-3-0-對香豆 酰基葡萄糖鼠李糖苷粗品。用50%的乙醇一水溶液溶解山奈酚-3-0-對香豆?；咸烟鞘?李糖苷粗品，濃度為80mg/mL，經(jīng)微孔濾膜過濾，進(jìn)行二維液相色譜制備，色譜柱為以硅膠為 基質(zhì)的親水型色譜填料(50 X 150mm，5μηι，華譜新創(chuàng)科技有限公司)流動相選擇含0.1 %體積 濃度甲酸的甲醇為有機(jī)相，含〇. 1 %體積濃度甲酸的水為水相，采用0-60min的15-80 %有機(jī) 相梯度洗脫。采用DAD紫外檢測器360nm選擇吸收波長，制備溫度為室溫，進(jìn)樣量為lOOOyL/ 針，流動相流速為90mL/min，收集保留時間在50-55min的餾分，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至干，得到山奈酸- 3-0-對香豆?；咸烟鞘罄钐擒栈衔?，經(jīng)液相色譜分析，純度為95.5%，一維制備山奈 酚-3-0-對香豆?；咸烟鞘罄钐擒沾制分猩侥畏?3-0-對香豆?；咸烟鞘罄钐擒盏暮?量為30%。
[0049] 分別采用質(zhì)譜、IH-NMR和13C-NMR(Me0D)對得到的終產(chǎn)物進(jìn)行分析，其中質(zhì)譜、IH-NMR譜圖如圖1和2所示，
[0050] 13C-NMR(Me0D)解析如下，
[0051] 山奈酚母環(huán)：156.98(C2)，135.42(C3)，178· 14(C4)，161.75(C5)，98.40(C6)， 164.18(C7)，93.46(C8)，156.88(C9)，104.68(C10)，121.25(C1，），130.56(C2,，C6，）， 115.00(C3，，C5，），159.67(C4，） 。
[0052] 3-0-鼠李糖：101 · 12(C1"），82.26(C2"），70.38(C3"），72.10(C4"），70 · 55(C5"）， 16.33(C6"）。
[0053] 2"-葡萄糖：105.66(Cl" '），73.99(C2" '），76.29(C3" '），70.78(C4" '），73.73 (C5"'），63.12(C6"'）。
[0054] 6"-對香豆?；?67.40(C1""），113.29(C2""），145· 16(C3""），125.58(C4""）， 129·62(C5""，C9""），115·23(C6""，C8""），160·02(C7""）。
[0055] 綜合鑒定為山奈酚-3-0-對香豆?；咸烟鞘罄钐擒眨衔锏姆肿邮綖?C36H36017，分子量740.1982，結(jié)構(gòu)式如下
[0056]
[0057]槲皮素-3-0-2"，6"_二鼠李糖基葡萄糖苷的制備
[0058] 稱取銀杏葉提取物IOg，溶于50mL 40%的乙醇一水溶液，制得銀杏葉提取物溶液， 濃度為200mg/mL，過0.45μηι微孔濾膜，進(jìn)行一維液相色譜分離。一維液相色譜采用以硅膠為 基質(zhì)的親水型色譜填料50 X 250mm，ΙΟμπι(華譜新創(chuàng)科技有限公司），流動相采用乙腈（含 〇.1%甲酸)為有機(jī)相，水(含〇.1%甲酸)為水相，梯度洗脫方式 :〇-15!^11有機(jī)相濃度從95% 降至90%臺階梯度進(jìn)行。采用DAD紫外檢測器360nm選擇吸收波長，制備溫度為室溫，進(jìn)樣量 為500yL/針，流動相流速為90mL/min，收集28 - 30分鐘的組分和殘余組分，將收集到的28 - 30分鐘的組分進(jìn)行旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮至干，為一維制備槲皮素-3-0-2"，6"_二鼠李糖基葡萄糖 苷粗品。用50%的乙醇一水溶液溶解槲皮素-3-0-2"，6"-二鼠李糖基葡萄糖苷粗品，濃度為 80mg/mL，經(jīng)微孔濾膜過濾，進(jìn)行二維液相色譜制備，色譜柱為以硅膠為基質(zhì)的親水型色譜 填料(50 X 150πιπι，5μπι，華譜新創(chuàng)科技有限公司）流動相采用乙腈(含0.1 %甲酸）為有機(jī)相， 水(含0.1 %甲酸)為水相，采用0-60min20 %有機(jī)相等度洗脫。采用DAD紫外檢測器360nm選 擇吸收波長，制備溫度為室溫，進(jìn)樣量為1000 yL/針，流動相流速為90mL/min，收集保留時間 在40-45min的組分，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至干，得到槲皮素-3-0-2"，6" -二鼠李糖基葡萄糖苷化合物。
