專利名稱：Tamandarin類似物及其片段以及制備和使用方法
背景技術(shù)：
發(fā)明領(lǐng)域本發(fā)明涉及大環(huán)縮酚肽類，包括代代寧和tamandarin類似物及其片段，它們用作抗癌藥和其它目的。本發(fā)明還提供了使用這些化合物作為蛋白質(zhì)合成、細(xì)胞生長、腫瘤發(fā)生和病毒感染的抑制劑和用于免疫抑制療法和作為編程性細(xì)胞死亡增強(qiáng)劑的方法。本發(fā)明還提供了制備tamandarin類似物的方法。
背景技術(shù)：
Tamandarins A和B為天然存在的分離自海洋被囊動物的代代寧類似物。Tamandarins A和B屬于有效抑制蛋白質(zhì)合成和細(xì)胞周期進(jìn)展并誘導(dǎo)快速編程性細(xì)胞死亡的一族化合物(代代寧類-來自Didemnidaefamily)(Grubb等《生物化學(xué)與生物物理學(xué)通訊》(Biochem.Biophys，Res.Commun.)2151130-1136(1995)；Johnson等《FEBS通訊》(FEBSLett.)3831-5(1996)；Johnson等《細(xì)胞免疫生物學(xué)》(Immunol.CellBiol.)77242-248(1999)；Johnson等《細(xì)胞生物化學(xué)雜志》(J.Cell.Biochem.)72269-278(1999))。其它代代寧類，包括代代寧B、代代寧M和脫氫代代寧B也表現(xiàn)出細(xì)胞毒性和抑制細(xì)胞效應(yīng)。
Tamandarins A和B表現(xiàn)出與代代寧B顯示出的活性相似的生物活性。例如，參見Liang，等《美國化學(xué)協(xié)會雜志》(J.Am.Chem.Soc.)1234469-4474(2001)。例如，tamandarin A為蛋白質(zhì)合成、細(xì)胞生長和腫瘤發(fā)生的有效抑制劑。Tamandarin A在體外表現(xiàn)出對胰腺癌的顯著活性(Liang等《有機(jī)通訊》(Org.Lett.)11319-1322(1999))。
對在研究或其它應(yīng)用中利用tamandarins和代代寧類的顯著限制在于從天然來源中獲得tamandarins的供應(yīng)有限和分離這些化合物的困難和費用。存在對合成tamandarins A和B和其它代代寧類似物的方法的需求。
此外，已經(jīng)制備和檢驗了極少的tamandarins A和B衍生物或類似物。還需要其它tamandarins A和B和代代寧類的衍生物和類似物。另外，需要用于合成tamandarins和代代寧類的化合物。也需要用作蛋白質(zhì)合成、細(xì)胞生長、腫瘤發(fā)生和病毒感染的抑制劑和用于免疫抑制療法和/或作為編程性細(xì)胞死亡促進(jìn)劑的其它化合物。
發(fā)明概述本發(fā)明的第一個方面涉及通式I、IA或II的化合物。
本發(fā)明的第二個方面涉及組合物，例如包括通式I、IA或II的化合物和合適的載體或賦形劑的藥物組合物。
本發(fā)明的第三個方面涉及抑制或預(yù)防癌細(xì)胞或腫瘤生長的方法，所述的方法包括使癌細(xì)胞與有效量的通式I、IA，或II的化合物接觸。在一個實施方案中，該方法涉及對需要這類治療的受試者進(jìn)行治療或預(yù)防癌癥，包括對所述的受試者給予有效量的例如通式I、IA或II。
本發(fā)明的第四個方面涉及抑制或預(yù)防腫瘤發(fā)生的方法，所述的方法包括使細(xì)胞或細(xì)胞成分與有效量的通式I、IA，或II的化合物接觸。在一個實施方案中，該方法涉及對需要這類治療的受試者進(jìn)行抑制或預(yù)防腫瘤發(fā)生，包括對所述的受試者給予有效量的通式I、IA或II。
本發(fā)明的第五個方面涉及抑制或預(yù)防蛋白質(zhì)合成的方法，所述的方法包括使細(xì)胞或細(xì)胞成分與有效量的通式I、IA，或II的化合物接觸。在一個實施方案中，該方法涉及對需要這類治療的受試者進(jìn)行抑制或預(yù)防蛋白質(zhì)合成，包括對所述的受試者給予有效量的通式I、IA或II。
本發(fā)明的第六個方面涉及促進(jìn)編程性細(xì)胞死亡的方法，所述的方法包括使細(xì)胞或細(xì)胞成分與有效量的通式I、IA，或II的化合物接觸。在一個實施方案中，該方法涉及對需要這類治療的受試者促進(jìn)編程性細(xì)胞死亡，包括對所述的受試者給予有效量的通式I、IA或II。
本發(fā)明的第七個方面涉及提供免疫抑制療法的方法，所述的方法包括使細(xì)胞或細(xì)胞成分與有效量的通式I、IA，或II的化合物接觸。在一個實施方案中，該方法涉及對需要這類治療的受試者提供免疫抑制療法，包括對所述的受試者給予有效量的通式I、IA或II。
本發(fā)明的第八個方面涉及通式I、IA或II的化合物在制備用于抑制或預(yù)防癌細(xì)胞或腫瘤生長的藥物組合物中的應(yīng)用。
本發(fā)明的第九個方面涉及預(yù)防或治療病毒感染的方法，所述的方法包括對需要這類治療的受試者給予有效量的通式I、IA或II的化合物。
本發(fā)明的第十個方面涉及通式I、IA或II的化合物在制備用于本文所述的一種或多種方法的藥物組合物中的應(yīng)用。
本發(fā)明的第十一個方面涉及制備通式I，IA，或II化合物的方法。
附圖簡述附

圖1是解釋本文和Sakai等在《藥物化學(xué)雜志》(J.Med.Chem.)392819-2834(1996)中所用的編號規(guī)則的Tamandarin A的結(jié)構(gòu)。
發(fā)明詳述本發(fā)明的第一個方面涉及通式I的化合物 其中R1和R2獨立為H或C1-4烷基，或R1和R2共同形成脯氨酸或高脯氨酸殘基的烷基環(huán)；R3選自氨基酸側(cè)鏈、萘基甲基和第一種熒光團(tuán)；R4為H或CH3；R5為H、胺保護(hù)基、氨基酸殘基、多肽、含有第二種熒光團(tuán)的肽、與固相支持物結(jié)合的化學(xué)部分或含有約1-約50個非氫原子的部分；R6為異亮氨酸側(cè)鏈或纈氨酸側(cè)鏈；W為O或NH；X為O或NH；Y為H或羥基保護(hù)基；且Z為C(O)或C(O)-CH(CH3)-C(O)；條件是如果R1和R2共同形成脯氨酸殘基的烷基環(huán)，R4為甲基，W為O，X為O，且Z為C(O)，那么R3不為異亮氨酸側(cè)鏈、纈氨酸側(cè)鏈、丙氨酸側(cè)鏈、正亮氨酸側(cè)鏈、正纈氨酸側(cè)鏈、亮氨酸側(cè)鏈、組氨酸側(cè)鏈、色氨酸側(cè)鏈、精氨酸側(cè)鏈、賴氨酸側(cè)鏈、第二種熒光團(tuán)或任選被OH、OCH3、CO(C6H5)、Br、I、F、Cl、CH3或C2H5取代的芐基；或或者，條件是如果R1和R2共同形成脯氨酸殘基的烷基環(huán)，R4為甲基且X為O，那么R3為萘基甲基。
在一個實施方案中，R1和R2為H。在另一個實施方案中，R1和R2為C1-4烷基，例如甲基。在另一個實施方案中，R1為H且R2為甲基。在另一個實施方案中，R1為甲基且R2為H。在另一個實施方案中，R1和R2共同形成脯氨酸殘基的烷基環(huán)。即在一個實施方案中，R1和R2共同形成1，3-戊二基。
在一個實施方案中，R3為氨基酸側(cè)鏈，特別是天然存在的氨基酸的側(cè)鏈。在一個實施方案中，R3為氨基酸側(cè)鏈，諸如異亮氨酸側(cè)鏈，即2-丁基部分，優(yōu)選具有(R)立體化學(xué)；纈氨酸側(cè)鏈，即2-丙基部分；丙氨酸側(cè)鏈，即甲基部分；正亮氨酸側(cè)鏈，即1-丁基部分；正纈氨酸側(cè)鏈，即1-丙基部分；亮氨酸側(cè)鏈，即異丁基部分，優(yōu)選具有(S)立體化學(xué)；苯丙氨酸側(cè)鏈，即芐基部分；組氨酸側(cè)鏈，即4-咪唑基甲基部分；色氨酸側(cè)鏈，即3-吲哚基甲基部分；酪氨酸側(cè)鏈，即4-羥基芐基部分；精氨酸側(cè)鏈，即4-胍基丁基部分；和賴氨酸側(cè)鏈，即4-氨基丁基部分。
在另一個實施方案中，R3為非天然存在的氨基酸的側(cè)鏈。非天然存在的氨基酸是本領(lǐng)域中公知的。在一個實施方案中，R3為萘基甲基?；蛘?，R3為被下列基團(tuán)取代的芐基OH；C1-4烷氧基，諸如OCH3和OCH2CH3；CO(C6H5)；F；Cl；Br；I；或C1-4烷基，諸如CH3和CH2CH3。
在另一個實施方案中，R3為第一種熒光團(tuán)。為熒光團(tuán)的部分是本領(lǐng)域中公知的。在一個實施方案中，所述的熒光團(tuán)為如上所述進(jìn)一步含有熒光團(tuán)部分的氨基酸側(cè)鏈(例如與上述氨基酸側(cè)鏈之一連接的熒光團(tuán))。這類熒光團(tuán)包括 在一個實施方案中，R5為H、胺保護(hù)基、氨基酸殘基、多肽或含有第二種熒光團(tuán)的肽。
在一個實施方案中，本發(fā)明包括通式I的化合物，其中R5為氫原子或適合于保護(hù)氨基酸的胺保護(hù)基。這類保護(hù)基是本領(lǐng)域中公知的且在本說明書上下文中涉及。R5的合適的保護(hù)基包括例如叔丁氧羰基。合適的保護(hù)基的實例可以在參考文獻(xiàn)中找到，諸如Green和Wuts(1991，《有機(jī)合成中的保護(hù)基》(Protective Groups in Organic Synthesis)，Wiley，New York，第2版)和Bodansky(1993，《肽合成原理》(Principles ofPeptide Synthesis)，Springer，Berlin)。
在一個實施方案中，R5為氨基酸殘基，例如亮氨酸殘基或含有兩個或多個氨基酸殘基的多肽。在某些實施方案中，R5基團(tuán)含有1-10個氨基酸殘基。在另一個實施方案中，R5基團(tuán)含有1、2、3、4或5個氨基酸殘基。在某些情況中，所述的氨基酸殘基或多肽含有一個或多個合適的保護(hù)基。這類氨基酸殘基和多肽類的實例包括-(N-甲基)亮氨酸；-(N-甲基)亮氨酸-脯氨酸；-(N-CBz-N-甲基)亮氨酸；-(N-甲基)亮氨酸-脯氨酸-乳酸；-(N-甲基)亮氨酸-脯氨酸-丙酮酸；-(N-甲基)亮氨酸-脯氨酸-乳酸-谷氨酰胺-焦谷氨酸；
-(N-甲基)亮氨酸-脯氨酸-乳酸-谷氨酰胺-環(huán)戊酸；-(N-甲基)亮氨酸-脯氨酸-乳酸-亮氨酸-焦谷氨酸；(N-甲基)亮氨酸-脯氨酸-乳酸-谷氨酰胺-環(huán)戊酸；-(N-甲基)亮氨酸-脯氨酸-丙氨酸-亮氨酸-焦谷氨酸；和-(N-甲基)亮氨酸-脯氨酸-(N-甲基)丙氨酸-亮氨酸-焦谷氨酸。
在另一個實施方案中，R5含有N-縮水甘油基-L-脯氨酸殘基。R5的合適值為-(N-甲基-R-亮氨酸)-S-脯氨酸-縮水甘油酸。
其它合適的R5基團(tuán)包括那些具有如下所示結(jié)構(gòu)的基團(tuán)
在另一個實施方案中，R5為帶有約1-約15個非氫原子，例如碳、氧、氮、硫、鹵素及其組合的末端非氨基酸部分。典型的基團(tuán)包括那些具有如下結(jié)構(gòu)的基團(tuán) 其它合適的R5基團(tuán)包括那些具有如下結(jié)構(gòu)的基團(tuán)
其中R’為H、Boc、異丁?；⒈；?pyruvyl)或丙烯?；?。
在另一個實施方案中，R5為含有熒光團(tuán)的肽。合適的R5基團(tuán)包括-(N-甲基)亮氨酸-脯氨酸-乳酸-(熒光團(tuán))。其它合適的R5基團(tuán)具有包括那些具有如下所示結(jié)構(gòu)的熒光團(tuán)。
在另一個實施方案中，R5為與支持物結(jié)合，例如共價結(jié)合的氨基酸殘基、多肽或化學(xué)部分或連接基，所述的支持物例如為玻璃或硅膠板、瓊脂糖珠或其它聚合物珠等。在一個實施方案中，R5為具有如下通式的基團(tuán) 其中SS表示固相支持物。在另一個實施方案中，所述的化學(xué)連接基或部分為有機(jī)連接基，諸如亞烷基或亞鏈烯基，例如含有1-20個碳原子的亞烷基或亞鏈烯基。在另一個實施方案中，R5可以表示為L-SS，其中L為二價有機(jī)連接基且SS為固相支持物。固相支持物為本領(lǐng)域中公知的。例如，參見MacLean等《純化學(xué)應(yīng)用》(Pure Appl.Chem.)71(12)2349-2365(1999)。
當(dāng)R5含有N-甲基-亮氨酸殘基時，該殘基的α-碳原子可以具有(R)或(S)立體化學(xué)。R5內(nèi)的其它氨基酸殘基可以具有(R)或(S)立體化學(xué)，但在一個實施方案中，它們在其α-碳原子上具有(S)立體化學(xué)。當(dāng)R5含有乳酸殘基時，該乳酸殘基優(yōu)選為(S)-乳酸殘基。在另一個實施方案中，R5內(nèi)非直接與通式I氮原子連接的亮氨酸(或N-甲基-亮氨酸)殘基(如果存在)的每個氨基酸殘基具有(S)立體化學(xué)。
在另一個實施方案中，R5含有熒光團(tuán)部分，例如與上述氨基酸側(cè)鏈之一連接的熒光團(tuán)。
在一個實施方案中，Y為H。在另一個實施方案中，Y為羥基保護(hù)基。Y上可以存在的羥基保護(hù)基的實例包括烷基-取代的甲硅烷基部分、芳基-取代的甲硅烷基部分或被烷基和芳基部分取代的硅烷。有用的羥基保護(hù)基的實例為三異丙基甲硅烷基部分(TIPS)。另一個合適的保護(hù)基包括三甲代甲硅烷基?？梢栽谕ㄊ絀的Y上使用的其它羥基保護(hù)基是本領(lǐng)域中公知的且描述在參考文獻(xiàn)中，諸如Green和Wuts(1991，《有機(jī)合成中的保護(hù)基》(Protective Groups in Organic Synthesis)第2版，Wiley，New York)。
第一個亞類的化合物為通式IA的化合物，其中R5為具有如下結(jié)構(gòu)的部分 其中R1和R2獨立為H或C1-4烷基，或R1和R2共同形成脯氨酸殘基的烷基環(huán)；R3選自氨基酸側(cè)鏈和第一種熒光團(tuán)；
R4為H或CH3；R5為H、胺保護(hù)基、氨基酸殘基、多肽、含有第二種熒光團(tuán)的肽、與固相支持物結(jié)合的化學(xué)部分或含有約1-約30個非氫原子的部分；R6為異亮氨酸側(cè)鏈或纈氨酸側(cè)鏈；X為O或NH；且Y為H或羥基保護(hù)基；條件是如果R1和R2共同形成脯氨酸殘基的烷基環(huán)，R4為甲基，W為O，X為O，且Z為C(O)，那么R3不為異亮氨酸側(cè)鏈、纈氨酸側(cè)鏈、丙氨酸側(cè)鏈、正亮氨酸側(cè)鏈、正纈氨酸側(cè)鏈、亮氨酸側(cè)鏈、組氨酸側(cè)鏈、色氨酸側(cè)鏈、精氨酸側(cè)鏈、賴氨酸側(cè)鏈、第二種熒光團(tuán)或任選被OH、OCH3、CO(C6H5)、Br、I、F、Cl、CH3或C2H5取代的芐基；或或者，條件是如果R1和R2共同形成脯氨酸殘基的烷基環(huán)，R4為甲基且X為O，那么R3為萘基甲基。
在這第一個亞類內(nèi)的一個實施方案中，R1和R2為H。在另一個實施方案中，R1和R2為C1-4烷基，例如甲基。在另一個實施方案中，R1為H且R2為甲基。在另一個實施方案中，R1為甲基且R2為H。在另一個實施方案中，R1和R2共同形成脯氨酸殘基的烷基環(huán)。即在一個實施方案中，R1和R2共同形成1，3-戊二基。
在這第一個亞類內(nèi)的一個實施方案中，R3為氨基酸，特別是天然存在的氨基酸的側(cè)鏈。在一個實施方案中，R3為氨基酸側(cè)鏈，諸如異亮氨酸側(cè)鏈，即2-丁基部分，優(yōu)選具有(R)立體化學(xué)；纈氨酸側(cè)鏈，即2-丙基部分；丙氨酸側(cè)鏈，即甲基部分；正亮氨酸側(cè)鏈，即1-丁基部分；正纈氨酸側(cè)鏈，即1-丙基部分；亮氨酸側(cè)鏈，即異丁基部分，優(yōu)選具有(S)立體化學(xué)；苯丙氨酸側(cè)鏈，即芐基部分；組氨酸側(cè)鏈，即4-咪唑基甲基部分；色氨酸側(cè)鏈，即3-吲哚基甲基部分；酪氨酸側(cè)鏈，即4-羥基芐基部分；精氨酸側(cè)鏈，即4-胍基丁基部分；和賴氨酸側(cè)鏈，即4-氨基丁基部分。
在這第一個亞類內(nèi)的另一個實施方案中，R3為非天然存在的氨基酸的側(cè)鏈。非天然存在的氨基酸是本領(lǐng)域中公知的。例如，合適的非天然存在的氨基酸包括，但不限于環(huán)亮氨酸、高環(huán)亮氨酸、9-蒽基-丙氨酸、3-(3-苯并噻唑基)丙氨酸、3-環(huán)己基丙氨酸、3，3-二苯基丙氨酸、3-吡啶基丙氨酸、3-(2-呋喃基)丙氨酸和3-苯乙烯基(sytryl)丙氨酸、3-(2-噻吩基)丙氨酸、2-苯基甘氨酸、烯丙基甘氨酸、2-環(huán)己基甘氨酸、炔丙基甘氨酸、2-(三氟甲基)苯基丙氨酸等。在一個實施方案中，R3為萘基甲基?；蛘?，R3為被OH、OCH3和OCH2CH3、CO(C6H5)、F、Cl、Br、I或CH3和CH2CH3取代的芐基。
在這第一個亞類內(nèi)的另一個實施方案中，R3為第一種熒光團(tuán)。在另一個實施方案中，R3含有熒光團(tuán)。為熒光團(tuán)的部分是本領(lǐng)域中公知的。在一個實施方案中，所述的熒光團(tuán)為如上所述進(jìn)一步含有熒光團(tuán)部分的氨基酸側(cè)鏈(例如與上述氨基酸側(cè)鏈之一連接的熒光團(tuán))。這類熒光團(tuán)包括 在這第一個亞類內(nèi)的一個實施方案中，R5為H、胺保護(hù)基、氨基酸殘基、多肽或含有第二種熒光團(tuán)的肽。
在這第一個亞類內(nèi)的一個實施方案中，本發(fā)明包括通式IA的化合物，其中R5為氫原子或適合于保護(hù)氨基酸的胺保護(hù)基。這類保護(hù)基是本領(lǐng)域中公知的且在本說明書上下文中涉及。R5的合適的保護(hù)基包括例如叔丁氧羰基。合適的保護(hù)基的實例可以在參考文獻(xiàn)中找到，諸如Green和Wuts(1991，《有機(jī)合成中的保護(hù)基》(Protective Groups in OrganicSynthesis)，Wiley，New York，第2版)和Bodansky(1993，《肽合成原理》(Principles of Peptide Synthesis)，Springer，Berlin)。
在這第一個亞類內(nèi)的一個實施方案中，R5為氨基酸殘基，例如亮氨酸殘基或含有兩個或多個氨基酸殘基的多肽。在某些實施方案中，R5基團(tuán)含有1-10個氨基酸殘基。在另一個實施方案中，R5基團(tuán)含有1、2、3、4或5個氨基酸殘基。在某些情況中，所述的氨基酸殘基或多肽含有一個或多個合適的保護(hù)基。這類氨基酸殘基和多肽類的實例包括-(N-甲基)亮氨酸；-(N-甲基)亮氨酸-脯氨酸；-(N-CBz-N-甲基)亮氨酸；-(N-甲基)亮氨酸-脯氨酸-乳酸；-(N-甲基)亮氨酸-脯氨酸-丙酮酸；-(N-甲基)亮氨酸-脯氨酸-乳酸-谷氨酰胺-焦谷氨酸；-(N-甲基)亮氨酸-脯氨酸-乳酸-谷氨酰胺-環(huán)戊酸；-(N-甲基)亮氨酸-脯氨酸-乳酸-亮氨酸-焦谷氨酸；(N-甲基)亮氨酸-脯氨酸-乳酸-谷氨酰胺-環(huán)戊酸；-(N-甲基)亮氨酸-脯氨酸-丙氨酸-亮氨酸-焦谷氨酸；和-(N-甲基)亮氨酸-脯氨酸-(N-甲基)丙氨酸-亮氨酸-焦谷氨酸。
在這第一個亞類內(nèi)的另一個實施方案中，R5含有N-縮水甘油基-L-脯氨酸殘基。R5的合適值為-(N-甲基-R-亮氨酸)-S-脯氨酸-縮水甘油酸。
其它合適的R5基團(tuán)包括那些具有如下所示結(jié)構(gòu)的基團(tuán)
R5的其它合適的基團(tuán)包括那些帶有除外常見的20種氨基酸之-的氨基酸殘基的基團(tuán)。這類氨基酸的合適的實例是本領(lǐng)域中公知的且包括例如羥基脯氨酸、脫氫脯氨酸、4-羧基谷氨酸、羥基賴氨酸、N，N-二甲基精氨酸、碘酪氨酸、β-丙氨酸等。在另一個實施方案中，R5為含有熒光團(tuán)的肽。R5的另一個合適的基團(tuán)包括-(N-甲基)亮氨酸-脯氨酸-乳酸-(熒光團(tuán))。帶有熒光團(tuán)的其它合適的R5包括那些具有如下所述結(jié)構(gòu)的基團(tuán)。

在另一個實施方案中，R5含有具有如下通式的部分 其中R10為H、C1-4烷基或苯基。在該亞類的一個實例中，R10為H。在該實施方案中，所述部分與形成酰胺鍵的大環(huán)胺基直接結(jié)合，即R5為如上所示的基團(tuán)。在另一個實施方案中，所述部分位于R5的末端位置上。即所述部分通過另一個部分，例如，氨基酸殘基、肽殘基或連接基與胺基連接。在另一個實施方案中，如上所示的部分通過酯鍵與R5基團(tuán)的剩余部分連接。例如，N-縮水甘油基-L-脯氨酸用于制備合適的R5部分，而這些合適的R5部分用于制備通式I、IA或II的化合物；或者，N-縮水甘油基-L-脯氨酸與大環(huán)的游離胺直接偶聯(lián)，所述的大環(huán)例如為化合物35、脫保護(hù)的61、脫保護(hù)的74、脫保護(hù)的85或脫保護(hù)的92。在另一個實施方案中，使N-縮水甘油基-L-脯氨酸與R5基團(tuán)的末端反應(yīng)，例如如方案17中所示與脫保護(hù)的化合物63的游離胺反應(yīng)。
在這第一個亞類內(nèi)的另一個實施方案中，R5為與支持物結(jié)合，例如共價結(jié)合的氨基酸殘基、多肽或化學(xué)部分或連接基，所述的支持物例如為玻璃或硅膠板、瓊脂糖珠或其它聚合物珠等。在一個實施方案中，R5為具有如下通式的基團(tuán) 或 其中SS表示固相支持物。在另一個實施方案中，所述的化學(xué)連接基或部分為有機(jī)連接基，諸如亞烷基或亞鏈烯基，例如含有1-20個碳原子的亞烷基或亞鏈烯基。在另一個實施方案中，R5可以表示為L-SS，其中L為二價有機(jī)連接基且SS為固相支持物。固相支持物為本領(lǐng)域中公知的。例如，參見MacLean等《純化學(xué)應(yīng)用》(Pure Appl.Chem.)71(12)2349-2365(1999)。
當(dāng)R5含有N-甲基-亮氨酸殘基時，該殘基的α-碳原子可以具有(R)或(S)立體化學(xué)。R5內(nèi)的其它氨基酸殘基可以具有(R)或(S)立體化學(xué)，但在一個實施方案中，它們在其α-碳原子上具有(S)立體化學(xué)。當(dāng)R5含有乳酸殘基時，該乳酸殘基優(yōu)選為(S)-乳酸殘基。在另一個實施方案中，R5內(nèi)非直接與通式I氮原子連接的亮氨酸(或N-甲基-亮氨酸)殘基(如果存在)的每個氨基酸殘基具有(S)立體化學(xué)。
在這第一個亞類內(nèi)的另一個實施方案中，R5含有熒光團(tuán)部分，例如與上述氨基酸側(cè)鏈之一連接的熒光團(tuán)。
在這第一個亞類內(nèi)的另一個實施方案中，R5為含有約1-約50個非氫原子，例如碳、氮、氧、硫、鹵素及其混合物的部分。在這第一個亞類內(nèi)的另一個實施方案中，R5為含有約1-約40個非氫原子的部分。在這第一個亞類內(nèi)的另一個實施方案中，R5為含有約1-約30個非氫原子的部分。在這第一個亞類內(nèi)的另一個實施方案中，R5為含有約1-約20個非氫原子的部分。在這第一個亞類內(nèi)的另一個實施方案中，R5為含有約1-約10個非氫原子的部分。合適的部分包括，但不限于肽類、碳水化合物、糖類、寡糖類、類固醇、生物活性分子、脂質(zhì)、核苷酸、核苷、維生素等。這類部分與大環(huán)的胺直接結(jié)合或通過有機(jī)連接基與大環(huán)的胺連接。含有約1-約50個非氫原子的其它合適的部分包括，但不限于帶有一個或多個如下基團(tuán)的部分烷基、鏈烯基、炔基、環(huán)烷基、烷氧基、環(huán)烷氧基、鹵素、氨基、硫代、酮基、芳基、雜芳基、鹵代、鹵代烷基、芳基、雜環(huán)、環(huán)烷基、雜芳基、烷基、鏈烯基、炔基、芳烷基、芳基鏈烯基、芳基炔基、雜芳烷基、雜芳基鏈烯基、雜芳基炔基、環(huán)烷基烷基、雜環(huán)烷基、羥基烷基、氨基烷基、羧基烷基、烷氧基烷基、硝基、氨基、脲基、氰基、酰氨基、羥基、巰基、酰氧基、疊氮基、烷氧基、羧基、氨基羰基、烷基巰基及其組合。
