一種銀杏葉酊劑及其制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種銀杏葉酊劑及其制備方法，屬于中藥合成技術(shù)領(lǐng)域。
【背景技術(shù)】
[0002] 銀杏葉為銀杏科植物銀杏的干燥葉，銀杏葉提取物是經(jīng)現(xiàn)代提取工藝從銀杏葉中 提取的活性物質(zhì)的富集產(chǎn)品，可用于阿爾茨海默病、抑郁癥、糖尿病、神經(jīng)疾病、陽痿、記憶 障礙、外周血管疾病、間歇性跛行、腦轉(zhuǎn)耳鳴等疾病的治療。其主要活性成分為黃酮類和萜 類。黃酮類成分包括單黃酮、黃酮醇苷、乙?；S酮醇苷、雙黃酮、黃烷-3-醇類以及原花色 素等。萜類銀杏內(nèi)酯有銀杏內(nèi)酯A、B、C、J、M及白果內(nèi)酯。
[0003] 目前國家食品藥品監(jiān)督管理總局(CFDA)批準(zhǔn)了數(shù)十種銀杏葉提取物劑型，包括銀 杏葉片、膠囊、顆粒、軟膠囊、分散片、丸、酊、滴劑、口服液、銀杏葉提取物注射液等，其成藥 形式均是將銀杏葉提取物與其它輔料混合形成，銀杏葉酊就是將銀杏葉提取物溶解在一定 深度的乙醇中形成的一種劑型。具有抑制血小板聚集、降低血液黏滯度、改善微循環(huán)的作 用，并能通過加強(qiáng)心肌組織代謝，抑制心肌纖維化，通過舒張血管、改善微循環(huán)等，來保持營 養(yǎng)成分及氧氣的供給，阻止心肌功能哀退，同時(shí)能減少氧自由基，提尚對(duì)缺氧的耐受力，調(diào) 節(jié)血官功能，增強(qiáng)組織能量代謝，降低血清總膽固醇和低密度脂蛋白膽固醇，升高高密度脂 蛋白膽固醇，減少腦梗死及其他心腦血管疾病的危險(xiǎn)因素等作用。主要用于治療用于瘀血 阻絡(luò)引起的胸痹心痛、中風(fēng)、半身不遂、舌強(qiáng)語謇;冠心病穩(wěn)定型心絞痛、腦梗死等疾病。眾 所周知，銀杏葉提取物是一個(gè)非常復(fù)雜的化合物富集產(chǎn)品，除上述主要的活性成分，其含有 從無機(jī)物到有機(jī)物、從極性到非極性、從小分子到生物大分子的各種成分，據(jù)不完全統(tǒng)計(jì)銀 杏葉中含有240多個(gè)化學(xué)成分。受技術(shù)發(fā)展的制約，目前銀杏葉提取物中各化學(xué)成分并沒有 完全被確認(rèn)，且有效成份、作用機(jī)制、藥代動(dòng)力學(xué)及不良反應(yīng)也并沒有完全探究清楚。而具 有本領(lǐng)域公知常識(shí)的技術(shù)人員均知悉，上述提到的作用機(jī)制、藥代動(dòng)力學(xué)及不良反應(yīng)均與 成藥中的化學(xué)成分有著必然的聯(lián)系。因此，進(jìn)一步明確銀杏葉提取物中的有效成分，并進(jìn)一 步精確有效成分的含量，提尚銀杏葉提取物的藥效，減少不良反應(yīng)，對(duì)于提尚患者健康及其 用藥安全具有重要的意義。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明的目的在于提供一種有效成分及含量更加明確的銀杏葉酊劑，并進(jìn)一步的 提供該提取物的制備方法。
[0005] 為此，本申請(qǐng)采取的技術(shù)方案為，
[0006] -種銀杏葉酊劑，包括由銀杏葉提取物形成的中藥組合物和用于溶解所述中藥組 合物的乙醇水溶液，以占所述中藥組合物的質(zhì)量百分比計(jì)，所述中藥組合物包括，24-40% 的銀杏總黃酮，6-16%的銀杏內(nèi)酯，銀杏酸小于5ppm。