[0059] 分別采用質(zhì)譜、1H-NMR和13C_NMR(MeOD)對得到的終產(chǎn)物進(jìn)行分析，其中質(zhì)譜、 1H-NMR譜圖如圖4和5所示，
[0060] 13C-NMR (MeOD)解析如下，
[0061] 槲皮素母環(huán)：157.04(C2)，133.07(C3)，177.88(C4)，161.73(C5)，98.38(C6)， 164.24(C7)，93.32(C8)，157.53(C9)，104.51(C10)，122·16(C1'），116.04(C2'），144·51 (C3'），148.14(C4'），114.68(C5'），122.08(C6'）
[0062] 葡萄糖：101.24(C1"），72.48(C2"），75.66(C3"），70.47(C4"），72.67(C5"），66.89 (C6，，）。
[0063] 2"-鼠李糖：100.85(C1" '），78.64(C2" '），70.74(C3" '），71.01(C4" '），68.32 (C5"'），16.13(C6"'）。
[0064] 6"-鼠李糖：99.10(C1""），77.51(C2""），70.87(C3""），70.91(C4""），68.56 (C5""），16.43(C6""）。
[0065] 綜合鑒定為槲皮素-3-0-2"，6"_二鼠李糖基葡萄糖苷，化合物的分子式為 C33H4QO2Q，分子量756.2103，結(jié)構(gòu)式如下
[0066]
[0067] S3由銀杏葉提取物形成的中藥組合物的制備方法
[0068] 將所述殘余組分和所述剩余組分旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)去除容積后混合，并干燥得到輔助品， 將所述輔助品、所述山奈酚-3-0-對香豆酰基葡萄糖鼠李糖苷和所述槲皮素-3-0-2"，6"_二 鼠李糖基葡萄糖苷混合得到本實施例的由銀杏葉提取物形成的中藥組合物。
[0069] 采用高效液相色譜對本申請的中藥組合物進(jìn)行檢測，以所述中藥組合物的質(zhì)量百 分比計，銀杏總黃酮24%，銀杏內(nèi)酯6%，銀杏酸小于5ppm，山奈酚-3-0-對香豆?；咸烟?鼠李糖苷2.08 %，槲皮素-3-0-2"，6" -二鼠李糖基葡萄糖苷2.11 %，銀杏內(nèi)酯Al. 4%，銀杏 內(nèi)酯Bl. 8%和銀杏內(nèi)酯Cl. 3%，還檢測有白果內(nèi)酯和蘆丁等化學(xué)成分。
[0070] S4銀杏葉酊的制備
[0071] 取上述由銀杏葉提取物形成的中藥組合物0.4g，溶解于IOml體積濃度為60 %的乙 醇水溶液中形成銀杏葉酊。
[0072] 實施例2
[0073]山奈酚-3-0-對香豆酰基葡萄糖鼠李糖苷的制備
[0074] 稱取銀杏葉提取物lg，溶于IOOmL體積濃度80%的乙醇一水溶液，制得銀杏葉提取 物溶液，濃度為10mg/mL，過0.45μηι微孔濾膜，進(jìn)行一維液相色譜制備。一維液相色譜采用以 硅膠為基質(zhì)的親水型色譜填料(50乂25〇 111111，1(^111，華譜新創(chuàng)科技有限公司），流動相采用乙 醇為有機(jī)相，水為水相，有機(jī)相濃度為90 %等度，采用DAD紫外檢測器360nm選擇吸收波長， 制備溫度為40°C，進(jìn)樣量為200yL/針，流動相流速為60mL/min，收集15~20分鐘的餾分和剩 余組分，將收集到的15~20分鐘的餾分進(jìn)行旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮至干，為一維制備山奈酚-3-0-對 香豆?；咸烟鞘罄钐擒沾制贰Ｓ?0%的乙醇一水溶液溶解山奈酚-3-0-對香豆?；咸?糖鼠李糖苷粗品，濃度為20mg/mL，經(jīng)微孔濾膜過濾，進(jìn)行二維液相色譜制備，色譜柱為以硅 膠為基質(zhì)鍵合C18反相填料（50 X 150mm，ΙΟμπι，華譜新創(chuàng)科技有限公司），流動相選擇含 0.1 %體積濃度甲酸的乙醇為有機(jī)相，含0.1 %體積濃度甲酸的水為水相，采用等度洗脫方 式，有機(jī)相濃度為20 %共60分鐘。采用DAD紫外檢測器360nm選擇吸收波長，制備溫度為室 溫，進(jìn)樣量為1000 yL/針，流動相流速為lOOmL/min，收集保留時間50-55min的餾分，旋轉(zhuǎn)蒸 發(fā)至干，得到山奈酚-3-0-對香豆酰基葡萄糖鼠李糖苷化合物，經(jīng)液相色譜分析，二維制備 的山奈酚-3-0-對香豆?；咸烟鞘罄钐擒沾制分猩侥畏?3-0-對香豆?；咸烟鞘罄钐?苷的含量為94.0%，
