zhuǎn)速為220轉(zhuǎn)/分的搖床培養(yǎng)箱中預培養(yǎng)26小時，起始pH為6.8，培養(yǎng)基中含有5至30克/升甘油、5至30克/升大豆蛋白胨、2至6克/升氯化鈉，和0.5至3克/升碳酸鈣。
將預培養(yǎng)物以10％的體積接種到1升含有10-30克/升甘油、0.5至3克/升KH2PO4、1至3克/升(NH4)2SO4、15-25克/升谷氨酸單鈉、0.05至0.2克/升FeSO4.7H2O、0.1至1克/升MgSO4.7H2O、10-20克/升2-(N-瑪啉代)丙磺酸(MOPS)、0.2-1克/升basildon防泡劑，和適當?shù)奈⒘吭厝芤旱幕瘜W組分確定培養(yǎng)基中。用4N NaOH將pH調(diào)至6.8。在28℃的溫度下在轉(zhuǎn)速為220轉(zhuǎn)份的搖床培養(yǎng)箱中進行二次預培養(yǎng)20小時，起始pH為6.8。
將二次預培養(yǎng)物以4％的體積接種到24升含有5至15克/升甘油、0.5-2克/升KH2PO4、0.5至3克/升(NH4)2SO4、10克/升谷氨酸單鈉、0.05至0.15克/升FeSO4.7H2O、0.1至1克/升MgSO4.7H2O、0.05至-1克/升basildon防泡劑，和適當?shù)奈⒘吭厝芤旱幕瘜W組分確定培養(yǎng)基中。
發(fā)酵在30℃下進行，通過用4N NaOH和4N H2SO4滴定將pH控制在6.95至7.05。通過控制攪拌速率將溶解氧壓力維持在50％空氣飽和度之上或調(diào)整到50％的空氣飽和度。
當分批培養(yǎng)基中的磷酸鹽耗盡后5小時，以30-60克/小時的速率加入含有300至500克甘油/千克物料的碳物料，以50-150克/小時的速率加入含有50至100克谷氨酸鈉/千克物料、5至10克NH4)2SO4/千克物料，以及5至10克KH2PO4/千克物料的氮-磷酸物料。
圖1和圖2分別表示在分批工藝和分批-補料工藝培養(yǎng)基中的棒酸和谷氨酸濃度。從圖1中可以看出，當谷氨酸濃度降到5克/升并且甚至更優(yōu)選地低于2.5克/升時，棒酸開始產(chǎn)生，最終棒酸濃度為250-300毫克/升。圖2表明當將谷氨酸加入到發(fā)酵罐中并使其維持在很低的濃度(＜1克/升)，30小時后，這個實驗中的棒酸效價能夠增加到500毫克/升，與分批實驗相比提高了1倍。
權利要求
1.一種在含有碳源和氮源的適當培養(yǎng)基上通過鏈霉菌屬菌株的發(fā)酵生產(chǎn)次級代謝產(chǎn)物的方法，其中將供給產(chǎn)生次級代謝產(chǎn)物的鏈霉菌屬的游離氨基酸濃度保持在低于5克/升發(fā)酵液，更優(yōu)選地低于2.5克/升，最優(yōu)選地低于0.5克/升，前提是排除了帶小棒鏈霉菌發(fā)酵液之濃度為4克/升游離天冬氨酸的情況。
2.根據(jù)權利要求1所述的方法，其中產(chǎn)生的次級代謝產(chǎn)物是β-內(nèi)酰胺、聚酮化合物或大環(huán)內(nèi)酯。
3.根據(jù)權利要求2所述的方法，其中產(chǎn)生的次級代謝產(chǎn)物是棒酸、匹馬菌素、紅霉素、制霉菌素或兩性霉素。
4.根據(jù)權利要求1-3所述的方法，其特征在于以分批、分批-補料、半連續(xù)或者連續(xù)方式應用蛋白質(zhì)水解產(chǎn)物作為游離氨基酸的來源。
5.根據(jù)權利要求4所述的方法，其中通過向與相應的野生型菌株相比具有增強的蛋白酶活性的菌株應用蛋白質(zhì)，形成蛋白質(zhì)水解產(chǎn)物。
6.根據(jù)權利要求4或5所述的方法，其特征在于應用富含谷氨酸或脯氨酸中任意一種的蛋白質(zhì)水解產(chǎn)物。
7.根據(jù)權利要求6所述的方法，其特征在于應用谷蛋白水解產(chǎn)物或者酪蛋白水解產(chǎn)物。
8.根據(jù)權利要求7所述的方法，其特征在于使用小麥谷蛋白水解產(chǎn)物。
9.根據(jù)權利要求1-3中任一項所述的方法，其特征在于以分批-補料、半連續(xù)或連續(xù)方式應用游離氨基酸。
10.根據(jù)權利要求9所述的方法，其特征在于應用谷氨酸或者脯氨酸。
11.根據(jù)權利要求1-10中任一項所述的方法，其特征在于通過帶小棒鏈霉菌的發(fā)酵生產(chǎn)棒酸。
12.一種在適當培養(yǎng)基上通過帶小棒鏈霉菌的發(fā)酵生產(chǎn)棒酸的方法，其特征在于使用谷蛋白水解產(chǎn)物或者酪蛋白水解產(chǎn)物。
13.一種進一步純化棒酸的方法，其特征在于純化由權利要求11或者12的方法獲得的棒酸。
14.根據(jù)權利要求13的棒酸純化以及隨后轉(zhuǎn)化為其鹽的工藝，其特征在于使不純棒酸轉(zhuǎn)化為其胺鹽，方法是通過加入相應的胺鹽形成化合物，并將所述的棒酸胺與無毒的藥學可接受的鹽反應，生成相應的純的棒酸鹽。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種通過鏈霉菌屬的發(fā)酵產(chǎn)生次級代謝產(chǎn)物的方法。如果將游離氨基酸濃度保持在低水平,則可獲得出人意料地高產(chǎn)量。
文檔編號A61K31/43GK1308682SQ99808223
公開日2001年8月15日 申請日期1999年7月1日 優(yōu)先權日1998年7月3日
發(fā)明者W·T·A·M·德拉阿特, P·克拉本 申請人:Dsm公司