在這第一個亞類內(nèi)的一個實施方案中，Y為H。在另一個實施方案中，Y為羥基保護(hù)基。Y上可以存在的羥基保護(hù)基的實例包括烷基-取代的甲硅烷基部分、芳基-取代的甲硅烷基部分或被烷基和芳基部分取代的硅烷。有用的羥基保護(hù)基的實例為三異丙基甲硅烷基部分(TIPS)。另一個合適的保護(hù)基包括三甲代甲硅烷基。可以在通式IA的Y上使用的其它羥基保護(hù)基是本領(lǐng)域中公知的且描述在參考文獻(xiàn)中，諸如Green和Wuts(1991，《有機(jī)合成中的保護(hù)基》(Protective Groups in OrganicSynthesis)第2版，Wiley，New York)。
第二個亞類的化合物為通式IA的化合物，其中R5為使得化合物具有如下結(jié)構(gòu)的部分 其中R7為氫或可以酶裂解的化學(xué)部分(即酶可裂解的部分)。本文所用的酶可裂解的部分可以包括可以在有特異性酶存在下被裂解(即以化學(xué)方式被分離的)的任何化學(xué)部分。能夠以化學(xué)方式使酶可裂解部分分離的酶的實例包括羧肽酶、β-內(nèi)酰胺酶、β-半乳糖苷酶、青霉素V-酰胺酶、胞嘧啶脫氨酶、硝基還原酶、堿性磷酸酶、β-葡萄糖苷酸酶和催化抗體。可以引入本文所述的化合物的酶可裂解部分的實例包括頭孢菌素類、β-葡萄糖苷類、磷酸鹽、焦磷酸鹽、β-D-半乳糖苷類、硝基苯胺、胞嘧啶、氨基甲酸酯類、肽類和氨基酸。
在該亞類內(nèi)的另一個實施方案中，R7為酶可裂解的部分，諸如與谷氨酰胺-焦谷氨酸連接的二肽或具有如下之一結(jié)構(gòu)的部分 或
通過接觸β-內(nèi)酰胺酶裂解上述所示的頭孢菌素。在一個實施方案中，具有上述碳水化合物結(jié)構(gòu)的R7取代基為鈉鹽或鉀鹽形式。
在酶裂解酶可裂解部分后，所得tamandarin類似物表現(xiàn)出一種或多種本文所述的生理活性。本發(fā)明帶有酶可裂解部分的tamandarin類似物可以任選在裂解酶可裂解部分前表現(xiàn)出這些活性。然而，在優(yōu)選的實施方案中，所述的類似物僅在從其中裂解酶可裂解部分后表現(xiàn)出治療活性。
如上所述，具有通式I結(jié)構(gòu)的tamandarin類似物可以與支持物結(jié)合。對該支持物的鑒定并不關(guān)鍵。該支持物基本上可以為這類類似物可以通過經(jīng)R5部分共價結(jié)合而結(jié)合的任意材料。支持物材料的實例包括結(jié)合的硅酸鹽、交聯(lián)瓊脂糖、聚丙烯酰胺、葡聚糖和烯丙基葡聚糖。可以使用反應(yīng)性化學(xué)部分通過化學(xué)方式修飾這類支持物材料以便有利于所述類似物與該支持物共價結(jié)合。這種類型的化學(xué)修飾是本領(lǐng)域中公知的且例如可以包括用溴化氰基團(tuán)、環(huán)氧化物基團(tuán)、tresyl基和羧基己基修飾支持物。制備支持物和隨后使化合物與該支持物結(jié)合的方案在本領(lǐng)域中可以得到且可以由本領(lǐng)域技術(shù)人員修改以用于本文所述的tamandarin類似物。
通式IA有用的亞類化合物為含有如下基團(tuán)的化合物熒光取代基，即光反應(yīng)性部分，諸如具有如下結(jié)構(gòu)的部分 或例如在R3或R5上的與支持物結(jié)合的部分。例如，帶有這類光反應(yīng)性部分的化合物是有用的或標(biāo)記的蛋白質(zhì)。
熒光取代基和光反應(yīng)性部分在本領(lǐng)域中是公知的。其它合適的光反應(yīng)性R5基團(tuán)包括 另一亞類有用的化合物為通式IA的化合物，其中R1和R2共同形成脯氨酸殘基的烷基環(huán)；R3為任選被OH、OCH3、CO(C6H5)、F、Cl、Br、I、CH3和C2H5中的一個或多個，優(yōu)選OCH3取代的芐基；R4為H；R5為上述實施方案中定義的任意一個；R6為纈氨酸側(cè)鏈；X為O；且Y為H。
另一亞類有用的化合物為通式IA的化合物，其中R1為H；R2為CH3；R3為任選被OH、OCH3、CO(C6H5)、F、Cl、Br、I、CH3和CH2CH3中的一個或多個且優(yōu)選OCH3取代的芐基；R4為CH3；R5為上述實施方案中定義的任意一個；R6為纈氨酸側(cè)鏈；X為O；且Y為H。
另一亞類有用的化合物為通式IA的化合物，其中R1為CH3；R2為CH3；R3為任選被OH、OCH3、CO(C6H5)、F、Cl、Br、I、CH3和CH2CH3中的一個或多個且優(yōu)選OCH3取代的芐基；R4為CH3；R5為上述實施方案中定義的任意一個；R6為纈氨酸側(cè)鏈；X為O；且Y為H。
另一亞類有用的化合物為通式IA的化合物，其中R1和R2共同形成脯氨酸殘基的烷基環(huán)；R3為萘基甲基；R4為CH3；R5為上述實施方案中定義的任意一個；R6為纈氨酸側(cè)鏈；X為O；且Y為H。
通式IA的另一亞類有用的化合物為具有如下通式的化合物
其中R1-R6、X和Y如對通式IA的化合物所定義。
本發(fā)明的另一個方面為通式II的化合物及其藥物上可接受的鹽 其中R8如對R5所定義。在一個實施方案中，R8為H、胺保護(hù)基或-(N-甲基)亮氨酸-脯氨酸-乳酸。
在本文所述的方法和組合物中有用的合適的新化合物的實例包括通式I、IA或II的化合物，其中R1和R2共同形成脯氨酸殘基的烷基環(huán)，R3為芐基，R4為CH3，R5為(N-甲基-R-亮氨酸)-S-脯氨酸-S-乳酸，R6為纈氨酸側(cè)鏈，X為O，且Y為H(化合物36)；R1和R2共同形成脯氨酸殘基的烷基環(huán)，R3為芐基，R4為CH3，R5為H，R6為纈氨酸側(cè)鏈，X為O，且Y為H；R1和R2共同形成脯氨酸殘基的烷基環(huán)，R3為芐基，R4為CH3，R5為H·HCl，R6為纈氨酸側(cè)鏈，X為O，且Y為H(化合物35)；R1和R2共同形成脯氨酸殘基的烷基環(huán)，R3為芐基，R4為CH3，R5為Boc，R6為纈氨酸側(cè)鏈，X為O，且Y為TIPS(化合物34)；R1和R2共同形成脯氨酸殘基的烷基環(huán)，R3為芐基，R4為CH3，R5為Boc，R6為纈氨酸側(cè)鏈，X為O，且Y為H；
R1和R2共同形成脯氨酸殘基的烷基環(huán)，R3為4-甲氧基芐基，R4為H，R5為(N-甲基-R-亮氨酸)-S-脯氨酸-S-乳酸，R6為纈氨酸側(cè)鏈，X為O，且Y為H(化合物62)；R1和R2共同形成脯氨酸殘基的烷基環(huán)，R3為4-甲氧基芐基，R4為H，R5為Boc，R6為纈氨酸側(cè)鏈，X為O，且Y為H(化合物61)；R1和R2共同形成脯氨酸殘基的烷基環(huán)，R3為4-甲氧基芐基，R4為H，R5為H，R6為纈氨酸側(cè)鏈，X為O，且Y為H；R1和R2共同形成脯氨酸殘基的烷基環(huán)，R3為4-甲氧基芐基，R4為H，R5為(N-甲基-R-亮氨酸)-S-脯氨酸-S-丙酮酸，R6為纈氨酸側(cè)鏈，X為O，且Y為H(化合物64)；R1和R2共同形成脯氨酸殘基的烷基環(huán)，R3為4-甲氧基芐基，R4為H，R5為(N-甲基-R-亮氨酸)，R6為纈氨酸側(cè)鏈，X為O，且Y為H；R1和R2共同形成脯氨酸殘基的烷基環(huán)，R3為4-甲氧基芐基，R4為H，R5為N-Cbz-N-甲基-R-亮氨酸，R6為纈氨酸側(cè)鏈，X為O，且Y為H(化合物63)；R1和R2共同形成脯氨酸殘基的烷基環(huán)，R3為4-甲氧基芐基，R4為H，R5為H·HCl，R6為纈氨酸側(cè)鏈，X為O，且Y為H；R1為H，R2為CH3，R3為4-甲氧基芐基，R4為CH3，R5為(N-甲基-R-亮氨酸)-S-脯氨酸-S-乳酸，R6為纈氨酸側(cè)鏈，X為O，且Y為H(化合物75)；R1為H，R2為CH3，R3為4-甲氧基芐基，R4為CH3，R5為Boc，R6為纈氨酸側(cè)鏈，X為O，且Y為H(化合物74)；R1為H，R2為CH3，R3為4-甲氧基芐基，R4為CH3，R5為H，R6為纈氨酸側(cè)鏈，X為O，且Y為H。
R1為CH3，R2為CH3，R3為4-甲氧基芐基，R4為CH3，R5為(N-甲基-R-亮氨酸)-S-脯氨酸-S-乳酸，R6為纈氨酸側(cè)鏈，X為O，且Y為H(化合物150)；R1為CH3，R2為CH3，R3為4-甲氧基芐基，R4為CH3，R5為Boc，R6為纈氨酸側(cè)鏈，X為O，且Y為H(化合物85)；
R1為CH3，R2為CH3，R3為4-甲氧基芐基，R4為CH3，R5為H，R6為纈氨酸側(cè)鏈，X為O，且Y為H；R1和R2共同形成脯氨酸殘基的烷基環(huán)，R3為2-萘基甲基，R4為CH3，R5為(N-甲基-R-亮氨酸)-S-脯氨酸-S-乳酸，R6為纈氨酸側(cè)鏈，X為O，且Y為H(化合物93)；R1和R2共同形成脯氨酸殘基的烷基環(huán)，R3為2-萘基甲基，R4為CH3，R5為Boc，R6為纈氨酸側(cè)鏈，X為O，且Y為H(化合物92)；R1和R2共同形成脯氨酸殘基的烷基環(huán)，R3為2-萘基甲基，R4為CH3，R5為H，R6為纈氨酸側(cè)鏈，X為O，且Y為H；R1和R2共同形成脯氨酸殘基的烷基環(huán)，R3為4-甲氧基芐基，R4為CH3，R5為(N-甲基-R-亮氨酸)-S-脯氨酸-S-乳酸，R6為纈氨酸側(cè)鏈，X為NH，且Y為H；R1和R2共同形成脯氨酸殘基的烷基環(huán)，R3為4-甲氧基芐基，R4為CH3，R5為H，R6為纈氨酸側(cè)鏈，X為NH，且Y為H；R1和R2共同形成脯氨酸殘基的烷基環(huán)，R3為4-甲氧基芐基，R4為CH3，R5為Boc，R6為纈氨酸側(cè)鏈，X為NH，且Y為H；本發(fā)明還包括通式I、IA或II化合物的鹽。術(shù)語鹽指的是包括通式I、IA或II化合物的酸-和/或堿-加成的鹽?？梢酝ㄟ^將合適的酸加入到包括通式I、IA或II的化合物中形成酸加成的鹽?？梢酝ㄟ^將合適的堿加入到包括通式I、IA或II的化合物中形成堿加成的鹽。所述的酸或堿基本上不會降解、分解或破壞所述通式I、IA或II的化合物。合適的鹽的實例包括鹽酸鹽、氫溴酸鹽、乙酸鹽、富馬酸鹽、馬來酸鹽、草酸鹽和琥珀酸鹽。其它合適的鹽包括鈉鹽、鉀鹽、碳酸鹽和氨丁三醇鹽。
還可以理解本發(fā)明包括通式I、IA或II的化合物的互變體?；プ凅w是本領(lǐng)域眾所周知的且包括酮-烯醇互變體。
通式I、IA或II的化合物還可以溶劑化，包括水合。水合可以在制備化合物或包括這些化合物的組合物期間發(fā)生或水合可以因所述化合物的吸濕性而在一定時間內(nèi)發(fā)生。
通式I、IA或II的某些化合物可以為稱作“前體藥物”的衍生物。表達(dá)方式“前體藥物”指的是與藥物相比具有強(qiáng)化的遞送特征和治療價值并通過酶或化學(xué)過程被轉(zhuǎn)化成活性藥物的已知直接起作用的藥物。前體藥物是本發(fā)明化合物的衍生物，其帶有代謝可裂解基團(tuán)且通過溶解或在生理條件下成為在體內(nèi)具有藥物活性的本發(fā)明化合物。酸性衍生物形式可以提供在哺乳動物生物體內(nèi)溶解度、組織相容性或延緩釋放的優(yōu)勢(參見Bundgard，H.，《前體藥物設(shè)計》(Design of Prodrugs)，7-9，21-24頁，Elsevier，Amsterdam 1985)。前體藥物包括本領(lǐng)域技術(shù)人員眾所周知的衍生物，例如，通過使母體酸與合適的醇或酰胺類反應(yīng)制備的酯類，所述的酰胺類通過使母體酸性化合物與胺反應(yīng)制備。
當(dāng)在任意成分或通式I中發(fā)生一次以上的任何變化時，除非另有說明，它在每次出現(xiàn)時的定義與在每另一次出現(xiàn)時的定義無關(guān)。此外，取代基和/或變化形式的組合是允許的，唯一的條件是這類組合產(chǎn)生穩(wěn)定的化合物。
還可以理解美國專利US6,509,315中公開的化合物不包括在如上述條件中所述的本發(fā)明中。
定義作為本文所用的下列術(shù)語中的每一個具有與其在本部分中相關(guān)的含義。
本文所用的某些氨基酸殘基(特別是20種常見的氨基酸)由其完整的名稱、相當(dāng)于它們的三字母密碼或相當(dāng)于它們的單字母密碼表示，如下所示


本文所用的術(shù)語“氨基酸側(cè)鏈”指的是含有不包括α-碳原子的氨基酸的所有原子、與α-碳結(jié)合的氫原子、α-羧基部分和α-胺部分的所有原子的部分。作為實例，“丙氨酸側(cè)鏈”指的是甲基，“纈氨酸側(cè)鏈”指的是2-丙基(或異丙基)，且3-環(huán)己基丙氨酸側(cè)鏈指的是環(huán)己基甲基(即C6H11-CH2-)。
“抑制”細(xì)胞中的過程(例如抑制蛋白質(zhì)合成、抑制細(xì)胞生長、抑制細(xì)胞周期發(fā)展、抑制細(xì)胞增殖或抑制腫瘤發(fā)生)指的是該過程進(jìn)行的速率減少(例如，至少10％、25％、50％、75％、90％、95％乃至100％)；該過程開始的速率減少(例如，至少10％、25％、50％、75％、90％、95％乃至100％)；或它們兩者。
“促進(jìn)”細(xì)胞中的過程(例如促進(jìn)編程性細(xì)胞死亡)指的是該過程進(jìn)行的速率增加(例如，至少10％、25％、50％、75％、90％、95％乃至100％)；該過程開始的速率增加(例如，至少10％、25％、50％、75％、90％、95％乃至100％)；或它們兩者。
本文所用的術(shù)語“藥物上可接受的載體”指的是可以與如本文所述的tamandarin類似物或片段合并且在合并后可以對受試者(例如人或其它動物)給藥的化學(xué)組合物。
本文所用的術(shù)語“生理上可接受的”酯或鹽指的是如本文所述的tamandarin類似物或片段的酯或鹽形式，它與藥物組合物中的其它組分相容且對該組合物所給予的受試者無害。
本文所用的藥物組合物的“非腸道給藥”包括給受試者的組織做物理破口并通過該組織上的破口給予藥物組合物的任意給藥途徑。非腸道給藥由此包括，但不限于通過注射組合物給予藥物組合物、通過手術(shù)切口施用組合物、通過透入組織的非手術(shù)創(chuàng)口施用組合物等。特別地，非腸道給藥包括，但不限于皮下、腹膜內(nèi)、肌內(nèi)、胸骨內(nèi)注射和滲透析輸注技術(shù)。
本文所用的術(shù)語“抗病毒活性”指的是預(yù)防細(xì)胞中的病毒復(fù)制、預(yù)防病毒感染細(xì)胞或使病毒感染細(xì)胞的生理作用逆轉(zhuǎn)?？共《舅帪檫f送至細(xì)胞時表現(xiàn)出抗病毒活性的物質(zhì)組合物。抗病毒藥為眾所周知的且描述在文獻(xiàn)中。作為實例，認(rèn)為AZT(齊多夫定)是預(yù)防人細(xì)胞中HIV復(fù)制的抗病毒藥。
描述本文所用的不同化學(xué)部分的術(shù)語為本領(lǐng)域中的術(shù)語且本領(lǐng)域技術(shù)人員可以理解。
本文所用的術(shù)語“高脯氨酸”指的是在環(huán)上還含有另外的亞甲基，即含有6-元環(huán)的脯氨酸部分。
本文所用的術(shù)語“非-氨基酸部分”指的是不含氨基和羧基的部分。這類部分以上述對R5所述為典型。非氨基酸部分可以為例如上述所示的那些R5基團(tuán)末端上的部分。
本文所用的術(shù)語“保護(hù)基”自身或作為另一個基團(tuán)的組成部分指的是易于在需要防止所述官能基發(fā)生不需要的化學(xué)反應(yīng)時與特定官能基連接(并形成被保護(hù)的官能基)且然后從所述被保護(hù)的官能基上被除去而顯現(xiàn)出原始官能基的化學(xué)部分。例如，參見Green和Wuts(1991，《有機(jī)合成中的保護(hù)基》(Protective Groups in Organic Synthesis)，Wiley，New York，第2版，1-9頁)，將該文獻(xiàn)的全部內(nèi)容引入本文作為參考。保護(hù)基的實例是本領(lǐng)域眾所周知的。合適的保護(hù)基的實例可以在參考文獻(xiàn)中找到，諸如Green和Wuts(1991，《有機(jī)合成中的保護(hù)基》(Protective Groups in Organic Synthesis)，Wiley，New York，第2版)和Bodansky(1993，《肽合成原理》(Principles of PeptideSynthesis)，Springer，Berlin)。保護(hù)基的具體的非限制性實例包括乙?；⑵S基、叔丁氧羰基(Boc)、苯甲?；?、二甲基異丙基甲硅烷基、叔丁基二甲基甲硅烷基、甲氧基甲基和芐氧羰基。與所述固體支持物連接的保護(hù)基也是合適的。
本文所用的術(shù)語“胺保護(hù)基”或作為另一個基團(tuán)的組成部分指的是易于在需要防止所述胺發(fā)生不需要的化學(xué)反應(yīng)時與胺基連接(并形成被保護(hù)的胺)且然后從所述被保護(hù)的胺基上被除去而顯現(xiàn)出原始胺的化學(xué)部分。胺保護(hù)基的實例是本領(lǐng)域眾所周知的。合適的胺保護(hù)基的實例可以在參考文獻(xiàn)中找到，諸如Green和Wuts(1991，《有機(jī)合成中的保護(hù)基》(Protective Groups in Organic Synthesis)，Wiley，New York，第2版)和Bodansky(1993，《肽合成原理》(Principles of PeptideSynthesis)，Springer，Berlin)。胺保護(hù)基的具體的非限制性實例包括氨基甲酸酯類，諸如叔丁氧羰基、甲氧羰基和芐氧羰基；酰胺類，諸如甲酰胺和三氟乙酰胺；和環(huán)狀亞胺類，諸如N-苯二酰亞氨基。
本文所用的術(shù)語“羥基保護(hù)基”或作為另一個基團(tuán)的組成部分指的是易于在需要防止所述胺發(fā)生不需要的化學(xué)反應(yīng)時與羥基連接(并形成被保護(hù)的羥基)且然后從所述被保護(hù)的羥基上被除去而顯現(xiàn)出原始羥基的化學(xué)部分。羥基保護(hù)基的實例是本領(lǐng)域眾所周知的。合適的羥基保護(hù)基的實例可以在參考文獻(xiàn)中找到，諸如Green和Wuts(1991，《有機(jī)合成中的保護(hù)基》(Protective Groups in Organic Synthesis)，Wiley，New York，第2版)和Bodansky(1993，《肽合成原理》(Principles ofPeptide Synthesis)，Springer，Berlin)。羥基保護(hù)基的具體的非限制性實例包括醚類，諸如甲氧基甲基、四氫吡喃基和芐基；甲硅烷基醚類，諸如三甲代甲硅烷基和三異丙基甲硅烷基；和碳酸鹽類，諸如9-芴基甲基和芐基。
盡管本文未對每一個術(shù)語提供具體的定義，但是每一個術(shù)語均為本領(lǐng)域技術(shù)人員可以理解。
組合物本發(fā)明的組合物包括藥物組合物，該藥物組合物包括如上述所定義的通式I、IA或II的新化合物和一種或多種藥物上可接受的賦形劑。本發(fā)明優(yōu)選的組合物為包括選自上述一種或多種實施方案的化合物和一種或多種藥物上可接受的賦形劑的藥物組合物?？梢园凑宅F(xiàn)有技術(shù)眾所周知的方式，諸如通過參考如《Remington氏藥物科學(xué)》(Remington’s Pharmaceutical Sciences)Mack Publishing Co.，Easton，Pa.，USA來配制包括一種或多種通式I、IA或II的化合物的藥物組合物。
在本發(fā)明的一個實施方案中，所述的組合物包括選自上述各實施方案中的一種或多種的化合物的組合物。
本發(fā)明包括含有至少一種本文所述的tamandarin類似物和生理活性片段的藥物組合物。這類組合物可以包括所述的類似物/片段和藥物上可接受的載體。作為實例，本發(fā)明的藥物組合物包括藥物上可接受的載體和具有通式I、IA或II結(jié)構(gòu)作為活性劑的tamandarin類似物。作為另一個實例，本發(fā)明的藥物組合物包括藥物上可接受的載體和下列化合物中的一種或多種在另一個實施方案中，本發(fā)明的藥物組合物包括一種或多種其它藥物活性劑，諸如其它腫瘤治療劑，其它抗感染藥等。
例如，可以在本文所述的方法中使用這類藥物組合物并用于抑制蛋白質(zhì)合成、細(xì)胞周期發(fā)展、腫瘤發(fā)生、生長和細(xì)胞內(nèi)增殖中的一種或多種。此外，這類組合物可以在本文所述的方法中用于促進(jìn)細(xì)胞中的編程性細(xì)胞死亡。
可以以口服固體制劑、眼用制劑、栓劑、氣溶膠、局部用制劑或其它類似制劑的形式經(jīng)全身給予用于本發(fā)明方法中的藥物組合物。除活性劑外，這類藥物組合物可以含有藥物上可接受的載體和其它用于促進(jìn)和有利于給藥的組分。還可以將其它可能的制劑，諸如納米粒、脂質(zhì)體、重新包封的紅細(xì)胞和基于免疫的系統(tǒng)用于給予本發(fā)明方法中的活性劑。
本發(fā)明包括由活性劑組成的適合于對受試者給藥的藥物組合物，或該藥物組合物包括活性劑和一種或多種藥物上可接受的載體、一種或多種其它組分或這些組分中某些的組合?；钚詣┛梢砸陨砩峡山邮艿孽セ螓}形式，諸如與生理上可接受的陽離子或陰離子的組合存在于藥物組合物中，正如本領(lǐng)域中眾所周知的。
可以通過任意已知方法或下文研發(fā)的方法制備本文所述的藥物組合物。一般來說，這類制備方法包括下列步驟將活性劑與載體或一種或多種其它輔助組分混合，且然后如果必要或需要，使產(chǎn)物成形或?qū)⑵浒b成所需的單一或多劑量單位。
盡管本文提供的對藥物組合物的描述主要涉及在倫理上適合于對人給藥，但是本領(lǐng)域技術(shù)人員可以理解這類組合物一般適合于對所有種類的動物給藥?？梢猿浞掷斫鈱m合于對人給藥的藥物組合物進(jìn)行改變以便使這些組合物適合于對各種動物給藥，且本領(lǐng)域技術(shù)人員可以設(shè)計并僅通過普通的實驗來進(jìn)行這類改變(如果有的話)。所關(guān)注的本發(fā)明藥物組合物給藥的受試者包括，但不限于人和其它靈長類以及哺乳動物，包括與商業(yè)相關(guān)的哺乳動物，諸如牛、豬、馬、綿羊、貓和狗。
可以制備、包裝或銷售適合于口服、直腸、陰道、非腸道、局部、肺、鼻內(nèi)、口含、眼用或其它給藥途徑的制劑形式的用于本發(fā)明的藥物組合物。其它關(guān)注的制劑包括投射的納米粒(projectednanoparticles)、脂質(zhì)體制劑、含有活性劑的重新包封的紅細(xì)胞和基于免疫的制劑。
可以將本發(fā)明的藥物組合物作為單一單位劑量或作為多個單一單位劑量以批量方式制備、包裝或銷售。本文所用的“單位劑量”是包括預(yù)定量活性劑的藥物組合物的個別量。活性劑的量一般等于對受試者給藥的活性劑劑量或這類劑量的合適的部分，諸如這類劑量的二分之一或三分之一。
可以使用常規(guī)技術(shù)制備本發(fā)明藥物組合物的控釋或緩釋制劑。
可以以離散的固體劑量單位的形式制備、包裝或銷售適合于口服給藥的本發(fā)明藥物組合物的制劑，包括，但不限于片劑、硬膠囊或軟膠囊、扁囊劑、藥片或錠劑，它們各自含有預(yù)定量的活性劑。適合于口服給藥的其它制劑包括，但不限于粉劑或顆粒劑、含水或油混懸液、水溶液或油溶液或乳劑。
本文所用的“油狀”液為包括含碳的液體分子且表現(xiàn)出低于水的極性的液體。
例如，可以通過壓制或模制活性劑任選與一種或多種其它組分制備包括活性劑的片劑?？梢酝ㄟ^在合適的裝置中壓制任選混合了粘合劑、潤滑劑、賦形劑、表面活性劑和分散劑中的一種或多種的自由流動形式的活性劑，諸如粉末或顆粒劑來制備壓制片?？梢酝ㄟ^在合適的裝置中模制活性劑、藥物上可接受的載體和至少足以濕潤該混合物的液體的混合物來制備模制片。用于制備片劑的藥物上可接受的賦形劑包括，但不限于惰性稀釋劑、成粒劑和崩解劑、粘合劑和潤滑劑。已知的分散劑包括，但不限于馬鈴薯淀粉和羥基乙酸淀粉鈉。已知的表面活性劑包括，但不限于十二烷基硫酸鈉。已知的稀釋劑包括，但不限于碳酸鈣、碳酸鈉、乳糖、微晶纖維素、磷酸鈣、磷酸氫鈣和磷酸鈉。已知的成粒劑和崩解劑包括，但不限于玉米淀粉和藻酸鹽。已知的粘合劑包括，但不限于明膠、阿拉伯膠、預(yù)凝膠化玉米淀粉、聚乙烯吡咯烷酮和羥丙基甲基纖維素。已知的潤滑劑包括，但不限于硬脂酸鎂、硬脂酸鹽、二氧化硅和滑石粉。