[0075]同實施例1分別采用質(zhì)譜、IH-匪R和13C_WR(MeOD)對得到的終產(chǎn)物進(jìn)行分析，最 終確認(rèn)得到的為山奈酚-3-0-對香豆?；咸烟鞘罄钐擒?。。
[0076]槲皮素-3-0-2"，6"_二鼠李糖基葡萄糖苷的制備
[0077] 稱取銀杏葉提取物lg，溶于IOOmL體積濃度80%的乙醇一水溶液，制得銀杏葉提取 物溶液，濃度為10mg/mL，過0.45μηι微孔濾膜，進(jìn)行一維液相色譜制備。一維液相色譜采用以 硅膠為基質(zhì)的親水型色譜填料(50乂25〇 111111，1(^111，華譜新創(chuàng)科技有限公司），流動相采用乙 醇為有機(jī)相，水為水相，有機(jī)相濃度為90 %等度，采用DAD紫外檢測器360nm選擇吸收波長， 制備溫度為40°C，進(jìn)樣量為200yL/針，流動相流速為60mL/min，收集28~32分鐘的組分和殘 余組分，將收集到的28 - 32分鐘的組分，進(jìn)行旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮至干，為一維制備槲皮素-3-0-2"，6" -二鼠李糖基葡萄糖苷粗品。用40 %的乙醇一水溶液溶解槲皮素-3-0-2"，6" -二鼠李 糖基葡萄糖苷粗品，濃度為20mg/mL，經(jīng)微孔濾膜過濾，進(jìn)行二維液相色譜制備，色譜柱為以 硅膠為基質(zhì)鍵合C18反相填料(50 X 150mm，ΙΟμπι，華譜新創(chuàng)科技有限公司），流動相選擇乙醇 (含0.1%甲酸)為有機(jī)相，水(含0.1%甲酸)為水相，采用等度洗脫方式，有機(jī)相濃度為20% 共60分鐘。采用DAD紫外檢測器360nm選擇吸收波長，制備溫度為室溫，進(jìn)樣量為lOOOyL/針， 流動相流速為100mL/min，收集保留時間40-45min的組分，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至干，得到槲皮素-3-0-2"，6"_二鼠李糖基葡萄糖苷化合物。
[0078]同實施例1分別采用質(zhì)譜、1H-NMR和13C-NMR(MeOD)對得到的終產(chǎn)物進(jìn)行分析，最終 確認(rèn)得到的為槲皮素-3-0-2"，6" -二鼠李糖基葡萄糖苷。
[0079] S3由銀杏葉提取物形成的中藥組合物的制備方法
[0080] 將所述殘余組分和所述剩余組分旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)去除容積后混合，并干燥得到輔助品， 將所述輔助品、所述山奈酚-3-0-對香豆?；咸烟鞘罄钐擒蘸退鲩纹に?3-0-2"，6"_二 鼠李糖基葡萄糖苷混合得到本實施例的由銀杏葉提取物形成的中藥組合物。
[0081] 采用高效液相色譜對本申請的中藥組合物進(jìn)行檢測，以所述中藥組合物的質(zhì)量百 分比計，銀杏總黃酮40%，銀杏內(nèi)酯16%，銀杏酸llppm，山奈酚-3-0-對香豆酰基葡萄糖鼠 李糖苷2.45 %，槲皮素-3-0-2"，6"-二鼠李糖基葡萄糖苷3.53 %，銀杏內(nèi)酯A3 %，銀杏內(nèi)酯 Bl. 8%和銀杏內(nèi)酯Cl. 3%，還檢測有白果內(nèi)酯和蘆丁等化學(xué)成分。
[0082] S4銀杏葉酊的制備
[0083] 取上述由銀杏葉提取物形成的中藥組合物0.4g，溶解于IOml體積濃度為60 %的乙 醇水溶液中形成銀杏葉酊。
[0084] 實施例3
[0085] 山奈酚-3-0-對香豆?；咸烟鞘罄钐擒盏闹苽?br>[0086] 稱取銀杏葉提取物100g，溶于200mL 50%的乙醇一水溶液，制得銀杏葉提取物溶 液，濃度為500mg/mL，過0.45μπι微孔濾膜，進(jìn)行一維液相色譜制備。一維液相色譜采用以硅 膠為基質(zhì)的親水型色譜填料（50Χ 250mm，10μ，華譜新創(chuàng)科技有限公司），流動相采用乙醇 (含0.1 %甲酸)為有機(jī)相，水(含0.1