[0122] UV照射，UVB和UVA的照射
[0123] 太陽模擬器（UVA Spot 1000, Filter H2，Hiinle,德國）用于用測試區(qū)域上請 求的照射強度照射測試區(qū)域?？赏瑫r照射測試區(qū)域。
[0124] 結果
[0125] 如圖1中所示，EPA/GLA測試產(chǎn)品比安慰劑更有效地減小了 UV引起的皮膚粗糙度。 顯示的數(shù)據(jù)是第5天相比于第1天。
[0126] 實施例9:抗痤瘡效果
[0127] 材料和方法
[0128] 測試化合物和細菌培養(yǎng)物
[0129] 所有的細菌培養(yǎng)基和試劑購自Sigma-Aldrich Ltd，除非另外說明。
[0130] 在乙醇中制備50mg/mL水楊酸（"SA"）的儲備液，以及壬二酸（"AZA")、>95%二十 碳五烯酸（"EPA"）、>95% γ-亞麻酸（"GLA"）和更低純度γ-亞麻酸（"GLA 70%"） 的每種100mg/mL的儲備液。分別在DMSO和蒸餾水中制備過氧化苯甲酰（" BPO " 50mg/ mL)和呋喃苯胺酸（"FUS"20mg/mL)的儲存液。獲得新霉素（"ΝΕΟ"）并將其作為無菌鹽 水中10mg/mL溶液使用。痤瘡丙酸桿菌NCTC737從典型培養(yǎng)物國家保藏中心（National Collection of Type Cultures) (Porton Down, UK)獲得。
[0131] 根據(jù)臨床和實驗室標準學院（Clinical and Laboratory Standards Institute) 出版的方案M11-A5 (CLSI，2001)，針對痤瘡丙酸桿菌，通過肉湯微稀釋法，測定最小抑制 濃度（MIC)和最小細菌濃度（MBC)測定值MIC和MBC。簡言之，在無菌的96孔板中制備 測試化合物的兩倍稀釋液，對于AZA、EPA、GLA、GLA70%、BPO和SA，至多為4096mg/L ;對于 ΝΕ0,至多512mg/L以及對于FUS，至多32mg/L。通過從補加布氏瓊膠（SBA)板重懸菌落， 在3mL補加布氏肉湯（SBB)中制備痤瘡丙酸桿菌接種物，補加布氏瓊膠（SBA)板在37°C厭 氧地生長（10% C02、10% H2、80% N2)大約 72h(A85Workstation ;Don Whitley Scientific Ltd.，Shipley，UK)。測定細菌懸液的吸光度讀數(shù)（A600)，并使用新鮮培養(yǎng)基調節(jié)接種物至 lx 107CFU/mL 〇
[0132] 通過在磷酸鹽緩沖鹽水（PBS)中稀釋并且在SBA上鋪板，確認接種物尺寸。用5 yL 細菌懸液接種每個孔。陰性對照孔僅含有培養(yǎng)基，而陽性對照孔含有用細菌懸液接種的培 養(yǎng)基。針對在任一測試孔中使用的最大濃度溶劑（DMS0或乙醇）（約10% )的抗菌效果，進 一步控制接種的孔。在37°C厭氧地溫育微量滴定板48h，然后測定MIC作為阻止可見的細 菌生長的每種化合物最低濃度。通過從未顯示可見生長的每個孔鋪板50 μ L到SBA并且在 37°C厭氧地溫育這些板96h，測定MBC。MBC是殺死>99. 9 %最初接種物的每種化合物最低 濃度。重復進行MIC和MBC。
[0133] 棋盤測試（Checkerboard tests)
[0134] 根據(jù)美國微生物學協(xié)會（American Society for Microbiology)出版的標準方 案（American Society for Microbiology, 1992)，進行棋盤試驗，以研宄在 EPA、GLA 和 GLA70%之間結合BPO、FUS、NEO和SA的協(xié)同抗痤瘡丙酸桿菌相互作用的存在。在SBB中 制備每種化合物的兩倍稀釋液，并將其以標準棋盤模式分配至96孔板?；衔锏臐舛确?圍從彡1/16XMIC至彡4XMIC。陽性對照孔含有在任何孔中使用的最大體積溶劑的肉湯，而 陰性對照孔只含有肉湯。接種物如上制備為lxl〇 7CFU/mL。將每一孔（除了陰性對照）用 5 yL細菌懸液溫育。在37 °C厭氧地溫育板48h，然后基于肉湯的清晰度和/或孔中菌落 的存在測定每個孔含有生長或沒有生長。針對每一相互作用，測定每個孔的分級抑制濃 度（fractional inhibitory concentration) (ΣFIC)。使用每一藥物-藥物相互作用的 相同板的最低SFIC值，計算用于評估每一相互作用的性質的平均值。協(xié)同作用被定義為 Σ FIC < 0. 5。為了檢查任何殺細菌協(xié)同作用，將來自不含可見生長的每個孔的10 μ L鋪板 至SBA并在37°C厭氧地溫育48h。在此報告中，當試劑組合在結合濃度小于化合物的累加 MBC下殺死>99. 9%的接種物時，認為有殺細菌協(xié)同作用。