可以不給片劑包衣或可以使用實現(xiàn)在受試者胃腸道延緩崩解的已知方法給片劑包衣，由此使活性劑持續(xù)釋放和吸收。作為實例，可以將諸如甘油單硬脂酸酯或二硬脂酸甘油酯這類物質(zhì)用于給片劑包衣。作為另一個實例，可以使用美國專利US4,256,108、US4,160,452和US4,265,874中所述的方法給片劑包衣而形成滲透受控的釋放片。片劑可以進(jìn)一步包括增甜劑、矯味劑、著色劑、防腐劑或它們的組合物以便提供美觀和適口的藥物制劑。
可以使用生理上可降解的組成，諸如明膠制備包括活性劑的硬膠囊。這類硬膠囊包括活性劑且可以進(jìn)一步包括其它組分，包括例如惰性固體稀釋劑，諸如碳酸鈣、磷酸鈣或高嶺土。
可以使用生理上可降解的組成，諸如明膠制備包括活性劑的軟膠囊。這類軟膠囊包括混合有水或油介質(zhì)的活性劑，所述的油介質(zhì)諸如花生油、液體石蠟或橄欖油。
可以以液體形式或在使用前用水或其它合適的載體再溶解的干品形式制備、包裝和銷售適合于口服給藥的本發(fā)明藥物組合物的液體制劑。
可以使用使活性劑在含水或油載體中混懸的常規(guī)方法制備液體混懸劑。含水載體包括例如水和等滲鹽水。油載體包括例如杏仁油；油酯類；乙醇；植物油，諸如花生油、橄欖油、芝麻油或椰子油；分級分離的植物油；和礦物油，諸如液體石蠟。液體混懸劑可以進(jìn)一步包括一種或多種其它組分，包括，但不限于懸浮劑、分散劑或濕潤劑、乳化劑、緩和劑、防腐劑、緩沖劑鹽、調(diào)味劑、著色劑和增甜劑。油狀混懸劑可以進(jìn)一步包括增稠劑。已知的懸浮劑包括，但不限于山梨醇糖漿、氫化食用脂、藻酸鈉，聚乙烯吡咯烷酮、西黃蓍膠、阿拉伯膠和纖維素衍生物，諸如羧甲基纖維素鈉、甲基纖維素、羥丙基甲基纖維素。已知的分散劑或濕潤劑包括，但不限于天然存在的磷脂類，諸如卵磷脂、烯化氧與脂肪酸、長鏈脂族醇、來源于脂肪酸和己糖醇的偏酯或與來源于脂肪酸和己糖醇酐的偏酯的縮合產(chǎn)物(分別例如聚氧乙烯硬脂酸酯、十七烷基乙烯氧基鯨蠟醇、聚氧乙烯山梨糖醇單油酸酯和聚氧乙烯山梨糖醇酐單油酸酯)。已知的乳化劑包括，但不限于卵磷脂和阿拉伯膠。已知的防腐劑包括，但不限于對羥基苯甲酸甲酯、對羥基苯甲酸乙酯或?qū)αu基苯甲酸正丙酯、抗壞血酸酯和山梨酸酯。已知的增甜劑包括例如，甘油、丙二醇、山梨醇、蔗糖和糖精。用于油狀混懸液的已知增稠劑包括例如，蜂蠟、硬石蠟和鯨蠟醇。
可以按照與液體混懸劑基本上相同的方式制備活性劑在含水或油溶劑中的液體溶液，主要的差別在于活性劑溶于而非懸浮于溶劑中。本發(fā)明藥物組合物的液體溶液可以包括有關(guān)對液體混懸劑所述的各成分，可以理解懸浮劑對活性劑在溶劑中輔助溶解并非必要。含水溶劑包括例如，水和等滲鹽水。油溶劑包括例如，杏仁油；油酯類；乙醇；植物油，諸如花生油、橄欖油、芝麻油或椰子油；分級分離的植物油；和礦物油，諸如液體石蠟。
可以使用已知方法制備本發(fā)明藥物制劑的粉劑和顆粒劑?？梢詫⑦@類制劑直接對受試者給藥，例如，用于形成片劑、填充膠囊或通過向其中添加水或油載體制備含水或油混懸劑或溶液。這些制劑各自可以進(jìn)一步包括分散劑或濕潤劑、懸浮劑和防腐劑中的一種或多種。在這些制劑中還可以包括其它賦形劑，諸如填充劑和增甜劑、矯味劑或著色劑。
在另一個實施方案中，可以以水包油乳劑或油包水乳劑的形式制備、包裝或銷售本發(fā)明的藥物組合物。油相可以為植物油，諸如橄欖油或花生油；礦物油，諸如液體石蠟；或它們的組合。這類組合物可以進(jìn)一步包括一種或多種乳化劑，諸如天然存在的樹膠，諸如阿拉伯膠或西黃蓍膠；天然存在的磷脂類，諸如大豆磷脂或卵磷脂；來源于脂肪酸和己糖醇酐類的組合的酯類或偏酯類，諸如失水山梨糖醇單油酸酯；和這類偏酯與環(huán)氧乙烷的縮合產(chǎn)物，諸如聚氧乙烯山梨糖醇酐單油酸酯。這些乳劑還可以含有其它組分，包括例如，增甜劑或矯味劑。
在另一個實施方案中，可以以適合于直腸給藥的制劑形式制備、包裝或銷售本發(fā)明的藥物組合物。例如，這類組合物可以為栓劑、保留灌腸劑和用于直腸或結(jié)腸灌洗的溶液的形式。
可以通過將活性劑與非刺激性藥物上可接受的賦形劑合并制備栓劑，所述的賦形劑在通常的室溫(即約20℃)下為固體，而在受試者的直腸溫度(即健康人體內(nèi)的約37℃)下為液體。合適的藥物上可接受的賦形劑包括，但不限于可可脂、聚乙二醇類和各種甘油酯類。栓劑可以進(jìn)一步包括其它組分，包括，但不限于抗氧化劑和防腐劑。
可以通過將活性劑與藥物上可接受的液體載體合并制備用于直腸或結(jié)腸灌洗的保留灌腸劑或溶液。正如本領(lǐng)域中眾所周知的，可以使用適合于對受試者直腸解剖結(jié)構(gòu)的遞送裝置給予灌腸劑并可將其包裝在所述裝置內(nèi)。灌腸劑可以進(jìn)一步包括各種其它組分，包括，但不限于抗氧化劑和防腐劑。
可以以適合于陰道給藥的制劑形式制備、包裝或銷售本發(fā)明的藥物組合物。例如，這類組合物可以為栓劑、浸漬的或涂敷的可插入陰道的物質(zhì)，諸如棉塞、灌洗劑或用于陰道沖洗的溶液。
用化學(xué)組合物浸漬或涂敷物質(zhì)的方法在本領(lǐng)域中是公知的且包括，但不限于使化學(xué)組合物沉積或結(jié)合在表面上的方法、在物質(zhì)合成過程中將化學(xué)組合物引入該物質(zhì)的結(jié)構(gòu)中的方法(即使用生理可降解的物質(zhì))和使含水或油溶液或混懸液吸入吸附劑材料、隨后進(jìn)行干燥或不進(jìn)行干燥的方法。
可以通過將活性劑與藥物上可接受的液體載體合并制備用于陰道沖洗的灌洗劑或溶液。正如本領(lǐng)域中眾所周知的，可以使用適合于對受試者陰道解剖結(jié)構(gòu)的遞送裝置給予灌洗劑并可將其包裝在所述裝置內(nèi)。灌洗劑可以進(jìn)一步包括各種其它組分，包括，但不限于抗氧化劑、抗菌劑、抗真菌劑和防腐劑。
適合于非腸道給藥的藥物組合物的制劑可以包括合并有藥物上可接受的載體的活性劑，所述的載體諸如為無菌水或無菌等滲鹽水?？梢砸赃m合于濃注給藥(bolus administration)或連續(xù)給藥的形式制備、包裝或銷售這類制劑。可以以單位劑型的形式制備、包裝或銷售可注射制劑，諸如含有防腐劑的安瓿或多劑量容器形式。用于非腸道給藥的制劑包括，但不限于在油或含水載體中的混懸液、溶液、乳劑、糊劑和可植入緩釋或生物可降解制劑。這類制劑可以進(jìn)一步包括一種或多種其它組分，包括，但不限于懸浮劑、穩(wěn)定劑或分散劑。在用于非腸道給藥的制劑的一個實施方案中，將活性劑制成在非腸道給予再溶解組合物前用合適的載體(例如滅菌無熱原水)再溶解的干燥(即粉末或顆粒)形式。
在另一個實施方案中，以無菌可注射的含水或油混懸液或溶液形式制備、包裝或銷售藥物組合物?？梢园凑展夹g(shù)配制這種混懸液或溶液，且它們除包括活性劑外，還可以包括其它組分，諸如本文所述的分散劑、濕潤劑或懸浮劑?？梢允褂脽o毒性的非腸道可接受的稀釋劑或溶劑，諸如水或1，3-丁二醇制備這類無菌可注射制劑。其它可接受的稀釋劑和溶劑包括，但不限于林格液、等滲氯化鈉溶液和固定油類，諸如合成的單酸甘油酯類或二脂酰甘油酯類。有用的其它非腸道給藥制劑包括這類制劑，它們包括在脂質(zhì)體制劑中為微晶形式的活性劑或作為生物可降解聚合物系統(tǒng)中的成分。用于緩釋或植入的組合物可以包括藥物上可接受的聚合物或疏水材料，諸如乳劑、離子交換樹脂、微溶的聚合物或微溶的鹽。
適合于局部給藥的制劑包括，但不限于液體或半液體制劑，諸如搽劑、洗劑；水包油或油包水乳劑，諸如霜劑、軟膏劑或糊劑；和溶液或混懸液。例如，局部給藥制劑可以包括約1％-約10％(w/w)的活性劑，不過，活性劑的濃度可以高至活性劑在溶劑中的溶解度極限。用于局部給藥的制劑可以進(jìn)一步包括本文所述的其它組分中的一種或多種。
可以制備、包裝或銷售適合于經(jīng)口腔進(jìn)行肺部給藥的制劑形式的本發(fā)明藥物組合物。這類制劑可以包括含有活性劑且具有約0.5-約7納米且優(yōu)選約1-約6納米直徑的干顆粒。便利的是這類組合物為使用裝置給藥的干粉形式，這類裝置包括拋射劑流可以定向分散粉末的干粉貯器或使用自推進(jìn)的溶劑/分配粉末的容器，諸如在密封容器中的包括溶于或懸浮于低沸點拋射劑中的活性劑的裝置。在一個實施方案中，這類粉末包括顆粒，其中按重量計至少98％的顆粒具有大于0.5納米的直徑且按數(shù)量計至少95％的顆粒具有小于7納米的直徑。在另一個實施方案中，按重量計至少95％的顆粒具有大于1納米的直徑且按數(shù)量計至少90％的顆粒具有小于6納米的直徑。在一個實施方案中，干粉組合物包括固體細(xì)粉稀釋劑，諸如糖，且便利的是將其制成單位劑型。
低沸點拋射劑一般包括在大氣壓下具有低于65°F沸點的液體拋射劑。在一個實施方案中，拋射劑可以占組合物的50-99.9％(w/w)且活性劑可以占組合物的0.1-20％(w/w)。拋射劑可以進(jìn)一步包括其它組分，諸如液體非離子或固體陰離子表面活性劑或固體稀釋劑(優(yōu)選具有與包括活性劑的顆粒相同等級的顆粒大小)。
為肺部遞送配制的本發(fā)明藥物組合物還可以提供溶液或混懸液滴劑形式的活性劑?？梢詫⑦@類制劑作為任選無菌的包括活性劑的含水或稀醇的溶液或混懸液形式制備、包裝或銷售，且便利的是可以使用任意噴霧或霧化裝置給予它們。這類制劑可以進(jìn)一步包括一種或多種其它組分，包括，但不限于矯味劑，諸如糖精鈉、揮發(fā)性油；緩沖劑；表面活性劑；或防腐劑，諸如甲基羥基苯甲酸酯。在一個實施方案中，通過這種給藥途徑提供的液滴具有約0.1-約200納米范圍的平均直徑。
用作肺部遞送的本文所述的制劑還用于鼻內(nèi)遞送本發(fā)明的藥物組合物。
適合于鼻內(nèi)給藥的另一種制劑為包括活性劑且具有約0.2-500微米平均顆粒的粗粉。以采用鼻吸藥的方式給予這類制劑，即通過從保持接近鼻孔的粉末容器中經(jīng)鼻通道快速吸入。
例如，適合于鼻內(nèi)給藥的制劑可以包括約0.1％(w/w)-約100％(w/w)的活性劑且可以進(jìn)一步包括一種或多種本文所述的其它組分。
可以以適合于口含給藥的制劑形式制備、包裝或銷售本發(fā)明的藥物組合物。例如，這類制劑可以為使用常規(guī)方法制備的片劑或錠劑形式，且例如，它們可以含有0.1-20％(w/w)的活性劑，余量包括口腔可溶解或可降解的組合物且任選為本文所述的其它組分中的一種或多種。另一方面，適合于口含給藥的制劑可以包括含有活性劑的粉末或氣霧化或霧化溶液或混懸液。在一個實施方案中，這類粉狀、氣霧化或霧化制劑在分散時具有約0.1-約200納米的平均顆?；蛞旱未笮。铱梢赃M(jìn)一步包括本文所述的其它組分中的一種或多種。
在另一個實施方案中，可以以適合于眼部給藥的制劑形式制備、包裝或銷售本發(fā)明的藥物組合物。例如，這類制劑可以為滴眼劑形式，包括例如，0.1-1.0％(w/w)的活性劑在含水或油載體中的溶液或混懸液。這類滴劑可以進(jìn)一步包括緩沖劑、鹽或本文所述其它組分中的一種或多種。其它有用的眼用給藥制劑包括那些微晶形式或在脂質(zhì)體制劑中的活性劑的制劑。
本文所用的“其它組分”包括，但不限于下列組分中的一種或多種賦形劑；表面活性劑；分散劑；惰性稀釋劑；成粒劑和崩解劑；粘合劑；潤滑劑；增甜劑；矯味劑；著色劑；防腐劑；生理可降解的組合物，諸如明膠；含水載體和溶劑；油載體和溶劑；懸浮劑；分散劑或濕潤劑；乳化劑；緩和劑；緩沖劑；鹽；增稠劑；填充劑；乳化劑；抗氧化劑；抗生素；抗真菌劑；穩(wěn)定劑；和藥物上可接受的聚合物或疏水材料。本發(fā)明藥物組合物中可以包括的其它的“其它組分”是本領(lǐng)域中公知的且例如描述在Genaro編輯，1985，《Remington氏藥物科學(xué)》(Remington’s Pharmaceutical Sciences)，Mack Publishing Co.，Easton，Pa.中，將該文獻(xiàn)引入本文作為參考。
本發(fā)明藥物組合物中的活性劑、藥物上可接受的載體和任何其它組分的相對量隨所治療受試者的身份、大小和疾病類型和嚴(yán)重程度的不同而改變且進(jìn)一步取決于組合物的給藥途徑。作為實例，該組合物可以包括0.1％-100％(w/w)的活性劑。
在另一個實施方案中，本發(fā)明涉及包括通式I、IA或II的化合物和載體的組合物，其中所述的載體適合于試驗。這類載體可以包括固體載體和液體載體。適合于試驗的組合物可以，但不一定是無菌的。用于試驗的合適的載體實例包括二甲亞砜、乙醇、二氯甲烷、甲醇、氯仿、N，N-二甲基甲酰胺等。在一個實施方案中，本發(fā)明涉及基本上由通式I、IA或II的化合物和載體合物，其中所述的載體適合于試驗。
化合物和組合物的應(yīng)用如本文公開的Tamandarin類似物及其生理活性片段，諸如具有通式I、IA或II的結(jié)構(gòu)的化合物可以用于影響各種生理過程。這些化合物各自可以用于抑制蛋白質(zhì)合成。此外，這些化合物可以用于抑制細(xì)胞-細(xì)胞周期的發(fā)展。盡管不受任何特定操作理論的束縛，但是認(rèn)為化合物的抑制細(xì)胞周期的活性可以歸因于抑制蛋白質(zhì)合成且可能還歸因于抑制其它與DNA復(fù)制或細(xì)胞分裂相關(guān)的細(xì)胞活性。Tamandarin類似物及其活性片段還誘導(dǎo)細(xì)胞中的編程性細(xì)胞死亡。因tamandarin類似物和片段產(chǎn)生的生理活性使得這些化合物可以用于緩解各種細(xì)胞生長、增殖和存活中的一種或多種異常的疾病。這類疾病的實例包括不同階段的癌癥，例如腫瘤發(fā)生、腫瘤生長和轉(zhuǎn)移；和不同階段的病毒感染，例如病毒顆粒感染細(xì)胞、細(xì)胞內(nèi)產(chǎn)生病毒顆粒和病毒感染細(xì)胞的存活。此外，本發(fā)明的化合物可以用于治療癌癥(例如乳腺癌)、病毒、真菌、寄生蟲和細(xì)菌感染、自身免疫病、變態(tài)反應(yīng)、其它超免疫病和動脈粥樣硬化。
本文公開的方法的受試者優(yōu)選為動物，包括，但不限于牛、馬、羊、豬、小雞、火雞、鵪鶉、貓、狗、小鼠、大鼠、家兔和豚鼠且更優(yōu)選哺乳動物且最優(yōu)選人。
本文所述的tamandarin類似物和片段可以用于抗增殖、抗腫瘤、抗病毒和免疫抑制目的。因此，本發(fā)明的另一個方面涉及抑制或預(yù)防癌細(xì)胞生長的方法，包括使所述的細(xì)胞接觸有效量的通式I、IA或II的化合物。例如，這些化合物可以用于對患有蛋白質(zhì)合成、細(xì)胞生長、增殖和存活異常中的一種或多種的疾病的患者給藥的藥物制劑或藥物。這類藥物可以用于治療諸如癌癥(例如乳腺癌)這類疾病?？梢杂杀疚乃龅幕衔锉憩F(xiàn)出的抗腫瘤活性的實例包括抑制腫瘤發(fā)生、抑制轉(zhuǎn)移、抑制腫瘤細(xì)胞生長、抑制腫瘤細(xì)胞增殖和促進(jìn)腫瘤細(xì)胞編程性細(xì)胞死亡。脫氫代代寧表現(xiàn)出對來源于幾種人實體瘤類型的細(xì)胞系，包括非小細(xì)胞肺癌和結(jié)腸腫瘤細(xì)胞系的活性，且表現(xiàn)出對非小細(xì)胞肺癌、黑素瘤、卵巢癌和結(jié)腸直腸癌的選擇性抗腫瘤活性(Depenbrock等《英國癌癥雜志》(Brit.J.Cancer)78739-744(1998))。本文所述的tamandarin類似物和片段表現(xiàn)出在這些細(xì)胞系中的一種或多種細(xì)胞以及在體內(nèi)相應(yīng)腫瘤類型的細(xì)胞中的抗腫瘤活性。可以使用例如包括維持在美國國家癌癥研究院藥物篩選程序中的60種標(biāo)準(zhǔn)腫瘤細(xì)胞系中的一種或多種的標(biāo)準(zhǔn)方法對本文所述的具體tamandarin類似物或片段有關(guān)任意特定腫瘤類型的有效性進(jìn)行測定。
本發(fā)明的另一個方面涉及抑制、治療或預(yù)防病毒感染的方法，包括對需要這類治療的受試者給予通式I、IA或II的化合物?？梢杂杀疚乃龅膖amandarin類似物或片段表現(xiàn)出的抗病毒活性的實例包括抑制病毒與細(xì)胞靶結(jié)合、抑制病毒感染細(xì)胞、抑制病毒成分的細(xì)胞合成、抑制病毒顆粒的細(xì)胞內(nèi)組建、抑制病毒顆粒從感染的細(xì)胞中釋放、抑制病毒感染細(xì)胞的生長、抑制病毒感染細(xì)胞的增殖和誘導(dǎo)病毒感染細(xì)胞的死亡(即編程性細(xì)胞死亡)。例如，本文所述的化合物的抗病毒活性可以用于治療或預(yù)防哺乳動物的病毒感染和相關(guān)癥狀。作為典型，本文所述的代代寧類似物或片段可以用于治療或預(yù)防諸如山谷熱病毒、登革病毒或任意馬腦炎病毒這類病毒感染。
在另一個實施方案中，本發(fā)明涉及對需要的受試者提供免疫抑制療法的方法，包括對所述的受試者給予有效量的通式I、IA或II的化合物?？梢杂杀疚乃龅膖amandarin類似物或片段表現(xiàn)出的免疫抑制活性的實例包括抑制對免疫原(例如傳染性病原體或移植細(xì)胞或組織)的細(xì)胞免疫反應(yīng)和抑制對免疫原的體液免疫反應(yīng)?？赡苄枰庖咭种频募膊〉膶嵗ㄗ陨砻庖卟?、移植排斥疾病(例如固體組織或骨髓移植排斥)、對植入裝置(例如支架或心瓣膜)發(fā)生免疫反應(yīng)、免疫過敏性和過敏反應(yīng)。
在另一個實施方案中，本發(fā)明的化合物用于治療腫瘤，包括實體瘤，諸如膀胱、乳腺、結(jié)腸、肝、卵巢、胃、胰腺、前列腺、腎的腫瘤、視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤、黑素瘤、纖維肉瘤或骨肉瘤。在另一個實施方案中，本發(fā)明的化合物用于治療白血病或淋巴瘤，諸如前髓細(xì)胞性白血病、急性成淋巴細(xì)胞性白血病、慢性髓細(xì)胞性白血病、T細(xì)胞淋巴瘤、皮膚T細(xì)胞淋巴瘤、伯基特B細(xì)胞淋巴瘤和B細(xì)胞淋巴瘤。在另一個實施方案中，本發(fā)明的化合物用于治療經(jīng)證實由該化合物所抑制的細(xì)胞系表示的癌癥或腫瘤。
可以在體外對細(xì)胞或組織(例如培養(yǎng)的細(xì)胞或組織或在導(dǎo)入相同或不同動物前從一種動物中采集的細(xì)胞或組織)給予本文所述的tamandarin類似物和片段。另一方面，通過對具有所述細(xì)胞或組織的動物(例如，哺乳動物，諸如人)給予活性劑或包括該活性劑的藥物組合物對體內(nèi)細(xì)胞或組織給予所述的活性劑。
在本文所述方法的一個實施方案中，對動物給予本文所述的帶有結(jié)合的酶可裂解基團(tuán)的tamandarin類似物。在一個實施方案中，在酶可裂解基團(tuán)裂解時，化合物從無活性(或低活性)形式被轉(zhuǎn)化成活性(或更具活性)的形式。因此，tamandarin類似物可以在酶活性發(fā)生的身體部位上得到選擇性活化。
用于裂解帶有連接的酶可裂解部分的tamandarin類似物的酶可以為天然出現(xiàn)于動物體內(nèi)部位上的酶?；蛘?，可以給動物提供這種酶，例如作為包括該酶或編碼該酶的核酸的組合物。作為另一個實例，可以使該酶與特異性結(jié)合動物體內(nèi)部位上的組織(例如癌細(xì)胞，諸如白血病細(xì)胞或?qū)嶓w瘤細(xì)胞)偶聯(lián)(例如使用交聯(lián)劑共價偶聯(lián)或通過作為酶-抗體融合蛋白表達(dá))，且可以對動物給予這種抗體-酶復(fù)合物。對同一動物給予帶有連接的酶-可裂解基團(tuán)的tamandarin類似物導(dǎo)致該化合物在組織或身體部位優(yōu)先活化。該化合物的生理作用由此定位于所述組織或身體部位且任何歸因于活化化合物的副作用由此得到減輕或被減小到最低限度。
可以給予有效量的本發(fā)明化合物，該有效量的劑量范圍在約0.01mg/kg-約300mg/kg，優(yōu)選0.1mg/kg-100mg/kg體重，更優(yōu)選0.1mg/kg-10mg/kg體重。可以以單一每日劑量給予本發(fā)明的化合物或可以以每日兩次、三次或四次的分次劑量給予總每日劑量。確切的給藥劑量和頻率取決于所用的通式I、IA或II的特定化合物、所治療的特定疾病、所治療疾病的嚴(yán)重程度、特定患者的年齡、體重和一般身體情況以及個體服用的其它藥物，因為這是本領(lǐng)域技術(shù)人員眾所周知的。劑量可以隨患者需求、所治療疾病的嚴(yán)重程度和所用的化合物的不同而改變。
在所有給藥情況中，可以理解可以如本文所述將通式I、IA或II的化合物作為包括所述化合物和藥物上可接受的賦形劑的藥物組合物給藥。另一方面，如果合適，可以將通式I、IA或II的化合物作為純物質(zhì)給藥。
在本發(fā)明的另一個方面中，可以將通式I、IA或II的化合物單獨使用或與一種或多種其它藥物活性劑聯(lián)用(例如抗癌藥、抗病毒藥)。
在另一個實施方案中，本發(fā)明的化合物還用于藥物開發(fā)試驗?？梢栽谠囼炛惺褂猛ㄊ絀、IA或II的化合物以便測定其它化合物作為抗癌藥、抗病毒藥或免疫抑制劑的功效和/或效能。這些試驗包括體內(nèi)和體外試驗。本發(fā)明的化合物可以用作對照品或可以用作發(fā)現(xiàn)新的有用化合物和藥物的前導(dǎo)化合物。
盡管仍然不受任何特定理論的束縛，但是認(rèn)為歸因于本文所述的tamandarin類似物和片段的生理活性是因這類類似物或片段與至少一種細(xì)胞成分之間的一種或多種相互作用所致。這種相互作用直接或間接導(dǎo)致所觀察到的細(xì)胞反應(yīng)。因此，本發(fā)明包括具有通式I、IA或II結(jié)構(gòu)的化合物在鑒定導(dǎo)致個體疾病表型的一種或多種細(xì)胞成分中的應(yīng)用。鑒定這類細(xì)胞成分可以表明緩解所述疾病的有效治療過程。用于該目的的化合物的實例包括具有通式I、IA或II結(jié)構(gòu)且含有熒光取代基(例如R5的部分)、光反應(yīng)性化學(xué)部分或與支持物結(jié)合的部分的tamandarin類似物和片段。
本文所述的熒光和其它可檢測標(biāo)記的tamandarin類似物(及其生理活性片段)可以用于鑒定那些類似物和片段可以發(fā)揮其生理作用的細(xì)胞。例如，可以鑒定或分離吸附或結(jié)合具有具有通式I、IA或II之一結(jié)構(gòu)的熒光化合物的細(xì)胞。鑒定或分離這類細(xì)胞可以用于診斷與存在這類細(xì)胞相關(guān)的疾病。鑒定或分離這些細(xì)胞還可以證實tamandarin類似物和片段中究竟哪一種化合物可有效治療與細(xì)胞相關(guān)的疾病。
帶有光反應(yīng)性部分的本發(fā)明化合物用作光親和探針。光親和探針用于鑒定、標(biāo)記和/或修飾靶蛋白。鑒定該靶蛋白用于理解疾病和細(xì)胞過程。本發(fā)明的光親和探針用于這類目的。另外，在另一個實施方案中，本發(fā)明的光親和探針用于調(diào)節(jié)靶蛋白或使其失活。
支持物結(jié)合的tamandarin類似物(或表現(xiàn)出相應(yīng)生理活性的tamandarin類似物的支持物結(jié)合的片段)可以用于鑒定在表面或其它處上含有受體蛋白、糖蛋白等的細(xì)胞，所述的受體蛋白、糖蛋白等能夠與所述類似物發(fā)生相互作用或與之結(jié)合。作為實例，可以通過使具有通式I、IA或II結(jié)構(gòu)并與支持物連接的tamandarin類似物與特定細(xì)胞受體發(fā)生相互作用而將其用于鑒定或物理分離特征在于存在特定受體的特定類型的細(xì)胞(例如腫瘤細(xì)胞)。