[0007] 上述的銀杏葉酊劑中，所述中藥組合物中包括，2.08-3.46 %的山奈酚-3-0-對(duì)香 豆酰基葡萄糖鼠李糖苷，2.11-3.53%的槲皮素-3-0-2"，6" -二鼠李糖基葡萄糖苷。
[0008] 上述的銀杏葉酊劑中，所述中藥組合物中包括，1.4-3 %的銀杏內(nèi)酯A，0.9-1.8 % 的銀杏內(nèi)酯B和1.2-1.3%的銀杏內(nèi)酯C。
[0009] 上述的銀杏葉酊劑中，所述中藥組合物中還包括白果內(nèi)酯和蘆丁。
[0010] 上述的銀杏葉酊劑中，所述中藥組合物的制備方法包括，
[0011] Sl山奈酚-3-0-對(duì)香豆?；咸烟鞘罄钐擒盏闹苽浞椒?，
[0012] (1)將銀杏葉提取物溶于體積濃度為40-80%的乙醇-水溶液中，制備得到銀杏葉 提取物的濃度為10-1 〇〇〇mg/mL的提取物溶液；
[0013] (2)對(duì)所述步驟（1)得到的提取物溶液進(jìn)行一維液相色譜分離，得到一維粗產(chǎn)品， 本步驟中一維液相色譜分離的條件為，色譜柱采用以硅膠為基質(zhì)的親水型色譜填料;流動(dòng) 相中的有機(jī)相為乙醇或甲醇，水相為水;洗脫條件以〇_15min有機(jī)相95%降至90%梯度進(jìn)行 或等度進(jìn)行；收集保留時(shí)間為15~20min的組分和剩余組分，將收集到的保留時(shí)間為15~ 20min的組分去除溶劑干燥得到所述山奈酚-3-0-對(duì)香豆酰基葡萄糖鼠李糖苷的一維粗產(chǎn) 品；
[0014] (3)將步驟(2)得到的一維粗產(chǎn)品溶解在體積濃度為40-80%的甲醇-水溶液或乙 醇-水溶液中，得到所述一維粗產(chǎn)品的濃度為20-200mg/mL的粗產(chǎn)品溶液；
[0015] (4)對(duì)所述步驟(3)得到的粗產(chǎn)品溶液進(jìn)行二維液相色譜制備，得到山奈酚-3-0-對(duì)香豆酰基葡萄糖鼠李糖苷，其中二維液相色譜條件為，色譜柱采用以硅膠為基質(zhì)鍵合C18 反相填料;流動(dòng)相中的有機(jī)相為乙醇或甲醇，水相為水;洗脫條件以0-60min有機(jī)相15%增 至80%梯度進(jìn)行或等度進(jìn)行;收集保留時(shí)間為50-55min的組分，干燥得到山奈酚-3-0-對(duì)香 豆?；咸烟鞘罄钐擒?；
[0016] S2所述槲皮素-3-0-2"，6"_二鼠李糖基葡萄糖苷的制備方法，
[0017] (a)將銀杏葉提取物溶于體積濃度為40-80%的乙醇-水溶液中，制備得到銀杏葉 提取物的濃度為10-1 〇〇〇mg/mL的提取物溶液；
[0018] (b)對(duì)所述步驟(a)得到的提取物溶液進(jìn)行一維液相色譜分離，得到一維粗產(chǎn)品； 本步驟中一維液相色譜分離的條件為，色譜柱采用以硅膠為基質(zhì)的親水型色譜填料;流動(dòng) 相中的有機(jī)相為乙醇或乙腈，水相為水;洗脫條件以〇_15min有機(jī)相95%降至90%梯度進(jìn)行 或等度進(jìn)行；收集保留時(shí)間為28-32min的組分和殘余組分，將保留時(shí)間為28-32min的組分 去除溶劑干燥得到含有槲皮素-3-0-2"，6"_二鼠李糖基葡萄糖苷的一維粗產(chǎn)品；
[0019] (c)將步驟(b)得到的一維粗產(chǎn)品溶解在體積濃度為40-80%的甲醇-水溶液或乙 醇-水溶液中，得到所述一維粗產(chǎn)品的濃度為20-200mg/mL的粗產(chǎn)品溶液；