[0135] 結果：
[0136] 測試試劑單獨的針對痤瘡丙酸桿菌的活性
[0137] EPA、GLA和GLA70%針對痤瘡丙酸桿菌的MIC為64-128mg/L，盡管這些脂肪酸沒 有一種在高達4096mg/L殺死細菌（表5)。SA和BPO的MIC是64mg/L，但這兩種試劑在高 達4096mg/L都不是殺細菌的。FUS針對痤瘡丙酸桿菌的MIC和MBC分別是2和256mg/L， NEO的MIC和MBC分別是8和16mg/L (表5)。AZA顯示沒有抗痤瘡丙酸桿菌活性，甚至在 4096mg/L (表7)。乙醇和DMSO在高達測試的最大濃度對痤瘡丙酸桿菌的生長沒有作用。重 要的是注意GLA 70 %正好與GLA>95 %-樣有效。
[0138] 表7每種測試化合物針對痤瘡丙酸桿菌的MIC和MBC
[0139]
[0140] 在EPA、GLA和GLA 70 %結合BPO、FUS、NEO和SA之間的相互作用
[0141] 使用棋盤試驗檢測三種脂肪酸（EPA、GLA和GLA70% )與四種常用抗微生物劑 (BP0、NE0、FUS和SA)之間的協(xié)同作用。使用兩個相同棋盤的每一個的最低SFIC計算每 一相互作用的平均SFIC(表8)。在控制痤瘡丙酸桿菌方面顯示陽性相互作用/協(xié)同作用 的唯一組合是EPA與SA。
[0142] 表8每種相互作用針對痤瘡丙酸桿菌的平均分級抑制濃度（SFIC)值，η = 2 ; SD ;標準偏差
[0143]
[0144] 實施例10:制劑A至C的察覺的氣味
[0145] 進行研宄以確定根據(jù)實施例1制備的制劑A至C的組合物的察覺的氣味。將少量 的每種組合物隨機施加至四位參與對象的每一位的手背或手腕。在數(shù)分鐘內在Lichert型 標尺上每位對象報告"魚腥"味的水平，如下面表9顯示。
[0146] 表9制劑A至C的氣味水平
[0148] 這些研宄數(shù)據(jù)表明，制劑C的組合物出乎意料地具有化妝品可接受的氣味（例如 沒有令人不快的氣味），而制劑A或制劑B的組合物處于與EPA和GLA脂肪酸相同的水平。
[0149] 雖然在本文已經(jīng)參考各種具體的材料、方法和實例描述和說明了本公開，但應理 解該公開不限于為此目的選擇的材料和方法的特定組合。這些細節(jié)的許多變化可以被暗 示，如本領域技術人員將理解的。說明書和實施例意欲是示例性的，本公開的真實范圍和精 神僅由權利要求書指出。在本說明書中提及的所有參考文獻、專利和專利申請在此通過引 用以其全部并入。
【主權項】
1. 化妝品組合物，其包括 游離二十碳五烯酸； 游離Y-亞麻酸；和 一種或多種化妝品可接受的賦形劑， 其中所述游離二十碳五烯酸和所述游離Y-亞麻酸以重量比大約2:1至大約8:1存 在。2. 權利要求1所述的組合物，其中所述賦形劑選自：溶劑、螯合劑、潤濕劑、增稠劑、乳 化劑、潤膚劑、吸附劑、防腐劑、香料、抗氧化劑、PH調節(jié)劑、花紋造型劑及其組合。3. 權利要求1所述的組合物，其中所述賦形劑包括水、Trilon B(EDTA二鈉）、 Glycerine Veg. PH EUR 99.5% (甘油）、Cosmedia SP(聚丙烯酸鈉）、Lincol BAS(C12-15 苯甲酸烷基酯）、Lincol SN(鯨蠟硬脂醇異壬酸酯）、Burro Di KARITE(牛油果樹果 脂）、Euxyl PE9010(苯氧基乙醇& 乙基己基丙三醇）、Profumo Fiori D'acqua 85328、 Lipochroman(二甲基甲氧基苯并二氫吡喃醇）、抗壞血酸棕櫚酸醋、Imwitor 372P(甘油硬 脂酸醋梓檬酸醋）、Cutina GMS/Bergabest GS40/Lincol GMS (硬脂酸甘油醋）、Lanette 22/Vegarol 22/Akest AB/Nafol 1822C(山崳醇）、氫氧化鈉和 Dry-Flo PC (淀粉辛烯基琥 珀酸鋁）。4. 權利要求1-3任一項所述的組合物，其中所述游離二十碳五烯酸存在的量是大約 0? 5wt. %至大約 8wt. %、大約 0? 8wt. %至大約 4wt. %、大約 0? 815wt. %、大約 I. 631wt. % 或大約 4. 080wt. %。5. 權利要求1-4任一項所述的組合物，其中所述游離Y-亞麻酸存在的量是大 約0? Iwt. %至大約3wt. %、大約0? 2wt. %至大約I. 5wt. %、大約0? 285wt. %、大約 0? 