在一個實施方案中，本發(fā)明的方法使用了選自上述各實施方案中的一種或多種的化合物。在另一個實施方案中，該方法使用了選自通式I、IA或II的化合物的化合物及其藥物上可接受的鹽，其中R1和R2共同形成脯氨酸殘基的烷基環(huán)，R3為芐基，R4為CH3，R5為(N-甲基-R-亮氨酸)-S-脯氨酸-S-乳酸，R6為纈氨酸側(cè)鏈，X為O，且Y為H(化合物36)；R1和R2共同形成脯氨酸殘基的烷基環(huán)，R3為芐基，R4為CH3，R5為H，R6為纈氨酸側(cè)鏈，X為O，且Y為H；R1和R2共同形成脯氨酸殘基的烷基環(huán)，R3為芐基，R4為CH3，R5為H·HCl，R6為纈氨酸側(cè)鏈，X為O，且Y為H(化合物35)；R1和R2共同形成脯氨酸殘基的烷基環(huán)，R3為芐基，R4為CH3，R5為Boc，R6為纈氨酸側(cè)鏈，X為O，且Y為TIPS(化合物34)；R1和R2共同形成脯氨酸殘基的烷基環(huán)，R3為芐基，R4為CH3，R5為Boc，R6為纈氨酸側(cè)鏈，X為O，且Y為H；R1和R2共同形成脯氨酸殘基的烷基環(huán)，R3為4-甲氧基芐基，R4為H，R5為(N-甲基-R-亮氨酸)-S-脯氨酸-S-乳酸，R6為纈氨酸側(cè)鏈，X為O，且Y為H(化合物62)；R1和R2共同形成脯氨酸殘基的烷基環(huán)，R3為4-甲氧基芐基，R4為H，R5為Boc，R6為纈氨酸側(cè)鏈，X為O，且Y為H(化合物61)；R1和R2共同形成脯氨酸殘基的烷基環(huán)，R3為4-甲氧基芐基，R4為H，R5為H，R6為纈氨酸側(cè)鏈，X為O，且Y為H；R1和R2共同形成脯氨酸殘基的烷基環(huán)，R3為4-甲氧基芐基，R4為H，R5為(N-甲基-R-亮氨酸)-S-脯氨酸-S-丙酮酸，R6為纈氨酸側(cè)鏈，X為O，且Y為H(化合物64)；R1和R2共同形成脯氨酸殘基的烷基環(huán)，R3為4-甲氧基芐基，R4為H，R5為(N-甲基-R-亮氨酸)，R6為纈氨酸側(cè)鏈，X為O，且Y為H；R1和R2共同形成脯氨酸殘基的烷基環(huán)，R3為4-甲氧基芐基，R4為H，R5為N-Cbz-N-甲基-R-亮氨酸，R6為纈氨酸側(cè)鏈，X為O，且Y為H(化合物63)；
R1和R2共同形成脯氨酸殘基的烷基環(huán)，R3為4-甲氧基芐基，R4為H，R5為H·HCl，R6為纈氨酸側(cè)鏈，X為O，且Y為H；R1為H，R2為CH3，R3為4-甲氧基芐基，R4為CH3，R5為(N-甲基-R-亮氨酸)-S-脯氨酸-S-乳酸，R6為纈氨酸側(cè)鏈，X為O，且Y為H(化合物75)；R1為H，R2為CH3，R3為4-甲氧基芐基，R4為CH3，R5為Boc，R6為纈氨酸側(cè)鏈，X為O，且Y為H(化合物74)；R1為H，R2為CH3，R3為4-甲氧基芐基，R4為CH3，R5為H，R6為纈氨酸側(cè)鏈，X為O，且Y為H。
R1為CH3，R2為CH3，R3為4-甲氧基芐基，R4為CH3，R5為(N-甲基-R-亮氨酸)-S-脯氨酸-S-乳酸，R6為纈氨酸側(cè)鏈，X為O，且Y為H(化合物150)；R1為CH3，R2為CH3，R3為4-甲氧基芐基，R4為CH3，R5為Boc，R6為纈氨酸側(cè)鏈，X為O，且Y為H(化合物85)；R1為CH3，R2為CH3，R3為4-甲氧基芐基，R4為CH3，R5為H，R6為纈氨酸側(cè)鏈，X為O，且Y為H；R1和R2共同形成脯氨酸殘基的烷基環(huán)，R3為2-萘基甲基，R4為CH3，R5為(N-甲基-R-亮氨酸)-S-脯氨酸-S-乳酸，R6為纈氨酸側(cè)鏈，X為O，且Y為H(化合物93)；R1和R2共同形成脯氨酸殘基的烷基環(huán)，R3為2-萘基甲基，R4為CH3，R5為Boc，R6為纈氨酸側(cè)鏈，X為O，且Y為H(化合物92)；R1和R2共同形成脯氨酸殘基的烷基環(huán)，R3為2-萘基甲基，R4為CH3，R5為H，R6為纈氨酸側(cè)鏈，X為O，且Y為H；R1和R2共同形成脯氨酸殘基的烷基環(huán)，R3為4-甲氧基芐基，R4為CH3，R5為(N-甲基-R-亮氨酸)-S-脯氨酸-S-乳酸，R6為纈氨酸側(cè)鏈，X為NH，且Y為H；R1和R2共同形成脯氨酸殘基的烷基環(huán)，R3為4-甲氧基芐基，R4為CH3，R5為H，R6為纈氨酸側(cè)鏈，X為NH，且Y為H；且R1和R2共同形成脯氨酸殘基的烷基環(huán)，R3為4-甲氧基芐基，R4為CH3，R5為Boc，R6為纈氨酸側(cè)鏈，X為NH，且Y為H。
化合物的制備方法本發(fā)明的另一個方面為合成通式I、IA或II的化合物的方法?？梢园凑障铝蟹桨负兔枋鲋懈爬ǖ囊话惴椒ê铣赏ㄊ絀、IA或II的化合物。如下實施例部分中提供了具體的非限制性合成實施例。
就制備本文所述的類似物和片段的方法而言，取代基R1、R2、R3、R4、R5、R6、W、X、Y和Z具有如上述所用相同的含義。
作為本說明書中所用的，保護(hù)反應(yīng)可以包括任意反應(yīng)，由此一個或多個化學(xué)部分與分子的氮原子、氧原子和硫原子之一共價(但是可逆的)連接。這類連接防止了所述原子或多個原子參與不需要的化學(xué)反應(yīng)，即與其它化學(xué)部分共價連接并對其它化學(xué)部分提供或接受質(zhì)子和電子。由此連接的化學(xué)部分稱作“保護(hù)基”。作為實例，可以使用諸如芐酯基-琥珀酰亞胺(CBZ-琥珀酰亞胺)這類試劑保護(hù)諸如D-纈氨酸這類化合物的氮原子。這種試劑在標(biāo)準(zhǔn)方案中的應(yīng)用產(chǎn)生了被保護(hù)的D-纈氨酸，即D-N-Cbz-纈氨酸。在該化合物中，CBZ部分起胺保護(hù)基的作用且與之連接的氮原子不易于發(fā)生其它化學(xué)反應(yīng)。作為可選的實例，可以使用諸如三異丙基甲硅烷基三氟甲磺酸酯(TIPSOTf)這類試劑保護(hù)化合物11的羥基部分而得到化合物13(實施例1)。在該化合物上，Y為三異丙基甲硅烷基(TIPS)部分且起羥基保護(hù)基的作用，從而防止與連接該部分的氧原子的化學(xué)反應(yīng)。
進(jìn)行保護(hù)反應(yīng)的方案和有關(guān)可以用作保護(hù)基的化學(xué)部分的綜合信息為本領(lǐng)域中公知的且可以在參考文獻(xiàn)中找到，諸如Green和Wuts(1991，《有機(jī)合成中的保護(hù)基》(Protective Groups in OrganicSynthesis)，Wiley，New York)或Bodansky(1993，《肽合成原理》(Principles of Peptide Synthesis)，Springer，Berlin)。
可以通過方案1和2中所示的合成途經(jīng)制備本發(fā)明的某些tamandarin類似物和片段。
方案1

方案2 在所示的過程中，具有通式IV結(jié)構(gòu)的化合物被轉(zhuǎn)化成具有通式V結(jié)構(gòu)的化合物。
如此一系列反應(yīng)可以包括，但不限于保護(hù)反應(yīng)、活化反應(yīng)、酯化反應(yīng)和酯水解反應(yīng)。優(yōu)選在進(jìn)行酯化和水解反應(yīng)前保護(hù)通式IV的胺基。制備具有通式V結(jié)構(gòu)的化合物的具體實例如實施例1中所述?！癆PG”指的是胺保護(hù)基，諸如，但不限于芐酯基(CBZ)部分或叔丁氧羰基(BOC)部分。還可以如本文和本領(lǐng)域中所述使用可選的胺保護(hù)基。
制備具有通式V結(jié)構(gòu)的化合物的方法中包括的活化反應(yīng)的實例如實施例1中所示。該活化步驟可以包括試劑，諸如五氟苯酚(PFPOH)。還可以將不需要活化中間體的酯化反應(yīng)用于制備具有通式V結(jié)構(gòu)的化合物。
不包括有利于外消旋化的嚴(yán)格條件的本領(lǐng)域中公知的任何酯水解方法可以用于制備具有通式V結(jié)構(gòu)的化合物。作為實例，可以使用在溶劑混合物中的強(qiáng)堿水解具有通式V結(jié)構(gòu)的化合物，其中羧基被酯化成烷基酯，例如甲酯。本領(lǐng)域技術(shù)人員易于選擇適合于在較適度條件下進(jìn)行酯水解的試劑和條件(即包括不有利于外消旋化的條件)。
用例如烯丙基溴(例如如實施例1中所述)酯化具有通式VI結(jié)構(gòu)的化合物而得到具有通式VII結(jié)構(gòu)的化合物。
可以偶聯(lián)具有通式V結(jié)構(gòu)的化合物和具有通式VII結(jié)構(gòu)的化合物(例如酯化)而得到具有通式VIII結(jié)構(gòu)的化合物(例如方案1的步驟3)。任選使用催化劑、偶聯(lián)試劑或酯化試劑進(jìn)行這類反應(yīng)。用于該反應(yīng)類型的試劑和條件在本領(lǐng)域是公知的且以實施例1中為典型。具有通式VIII結(jié)構(gòu)的Tamandarin片段表現(xiàn)出本文所述的藥理活性中的一種或多種。
具有通式VIII結(jié)構(gòu)的化合物可以被水解成具有通式IX結(jié)構(gòu)的化合物。
如本文其它處所述，適合于酯水解的反應(yīng)條件和試劑是本領(lǐng)域中公知的且易于由本領(lǐng)域技術(shù)人員所應(yīng)用。這類水解的實例如實施例1中所述。具有通式IX結(jié)構(gòu)的Tamandarin片段表現(xiàn)出本文所述的藥理活性中的一種或多種。
具有通式IX結(jié)構(gòu)的化合物的羧基可以被活化成具有通式X結(jié)構(gòu)的化合物。
在通式X中，“ACT”指的是活化基團(tuán)，諸如五氟苯基(PFP)部分。另一個活化基團(tuán)的實例為N-羥基琥珀酰亞胺部分?？梢允褂弥T如活化試劑、催化劑、活化基團(tuán)供體等這類試劑進(jìn)行化學(xué)活化。作為實例，通過共價連接PFP基團(tuán)活化實施例2中所述的化合物8而得到化合物18。按照本文公開的方式活化化合物的方案是本領(lǐng)域中公知的。具有通式X結(jié)構(gòu)的Tamandarin片段表現(xiàn)出本文所述的藥理活性中的一種或多種。
可以使具有通式X結(jié)構(gòu)的活化化合物與具有通式XI結(jié)構(gòu)的第三種反應(yīng)劑偶聯(lián)而得到具有通式XII結(jié)構(gòu)的化合物。在通式XI和XII中，SEM指的是2-(三甲代甲硅烷基)乙氧羰基。該反應(yīng)的實例如實施例1中所述，其中化合物24與化合物18偶聯(lián)成化合物25。例如，制備被保護(hù)肽，諸如化合物18必不可少的試劑和條件描述在Li等《美國化學(xué)協(xié)會雜志》(J.Am.Chem.Soc.)1127659-7672(1990)中。具有通式XII結(jié)構(gòu)的Tamandarin類似物表現(xiàn)出本文所述的藥理活性中的一種或多種。
可以通過下列步驟制備本文所述的具有本文所述藥理活性中的一種或多種的tamandarin類似物除去具有通式XII結(jié)構(gòu)的化合物的氨基保護(hù)基和羰基羥基保護(hù)基；和將該化合物環(huán)化成具有通式XIII結(jié)構(gòu)的化合物。該過程如方案2的步驟7中所示。
該類反應(yīng)的實例如實施例1中所示。可以通過使諸如具有通式XII結(jié)構(gòu)的這類化合物與一種或多種試劑反應(yīng)對該化合物進(jìn)行化學(xué)脫保護(hù)以除去該化合物的保護(hù)基。典型的脫保護(hù)反應(yīng)在本文中公開。用于使化合物脫保護(hù)的其它方案為本領(lǐng)域中公知且易于由本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)用，以便對具有通式XII結(jié)構(gòu)的化合物脫保護(hù)。否則，可以使用本領(lǐng)域中公知用于肽類的大環(huán)化的方法對具有通式XII結(jié)構(gòu)的脫保護(hù)的化合物進(jìn)行環(huán)化。例如，大環(huán)化的條件可以與實施例2中所述產(chǎn)生化合物34中所用的那些條件相似或相同。具有通式XIII結(jié)構(gòu)的Tamandarin類似物表現(xiàn)出本文所述的治療活性中的一種或多種。
可以除去具有通式XIII結(jié)構(gòu)的化合物的一個或多個保護(hù)基而得到具有通式XIV結(jié)構(gòu)的化合物。這種脫保護(hù)如方案2的步驟8中所示。具有通式XIV結(jié)構(gòu)的Tamandarin類似物表現(xiàn)出本文所述的治療活性中的一種或多種。
可以通過使具有通式XIV結(jié)構(gòu)的化合物與帶有R5部分的試劑偶聯(lián)制備另一種活性化合物。該反應(yīng)以實施例1-4中為典型。R5取代基可以優(yōu)選在其遠(yuǎn)端上或接近其遠(yuǎn)端上(相對于大環(huán)而言)含有酶可裂解部分。這類部分可以被酶裂解，例如，羧肽酶、β-內(nèi)酰胺酶、β-半乳糖苷酶、青霉素V-酰胺酶、胞嘧啶脫氨酶、硝基還原酶、堿性磷酸酶、β-葡萄糖苷酸酶和催化抗體。含有酶可裂解部分的R5部分的實例為-(N-甲基)亮氨酸-(S)脯氨酸-(S)乳酸-(S)谷氨酰胺-(S)焦谷氨酸。酶可裂解部分的其它實例如本文所述。其它合適的試劑包括那些帶有上述具體R5基團(tuán)的那些試劑，其中開放的化合價被官能基，例如OH取代，使得該部分含有適合于偶聯(lián)大環(huán)的胺的官能基，例如COOH。
可以通過方案3中所示的合成途經(jīng)制備本發(fā)明的其它tamandarin類似物和片段。
方案3 在方案3中，使通式XV的化合物與通式XVI的化合物反應(yīng)而生成通式XVII的化合物。使用合適的酯化條件進(jìn)行步驟10而形成通式XVII的化合物。然后使通式XVII的化合物與通式XVIII的化合物縮合成通式XIX的化合物。隨后使通式XIX的化合物反應(yīng)而形成通式XIII的大環(huán)。步驟12包括使胺和羧酸酯基脫保護(hù)且進(jìn)一步包括大環(huán)化反應(yīng)。使通式XIII的大環(huán)脫保護(hù)(其中R5為H)且然后與合適的部分反應(yīng)而生成通式I的化合物。注意通式XIII的化合物屬于通式I的范圍。
當(dāng)X為NH，使得酯鍵被酰胺鍵取代時，可以如方案4中所示制備含有R3、R4和R5的酰胺片斷。
方案4 在方案4中，首先使通式XX的化合物與合適的胺保護(hù)基反應(yīng)而生成通式XXI的化合物。例如，反應(yīng)14可以使用在二噁烷中的(Boc)2O和NaOH。然后將通式XXI的化合物酯化成通式XXII的合適的酯。合適的酯包括烷基酯，諸如甲酯。可以通過使通式XXI的化合物與諸如甲基碘這類烷基鹵和諸如KHCO3這類合適的堿反應(yīng)而形成酯。然后將該酯還原成通式XXIII的醇。可以使用標(biāo)準(zhǔn)條件和試劑，諸如NaBH4進(jìn)行還原。隨后將通式XXIII的化合物轉(zhuǎn)化成通式XXIV的化合物，其中PG為合適的保護(hù)基，諸如叔丁基二甲基甲硅烷基、三甲代甲硅烷基或三異丙基甲硅烷基，且LG為合適的離去基，諸如甲磺酰基或甲苯磺?；?。優(yōu)選步驟16包括兩個步驟，其中第一個步驟為保護(hù)伯醇，而第二個步驟將仲醇轉(zhuǎn)化成合適的離去基。然后使通式XXIV的化合物與氮化物，諸如NaN3反應(yīng)而形成通式XXV的化合物。在合適的條件下，例如使用H2和乙醇中的Pd/碳使通式XXV的化合物還原成通式XXVI的胺。在合適的條件下使通式XXVI的胺與通式XXVII的酸縮合成通式XXVIII的酰胺。可以使用合適的偶聯(lián)試劑，例如DCC、HOBt和NMM催化酰胺鍵形成。然后使通式XXVIII的酰胺脫保護(hù)而得到通式XXIX的醇，將其氧化成通式XXX的酸。用于進(jìn)行步驟20和21的合適試劑和條件為本領(lǐng)域中眾所周知。然后用通式XXX的化合物取代如方案3中所示的通式XVIII的化合物以制備通式IA的化合物，其中X為NH。
使用與用于制備本文所述通式IA化合物相似的方法制備通式I的化合物。當(dāng)Z為C(O)-CH(CH3)-C(O)且W為O或NH時，可以使用合適的HIP-異他汀類(isostatine)部分取代方案1中通式X的化合物。合適的HIP-異他汀類(isostatine)部分是已知的。例如，參見Pfizenmeyer等《生物有機(jī)藥物化學(xué)通訊》(Bioorg.Med.Chem.Lett.)83653-3656(1998)。
tamandarin類似物和片段取代基的變化可能需要在本文所述的一般方法中適度修飾?？梢岳斫獗景l(fā)明包括這類修飾，因為它們易于由合成化學(xué)領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來設(shè)計。
使用標(biāo)準(zhǔn)步驟記錄1H-NMR、13C-NMR、IR和MS光譜。將顯著的峰依次列表表示質(zhì)子數(shù)、多樣性(s，單峰；d，雙峰；t，三重峰；q，四重峰；m，多重峰；br s，寬單峰)和以赫茲計的偶合常數(shù)。
實施例實施例1Tamandarin B的全合成方案5
方案6 方案7
方案8 方案9 將D-N-Cbz-纈氨酸五氟苯基(PFP)酯(10)D-N-Cbz-纈氨酸(9.8g，39.0mmol)溶于CH2Cl2(100mL)并冷卻至0℃，隨后添加吡啶(3.4mL，42.9mmol)和PFP-三氟乙酸酯(4.08mL，46.8mmol)。將該溶液在室溫下攪拌1小時并用NH4Cl(50mL，飽和)猝滅。用5％HCl(100mL)、NaHCO3(100mL，飽和)洗滌有機(jī)層，干燥(Na2SO4)，過濾并蒸發(fā)溶劑。得到了產(chǎn)生的PFP酯10，為無色油狀物(15.8g，92％)，并將其直接用于下一步。該化合物表現(xiàn)出與參比物23中報導(dǎo)相同的1H-NMR。1H-NMR(500MHz，CDCl3)1.01(d，J＝6.9Hz，3H)，1.08(d，J＝6.9Hz，3H)2.33-2.41(m，1H)，4.63-4.70(m，1H)，5.15(s，2H)，5.22(d，J＝7.8Hz，1H)，7.30-7.41(m，5H)。
(4R)-4-芐氧基羰基氨基-5-甲基-3-氧代-己酸甲酯(11)向冷卻至-78℃的PFP酯10(6g，14.4mmol)在無水THF(30mL)中的溶液中加入乙酸甲酯的烯醇鋰溶液。通過在-78℃下向LDA溶液(在50mL無水THF中51.8mmol)添加乙酸甲酯(4.12mL，50.3mmol)并將所得溶液攪拌1小時制備該烯醇鹽。將該反應(yīng)混合物在相同溫度下攪拌45分鐘以上并在-78℃下用NH4Cl(50mL)猝滅。在溫至室溫后，用EtOAc(mL)稀釋該溶液。分離有機(jī)層并用10％HCl(100mL)、5％NaHCO3(100mL)和NaCl(100mL，飽和)洗滌，干燥(Na2SO4)，過濾并濃縮。通過柱色譜法純化粗油(硅膠，EtOAc/己烷1/9)而得到甲酯11(2.8g，64％)，為無色油狀物。1H-NMR(500MHz，CDCl3)0.80(d，J＝6.8Hz，3H)，1.01(d，J＝6.8Hz，3H)，2.20-2.29(m，1H)，3.51(d，J＝11.8Hz)，3.55(d，J＝17.7Hz)，3.70(s，3H)，4.41(q，J＝4.4Hz，1H)，5.09(s，2H)，5.32(d，J＝12.0Hz，1H)，7.29-7.39(m，5H)。
(3S，4R)-4-芐氧基羰基氨基-3-羥基-5-甲基己酸甲酯(12)向冷卻至-78℃的甲酯11(2.8g，9.15mmol)在HPLC MeOH(30mL)的溶液中分批加入硼氫化鉀(1.72g，32mmol)。將該反應(yīng)混合物在-78℃下攪拌10分鐘，加熱到-20℃攪拌30分鐘，且然后在0℃下攪拌10分鐘。用乙酸使反應(yīng)猝滅至pH 7并用CH2Cl2(3×50mL)提取。用NaHCO3(50mL，飽和)、NaCl(50mL，飽和)洗滌有機(jī)層，干燥(Na2SO4)，過濾并蒸發(fā)。得到醇12，為無色油狀物(2.7g，98％)并將其直接用于下一步。1H-NMR(500MHz，CDCl3)0.87(d，J＝6.7Hz，3H)，0.94(d，J＝6.7Hz，3H)，2.10-2.19(m，1H)，2.47(dd，J＝16.7和9.1Hz)，2.58(dd，J＝16.7和2.9Hz，1H)，3.11-3.20(m，1H)，3.56-3.63(m，1H)，3.68(s，3H)，3.90-3.98(m，1H)，4.64(d，J，＝7.9Hz，1H)，5.09(s，2H)，7.30-7.39(m，5H)。
(3S，4R)-4-芐氧基羰基氨基-5-甲基-3-(三異丙基-硅烷氧基)己酸甲酯(13)向在氬氣環(huán)境中冷卻至0℃的粗醇12(2.7g，9.1mmol)在CH2Cl2(10mL)中的溶液中加入2，6-盧剔啶(2.6mL，22.7mmol)和三氟甲磺酸三異丙基甲硅烷基酯(3.6mL，13.6mmol)。將該反應(yīng)混合物在0℃下攪拌30分鐘且然后在室溫下攪拌2小時并用CH2Cl2(25mL)稀釋。分離有機(jī)層并用10％HCl(50mL)、NaHCO3(50mL，飽和)和NaCl(50mL，飽和)洗滌，干燥(Na2SO4)，過濾并濃縮。通過柱色譜法純化粗油(硅膠，乙醚/己烷2∶98-15∶85)而得到13(2.9g，70％)，為無色油狀物。1H-NMR(500MHz，CDCl3)0.88(d，J＝6.8Hz，3H)，0.92(d，J＝6.7Hz，3H)，1.01-1.07(m，21H)，1.97-2.04(m，1H)，2.53(dd，J＝15.3和4.7Hz，1H)，2.60(dd，J＝15.2和7.5Hz，1H)，3.57(s，3H)，3.59-3.65(m，1H)，4.34-4.40(m，1H)，4.78(d，J＝10.3Hz，1H)，5.06-5.09(m，2H)，7.27-7.35(m，5H)。
(3S，4R)-4-芐氧基羰基氨基-5-甲基-3-(三異丙基-硅烷氧基)己酸(14)向冷卻至0℃的13(2.2g，4.7mmol)在50mL THF/MeOH(1∶1)中的溶液中加入1N NaOH溶液(55mL，32mmol)。將該反應(yīng)體系在0℃下攪拌2小時且然后在室溫下攪拌過夜。濃縮該反應(yīng)混合物并用H2O(20mL)稀釋，冷卻至0℃，用1N KHSO4溶液酸化至pH 2并用EtOAc(3×20mL)提取。用NaCl(50mL，飽和)洗滌合并的有機(jī)層，干燥(Na2SO4)，過濾并蒸發(fā)。得到產(chǎn)生的酸14，為無色油狀物(1.76g，86％)并將其直接用于下一步。1H-NMR(500MHz，CDCl3)0.86(m，3H)，0.95(d，J＝6.7Hz，3H)，1.04-1.14(m，21H)，1.90-2.00(m，1H)，2.52-2.72(m，2H)，3.60-3.62(m，1H)，4.28-4.36(m，1H)，5.02(d，J＝10.4Hz，1H)，5.07-5.13(m，3H)，7.25-7.35(m，5H)。
(2S)-{1-(2S，3R)-[3-芐氧基羰基氨基-2-(三異丙基-硅烷氧基)己基]乙烯氧基}-3-甲基丁酸烯丙酯(16)向冷卻至0℃的酸14(1.76g，3.89mmol)在CH2Cl2(20mL)中的溶液中依次加入α-羥基異戊酸烯丙酯15(615mg，3.89mmol)、EDAC HCl(820mg，4.20mmol)和DMAP(94mg，0.77mmol)。將該反應(yīng)混合物在0℃下攪拌1小時且然后在室溫下攪拌過夜。用CH2Cl2稀釋該反應(yīng)體系并用10％HCl(50mL)、NaHCO3(50mL，飽和)和NaCl(50mL，飽和)洗滌有機(jī)層，干燥(Na2SO4)，過濾并濃縮。通過柱色譜法純化粗油(硅膠，EtOAc/己烷9∶1)而得到烯丙酯16(1.2g，52％)，為無色油狀物。1H-NMR(500MHz，CPCl3)0.88-0.99(m，12H)，1.00-1.10(m，21H)，1.96-2.05(m，1H)，2.17-2.25(m，1H)，2.65(dd，J＝15.8和5.3Hz，1H)，2.71(dd，J＝15.8和7.3Hz，1H)，3.62-3.72(m，1H)，4.40-4.45(m，1H)，4.57-4.63(m，2H)，4.79(d，J＝4.8Hz，1H)，4.88(d，J＝10.6Hz，1H)，5.07(s，2H)，5.20-5.23(m，1H)，5.28-5.32(m，1H)，5.83-5.91(m，1H)，7.26-7.38(m，5H)。