[0020] (d)對(duì)所述步驟(c)得到的粗產(chǎn)品溶液進(jìn)行二維液相色譜制備，得到槲皮素-3-0-2"，6"_二鼠李糖基葡萄糖苷；
[0021 ] S3由銀杏葉提取物形成的中藥組合物的制備方法
[0022]將所述殘余組分和和所述剩余組分去除容積后混合，并干燥得到輔助品，將所述 輔助品、所述山奈酚-3-0-對(duì)香豆酰基葡萄糖鼠李糖苷和所述槲皮素-3-0-2"，6"_二鼠李糖 基葡萄糖苷混合得到所述由銀杏葉提取物形成的中藥組合物。
[0023]上述的銀杏葉酊劑中，
[0024]所述步驟(d)中二維液相色譜條件為，色譜柱采用以硅膠為基質(zhì)鍵合C18反相填 料;流動(dòng)相中的有機(jī)相為乙醇或乙腈，水相為水;0-60min內(nèi)等度洗脫，洗脫時(shí)有機(jī)相的體積 濃度為15-25% ;收集保留時(shí)間為40-45min的組分，干燥得到槲皮素-3-0-2"，6"-二鼠李糖 基葡萄糖苷。
[0025] 上述的銀杏葉酊劑中，所述步驟(2)中一維液相色譜分離，有機(jī)相還含有甲酸，甲 酸體積濃度為〇. 1 % ;水相中還含有甲酸，甲酸體積濃度為〇. 1 % ;
[0026] 所述步驟(4)二維液相色譜制備，流動(dòng)相中還含有甲酸，甲酸體積濃度為0.1%;水 相中還含有甲酸，甲酸體積濃度為0.1 %。
[0027] 上述的銀杏葉酊劑中，所述步驟(c)中一維液相色譜分離，有機(jī)相還含有甲酸，甲 酸體積濃度為〇. 1 % ;水相中還含有甲酸，甲酸體積濃度為〇. 1 % ;
[0028] 所述步驟(d)二維液相色譜制備，流動(dòng)相中還含有甲酸，甲酸體積濃度為0.1%;水 相中還含有甲酸，甲酸體積濃度為0.1 %。
[0029] 本申請(qǐng)還提供了一種上述任一銀杏葉酊劑的制備方法，包括，取所述銀杏葉提取 物形成的中藥組合物溶解于體積濃度為60%的乙醇水溶液中，即得，其中所述中藥組合物 與所述乙醇水溶液的質(zhì)量體積比為0.4g/10ml。
[0030] 上述銀杏葉酊劑的制備方法中，還包括加入輔料的步驟。
[0031 ]與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有如下優(yōu)點(diǎn)，
[0032] (1)本發(fā)明的銀杏葉酊中，將其中的銀杏葉提取物中銀杏總黃酮的含量明確到24-40 %，銀杏內(nèi)酯的含量明確到6-16 %，同時(shí)明確了兩種對(duì)其藥物具有重要影響的山奈酚ΙΟ-對(duì)香豆?；咸烟鞘罄钐擒蘸烷纹に?3-0-2" ，6"_ 二鼠李糖基葡萄糖苷，并進(jìn)一步的將 其含量精確限定為2.08-3.46 %和2.11-3.53 %，進(jìn)一步的，清楚的界定其銀杏內(nèi)酯Al. 4-3%，銀杏內(nèi)酯BO. 9-1.8%和銀杏內(nèi)酯Cl. 2-1.3%。通過對(duì)銀杏葉提取物中有效成分含量的 進(jìn)一步精確，及有效成分的進(jìn)一步認(rèn)定，提尚了銀杏葉提取物的藥效，進(jìn)而提尚了由其制備 得到的酊劑的藥效。
[0033] (2)本發(fā)明的銀杏葉酊中，通過對(duì)銀杏葉提取物進(jìn)行精制和提純，得到具有確切含 量的組合物，在提高銀杏葉提取物藥效的同時(shí)，通過上述操作過程減少了雜質(zhì)，從而減少了 酊劑的不良反應(yīng)。