570wt. %或大約 I. 425wt. %。6. 權利要求1-5任一項所述的組合物，其中所述游離二十碳五烯酸存在的量是大約 0. 815wt. %和所述y亞麻酸存在的量是大約0. 285wt. %。7. 權利要求1-5任一項所述的組合物，其中所述游離二十碳五烯酸存在的量是大約 1. 631wt. %和所述y亞麻酸存在的量是大約0. 570wt. %。8. 權利要求1-5任一項所述的組合物，其中所述游離二十碳五烯酸存在的量是大約 4. 080wt. %和所述y亞麻酸存在的量是大約I. 425wt. %。9. 權利要求1-8任一項所述的組合物，其中所述游離二十碳五烯酸來源于包含至少大 約95wt %游離二十碳五烯酸的組合物。10. 權利要求1-9任一項所述的組合物，其中所述游離Y _亞麻酸來源于包含至少大約 70wt%游離y -亞麻酸的組合物。11. 權利要求1-10任一項所述的組合物，其中所述游離二十碳五烯酸來源于包含至少 大約95wt%游離二十碳五烯酸的組合物并且其中所述游離Y-亞麻酸來源于包含至少大 約70wt%游離y-亞麻酸的組合物。12. 權利要求1-10任一項所述的組合物，其中所述游離Y _亞麻酸來源于包含至少大 約70wt%并且不大于大約90wt%游離y-亞麻酸的組合物。13. 權利要求1-12任一項所述的組合物，其中所述游離Y _亞麻酸來源于包含至少大 約70wt%游離y-亞麻酸以及棕櫚酸、硬脂酸、油酸、亞麻酸、二十碳烯酸和二十二碳烯酸 中的至少一種游離酸的組合物。14. 權利要求1-13任一項所述的組合物，其中所述組合物包括大約IOwt. %或大約 5wt. %的所述組合物中存在的所有脂肪酸。15. 權利要求1所述的組合物，其包括： 大約 0? 815wt. % 至大約 4. 08wt. % EPA ; 大約 0? 285wt. %至大約 I. 425wt. % GLA ; 大約 3. Owt% Glycerine Veg. PH EUR 99. 5% (甘油）， 大約 0? lwt. % Trilon B(EDTA 二鈉）； 大約0? 5wt. % Cosmedia SP (聚丙稀酸鈉）； 大約2wt. % Imwitor 372P (甘油硬脂酸醋梓檬酸醋）； 大約3wt. % Lincol BAS(C12-15苯甲酸烷基酯）； 大約5wt. % Lincol SN(鯨賭硬脂醇異壬酸醋）； 大約 2wt. % Cutina GMS/Bergabest GS40/Lincol GMS(硬脂酸甘油醋）； 大約 lwt. % Lanette 22/Vegarol 22/Akest AB/Nafol 1822C(山箭醇）； 大約2wt. % Burro Di KARITE (牛油果樹果脂）； 大約lwt. % Dry-Flo PC (淀粉辛烯基琥泊酸錯）； 大約lwt. % EuxylPE 9010 (苯氧基乙醇&乙基己基丙三醇）； 大約 0? 7wt. % Profumo Fiori D' acqua 85328 ; 大約0? Olwt. % Lipochroman(二甲基甲氧基苯并二氫吡喃醇）； 大約0.1 wt. %抗壞血酸棕櫚酸酯； 大約0. 3wt. %氫氧化鈉；和 余量的水。16. 權利要求1-15任一項所述的組合物，其中所述組合物具有化妝品可接受的氣味。17. 權利要求1-16任一項所述的組合物，進一步包括水楊酸。18. 治療和/或預防對象的皮膚疾病或病況的方法，所述方法包括： 局部施用權利要求1-17任一項所述的組合物至所述對象的皮膚的至少一部分。19. 權利要求18所述的方法，其中所述皮膚疾病或病況是痤瘡。20. 權利要求18所述的方法，其中所述皮膚疾病或病況是起皺。21. 權利要求18所述的方法，其中所述皮膚疾病或病況是脂溢性皮炎。
【專利摘要】本公開一般地涉及包含游離二十碳五烯酸和游離γ-亞麻酸的化妝品組合物。在一些實施方式中，化妝品組合物具有化妝品可接受的氣味。
【IPC分類】A61P17/10, A61P17/08, A61K8/36, A61Q19/08, A61K8/368, A61K31/202
【公開號】CN104994911
【申請?zhí)枴緾N201380054837
【發(fā)明人】M·曼庫, J·克萊馬克思, D·科蘭
【申請人】尊貴科學有限公司
【公開日】2015年10月21日
【申請日】2013年9月5日
【公告號】CA2882850A1, EP2892616A2, US8673325, US9192674, US20140066507, US20140066509, WO2014037903A2, WO2014037903A3