(2S)-{1-(2S，3R)-[3-芐氧基羰基氨基-2-(三異丙基-硅烷氧基)己基]乙烯氧基}-3-甲基丁酸五氟苯基酯(18)在室溫下向烯丙酯16(1.2g，2.02mmol)在干THF(15mL)中的溶液中加入Pd(Ph3)4(231mg，0.20mmol)和嗎啉(1.7mL，20mmol)。將該混合物攪拌過夜并濃縮該反應(yīng)混合物，用CH2Cl2(20mL)稀釋并用1N HCl(20mL)和H2O(20mL)洗滌。干燥(Na2SO4)有機(jī)層，過濾并濃縮至得到酸17。將殘余物溶于CH2Cl2(5mL)，冷卻至0℃，隨后依次加入PFPOH(384mg，2.09mmol)、EDAC.HCl(45mg，72.38mmol)和DMAP(49mg，0.39mmol)。將該反應(yīng)混合物在0℃下攪拌1/2小時且然后在室溫下攪拌4小時。用CH2Cl2稀釋該反應(yīng)體系并用10％HCl(50mL)、5％NaHCO3(50mL，飽和)和NaCl(50mL，飽和)洗滌有機(jī)層，干燥(Na2SO4)，過濾并濃縮。通過柱色譜法純化粗油(硅膠，EtOAc/己烷9∶1)而得到五氟苯基酯18(0.71g，兩步總計50％)，為無色油狀物。1H-NMR(500MHz，CDCl3)0.89(d，J＝7.0Hz，3H)，0.92(d，J＝7.0Hz，3H)，1.02-1.06(m，21H)，1.06-1.11(m，6H)，2.00-2.08(m，1H)，2.31-2.40(m，1H)，2.60-268(dd，J＝15.8和4.8Hz，1H)，2.77(dd，J＝15.8和7.9Hz，1H)，3.63-3.70(m，1H)，4.40-4.45(m，1H)，4.799d，J＝10.3Hz，1H)，4.98-5.03(m，2H)，5.04-5.089m，1H)，7.26-7.34(m，5H)。
L-Cbz-N-亮氨酰-L-脯氨酸甲酯(19)向冷卻至0℃的L-Cbz-亮氨酸(902mg，3.40mmol)和L-脯氨酸甲酯鹽酸鹽(563mg，3.40mmol)在干CH2Cl2(10mL)中的溶液中加入二環(huán)己基碳化二亞胺(DCC)(912mg，4.42mmol)、1-羥基苯并三唑(HOBt)(551mg，4.08mmol)和N-甲基嗎啉(NMM)(2.6mL，13.6mmol)。1小時后，將該反應(yīng)體系溫至室溫并攪拌過夜。用乙醚(10mL)稀釋該混合物并過濾。用EtOAc(25mL)稀釋濾液并用和10％HCl(100mL)、NaHCO3(100mL，飽和)和NaCl(100mL，飽和)溶液洗滌。干燥有機(jī)層(Na2SO4)并蒸發(fā)溶劑。通過柱色譜法純化粗油(硅膠，EtOAc/己烷2/8)而得到L-Cbz-N-亮氨酰-L-脯氨酸甲酯(1.24g，98％)，為白色泡沫。1H-NMR(500MHz，CDCl3)0.94(d，J＝6.6Hz，3H)，0.99(d，J＝6.5Hz，3H)，1.50-1.65(d，J＝6.5Hz，2H)，1.73-1.79(m，1H)，1.94-2.22(m，4H)，3.57-3.78(m，2H)，3.70(s，3H)，4.50-4.55(m，2H)，5.03-5.09(m，2H)，5.33(d，J＝8.8Hz，2H)，7.28-7.34(m，15H)。
L-Cbz-N-亮氨酰-L-脯氨酸(20)向冷卻至0℃的二肽酯19(887mg，2.36mmol)在THF(20mL)中的溶液中滴加LiOH(198mg，4.72mmol)在水(20mL)中的溶液。將該反應(yīng)體系溫至室溫并攪拌過夜。在減壓下濃縮所得溶液并用乙醚提取。用50％HCl將水層酸化至pH 2并用EtOAc(3×20mL)提取。干燥有機(jī)層(Na2SO4)并蒸發(fā)溶劑而得到L-Cbz-N-亮氨酰-L-脯氨酸20(774mg，90％)，為白色泡沫。該化合物表現(xiàn)出與參比物24中報導(dǎo)相同的1H-NMR。1H-NMR(500MHz，CDCl3)0.92(d，J＝6.5Hz，3H)，0.96(d，J＝6.5Hz，3H)，1.43-1.58(m，2H)，1.71-1.76(m，1H)，1.99-2.23(m，4H)，3.55-3.58(m，1H)，3.75-3.78(m，1H)，4.51-4.58(m，2H)，5.03-5.09(m，2H)，7.28-7.34(m，15H)。
L-Cbz-N-O-二甲基酪氨酸(21)向在0℃下的攪拌的L-Cbz-Tyr(5.0g，15.8mmol)在THE(84mL)中的溶液中分批加入KOH細(xì)粉(8.86g，158mol)，隨后添加硫酸氫四丁基銨(0.5g，按重量計10％)。然后在15分鐘內(nèi)滴加硫酸二甲酯(9.74mL，103mmol)。將反應(yīng)體系再攪拌30分鐘并加入H2O(50mL)。在室溫下攪拌5小時后，加入20％氫氧化銨水溶液(20mL)。用乙醚(100mL)稀釋該反應(yīng)體系，分離水層并用飽和NaHCO3水溶液(2×40mL)提取有機(jī)層。用1M KHSO4將合并的水層酸化至pH 1并用EtOAc(2×200mL)提取。合并有機(jī)層，干燥(Na2SO4)，過濾并濃縮。得到產(chǎn)生的酸21(4.3g，85％)，為黃色油狀物且不經(jīng)純化將其用于下一步。1H-NMR(500MHz，CDCl3)2.78和2.84(s，3H)，2.92-3.06(m，1H)，3.21-3.30(m，1H)，3.76(s，3H)，4.80-4.90(m，1H)，5.00-5.10(m，2H)，6.65-6.79(m，2H)，7.00-7.09(m，2H)，7.24-7.33(m，5H)。
L-Cbz-N，O-二甲基酪氨酸-O-L-N-Boc-蘇氨酸-SEM酯將冷卻至0℃的L-Cbz-N-O-二甲基酪氨酸(21)(188mg，0.54mmol)在CH2Cl2(2mL)中的溶液中加入Boc-Thr-O-SEM(100mg，0.45mmol)。向所得溶液中加入Et3N(165μl，1.18mmol)、DMAP(14mg，0.11mmol)和氯甲酸異丙烯酯(60μl，0.54mmol)。將該反應(yīng)體系在0℃下攪拌1小時，用Et2O(10mL)稀釋并用10％HCl(10mL)、5％NaHCO3(10mL)和飽和NaCl(10mL)溶液洗滌。干燥有機(jī)層(Na2SO4)并蒸發(fā)溶劑。通過柱色譜法純化粗油(硅膠，EtOAc/己烷10∶1)而得到二肽22(131mg，43％)。1H-NMR(200MHz，CDCl3)0.01(m，9H)，0.92-0.96(m，2H)，1.23-1.29(m，3H)，1.44和1.43(s，9H)，2.72和2，79(s，3H)，2，81-2.98和3.17-3.21(m，2H)，3.67-3.72(m，2H)，3.76(s，3H)，4.20-4.50(m，2H)，4.60-4.78(m，1H)，5.03-5.11(m，2H)，5.25-5.43(m，2H)，6.74-6.78(m，2H)，6.97-7.06(m，2H)，7.22-7.33(m，5H)。
L-N，O-二甲基酪氨酸-O-L-Boc-蘇氨酸-OSEM(22)向在氬氣環(huán)境中的L-Cbz-N-甲基苯丙氨酸-O-Boc-蘇氨酸-OSEM(231mg.0.34mmol)在MeOH中的溶液中加入Pd(OH)2(23mg)。用H2凈化該反應(yīng)體系并在氫氣(1atm)環(huán)境中攪拌過夜。將該混合物通過Celite過濾。濃縮濾液至得到化合物22(174mg，94％)，為黃色油狀物。1H-NMR(500MHz，CDCl3)0.0(s，9H)，0.91(t，J＝8.2，2H)，1.23和1，25(d，J＝5.6Hz，3H)，1.41(s，9H)，2.31(s，3H)，2，79(s，3H)，2.82和2.83(dd，J＝14.3和6.4Hz)，3.45(t，J＝6.1Hz，1H)，3.64-3.67(m，2H)，4.48和5.23(d，J＝9.7Hz)，5.02(d，J＝5.2Hz，2H)，6.75-6.78(m，2H)，6.92-7.05(m，2H)。
L-Cbz-亮氨酰-L-脯氨酰-L-N，O-二甲基酪氨酸-O-L-Boc-蘇氨酸-O-SEM(23)向冷卻至-15℃的L-Cbz-Leu-L-Pro-OH(98.4mg，0.27mmol)在CH2Cl2(2mL)中的溶液中加入BOP-Cl(69mg，0.27mmol)，隨后滴加NMM(30μL，0.27mmol)。將L-N，O-二甲基酪氨酸-O-L-Boc-蘇氨酸-O-SEM(147mg，0.27mmol)在CH2Cl2(2mL)中的分相溶液冷卻至-15℃并加入到反應(yīng)體系中，隨后添加N-甲基嗎啉(NMM)(30μl，0.54mmol)。將該混合物在-15℃下攪拌15分鐘，在0℃下攪拌1小時并在室溫下攪拌過夜。用EtOAc(15mL)稀釋該反應(yīng)混合物并用10％HCl(10mL)、NaHCO3(10mL，飽和)和NaCl(10mL，飽和)洗滌。干燥有機(jī)層(Na2SO4)并蒸發(fā)溶劑。通過柱色譜法純化粗油(硅膠，EtOAc/己烷3/7)而得到四肽23(130g，55％)，為淡黃色油狀物。1H-NMR(500MHz，CDCl3)0.00(s，9H)，0.67-0.87(m，2H)，0.89-1.00(m，6H)，1.19-1.21(d，J＝6.8Hz)，1.36(d，J＝6.8Hz，3H)，1.46(s，9H)，1.54-1.99(m，7H)，2.72(s)，2.73(s，3H)，2.91-3.00(m，1H)，3.05-3.15(m)，3.50-3.55(m，1H)，3.66-3.89(m，4H)，3.75(s，3H)，4.25-4.33(m，1H)，4.41-4.61(m，2H)，4.67-4.68(m，1H)，4.62-4.75(m，1H)，4.95-5.01(dd，J＝8.5和3.2Hz)，5.01-5.17(m，2H)，5.27-5.62(m，3H)，7.16-7.42(m，10H)，7.81(m，1H)，8.00(m)。
L-亮氨酰-L-脯氨酰-L-N，O-二甲基酪氨酸-L-N-Boc-蘇氨酸-O-SEM(24)向在氬氣環(huán)境中的L-Cbz-亮氨酰-L-脯氨酰-L-N-甲基苯基丙氨酸-O-L-Boc-蘇氨酸-OSEM(665mg，0.74mmol)在MeOH(10mL)中的溶液中加入Pd(OH)2(119mg)。用H2凈化該反應(yīng)體系并在氫氣(1atm)環(huán)境中攪拌過夜。將該混合物通過C鹽過濾。濃縮濾液至得到游離氨基四肽24(547mg，94％)，為無色油狀物，不經(jīng)進(jìn)一步純化將其用于下一步。1H-NMR(500MHz，CDCl3)0.001(s，9H)，0.64-0.86(m，2H)，0.88-0.96(m，6H)，1.19-1.21(d，J＝6.3Hz)，1.33-1.34(d，J＝6.3Hz，3H)，1.44(s，9H)，1.63-1.92(m，3H)，1.92-2.01和2.08-2.24(m，4H)，2.73(s)，2.86-2.96和3.10-3.19(m，2H)，3.45-3.72(m，4H)，4.34-4.69(m，3H)，4.78-4.81(dd，J＝8.0和3.3Hz，1H)，5.01-5.10(m，1H)，5.17-5.52(m)和5.58-7.60(m，3H)6.77-6.83(m，2H)，7.00-7.10(m，2H)。
Tamandarin B被保護(hù)的直鏈前體(25)向冷卻至0℃的PFP酯18(285mg，0.39mmol)在CH2Cl2(1.5mL)中的溶液中加入DIEA(170μL，0.98mmol)并將該溶液攪拌20分鐘，隨后添加在CH2Cl2(1.5mL)和DMAP(9.5mg，0.078mmol)中的胺24(292mg，0.39mmol)。將該反應(yīng)混合物在0℃下攪拌1小時且然后在室溫下再攪拌1小時。用NH4Cl(3mL)使反應(yīng)猝滅并用CH2Cl2(10mL)稀釋。用10％HCl(10mL)、5％NaHCO3(10mL)和NaCl(10mL，飽和)洗滌有機(jī)層，干燥(Na2SO4)，過濾并濃縮。通過柱色譜法純化粗油(硅膠，EtOAc/己烷9∶1)而得到25(285mg，57％)，為無色油狀物。1H-NMR(500MHz，CDCl3)0.008(s，9H)，0.73-0.83(m，2H)，0.85-0.92(m，9H)，0.92-1.08(m，21H)，1.45(s，4H)，1.13-2.19(m，11H)，2.43-2.46(m，1H)和2，54-2.58(m.1H)，2.64(s，3H)，2.88(s，3H)，3.09-3.17(m，2H)，3.44-3.73(m，4H)，3.75(s，3H)，3.79-3.89(m，1H)，4.38-4.55(m，4H)，4.69-4.81(m，1H)，4.96-5.05(m，3H)，5.18-5.43(m，3H)，5.46-5.48(d，J＝6.0Hz，1H)，6.83(m，2H)，6.95-7.11(m，2H)，7.25-7.38(m，5H)，7.55-7.77(m)和8.85-8.87(m，2H)。
Tamandarin B被保護(hù)的大環(huán)(26)向在0℃下的完全被保護(hù)的直鏈前體25(350mg，0.27mmol)溶于CH2Cl2(5mL)中的溶液中加入MgBr2.Et2O(210mg，0.81mmol)。將該反應(yīng)體系在0℃下攪拌2小時且然后在室溫下攪拌過夜。用CH2Cl2稀釋該反應(yīng)體系并用10％HCl(10mL)和NaCl(10mL，飽和)洗滌有機(jī)層，過濾并濃縮。得到產(chǎn)生的酸(319mg)且將其直接用于下一步。向在氬氣環(huán)境中的粗酸(319mg)在MeOH(5mL)中的溶液中加入Pd(OH)2(28mg)。用H2凈化該反應(yīng)體系并在氫氣(1atm)環(huán)境中攪拌過夜。將該混合物通過C鹽過濾。濃縮濾液至得到直鏈前體(296mg)，為白色泡沫，將其直接用于下一步。將粗的氨基酸直鏈前體溶于DMF(27mL)并冷卻至0℃。加入HATU(123mg，0.32mmol)，隨后滴加DIEA(141μL，0.81mmol)。將該反應(yīng)混合物在0℃下攪拌1小時且然后攪拌過夜。在真空中濃縮該反應(yīng)混合物，用EtOAc(10mL)稀釋并用10％HCl(10mL)、5％NaHCO3(10mL)和NaCl(10mL，飽和)洗滌，干燥(Na2SO4)，過濾并濃縮。通過柱色譜法純化粗油(硅膠，EtOAc/己烷5/1)而得到被保護(hù)的大環(huán)26(50mg，三步總計19％)，為白色泡沫。該化合物表現(xiàn)出與參比物23中報導(dǎo)相同的1H-NMR。1H-NMR(500MHz，CDCl3)0.78-1.07(m，39H)，1.21-1.48(m，17H)，1.56-1.92(m，4H)，1.73-1.81(m，1H)，1.95-2.12(m，2H)，2.43-2.44(m，1H)和3.11-3.17(m，1H)，2.52(s，3H)，2.89-3.00(m，1H)，3.30-3.32(m，1H)，3.49-3.52(m，1H)，3.60-3.62(m，1H)，3.66-3.70(m，1H)，3.77(s，3H)，4.14-4.19(m，1H)，4.37-4.43(m，1H)，4.46-4.48(d，J＝7.6Hz，1H)，4.55-4.86(m，1H)，4.88-4.92(m，1H)，6.82-6.83(d，J＝8.5Hz，2H)，7.06-7.07(d，J＝8.5Hz，2H)，7.41-7.48(m，2H)。
Tamandarin B(2)向Boc被保護(hù)的大環(huán)26(10mg，0.01mmol)在HPLC EtOAc中的溶液中加入HCl在EtOAc中的溶液。將所得溶液在室溫下攪拌2小時。濃縮該溶液并用CH2Cl2稀釋殘余物且再次濃縮至得到鹽酸鹽(定量產(chǎn)率)，為白色固體，將其直接用于下一步。向在0℃下大環(huán)胺鹽(9mg，0.01mmol)和側(cè)鏈(6.1mg，0.015mmol)在CH2Cl2(0.50mL)中的混合物中加入BOP(8.4mg，0.015mmol)和NMM(6μL，0.05mmol)。在0℃下30分鐘后，將該反應(yīng)體系在室溫下攪拌過夜。用NaCl溶液(2mL，飽和)處理該反應(yīng)體系并用EtOAc(2×10mL)提取。用10％HCl(5mL)、5％NaHCO3(5mL)和NaCl(5mL，飽和)洗滌有機(jī)層，干燥(Na2SO4)，過濾并濃縮。通過HPLC純化粗油(8mg，61％)。
實施例2Phe5Tamandarin B的合成按照方案9和10中所示的方法合成tamandarin B的苯丙氨酸類似物(Phe5Tamandarin B)。
方案10
方案11 L-Cbz-N-甲基苯丙氨酸(28)向在0℃下的攪拌的L-Cbz-Phe(5.1g，17.8mmol)在THE(90mL)中的溶液中分批加入KOH細(xì)粉(6.7g，0.12mol)，隨后添加硫酸氫四丁基銨(0.51g，按重量計10％)。然后在15分鐘內(nèi)滴加硫酸二甲酯(6.4mL，71.2mmol)。將反應(yīng)體系再攪拌30分鐘并加入H2O(50mL)。在室溫下攪拌5小時后，加入20％氫氧化銨水溶液(20mL)。用乙醚(100mL)稀釋該反應(yīng)體系，分離水層并用飽和NaHCO3水溶液(2×40mL)提取有機(jī)層。用1M KHSO4將合并的水層酸化至pH 1并用EtOAc(2×200mL)提取。合并有機(jī)層，干燥(Na2SO4)，過濾并濃縮。得到產(chǎn)生的酸28(4.5g，85％)，為黃色油狀物且不經(jīng)純化將其用于下一步。1H-NMR(500MHz，CDCl3)2.71和2.78(s，3H)，2.94-3.06(m，1H)，3.17-3.32(m，1H)，4.79-4.89(m，2H)，4.95和5.03(s，2H)，7.04-7.28(m，10H)。
L-Cbz-N-甲基苯丙氨酸-O-L-Boc-蘇氨酸-OSEM(29)將冷卻至0℃的Cbz-N-甲基苯丙氨酸(2mg，6.56mmol)在CH2Cl2(40mL)中的溶液中加入Boc-Thr-OSEM(2.08g，5.96mmol)。向所得溶液中加入Et3N(1.9ml，13mmol)、DMAP(146mg，1.19mmol)和氯甲酸異丙烯酯(0.71mL，6.56mmol)。將該反應(yīng)體系在0℃下攪拌1小時，用Et2O(150mL)稀釋并用10％HCl(50mL)、5％NaHCO3(50mL)和飽和NaCl(50mL)溶液洗滌。干燥有機(jī)層(Na2SO4)并蒸發(fā)溶劑。通過柱色譜法純化粗油(硅膠，EtOAc/己烷10∶1)而得到二肽29(1.79g，60％)。1H-NMR(200MHz，CDCl3)0.0(s，9H)，0.96(m，2H)，1.25和1.30(d，J＝1.6Hz，3H)，1.46(s，9H)，2.75和2.83(s，3H)，2.92-3.06(m，1H)，3.20-3.40(m，1H)，3.75-3.85(m，2H)，4.44(m，2H)，4.83-4.90(m，1H)，5.01-5.15(m，3H)，5.25-5.40(m，2H)，5.46(m，1H)，7.09-7.35(m，10H)。
L-N-甲基苯丙氨酸-O-L-Boc-蘇氨酸-OSEM(30)向在氬氣環(huán)境中的L-Cbz-N-甲基苯丙氨酸-O-Boc-蘇氨酸-OSEM(1.7g.2.6mmol)在MeOH中的溶液中加入Pd(OH)2(170mg)。用H2凈化該反應(yīng)體系并在氫氣環(huán)境中(1atm)攪拌過夜。將該混合物通過C鹽過濾。濃縮濾液至得到化合物30(1.32g，98％)，為黃色油狀物。1H-NMR(500MHz，CDCl3)0.0(s，9H)，0.93(t，J＝8.2，2H)，1.04和1，28(d，J＝5.6Hz，3H)，1.44(s，9H)，2.29(s，3H)，2.83和2.93(dd，J＝14.3和6.4Hz)，3.40(t，J＝6.1Hz，1H)，3.66-3.68(m，2H)，4.48和5.23(d，J＝9.7Hz)，5.02(d，J＝5.2Hz，2H)，7.08-7.28(m，5H)。
L-Cbz-亮氨酰-L-脯氨酰-L-N-甲基苯丙氨酸-O-L-Boc-蘇氨酸-O-SEM(31)向冷卻至-15℃的L-Cbz-Leu-L-Pro-OH(1.0g，2.84mmol)在CH2Cl2(25mL)中的溶液中加入BOP-Cl(0.72g，2.84mmol)，隨后滴加NMM(318μL，2.847mmol)。將30(1.32g，2.58mmol)在CH2Cl2(25mL)中的分相溶液冷卻至-15℃并加入到反應(yīng)體系中，隨后添加N-甲基嗎啉(NMM)(0.58mL，5.16mmol)。將該混合物在-15℃下攪拌15分鐘，在0℃下攪拌1小時并在室溫下攪拌過夜。用EtOAc稀釋該反應(yīng)混合物并用10％HCl(100mL)、NaHCO3(100mL，飽和)和NaCl(100mL，飽和)洗滌。干燥有機(jī)層(Na2SO4)并蒸發(fā)溶劑。通過柱色譜法純化粗油(硅膠，EtOAc/己烷3/7)而得到四肽31(1.02g，55％)，為淡黃色油狀物。Rf0.19(AcOEt/己烷3∶7)。[α]D20＝-38.5(c＝1，CH2Cl2)。1H-NMR(500MHz，CDCl3)0.0(s，9H)，0.73-0.77(m，2H)，0.92-1.00(m，6H)，1.21(d，J＝6.7Hz)，1.36(d，J＝6.7Hz，3H)，1.46(s，9H)，1.54-1.99(m，7H)，2.72(s)，2.78(s，3H)，2.93-3.01(m，1H)，3.05-3.15(m)，3.50-3.55(m，1H)，3.66-3.89(m，4H)，4.29-4.35(m，1H)，4.41-4.61(m，2H)，4.63-4.65(m，1H)，4.72-4.74(dd，J＝8.1和3.1Hz，1H)，4.95-5.01(dd，J＝8.1和3.1Hz)，5.05-5.17(m，2H)，5.27-5.62(m，3H)，7.16-7.42(m，10H)，7.71(d，J＝10Hz，1H)，8.01(d，J＝9.2Hz)。13C-NMR(125MHz，CDCl3)-1.46，16.2，16.6，16.9，17.9，21.4，23.4，24.5，24.7，25.1，28.2，29.2，34.5，39.5，40.7，46.8，51.1，53.3，55.1，57.6，58.8，62.1，65.8，62.7，67.9，68.2，71.2，72.5，80.1，89.8，90.2，126.6，127.3，127.9，128.4，128.8，129.4，156.0，169.1，172.7，173.8。IR(凈)3278，2954，1703，1640，1521，1435，1365。HRMS m/z C44H66N4O11SiNa(M+Na)計算值877.4395；測定值877.4404。