[0034] (3)本申請(qǐng)從銀杏葉提取物中采用二維液相色譜法分離出明確的藥用化合物山奈 酚-3-0-對(duì)香豆酰基葡萄糖鼠李糖苷和槲皮素-3-0-2"，6" -二鼠李糖基葡萄糖苷，其制備方 法簡(jiǎn)單，分離操作方便，利于銀杏葉提取物藥品質(zhì)量的提高。
【附圖說明】
[0035] 為了使本發(fā)明的內(nèi)容更容易被清楚的理解，下面根據(jù)本發(fā)明的具體實(shí)施例并結(jié)合 附圖，對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)的說明，其中
[0036] 圖1本發(fā)明實(shí)施例1中制備得到的山奈酚-3-0-對(duì)香豆?；咸烟鞘罄钐擒盏馁|(zhì) 譜；
[0037] 圖2本發(fā)明實(shí)施例1中制備得到的山奈酚-3-0-對(duì)香豆酰基葡萄糖鼠李糖苷的H譜；
[0038] 圖3本發(fā)明實(shí)施例1中制備得到的山奈酚-3-0-對(duì)香豆酰基葡萄糖鼠李糖苷的C譜；
[0039] 圖4本發(fā)明實(shí)施例1中制備得到的槲皮素-3-0-2"，6"_二鼠李糖基葡萄糖苷的質(zhì) 譜；
[0040] 圖5本發(fā)明實(shí)施例1中制備得到的槲皮素-3-0-2"，6"_二鼠李糖基葡萄糖苷的H譜；
[0041] 圖6本發(fā)明實(shí)施例1中制備得到的槲皮素-3-0-2"，6"_二鼠李糖基葡萄糖苷的C譜。
【具體實(shí)施方式】
[0042] 本發(fā)明實(shí)施例中出現(xiàn)的百分?jǐn)?shù)％，如無特殊說明表示的是體積百分?jǐn)?shù)，例如， "40%的乙醇一水溶液"表示乙醇的水溶液其中乙醇的體積百分?jǐn)?shù)為40%;
[0043] "40%的甲醇一水溶液"表示甲醇的水溶液其中甲醇的體積百分?jǐn)?shù)為40% ;
[0044] "乙醇（含0.1 %甲酸）"表示乙醇與甲酸的混合溶液其中甲酸的體積百分?jǐn)?shù)為 0.1 % ; "7K(含〇. 1 %甲酸)"表示水與甲酸的混合溶液其中甲酸的體積百分?jǐn)?shù)為〇. 1 %。
[0045] 本申請(qǐng)的銀杏葉提取物適用于采用現(xiàn)有提取工藝從銀杏葉中提取得到的提取物， 為便于比較，本申請(qǐng)實(shí)施例中采用的銀杏葉提取物由北京雙鶴高科天然藥物有限責(zé)任公司 提供。
[0046] 實(shí)施例1
[0047] 山奈酚-3-0-對(duì)香豆?；咸烟鞘罄钐擒盏闹苽?br>[0048] 稱取銀杏葉提取物IOg，溶于50mL 40%的乙醇一水溶液，制得銀杏葉提取物溶液， 濃度為200mg/mL，過0.45μηι微孔濾膜，進(jìn)行一維液相色譜分離。一維液相色譜采用以硅膠為 基質(zhì)的親水型色譜填料50 X 250mm，ΙΟμπι(華譜新創(chuàng)科技有限公司），流動(dòng)相采用含0.1 %體 積濃度甲酸的甲醇為有機(jī)相，含〇. 1%體積濃度甲酸的水為水相，梯度洗脫方式:〇-15min有 機(jī)相濃度從95%降至90%臺(tái)階梯度進(jìn)行。采用DAD紫外檢測(cè)器360nm選擇吸收波長，制備溫 度為室溫，進(jìn)樣量為500yL/針，流動(dòng)相流速為90mL/min，收集15~20分鐘的餾分和剩余組 分，將收集到的15~20分鐘的餾分進(jìn)行旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮至干，為一維制備山奈酚