L-亮氨酰-L-脯氨酰-L-N-甲基苯基丙氨酸-O-L-Boc-蘇氨酸-OSEM(32)向在氬氣環(huán)境中的31(223mg，0.26mmol)在MeOH中的溶液中加入Pd(OH)2(50mg)。用H2凈化該反應(yīng)體系并在氫氣(1atm)環(huán)境中攪拌過夜。將該混合物通過C鹽過濾。濃縮濾液至得到游離氨基四肽32(192mg，97％)，為黃色油狀物，不經(jīng)進(jìn)一步純化將其用于下一步。1H-NMR(500MHz，CDCl3)0.0(s，9H)，0.72-0.76(m，2H)，0.90-0.99(m，6H)，1.22(d，J＝6.7Hz)，1.35(d，J＝6.7Hz，3H)，1.45(s，9H)，1.47-1.539m，2H)，1.81-2.01(m，5H)，2.71(s)，2.79(s，3H)，2.92-3.00(m，1H)，3.05-3.15(m)，3.51-3.56(m，1H)，3.67-3.90(m，4H)，4.29-4.35(m，1H)，4.42-4.63(m，2H)，4.63-4.65(m，1H)，4.72-4.74(dd，J＝8.0和3.2Hz，1H)，5.01(d，J＝6.0Hz，1H)，5.21-5.59(m，3H)，7.05-7.29(m，5H)，7.53(d，J＝10Hz)，7.68(d，J＝9.1Hz)。
-Tamandarin B被保護(hù)的直鏈前體(33)向冷卻至0℃的PFP酯18(191mg，0.26mmol)在CH2Cl2(5mL)中的溶液中加入DIEA(116μL，0.65mmol)并將該溶液攪拌20分鐘，隨后添加在CH2Cl2(5mL)和DMAP(0.6mg，0.006mmol)中的胺32(192mg，0.27mmol)。將該反應(yīng)混合物在0℃下攪拌1小時且然后在室溫下再攪拌1小時。用NH4Cl使反應(yīng)猝滅并用CH2Cl2稀釋。用10％HCl(100mL)、5％NaHCO3(100mL)和NaCl(100mL，飽和)洗滌有機(jī)層，干燥(Na2SO4)，過濾并濃縮。通過柱色譜法純化粗油(硅膠，EtOAc/己烷9∶1)而得到33(153mg，44％)，為無色油狀物。Rf0.20(AcOEt/己烷3/1)。[α]D20＝-44.0(c＝1，CHCl3)。1H-NMR(500MHz，CDCl3)0.0(s，9H)，0.87-0.89(m，2H)，0.90-0.98(m，18H)，1.02-1.10(m，21H)，1.43(s，4H)，1.11-2.10(m，9H)，2.49-2.51(m，3H)，2.68(s，3H)，2.89(s，3H)，3.09-3.17(m，2H)，3.65-3.67(m，1H)，3.68-3.72(m，5H)，4.31-4.45(m，1H)，4.20-4.33(m，3H)，4.69-4.79(m，2H)，4.96-5.05(m，3H)，5.18-5.43(m，3H)，5.47(d，J＝6.0Hz，1H)，6.83(d，J＝7.9Hz，1H)，7.11-7.41(m，11H)，7.82(d，J＝6.5Hz，1H)，8.88(d，J＝8.5Hz，1H)，13C-NMR(125MHz，CDCl3)13.1，17.3，18.1，18.5，19.3，20.9，21.6，23.9，25.4，28.6，29.6，30.5，34.8，35.0，39.9，47.3，49.4，55.3，57.3，59.3，60.7，62.6，66.7，68.6，79.1，80.6，90.6，127，1，128.2，129.3，137.4，156.8，157.1，169.5，170.4，171.0，172.1，174.2。IR(凈)3446，2956，2868，1738，1703，16361455。HRMS m/zC65H107N5O15Si2Na(M+Na)計算值1276.7199；測定值1276.7273。
-Tamandarin B被保護(hù)的大環(huán)(34)向在0℃下的完全被保護(hù)的直鏈前體33(140mg，0.11mmol)溶于CH2Cl2(5mL)中的溶液中加入MgBr2.Et2O(85mg，0.33mmol)。將該反應(yīng)體系在0℃下攪拌2小時且然后在室溫下攪拌過夜。用CH2Cl2稀釋該反應(yīng)體系并用10％HCl(100mL)和NaCl(100mL，飽和)洗滌有機(jī)層，干燥(Na2SO4)，過濾并濃縮。得到產(chǎn)生的酸(130mg)，為白色泡沫，且將其直接用于下一步。向在氬氣環(huán)境中的粗酸(130mg，0.30mmol)在MeOH(5mL)中的溶液中加入Pd(OH)2(28mg)。用H2凈化該反應(yīng)體系并在氫氣(1atm)環(huán)境中攪拌過夜。將該混合物通過C鹽過濾。濃縮濾液至得到直鏈前體(87mg，78％)，為白色泡沫，將其直接用于下一步。將粗的氨基酸直鏈前體(87mg，0.08mmol)溶于DMF(9mL)并冷卻至0℃。加入HATU(40mg，0.10mmol)，隨后滴加DIEA(46μL，0.26mmol)。將該反應(yīng)混合物在0℃下攪拌1小時且然后攪拌過夜。在真空中濃縮該反應(yīng)混合物，用EtOAc(10mL)稀釋并用10％HCl(10mL)、5％NaHCO3(10mL)和NaCl(10mL，飽和)洗滌，干燥(Na2SO4)，過濾并濃縮。通過柱色譜法純化粗油(硅膠，EtOAc/己烷5/1)而得到被保護(hù)的大環(huán)34(10mg，三步總計15％)，為白色泡沫。Rf0.40(AcOEt/己烷3/7)。[α]D20＝-36.1(c＝1，CH2Cl2)。1H-NMR(500MHz，CDCl3)0.79-1.09(m，18H)，1.09-1.10(s，21H)，1.27(d，J＝6.4Hz，3H)，1.44(s，9H)，1.56-1.70(m，3H)，1.73-1.81(m，1H)，1.99-2.23(m，4H)，2.27(dd，J＝17.0和2.9Hz，1H)，2.42(dd，J＝17.0和3.0Hz，1H)，2.50(s，3H)，2.61(dd，J＝17.1和6.5Hz，1H)，2.98-3.00(m，1H)，3.19-3.23(m，1H)，3.30-3.32(m，1H)，3.42(dd，J＝9.8和4.9Hz，1H)，3.57(dd，J＝10和4.4Hz，1H)，3.60-3.62(m，1H)，3.63-3.64(m，1H)，4.03-4.21(m，1H)，4.32-4.36(m，1H)，4.37-4.45(m，1H)，4.57-4.60(m，1H)，4.60-4.69(m，1H)，4.88-4.92(m，1H)，4.94(d，J＝6.0Hz，1H)，5.80(m，1H)，7.12-7.17(m，2H)，7.28-7.31(m，3H)，7.48-7.51(m，2H)。13C-NMR(125MHz，CDCl3)12.2，12.6，15.1，16.5，17.5，18.0，18.2，18.8，19.6，20.7，21.0，23.5，24.9，27.9，28.1，30.1，31.0，35.1，38.5，39.7，40.9，47.7，48.1，55.5，56.9，59.3，65.9，68.8，69，9，71.8，80.1，81.2，126.9，128.7，129.5，138.1，155.9，168.7，170.9，171.0，172.2。IR(凈)3331，2926，1743，1636，1513，1456。
-Tamandarin B(36)向Boc保護(hù)的大環(huán)34(10mg，0.01mmol)在HPLC EtOAc中的溶液中加入HCl在EtOAc中的溶液。將所得溶液在室溫下攪拌2小時。濃縮該溶液并用CH2Cl2稀釋殘余物且再次濃縮至得到鹽酸鹽35(9mg，定量產(chǎn)率)，為白色固體，將其直接用于下一步。向在0℃下大環(huán)胺鹽(9mg，0.01mmol)和側(cè)鏈(6.1mg，0.015mmol)在CH2Cl2(0.50mL)中的混合物中加入BOP(8.4mg，0.015mmol)和NMM(6μL，0.05mmol)。在0℃下30分鐘后，將該反應(yīng)體系在室溫下攪拌過夜。用NaCl溶液(2mL，飽和)處理該反應(yīng)體系并用EtOAc(2×10mL)提取。用10％HCl(5mL)、5％NaHCO3(5mL)和NaCl(5mL，飽和)洗滌有機(jī)層，干燥(Na2SO4)，過濾并濃縮。通過HPLC純化粗油(8mg，61％)。
實施例3Leu5Tamandarin B的嘗試合成tamandarin B的亮氨酸類似物(Leu5Tamandarin B)的嘗試合成為如下方案中所示。

使用同樣已知的合成順序以Cbz-L-Leu(37)而非Cbz-L-Phe或Cbz-L-Tyr為原料，由L-亮氨酸制備由Leu3、Pro4、Leu5和Thr6組成的四肽單位(化合物41)(方案9)。
使用氫和氫氧化鈀使化合物41脫保護(hù)而得到胺42。在與上述使用，例如用于制備化合物33相似的條件下使化合物42與化合物18(作為異構(gòu)體混合物使用)反應(yīng)。該反應(yīng)產(chǎn)生化合物43。在上述所示，例如用于制備化合物34的條件下嘗試環(huán)化化合物43。然而，在這些條件下的環(huán)化反應(yīng)并不成功。
實施例4Ser6Tamandarin B的合成如方案12-16中所示合成tamandarin B的絲氨酸類似物(Ser6Tamandarin B)。
方案12 方案13 方案14
方案15 方案16
D-N-Boc-纈氨酸五氟苯基(PFP)酯(44)將D-N-Boc-纈氨酸(5g，23mmol)溶于CH2Cl2(60mL)并冷卻至0℃，隨后添加吡啶(1.7mL，25.3mmol，)和PFP-三氟乙酸酯(4.08mL，27.6mmol)。將該溶液在室溫下攪拌1小時并用NH4Cl(50mL，飽和)猝滅。用5％HCl(100mL)、NaHCO3(100mL，飽和)洗滌有機(jī)層，干燥(Na2SO4)，過濾并蒸發(fā)溶劑。得到產(chǎn)生的PFP酯44，為無色油狀物(8.6g，98％)并直接用于下一步。1H-NMR(500MHz，CDCl3)1,03(d，J＝6.7Hz，3H)，1,09(d，J＝6.7Hz，3H)，1.47(s，9H)，2,30-2.38(m，1H)，4.57-4.58(m，1H)，5.01-5.02(m，1H)。
(4R)-4-叔丁氧羰基氨基-5-甲基-3-氧代己酸甲酯(45)向冷卻至-78℃的PFP酯44(7g，18.3mmol)在無水THF(30mL)中的溶液中加入乙酸甲酯的烯醇鋰溶液。通過在-78℃下向LDA溶液(在50mL無水THF中65.0mmol)添加乙酸甲酯(5.4mL，65.0mmol)并將所得溶液攪拌1小時制備該烯醇鹽。將該反應(yīng)混合物在相同溫度下攪拌45分鐘以上并在-78℃下用NH4Cl(50mL)猝滅。在溫至室溫后，用EtOAc(150mL)稀釋該溶液。分離有機(jī)層并用10％HCl(100mL)、5％NaHCO3(100mL)和NaCl(100mL，飽和)洗滌，干燥(Na2SO4)，過濾并濃縮。通過柱色譜法純化粗油(硅膠，EtOAc/己烷1/9)而得到甲酯45(3.0g，61％)，為無色油狀物。Rf0.14(EtOAc/己烷1/9)。[α]D20＝-13.2(c＝0.5，CHCl3)。1H-NMR(500MHz，CDCl3)0.81(d，J＝6.8Hz)和0.83-0.92(m，2H)，0.99(d，J＝6.8Hz，2H)，1.44(s，9H)，2.20-2.25(m，1H)，3.53(m，2H)，3.71(s，3H).4.29(m，1H)，5.09(m，1H)。13C-NMR(125MHz，CDCl3)16.6，19.7，28.2，29.5，46.8，52.3，64.3，80.08，155.9，167.1，202.0。IR(凈)3442.3，2966.2，1750.0，1715.9，1515.0，1508.3，1366.9，1165.6，1014.0。HRMS m/z C13H24NO5(M+H)計算值274.1654；測定值274.1654。
(3S，4R)-4-叔丁氧羰基氨基-3-羥基-5-甲基己酸甲酯(46)向冷卻至-78℃的甲酯45(2.4g，8.70mmol)在HPLC MeOH(100mL)中的溶液中分批加入硼氫化鉀(1.4g，26.1mmol)。將該反應(yīng)混合物在-78℃下攪拌10分鐘、溫至-20℃下30分鐘且然后溫至0℃下10分鐘。用乙酸使反應(yīng)猝滅至pH＝7并用CH2Cl2(3×50mL)提取。用NaHCO3(50mL，飽和)、NaCl(50mL，飽和)洗滌有機(jī)層，干燥(Na2SO4)，過濾并蒸發(fā)。得到醇46，為無色油狀物(2.2g，92％)并將其直接用于下一步。1H-NMR(500MHz，CDCl3)0.88(d，J＝6.8Hz，3H)，0.93(d，J＝6.8Hz，3H)，1.44(s，9H)，2.03-2.17(m，1H)，2.41-2.52(m，1H)，2.58-2.63(m，1H)，3.50-3.55(m，1H)，3.71(s，3H)，3.89-3.93(m，1H)，3.38-3.41(m，1H)。
(3S，4R)-4-叔丁氧羰基氨基-5-甲基-3-(叔丁基二甲基-硅烷氧基)己酸甲酯(47)向在氬氣環(huán)境中冷卻至0℃的粗醇46(2.2g，7.9mmol)在DMF(12mL)中的溶液中加入咪唑(1.61mL，23.7mmol)和叔丁基二甲基甲硅烷基氯(3.57mL，23.7mmol)。將該反應(yīng)混合物在0℃下攪拌30分鐘且然后在室溫下攪拌18小時并用Et2O(50mL)稀釋。分離有機(jī)層并用10％HCl(50mL)、NaHCO3(50mL，飽和)和NaCl(50mL，飽和)洗滌，干燥(Na2SO4)，過濾并濃縮。通過柱色譜法純化粗油(硅膠，乙酸乙酯/己烷1/9)而得到47(2.59g，98％)，為無色油狀物。Rf0.31(EtOAc/己烷1/9)。[α]D20＝+5.30(c＝1，CH2Cl2)。1H-NMR(500MHz，CDCl3)0.07(s，6H)，0.84-0.91(m，15H)，1.42(s，9H)，1.98-2.01(m，1H)，2.43(dd，J＝6.0和19Hz，1H)，2.52(dd，J＝5.9和18.5Hz，1H)，3.47-3.48(m，1H)，3.65(s，3H)，4,17-4.19(m，1H)，4,41-4.44(m，1H)。13C-NMR(125MHz，CDCl3)-3.6，16.6，17.60，18.9，25.7，27.8，28.2，39.9，51.5，51.9，59.5，70.19，155.9，172.2。IR(凈)3373.1，2960.7，1717.0，1504.6，1366.1，1173.0，837.0。HRMS m/z C19H39NO5Si(M+Na)計算值390.2675；測定值390.2676。
(3S，4R)-4-叔丁氧羰基氨基-5-甲基-3-(叔丁基二甲基-硅烷氧基)己酸(48)向冷卻至0℃的47(500mg，1.28mmol)在25mL THF/MeOH(1∶1)中的溶液中加入1N NaOH溶液(25mL)。將該反應(yīng)體系在0℃下攪拌2小時且然后在室溫下攪拌過夜。濃縮該反應(yīng)混合物并用H2O(20mL)稀釋，冷卻至0℃，用1N KHSO4溶液酸化至pH 2并用EtOAc(3×20mL)提取。用NaCl(50mL，飽和)洗滌合并的有機(jī)層，干燥(Na2SO4)，過濾并蒸發(fā)。得到產(chǎn)生的酸48，為無色油狀物(1.76g，86％)并將其直接用于下一步。1H-NMR(500MHz，CDCl3)0.06(s，6H)，0.84-0.95(m，15H)，1.43(s，9H)，2.01-2.11(m，1H)，2.53(m，1H)，2.64(m，1H)，3.53-3.58(m，1H)，4.10-4.14(m，1H)，3.65(s，3H)，4.17-4.19(m，1H)，4.51-4.54和6.29-6.31(m，1H)。
N-α-羥基戊?；?N-亮氨酰-脯氨酸芐酯(51)向冷卻至0℃的鹽酸鹽49(1.56mg，4.23mmol)在CH2Cl2(2mL)中的溶液中加入NMM(522μL，4.65mmol)。15分鐘后，分批加入α-羥基戊酸(50)(500mg，4.23mmol)和DCC(959mg，4.65mmol)。將該反應(yīng)混合物在室溫下攪拌14小時，用CH2Cl2(25mL)稀釋并用HCl 1N(20mL)、NaHCO3(20mL，飽和)和鹽水(20mL)洗滌，干燥(Na2SO4)，過濾并濃縮。通過柱色譜法純化粗油(硅膠，EtOAc/己烷1/1-3/1梯度)而得到51(1.47g，84％)，為白色固體。Rf0.46(EtOAc/己烷1/2)。1H-NMR(500MHz，CDCl3)0.81(d，J＝7.0Hz，3H)，0.92(m，6H)，0.97(d，J＝7.0Hz，3H)，1.42(m，1H)，1.63(m，2H)，2.00(m，3H)，2.19(m，2H)，3.60(m，1H)，3,85(m，1H)，3.88(d，J＝4.8Hz，1H)，4.66(m，1H)，4.80(m，1H)，5.06(d，J＝12.3Hz，1H)，5.14(d，J＝12.3Hz，3H)，7.32(m，5H)，7.41(d，8.4，1H)。13C-NMR(125MHz，CDCl3)15.3，19.1，21.3，23.1，24.4，24.7，28.8，31.3，40.5，46.8，48.2，58.2，66.7，75.8，127.9，128.1，128.3，135.3，117.4，117.9，173.9。
(3S，4R)-4-叔丁氧羰基氨基-5-甲基-3-(叔丁基二甲基-硅烷氧基)己酸N-α-羥基戊酰基-N-亮氨酰-O-芐基-脯氨酰酯(52)向冷卻至-5℃的醇51(400mg，0.96mmol)在CH2Cl2(8mL)中的溶液中分批加入DMAP(35mg，0.28mmol)，酸(425mg，1.15mmol)和DCC(247mg，1.15mmol)。將該反應(yīng)混合物在-5℃下攪拌7小時，過濾并蒸發(fā)。將殘余物溶于CH3CN(10mL)，再次過濾并蒸發(fā)。將粗油溶于EtOAc(20mL)并用10％KHSO4(15mL)、NaHCO3(15mL，飽和)和NaCl(15mL，飽和)洗滌。干燥(Na2SO4)有機(jī)層并蒸發(fā)溶劑。通過柱色譜法純化粗油(硅膠，EtOAc/己烷1/4梯度)而得到52(110mg，60％)。Rf0.47(EtOAc/己烷1∶1)。[α]D20＝-69.0(c＝1，CH2Cl2)。1H-NMR(500MHz，CDCl3)旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體0.07(s，6H)，0.75-1.10(m，27H)，1.49(s，9H)，1.50-1.71(m，2H)，1.75-2.20(m，3H)，2.12-2.21(m，2H)，2.41-2.63(m，2H)，3.12-3.15(m，1H)，3.41-3.49(m，2H)，3.53-3.62(m，2H)，3.68-3.72(m，1H)，3.81-3.88(m，1H)，4.05-4.10(m，1H)，4.21(d，J＝8.0Hz，1H)，4.49-4.51(m，1H)，4.60-4.69(m，2H)，4.77(d，J＝10.0Hz，1H)，4.90-5.01(m，2H)，5.11-5.22(m，2H)，6.88(d，J＝9.0Hz，1H)，7.22-7.33(m，5H)，8.33(d，J＝6.3Hz，1H)。13C-NMR(125MHz，CDCl3)-5.1，-4.8，14.7，17.8，18.0，18.9，20.4，21.2，23.2，24.6，24.7，24.9，25.4，25.7，28.4，28.8，30.2，33.9，38.9，43.0，48.4，58.8，63.2，66.8，71.5，79.3，82.6，128.1，128.3，128.5，135.5，157.4，170.0，170.9，171.2，171.8，172.2。IR(凈)3265.8，2937.7，2903.6，2363.0，1740.4，1692.3，1643.4，1451.6，1386.8，1365.4，1167.2，1091.1，837.3。HRMS m/z C41H69N3O9SiNa(M+Na)計算值796.4700；測定值798.4735。
L-N-Boc-絲氨酸苯甲酰甲基酯(55)向冷卻至0℃的攪拌的L-N-Boc-絲氨酸(2g，9.7mmol)在EtOAc(20mL)中的溶液中加入Et3N(1.39mL，9.7mmol)和溴乙酰苯(1.9g，9.7mmol)。將該反應(yīng)混合物在室溫下攪拌2天，用EtOAc(50mL)稀釋并用10％HCl(20mL)、5％NaHCO3(20mL)和飽和NaCl(20mL)溶液洗滌。干燥(Na2SO4)有機(jī)層并蒸發(fā)溶劑。將殘余物與乙醚一起研磨并過濾而得到55(3.4g，98％)，為黃色泡沫。Rf0.50(EtOAc/己烷1∶1)。[α]D20＝-19.1(c＝1，CHCl3)。1H-NMR(500MHz，CDCl3)1.43和1.46(s，3H)，3.70-3.73(m，1H)，3.84-3.88(m，1H)，4.22-4.24(m，1H)，4.51-4.52(m，1H)，5.28-5.36(m，1H)，5.61-5.66(m，2H)，7.49(t，J＝6.5Hz，2H)，7.57(t，J＝6.3Hz，1H)，7.87(dd，J＝1.9和6.3Hz，2H)。13C-NMR(125MHz，CDCl3)27.2，28.1，56.0，63.7，66.3，79.8，85.0，127.6，128.8，133.3，134.3，146.6，155.5，170.1，192.8。IR(凈)3439.8，2978.7，2935.6，1807.8，1756.6，1704.8，1506.6，1369.7，1162.9。
O-(L-N-Cbz-N，O-二甲基酪氨酰)-L-N-Boc-絲氨酸苯甲酰甲基酯(56)向冷卻至0℃的L-N-Boc-絲氨酸苯甲酰甲基酯55(1.42g，3.96mmol)在CH2Cl2(20mL)中的溶液中加入DMAP(145mg，1.18mmol)和L-N-Cbz-N，O-二甲基酪氨酸(21)(1.36g，3.96mmol)。在0℃下攪拌10分鐘后，加入DCC(897mg，4.35mmol)。將該反應(yīng)混合物在室溫下攪拌過夜。過濾該化合物并將濾液濃縮至干。將殘余物溶于CH3CN(25mL)，再次過濾并蒸發(fā)。將粗油溶于EtOAc(50mL)并用10％KHSO4(30mL)、NaHCO3(50mL，飽和)和NaCl(50mL，飽和)洗滌。干燥有機(jī)層(Na2SO4)并蒸發(fā)溶劑。通過柱色譜法純化粗油(硅膠，EtOAc/己烷1/4-1/2梯度)而得到二肽56(1.69g，63％)，為黃白色固體。Rf0.12(EtOAc/己烷1∶4)。Mp＝64-65℃。[α]D20＝-12.0(c＝1，CH2Cl2)。1H-NMR(500MHz，CDCl3)1.49(s，3H)，2.85和3.01(s，3H)，3.04-3.11(m，1H)，3.27-3.37(m，1H)，3.80(s，3H)，4.53-4.67(m，1H)，4.70(dd，J＝3.9和11.7Hz，1H)，4.81-4.82(m，1H)，4.94-5.01(m，1H)，5.08-5.14(m，2H)，5.30-5.35(m，1H)，5.48-5.52(m，1H)，6.76-6.83(m，2H)，7.05-7.24(m，2H)，7.27-7.34(m，5H)，7.51(t，J＝7.3Hz，2H)，7.64(t，J＝7.2Hz，1H)，7.89(d，J＝7.5Hz，2H)。13C-NMR(125MHz，CDCl3)28.3，32.2，33.8，34.2，52.9，55.1，60.9，64.9，67.2，67.3，113.9，127.4，127.7，127.8，127.9，128.3，128.9，129.1，129.8，133.9，136.6，158.3，170.4，170.6，190.8。IR(凈)3404.1，2932.5，1703.2，1513.7，1453.1，1402.5，1248.0，1162.6，1033.0，754.8。
O-(L-N-Cbz-N，O-二甲基酪氨酰)-L-N-Boc-絲氨酸(57)向冷卻至0℃的絲氨酸苯甲酰甲基酯56(500mg，0.73mmol)在AcOH水溶液(6mL，90％)中的溶液中加入Zn粉(381mg，5.48mmol)。將所得混合物在0℃下攪拌3小時，用Celite過濾并用EtOAc(25mL)洗滌Celite。用10％KHSO4(20mL)、NaHCO3(20mL，飽和)和NaCl(20mL，飽和)洗滌濾液。干燥有機(jī)層(Na2SO4)并蒸發(fā)溶劑。通過柱色譜法純化粗油(硅膠，MeOH/CH2Cl21/9)而得到酸57(290mg，75％)，為白色固體。Rf0.35(MeOH/CH2Cl21/9)。mp＝71-72℃。[α]D20＝-2.5(c＝1，CH2Cl2)。1H-NMR(500MHz，CDCl3)1.43(m，9H)，2.78(s，3H)，2.81-3.01(m，1H)，3.15-3.26(m，1H)，3.79(s，3H)，4.31-4.45(m，2H)，3.65-3.70(m，1H)，4.89-5.05(m，2H)，5.55-5.67(m，1H)，6.71-6.80和6.93-7.05(m，2H)，7.26-7.33(m，5H)。13C-NMR(125MHz，CDCl3)28.3，33.4，33.7，53.1，55.1，60.8，67.5，68.0，80.0，113.9，127.4，127.8，128.3，128.8，129.6，129.7，136.5，137.0，158.3，170.1，174.3。IR(凈)3354.1，2933.3，1706.0，1513.7，1247.5，1163.3，1032。HRMS m/zC27H34N2O9Na(M+Na)計算值553.2162(M+Na)；測定值553.2176。
-Tamandarin B被保護(hù)的直鏈前體(59)向冷卻至0℃的52(117mg，0.18mmol)在二噁烷(5mL)中的溶液中加入HCl在二噁烷(5mL)中的溶液。將所得溶液在室溫下攪拌2小時。濃縮該溶液并用CH2Cl2稀釋殘余物且再次濃縮至得到鹽酸鹽58(90mg，定量產(chǎn)率)，為白色固體，將其直接用于下一步。向冷卻至-5℃的鹽酸鹽58(90mg，0.15mmol)、HBTU(61mg，0.16mmol)、HOBt(20mg，0.15mmol)和Tyr-ser酸57(80mg，0.15mmol)的混合物中加入CH2Cl2/DMF 2/1(3mL)的溶液，將該反應(yīng)體系攪拌5分鐘并加入DIPEA(106μL，0.60mmol)。將所得溶液在-5℃下攪拌過夜，用tBuOMe(10mL)稀釋，用10％KHSO4(10mL)、NaHCO3(10mL，飽和)和NaCl(10mL，飽和)洗滌，干燥(Na2SO4)，過濾并濃縮。通過柱色譜法純化粗油(硅膠，EtOAc/己烷1/1梯度)而得到59(105mg，65％)。Rf0.34(AcOEt/己烷1∶1)。[α]D20＝-59.1(c＝1，CH2Cl2)。1H-NMR(500MHz，CDCl3)0.88-1.00(m，18H)，1.47(s，9H)，1.49-1.52(m，4H)，2.03-2.06(m，5H)，2.22-2.25(m，3H)，2.55-2.60(m，1H)，2.70-2.84(m，3H)，2.98-3.03(m，1H)，3.27(dt，J＝5.8和20.0Hz，1H)，3.80(s，3H)，4.12-4.15(m，1H)，4.50-4.53(m，3H)，4.53-4.59(m，2H)，5.00-5.23(m，6H)，5.80-5.83(m，1H)，6.78-6.80(m，3H)，7.06-7.08(m，3H)，7.29-7.38(m，11H)。13C-NMR(125MHz，CDCl3)14.5，17.3，18.6，20.2，21.0，23.3，24.6，24.8，27.8，28.2，28.8，30.3，32.5，33.8，38.8，46.8，48.4，55.1，58.9，60.3，60.5，61.0，64.3.66.9，67.2，68.5，78.1，78.5，79.3，113.8，127.5，127.9，128.1，128.3，128.5，128.8，129.7，135.3，136.5，156.7，157.5，158.2，167.3，168.0，169.6，170.7，171.3。IR(凈)3315.5，2968.3，1744.0，1670.0，1637.7，1513.9，1447.3，1170.6。HRMS m/z C57H79N5O15Na計算值1096.5470(M+Na)；測定值1096.5498。
-Tamandarin B大環(huán)(61)向在氬氣環(huán)境中的被保護(hù)的直鏈前體59(206mg，0.19mmol)溶于MeOH(15mL)中的溶液中加入Pd(OH)2(81mg)。用H2凈化該反應(yīng)體系并在氫氣(1atm)環(huán)境中攪拌過夜。將該混合物通過Celite過濾。濃縮濾液至得到游離直鏈前體60(150mg，91％)，為黃色油狀物，不經(jīng)純化將其用于下一步。將粗氨基酸直鏈前體60(150mg，0.17mmol)溶于CH3CN(30mL)并冷卻至0℃。加入HATU(160mg，0.42mmol)，隨后滴加NNM(38μL，0.34mmol)。將該反應(yīng)混合物在0℃下攪拌1小時且然后攪拌過夜。在真空中濃縮該反應(yīng)混合物，用EtOAc(15mL)稀釋，用10％KHSO4(10mL)、5％NaHCO3(10mL)和NaCl(10mL，飽和)洗滌，干燥(Na2SO4)，過濾并濃縮。通過柱色譜法純化粗油(硅膠，EtOAc/己烷2/1)而得到被保護(hù)的大環(huán)61(130mg，89％)，為白色泡沫。Rf0.23(AcOEt/己烷1/2)。[α]D20＝-56.1(c＝1，CHCl3)。1H-NMR(500MHz，CDCl3)0.89-1.05(m，18H)，1.45(m，9H)，1.62-1.74(m，1H)，2.00-2.20(m，4H)，2.55(m，3H)，2.81(dd，1H)，2.99(dd，1H)，3.15(dd，1H)，3.36(dd，1H)，3.53(m，1H)，3.67(m，1H)，3.73(m，1H)，3.80(s，3H)，3，91(m，1H)，4.10(m，1H)，4.19(m，1H)，4.42(td，J＝和，1H)，4.48(m，1H)，4.51(dd，J＝和，1H)，4.59(m，1H)，4，91(m，1H)，5.06(m，2H)，6.84(d，2H)，7.01(d，2H)，7.77(d，2H)，8.55(d，2H)。13C-NMR(125MHz，CDCl3)17.4，17.8，18.7，20.2，20.6，21.4，23.5，24.9，25.1，26.0，28.0，28.1，28.3，28.6，28.8，30.2，30.7，34.1，38.6，46.1，47.0，48.7，48.9，52.4，55.3，57.2，62.9，63.7，65.6，68.7，69.3，78.7，80.5，114.1，129.8，130.3，155.6，158.6，169.1，170.8，171.1，171.2。IR(凈)3314.2，2924.3，2359.9，1742.6，1630.7。HRMS m/z C57H79N5O15Na計算值1096.5470(M+Na)；測定值1096.5498。
-Tamandarin B(62)向Boc保護(hù)的大環(huán)61(20mg，0.024mmol)在HPLC二噁烷(10mL)中的溶液中加入HCl在二噁烷(10mL)中的溶液。將所得溶液在室溫下攪拌2小時。濃縮該溶液并用CH2Cl2稀釋殘余物且再次濃縮至得到鹽酸鹽(18mg，定量產(chǎn)率)，為白色固體，將其直接用于下一步。向冷卻至0℃的大環(huán)胺鹽(18mg，0.023mmol)和側(cè)鏈(11mg，0.035mmol)在CH2Cl2(3mL)中的混合物中加入BOP(15mg，0.035mmol)和NMM(10μL，0.092mmol)。在0℃下30分鐘后，將該混合物在室溫下攪拌過夜。用飽和NaCl溶液(2mL)處理該反應(yīng)體系并用EtOAc(2×10ml)提取。用10％HCl(5mL)、NaHCO3(5mL)和NaCl(5mL，飽和)洗滌，干燥(Na2SO4)，過濾并濃縮。通過HPLC純化粗油(24mg)。1H-NMR(300MHz，CDCl3)δ0.82-0.96(m，24H)，1.09-1.28(m，14H)，1.39-1.43(m，3H)，1.64(m，2H)，1.88-1.98(m，2H)，2.10-2.15(m，2H)，2.58(s，3H)，2.90-2.95(m，1H)，3.05(s，3H)，3.09-3.12(m，1H)，3.35-3.43(m，1H)，3.43-3.82(m，5H)，3.79(s，3H)，3.98-4.05(m，1H)，4.12-4.17(m，1H)，4.45-4.50(m，1H)，4.62-4.66(m，1H)，4.67-4.70(m，2H)，5.05(d，J＝5.3，1H)，5.29-5.32(m，2H)，6.80(d，J＝8.7Hz，2H)，7.02(d，J＝8.6Hz，2H)，7.65(d，J＝6.7Hz，1H)，8.09(d，J＝9.5Hz，1H)，8.45(d，J＝8.9Hz，1H)。HRMS m/zC52H81N7O14Na(M+Na)計算值1050.5739；測定值1050.5731。
實施例5Ser6Pyr Tamandarin B的合成如方案17中所示制備tamandarin(Ser6Pyr Tamandarin B)的絲氨酸-丙酮酸類似物。
方案17 使用在二噁烷中的HCl(氣體)除去Ser6tamandarin B大環(huán)中的N-Boc基團(tuán)。隨后使用在DMF/DCM中的HATU和NMM與D-Cbz-N-Me-Leu偶聯(lián)得到縮酚酸肽63，產(chǎn)率50％。使用如本文所述的條件氫解CBz基團(tuán)并與脯氨酰-丙酮酰片段偶聯(lián)而得到所需的類似物64。
實施例6Ala4Tamandarin B的合成如方案18-20中所示合成tamandarin B(Ala4Tamandarin B)的丙氨酸類似物。
方案18
方案19
方案20 N-Boc-L-亮氨酰-N-L-丙氨酸芐酯(67)向N-Boc-L-丙氨酸芐酯(66)(660mg，2.36mmol)在HPLC EtOAc(10mL)中的溶液中加入HCl在EtOAc(5mL)中的飽和溶液。將所得溶液在室溫下攪拌2小時。濃縮該溶液并用CH2Cl2稀釋殘余物且再次濃縮至得到鹽酸鹽(定量產(chǎn)率)，為白色固體，將其直接用于下一步。向冷卻至0℃的鹽酸鹽(500mg，2.78mmol)在CH2Cl2(6mL)中的溶液中加入NMM(423μl，4.17mmol)。15分鐘后，加入N-Boc-L-亮氨酸一水合物(693mg，2.78mmol)、HOBt(425mg，2.78mmol)和DCC(630mg，3.05mmol)。將該反應(yīng)混合物在室溫下攪拌14小時并用CH2Cl2稀釋(25mL)且過濾。用HCl 1N(20mL)、NaHCO3(20mL，飽和)和鹽水(20mL)洗滌所得溶液，干燥(Na2SO4)，過濾并濃縮。通過柱色譜法純化粗油(硅膠，EtOAc/己烷1/6梯度)而得到67(650mg，78％)。1H-NMR(500MHz，CDCl3)0.99-1.01(m，6H)，1.43(d，J＝6.8Hz，3H)，1.44(s，9H)，1.45-1.75(m，3H)，4.15-4.25(m，1H)，4.55-4.66(m，1H)，5.00-5.25(m，2H)，5.45-5.53(m，1H)，7.29-1.34(m，5H)。13C-NMR(125MHz，CDCl3)21.5，24.1，28.05，41.2，47.7，52.5，66.6，79.3，82.2，127.8，128.1，128.5，135.2，155.6，172.2，172.6。
N-羥基戊酰-N-亮氨酰-丙氨酸芐酯(69)向67(625mg)在HPLCAcOEt(10mL)中的溶液中加入HCl在AcOEt(5mL)中的飽和溶液。將所得溶液在室溫下攪拌2小時。濃縮該溶液并用CH2Cl2稀釋殘余物且再次濃縮至得到鹽酸鹽68(定量產(chǎn)率)，為白色固體，將其直接用于下一步。向冷卻至0℃的鹽酸鹽68(522mg，1.59mmol)在CH2Cl2(6mL)中的溶液中加入NMM(197μl，1.75mmol)。15分鐘后，分批加入α-羥基戊酸(187mg，1.59mmol)和DCC(360mg，1.75mmol)。將該反應(yīng)混合物在室溫下攪拌14小時并用CH2Cl2稀釋(25mL)且用HCl 1N(20mL)、NaHCO3(20mL，飽和)和鹽水(20mL)洗滌所得溶液，干燥(Na2SO4)，過濾并濃縮。通過柱色譜法純化粗油(硅膠，EtOAc/己烷1/1)而得到69(480mg，77％)，為白色固體。Rf0.31(AcOEt/己烷1/1)。[α]D20＝-45.3(c＝1，CH2Cl2)。1H-NMR(500MHz，CDCl3)0.82(d，J＝6.8Hz，3H)，0.86(d，J＝6.1Hz，3H)，0.90(d，J＝6.1Hz，3H)，0.99(d，J＝6.8Hz，3H)，1.36(d，J＝7.1Hz，3H)，1，57-1.63(m，3H)，1.89-1.93(m，1H)，2.02-2.16(m，1H)，3.95-3.97(m，1H)，4.49-4.96(m，2H)，5.13(c，J＝12.3，2H)，7.03(d，J＝7.0Hz，1H)，7.18(d，J＝8.5Hz，1H)，7.30-7.35(m，5H)。13C-NMR(125MHz，CDCl3)15.5，17.8，19.1，21.7，22.8，24.6，31.6，33.8，40.9，51.1，67.1，76.2，128.1，128.3，168.6，135.3，172.1，172.8，173.8。
(3S，4R)-4-叔丁氧羰基氨基-5-甲基-3-(叔丁基-二甲基硅烷氧基)己酸N-羥基戊酰-N-亮氨酰-O-芐基丙氨酸酯(70)向冷卻至-5℃的肽69(200mg，0.51mmol)在CH2Cl2(4mL)中的溶液中分批加入DMAP(18.4mg，0.15mmol)、酸48(229mg，0.61mmol)和DCC(157mg，0.76mmol)。將該反應(yīng)混合物在-5℃下攪拌7小時，過濾并蒸發(fā)。將殘余物溶于CH3CN(7mL)，再次過濾并蒸發(fā)。將粗油溶于EtOAc(10mL)并用10％KHSO4(10mL)、NaHCO3(10mL，飽和)和NaCl(10mL，飽和)洗滌。干燥有機(jī)層(Na2SO4)并蒸發(fā)溶劑。通過柱色譜法純化粗油(硅膠，EtOAc/己烷1/4梯度)而得到70(340mg，89％)，為白色泡沫。Rf0.72(AcOEt/己烷1∶1)。[α]D20＝-50.4(c＝1，CH2Cl2)。1H-NMR(500MHz，CDCl3)旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體混合物0.05(s，6H)，0.77-1.04(m，27H)，1.30和1.39(d，J＝6.7Hz，3H)，1.42和1.52(s，9H)，1.30-1.70(m，5H)，2.56-2,70(m，2H)，3.19-3.22(m，1H)，3.41-3.47(m，1H)，3.83-3.85(m，1H)，3.99-4.03(m，1H)，4.30-4.32(m，2H)，4.35-4.38(m，1H)，4.48-4.53(m，1H)，4.67-4.70(m，1H)，4.73-4.75(m，1H)，4.82-4.85(m，1H)，4.99-5.13(m，2H)，5.15-5.21(m，2H)，6.33(d，J＝7.2Hz，1H)，7.18-7.30(m，5H)，8.39(d，J＝8.0Hz，1H)。13C-NMR(125MHz，CDCl3)-5.1，-4.8，14.6，17.2，17.6，17.9，18.6，20.3，21.2，22.8，22.9，24.5，24.6，24.8，25.3，25.6，28.1，28.2，34.8，39.6，48.0，48.3，50.8，50.9，55.5，63.1，66.6，70.1，71.3，78.9，79.5，82.1，127.9，128.0，128.3，135.4，156.1，157.3，169.6，170.0，170.5，170.9，171.5，172.2，172.6，172.9。HRMS m/zC39H67N3O9SiNa(M+Na)計算值772.4544；測定值772.4551。
-Tamandarin B被保護(hù)的直鏈前體(73)向冷卻至0℃的70(80mg，0.10mmol)在二噁烷(2mL)中的溶液中加入HCl在二噁烷(2mL)中的溶液。將所得溶液在室溫下攪拌2小時。濃縮該溶液并用CH2Cl2稀釋殘余物且再次濃縮至得到鹽酸鹽71(61mg，定量產(chǎn)率)，為白色固體，將其直接用于下一步。向冷卻至-5℃的鹽酸鹽(61mg，0.10mmol)、HBTU(41.7mg，0.11mmol)、HOBt(13.5mg，0.10mmol)和Tyr-Thr酸72(54mg，0.10mmol)的混合物中加入CH2Cl2/DMF 2/1(3mL)的溶液，將該反應(yīng)體系攪拌5分鐘并加入DIPEA(71μL，0.40mmol)。將所得溶液在-5℃下攪拌過夜，用tBuOMe(10mL)稀釋，用10％KHSO4(10mL)、NaHCO3(10mL，飽和)和NaCl(10mL，飽和)洗滌，干燥(Na2SO4)，過濾并濃縮。通過柱色譜法純化粗油(硅膠，EtOAc/己烷1/1梯度)而得到73(98mg，86％)。Rf0.38(AcOEt/己烷1∶1)。[α]D20＝-34.4(c＝1，CH2Cl2)。1H-NMR(500MHz，CDCl3)0.88-1.02(m，18H)，1.19(d，J＝6.9Hz，3H)，1.26(d，J＝6.9Hz，3H)，1.48(s，9H)，1.55-1.62(m，4H)，1.87-1.95(m，2H)，2.22-2.45(m，2H)，2.55-2.70(m，3H)，2.84(s，3H)，2.97-3.05(m，1H)，3.11-3.19(m，1H)，3.81(s，3H)，4.12-4.35(m，2H)，4.41-4.48(m，1H)，4.55-4.58(m，1H)，4.63-4.66(m，1H)，5.00-5.20(m，6H)，5.30-5.33(m，1H)，5.62(d，J＝7.3Hz，1H)，6.77(d，J＝8.3Hz，2H)，6.98(m，1H)，7.06(d，J＝7.3Hz，1H)，7.19(m，1H)，7.29-7.42(m，10H)，7.60-7.66(m，1H)。13C-NMR(125MHz，CDCl3)16.2，16.9，17.6，18.7，20.1，23.1，24.5，24.8，25.5，26.9，28.1，28.2，30.2，32.3，33.8，34.0，37.9，39.8，48.2，51.1，55.2，57.5，60.6，61.1，66.9，67.5，69.1，70.0，78.1，80.3，113.9，127.5，128.0，128.3，128.4，128.5，129.8，1315.3，136.2，156.9，158.4，170.1，170.9，171.2，171.9，172.4。IR(凈)3297.6，2962.0，1744.0，1658.8，1514.2，1166.6。HRMS m/z C57H79N5O15Na計算值1096.5470(M+Na)；測定值1096.5498。
-Tamandarin B大環(huán)(74)向在氬氣環(huán)境中的被保護(hù)的直鏈前體73(102mg，0.09mmol)溶于MeOH(88mL)中的溶液中加入Pd(OH)2(44mg)。用H2凈化該反應(yīng)體系并在氫氣(1atm)環(huán)境中攪拌過夜。將該混合物通過Celite過濾并濃縮濾液至得到游離直鏈前體14(77mg，96％)，為黃色油狀物。將粗氨基酸直鏈前體(77mg，0.91mmol)溶于CH3CN(20mL)并冷卻至0℃。加入HATU(815mg，0.22mmol)，隨后滴加NNM(20μL，1.82mmol)。將該反應(yīng)混合物在0℃下攪拌1小時且然后攪拌過夜。在真空中濃縮該反應(yīng)混合物，用EtOAc(15mL)稀釋，用10％KHSO4(15mL)、5％NaHCO3(15mL)和NaCl(15mL，飽和)洗滌，干燥(Na2SO4)，過濾并濃縮。通過柱色譜法純化粗油(硅膠，EtOAc/己烷2/1)而得到被保護(hù)的大環(huán)74(45mg，60％)，為白色泡沫。Rf0.24(AcOEt/己烷1/2)。[α]D20＝-33.09(c＝1，CHCl3)。1H-NMR(500MHz，CDCl3)0.92-1.04(m，18H)，1.16(d，J＝6.8Hz，3H)，1.17-1.30(m，3H)，1.49(s，9H)，1.51-1.61(m，1H)，1.73-1.75(m，1H)，1.83-1.86(m，1H)，1.93-1.97(m，1H)，2.30-2.40(m，1H)，2.57-2.39(m，1H)，3.00-3.05(m，1H)，3.08(s，3H)；3.19-3.21(m，1H)，3.49-3.51(m，1H)，3.82(s，3H)，3.98-4.00(m，1H)，5.01-5.06(m，2H)，5.27-5.30(m，1H)，5.56-5.66(m，1H)，6.67-6.69(m，1H)，6.88(d，J＝7.9Hz，2H)，7.00-7.09(m，1H)，7.12(d，2H)。13C-NMR(125MHz，CDCl3)15.1，18.4，18.9，20.9，21.1，23.2，24.0，24.8，24.9，25.5，28.0，28.1，30.1，33.7，34.4，39.01，39.3，45.4，47.1，51.2，55.3，69.3，71.9，79.5，80.6，114.1，114.2，129.9，132.3，156.1，169.01，170.9，171.5，172.3，173.2。HRMS m/z C41H65N5O12Na計算值842.4527(M+Na)；測定值842.4545。
-Tamandarin B(75)向Boc保護(hù)的大環(huán)74(11mg，0.013mmol)在HPLC二噁烷(5mL)中的溶液中加入HCl在二噁烷(5mL)中的溶液。將所得溶液在室溫下攪拌4小時。濃縮該溶液并用CH2Cl2稀釋殘余物且再次濃縮至得到鹽酸鹽(定量產(chǎn)率)，為白色固體，將其直接用于下一步。向冷卻至0℃的大環(huán)胺鹽(10mg，0.013mmol)和側(cè)鏈(6.2mg，0.019mmol)在CH2Cl2(2mL)中的混合物中加入BOP(8.4mg，0.019mmol)和NMM(6μL，0.052mmol)。在0℃下30分鐘后，將該反應(yīng)體系在室溫下攪拌過夜。用NaCl溶液(5mL，飽和)處理該反應(yīng)體系并用EtOAc(2×10mL)提取。用10％HCl(5mL)、5％NaHCO3(5mL，飽和)和NaCl(10mL，飽和)洗滌有機(jī)層，干燥(Na2SO4)，過濾并濃縮。通過HPLC純化粗油(10mg，77％)。1H-NMR(300MHz，CDCl3)δ0.82-1.46(m，32H)，1.46-2.10(m，12H)，2.16(m，4H)，2.65(m，1H)，2.82-3.01(m，1H)，3.05(s，3H)，3.20(s，3H)，3.49-3.55(m，2H)，3.63-3.92(m，5H)，3.85(s，3H)，4.09(m，1H)，4.32-4.43(m，2H)，4.60-4.65(m，1H)，4.75(t，J＝6.7，1H)，4.88(t，J＝8.0，1H)，5.01(d，J＝5.3，1H)，5.24(s，2H)，6.64-6.66(m，1H)，6.85(d，J＝8.7Hz，2H)，7.14(d，J＝8.8Hz，2H)，7.22-7.23(m，1H)。MS m/z C51H81N7O14計算值1016.2；測定值1016.4(M+H)+。
實施例7L-Me-Ala4Tamandarin B的合成如方案21和22中所示合成tamandarin B的L-甲基丙氨酸類似物(L-Me-Ala4Tamandarin B)。然后使化合物85進(jìn)行如下所述反應(yīng)而形成L-甲基丙氨酸類似物。
方案21
方案22
Boc-L-N-甲基丙氨酸(76)向在0℃下的攪拌的L-Boc-丙氨酸(5g，26.4mmol)在THF(80mL)中的溶液中分批加入KOH細(xì)粉(10.4g，187mol)，隨后添加硫酸氫四丁基銨(0.5g，按重量計10％)。然后在15分鐘內(nèi)滴加硫酸二甲酯(10mL，105mmol)。將反應(yīng)體系再攪拌30分鐘并加入H2O(50mL)。在室溫下攪拌5小時后，加入20％氫氧化銨水溶液(20mL)。用乙醚(100mL)稀釋該反應(yīng)體系，分離水層并用飽和NaHCO3水溶液(2×40mL)提取有機(jī)層。用1M KHSO4將合并的水層酸化至pH 1并用EtOAc(2×200mL)提取。合并有機(jī)層，干燥(Na2SO4)，過濾并濃縮。得到產(chǎn)生的酸76(4.3g，80％)，為黃色油狀物且不經(jīng)純化將其用于下一步。1H-NMR(500MHz，CDCl3)1.43-1.55(m，12H)，2.91(br s，3H)，4.54-4.58(m，1H)，4.89-4.93(m，1H)。
N-Boc-L-N-甲基丙氨酸芐酯(77)向冷卻至0℃的L-Boc-N-甲基丙氨酸76(2.1g，10.3mmol)在THF(10mL)中的溶液中加入Et3N(1.6mL，11.3mmol)和芐基溴(1.3mL，11.3mmol)。將該混合物在室溫下攪拌18小時并在減壓下蒸發(fā)溶劑。蒸發(fā)殘余物，用CH2Cl2(20mL)稀釋并用HCl 1N(15mL)、飽和NaHCO3(15mL)和H2O(15mL)洗滌。合并有機(jī)層，干燥(Na2SO4)，過濾并濃縮。得到產(chǎn)生的酯77(2.25g，95％)，為黃色油狀物且不經(jīng)純化將其用于下一步。1H-NMR(500MHz，CDCl3)1.44-1.54(m，12H)，2.81和2.90(br s，3H)，4.49-4.53(m，1H)，4.83-4.89(m，1H)，5.18(s，2H)，7.27-7.43(m，5H)。
N-Boc-L-亮氨酰-L-N-甲基丙氨酸酸芐酯(79)向L-N-Boc-N-甲基丙氨酸芐酯(77)(320mg，1.09mmol)在HPLC二噁烷(8mL)中的溶液中加入HCl在二噁烷(5mL)中的飽和溶液。將所得溶液在室溫下攪拌2小時。濃縮該溶液并用CH2Cl2稀釋殘余物且再次濃縮至得到鹽酸鹽(定量產(chǎn)率)，為白色固體，將其直接用于下一步。向冷卻至0℃的鹽酸鹽(250mg，1.09mmol)在CH2Cl2(10mL)和DMF(5mL)中的溶液中加入NMM(221μL，2.08mmol)。15分鐘后，加入N-Boc-L-亮氨酸一水合物(246mg，0.99mmol)和HATU(779mg，2.08mmol)。將該混合物在室溫下攪拌14小時并蒸發(fā)CH2Cl2。用乙醚(25mL)稀釋所得殘余物并用HCl 1N(20mL)、飽和NaHCO3(20mL，)和鹽水(20mL)洗滌，干燥(Na2SO4)，過濾并濃縮。不經(jīng)純化將粗油用于下一步。1H-NMR(500MHz，CDCl3)0.91(d，J＝6.7Hz，3H)，0.99(d，J＝6.7Hz，3H)，1.48(m，13H)，1.69-1.78(m，2H)，3.01(s，3H)，4.60-4.71(m，1H)，5.10-5.29(m，3H)，5.35-5.48(m，1H)，7.31-7.42(m，5H)。HRMS m/z C22H34N2O5Na(M+Na)計算值429.2365；測定值429.2385。
N-羥基戊酰-N-L-亮氨酰-N-L-甲基丙氨酸芐酯(81)向二肽79(360mg)在HPLC二噁烷(10mL)中的溶液中加入HCl在二噁烷(6mL)中的飽和溶液。將所得溶液在室溫下攪拌2小時。濃縮該溶液并用CH2Cl2稀釋殘余物且再次濃縮至得到鹽酸鹽80(330mg，定量產(chǎn)率)，為白色固體，將其直接用于下一步。向冷卻至0℃的鹽酸鹽80(303mg，0.88mmol)在CH2Cl2(2mL)中的溶液中加入NMM(1080μL，0.96mmol)。15分鐘后，分批加入羥基戊酸(104mg，0.88mmol)和DCC(200mg，0.96mmol)。將該混合物在室溫下攪拌14小時，用CH2Cl2(20mL)稀釋，用HCl 1N(20mL)、NaHCO3(20mL，飽和)和鹽水(20mL)洗滌，干燥(Na2SO4)，過濾并濃縮。通過柱色譜法純化粗油(硅膠，EtOAc/己烷2/1)而得到81(258mg，72％)，為無色油狀物。Rf0.30(EtOAc/己烷2/1)。[α]D20＝-37.2(c＝1，CH2Cl2)。1H-NMR(500MHz，CDCl3)0.87(d，J＝6.8Hz，3H)，0.89(d，J＝6.1Hz，3H)，0.90(d，J＝6.1Hz，3H)，1.03(d，J＝6.8Hz，3H)，1.42(d，J＝7.3Hz，3H)，1.55-1.66(m，1H)，1.66-.1.76(m，1H)，2.14-2.20(m，1H)，3.02(s，3H)，3.98(d，J＝1Hz，1H)，4.98-5.02(m，1H)，5.17(m，2H)，5.37(c，J＝6.9Hz，2H)，7.29-7.40(m，5H)。13C-NMR(125MHz，CDCl3)14.07，15.5，19.12，21.5，21.6，23.1，23.3，24.6，24.7，25.4，31.0，31.7，33.4，41.3，47.2，52.3，67.0，76.1，128.2，128.4，128.6，135.3，171.3，173.3，173.5。IR(凈)3378.8，2958.9，1740.3，1652.0，1635.5，1558.0，1506.2，1456.2，1196.1，1086.6。HRMS m/z C22H34N2O5Na(M+Na)計算值429.2365；測定值429.2370。
(3S，4R)-4-叔丁氧羰基氨基-5-甲基-3-(叔丁基二甲基-硅烷氧基)己酸N-羥基戊酰-N-L-亮氨酰-N-L-甲基丙氨酸芐酯(82)向冷卻至-5℃的肽81(245mg，0.61mmol)在CH2Cl2(4mL)中的溶液中分批加入DMAP(22.4mg，0.15mmol)、酸48(271mg，0.72mmol)和DCC(157mg，0.18mmol)。將該反應(yīng)混合物在-5℃下攪拌7小時，過濾并蒸發(fā)。將殘余物溶于CH3CN(8mL)，再次過濾并蒸發(fā)。將粗油溶于EtOAc(15mL)并用10％KHSO4(15mL)、NaHCO3(15mL，飽和)和NaCl(15mL，飽和)洗滌。干燥有機(jī)層(Na2SO4)并蒸發(fā)溶劑。通過柱色譜法純化粗油(硅膠，EtOAc/己烷1/4)而得到70(325mg，70％)，為白色泡沫。Rf0.22(AcOEt/己烷4∶1)。[α]D20＝-33.6(c＝1，CH2Cl2)。1H-NMR(500MHz，CDCl3)旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體混合物0.01(s，6H)，0.85-1.00(m，27H)，1.39(d，J＝6.7Hz，3H)，1.44和1.51(s，9H)，1.29-1.40(m，1H)，1.56-1,70(m，2H)，1.89-1.92(m，1H)，2.00-2.09(m，2H)，2.43-2.46(m，1H)，2.66-2.70(m，1H)，2.69-2.70(m，1H)，2.94和3.01(s，3H)，3.43-3.46(m，1H)，3.60-3.65(m，1H)，3.98-4.02(m，4H)，4.09-4.14(m，2H)，4.31(d，J＝7.8Hz，1H)，4.81-4.82(m，1H)，4.99-5.13(m，2H)，5.15-5.21(m，1H)，6.63(d，J＝7.2Hz，1H)，6.74(d，J＝5.2Hz，1H)，7.18-7.30(m，5H)，8.39(d，J＝6.5Hz，1H)。13C-NMR(125MHz，CDCl3)-5.0，-4.5，13.9，14.1，14.7，16.5，17.6，18.1，18.5，18.8，20.4，21.3，21.5，23.2，24.6，24.7，25.7，26.9，27.7，28.4，30.1，30.4，30.7，30.9，39.3，39.9，41.8，42.8，47.0，51.9，52.3，59.4，60.2，63.0，66.7，66.9，70.1，71.4，78.9，79.2，79.4，82.4，128.08，128.2，128.3，128.5，135.4，135.5，156.2，157.3，169.1，169.7，170.8，171.0，171.2，171.6，172.5，173.6。IR(凈)2959.1，1740.5，1694.0，1644.4，1521.2，1471.5，1387.0，1252.7 1166.6，1086.1。HRMS m/z C40H69N3O9SiNa(M+Na)計算值786.4700；測定值786.4707。
-Tamandarin B被保護(hù)的直鏈前體(84)向冷卻至0℃的82(285mg，0.37mmol)在二噁烷(5mL)中的溶液中加入HCl在二噁烷(5mL)中的溶液。將所得溶液在室溫下攪拌2小時。濃縮該溶液并用CH2Cl2稀釋殘余物且再次濃縮至得到鹽酸鹽83(218mg，定量產(chǎn)率)，為白色固體，將其直接用于下一步。向冷卻至-5℃的鹽酸鹽83(218mg，0.37mmol)、HBTU(147.3mg，0.38mmol)、HOBt(50mg，0.37mmol)和Tyr-Thr酸72(201mg，0.37mmol)的混合物中加入CH2Cl2/DMF 2/1(10mL)的溶液，將該反應(yīng)體系攪拌5分鐘并加入DIPEA(264μL，1.48mmol)。將所得溶液在-5℃下攪拌過夜，用t-BuOMe(25mL)稀釋，用10％KHSO4(20mL)、NaHCO3(20mL，飽和)和NaCl(20mL，飽和)洗滌，干燥(Na2SO4)，過濾并濃縮。通過柱色譜法純化粗油(硅膠，EtOAc/己烷1/1梯度)而得到84(280mg，69％)。Rf0.22(AcOEt/己烷1∶1)。[α]D20＝-45.8(c＝1，CH2Cl2)。1H-NMR(500MHz，CDCl3)0.87-1.01(m，18H)，1.00-1.16(m，4H)，1.28(d，J＝6.9Hz，3H)，1.47(s，9H)，1.68-1.69(m，2H)，1.70-1.77(m，1H)，2.07-2.09(m，1H)，2.22-2.25(m，1H)，2.75-2.77(m，1H)，2.85，2.87(m，1H)，2.88(s，3H)，2.98(s，3H)，3.23(dd，J＝7.3和14.3Hz，1H)，3.77(s，3H)，4.10-4.15(m，1H)，4.21-4.28(m，2H)，4.35-4.38(m，1H)，4.60-4.66(m，1H)，5.00-5.12(m，2H)，5.20-5.33(m，4H)，5.25-5.30(m，1H)，5.58(d，J＝7.3Hz，1H)，6.79(d，J＝8.3Hz，2H)，7.02(m，1H)，7.09(d，J＝7.3Hz，1H)，7.20(m，1H)，7.29-7.37(m，10H)。13C-NMR(125MHz，CDCl3)14.4，16.8，17.8，18.6，19.0，20.7，21.7，23.7，25.1，28.5，28.6，30.9，31.3，32.3，34.5，39.0，41.1，41.2，47.6，52.7，55.6，58.1，61.2，67.9，69.2，70.5，71.0，78.6，81.1，114.3，128.05，128.4，128.6，128.8，129.0，130.3，135.7，136.8，156.1，157.3，158.8，169.9，170.4，171.4，171.6，173.7。IR(凈)3318.3，2961.1，2993.3，1741.8，1683.1，1636.1，1514.0，1455.7，1306.1，1247.8，1175.8。HRMS m/zC57H81N5O15Na計算值1098.2756(M+Na)；測定值1098.5657。
-Tamandarin B大環(huán)(85)向在氬氣環(huán)境中的被保護(hù)的直鏈前體84(280mg，0.33mmol)在MeOH(20mL)中的溶液中加入Pd(OH)2(100mg)。用H2凈化該反應(yīng)體系并在氫氣(1atm)環(huán)境中攪拌過夜。將該混合物通過Celite過濾，并濃縮濾液至得到游離直鏈前體(208mg，94％)，為黃色油狀物。將粗氨基酸直鏈前體(208mg，0.24mmol)溶于CH3CN(50mL)并冷卻至0℃。加入HATU(219mg，0.57mmol)，隨后滴加NNM(51μL，0.48mmol)。將該反應(yīng)混合物在0℃下攪拌1小時且然后攪拌過夜。在真空中濃縮該反應(yīng)混合物，用EtOAc(30mL)稀釋，用10％KHSO4(25mL)、5％NaHCO3(25mL)和NaCl(25mL，飽和)洗滌，干燥(Na2SO4)，過濾并濃縮。通過柱色譜法純化粗油(硅膠，EtOAc/己烷2/1)而得到被保護(hù)的大環(huán)85(94mg，48％)，為白色泡沫。Rf0.30(AcOEt/己烷1/2)。[α]D20＝-28.77(c＝1，CHCl3)。1H-NMR(500MHz，CDCl3)0.88-1.00(m，17H)，1.22-1.33(m，3H)，1.17-1.30(m，4H)，1.49(s，9H)，1.48-1.52(m，1H)，1.97-2.05(m，2H)，2.09-2.14(m，1H)，2.30-2.40(m，1H)，2.51(dd，J＝7.0和13.2Hz，1H)，2.59-2.61(m，2H)，2.80和2.91(s，3H)，2.88-2.91(m，1H)，3.09和3.15(s，3H)，3.10-3.15(m，1H)，3.28-3.33(m，1H)，3.49-3.51(m，1H)，3.75和3.78(s，3H)，4.12-4.13(m，1H)，4.22-4.23(m，1H)，4.51-4.52(m，1H)，4.92-4.93(m，1H)，4.94(d，J＝5.8Hz，1H)，4.98-5.05(m，2H)，5.19-5.21(m，1H)，5.25-5.27(m，1H)，6.80(t，J＝6.5Hz，2H)，7.03(dd，J＝8.5和11.7Hz，2H)，7.40(d，J＝8.6Hz，1H)，7.71(d，J＝9.2Hz，1H)，7.89(d，J＝8.1Hz，1H)。13C-NMR(125MHz，CDCl3)14.1，14.8，15.5，18.3，18.8，19.0，19.4，20.6，23.8，23.9，25.0，25.3，28.4，30.1，30.2，30.8，30.9，33.9，34.8，38.9，39.3，47.7，48.2，51.3，55.6，56.5，62.0，66.6，69.3，69.5，70.3，71.5，79.3，80.9，81.0，114.4，114.7，128.4，129.7，130.2，130.4，130.8，156.2，156.4，159.0，159.2，169.1，170.0，170.2，171.4，171.8，172.0，172.9，174.1，174.3。IR(凈)3334.2，2960.5，1745.1，1658.6，1961.2，1514.1，1248.5，1164.1，1082.6。HRMS m/z C42H67N5O12Na計算值856.4683(M+Na)；測定值856.4617。
-Tamandarin B(120)向Boc保護(hù)的大環(huán)85(15mg，0.018mmol)在HPLC二噁烷(5mL)中的溶液中加入HCl在二噁烷(5mL)中的溶液。將所得溶液在室溫下攪拌4小時。濃縮該溶液并用CH2Cl2稀釋殘余物且再次濃縮至得到鹽酸鹽(14mg，定量產(chǎn)率)，為白色固體，將其直接用于下一步。向在0℃下的大環(huán)胺鹽(14mg，0.018mmol)和側(cè)鏈(10mg，0.031mmol)在CH2Cl2(3mL)中的混合物中加入BOP(14mg，0.031mmol)和NMM(9μL，0.72mmol)。在0℃下30分鐘后，將該混合物在室溫下攪拌過夜。用NaCl溶液(2mL，飽和)處理該反應(yīng)體系并用EtOAc(3×10mL)提取。用10％HCl(10mL)、5％NaHCO3(10mL)和NaCl(10mL，飽和)洗滌有機(jī)層，干燥(Na2SO4)，過濾并濃縮。通過HPLC純化粗油(13mg)。
實施例8L-3-(2-萘基)丙氨酸5Tamandarin B的合成如方案23-26中所示和下述制備tamandarin(L-3-(2-萘基)丙氨酸5Tamandarin B)的萘丙氨酸類似物。
方案23
方案25 方案26 L-N-Boc-蘇氨酸苯甲酰甲基酯(86)向冷卻至0℃的L-N-Boc-蘇氨酸(2g，9.13mmol)在EtOAc(20mL)中的攪拌混懸液中加入Et3N(1.31mL，9.13mmol)和溴乙酰苯(1.82g，9.13mmol)。將該反應(yīng)混合物在室溫下攪拌2天，用EtOAc(50mL)稀釋并用10％HCl(20mL)、5％NaHCO3(20mL，飽和)和飽和NaCl(20mL)溶液洗滌。干燥(Na2SO4)有機(jī)層并蒸發(fā)溶劑。將殘余物與乙醚一起研磨并過濾而得到86(2.8g，83％)，為黃色泡沫。Rf0.55(AcOEt/己烷1∶1)。[α]D20＝-29.4(c＝2，AcOEt)。1H-NMR(300MHz，CDCl3)1.31(d，J＝6.6Hz，3H)，1,46(s，9H)，3.77(s，1H)，4,44(m，1H)，4.60(m，1H)，5.34(d，J＝16.5Hz，1H)，5.37(m，1H)，5,68(d，J＝16.7Hz，1H)，7.51(m，2H)，7.65(m，1H)，7.92(m，1H)。
L-N-Cbz-N-甲基-2-萘丙氨酸(87)向在0℃下的攪拌的L-N-Cbz-2-萘丙氨酸(0.80g，2.29mmol)在THF(40mL)中的溶液中分批加入KOH細(xì)粉(0.89g，16.0mmol)，隨后添加硫酸氫四丁基銨(80mg，按重量計10％)。然后在15分鐘內(nèi)滴加硫酸二甲酯(0.86mL，9.16mmol)。將反應(yīng)體系再攪拌30分鐘并加入H2O(50mL)。在室溫下攪拌5小時后，加入20％氫氧化銨水溶液(10mL)。用乙醚(50mL)稀釋該反應(yīng)體系，分離水層并用飽和NaHCO3水溶液(2×20mL)提取有機(jī)層。用1M KHSO4將合并的水層酸化至pH 1并用EtOAc(2×100mL)提取。合并有機(jī)層，干燥(Na2SO4)，過濾并濃縮。得到產(chǎn)生的酸87(832mg，90％)，為黃色油狀物且不經(jīng)純化將其用于下一步。1H-NMR(500MHz，CDCl3)2，89和2.94(s，3H)，2.27-3.32(m，1H)，3.46-3.55(m，1H)，4.97-5.09(m，3H)，7.12-7.52(m，12H)。
O-(L-N-Cbz-N-甲基-2-萘丙氨酸)-L-N-Boc-蘇氨酸苯甲酰甲基酯(88)向冷卻至0℃的L-N-Boc-蘇氨酸苯甲酰甲基酯86(852mg，2.29mmol)在CH2Cl2(15mL)中的溶液中加入DMAP(84mg，0.68mmol)和L-N-Cbz-N-甲基萘丙氨酸87(832mg，2.29mmol)。在0℃下攪拌10分鐘后，加入DCC(519mg，2.52mmol)。將該反應(yīng)混合物在室溫下攪拌過夜。過濾該混合物并將濾液濃縮至干。將殘余物溶于CH3CN(15mL)，再次過濾并蒸發(fā)。將粗油溶于EtOAc(50mL)并用10％KHSO4(50mL)、NaHCO3(50mL，飽和)和NaCl(50mL，飽和)洗滌。干燥有機(jī)層(Na2SO4)并蒸發(fā)溶劑。通過柱色譜法純化粗油(硅膠，EtOAc/己烷3/1梯度)而得到二肽88(1.02g，68％)，為淡黃色油狀物。Rf0.25(AcOEt/己烷1∶3)。[α]D20＝-27.6(c＝1，CH2Cl2)。1H-NMR(500MHz，CDCl3)1.22(d，J＝6.9Hz，3H)，1.49(s，9H)，2.77和2.92(m，3H)，3.21-3.31(m，1H)，3.50-3.56(m，1H)，3.75(m，1H)，4.46-4.48(m，1H)，4.67-4.69(m，1H)，5.00-5.71(m，4H)，7.16-7.46(m，3H)，7.47-7.64(m，4H)，7.51-7.94(m，5H)。13C-NMR(125MHz，CDCl3)17.0，17.3，28.7，35.3，31.7，32.0，35.38，39.8，50.1，57.5，59.8，66.9，67.3，67.6，68.7，80.0，125.9，126.4，127.5，127.8，127.9，128.0，128.2，128.4，128.8，129.3，129.5，132.7，133.8，133.9，134.4，135.0，169.3，169.7，171.5，193.6。IR(凈)3433.6，2977.9，1753.9，1707.6，1598.4，1510.7，1450.0，1367.5，1314.5，1161.2。
O-(L-N-Cbz-N-甲基萘丙氨酸)-L-N-Boc-蘇氨酸(89)向冷卻至0℃的絲氨酸苯甲酰甲基酯88(500mg，0.75mmol)在AcOH水溶液(7mL，90％)中的溶液中加入Zn粉(383mg，5.48mmol)。將所得混合物在0℃下攪拌3小時，用Celite過濾并用EtOAc(25mL)洗滌Celite。用10％KHSO4(20mL)、NaHCO3(20mL，飽和)和NaCl(20mL，飽和)洗滌濾液。干燥有機(jī)層(Na2SO4)并蒸發(fā)溶劑。通過柱色譜法純化粗油(硅膠，MeOH/CH2Cl21/9)而得到酸89(248mg，60％)，為白色泡沫。Rf0.35(MeOH/CH2Cl21∶9)。[α]D20＝+7.10(c＝0.7，CH2Cl2)。1H-NMR(500MHz，CDCl3)1.29-1.32(m，3H)，1.48(s，9H)，2.78-2.80(m，3H)，3.17-3.22(m，1H)，3.25-3.54(m，1H)，4.52-4.53(m，1H)，5.03-5.15(m，2H)，5.44-5.64(m，2H)，7.19-7.36(m，5H)，7.50-7.54(m，3H)，7.71-7.89(m，4H)。1C-NMR(125MHz，CDCl3)16.4，16.7，20.7，28.1，31.7，32.0，34.6，34.9，39.8，50.1，57.3，60.6，66.4，72.2，80.0，125.4，125.9，126.7，127.5，127.9，128.2，128.8，132.2，133.4，134.2，136.1，156.1，156.9，169.3，169.7，169.8。IR(凈)3435.1，2978.4，1743.4，1709.6，1499.9，1402.2，1315.6，1217.1，1162.0，1060.6，752.2。
-Tamandarin B被保護(hù)的直鏈前體(90)向冷卻至0℃的56(110mg，0.14mmol)在二噁烷(5mL)中的溶液中加入HCl在二噁烷(5mL)中的溶液。將所得溶液在室溫下攪拌2小時。濃縮該溶液并用CH2Cl2稀釋殘余物且再次濃縮至得到鹽酸鹽(85mg，定量產(chǎn)率)，為白色固體，將其直接用于下一步。向冷卻至-5℃的鹽酸鹽(85mg，0.14mmol)、HBTU(53mg，0.14mmol)、HOBt(19mg，0.14mmol)和酸89(79mg，0.14mmol)的混合物中加入CH2Cl2/DMF 2/1(4mL)的溶液，將該反應(yīng)體系攪拌5分鐘并加入DIPEA(72μL，0.56mmol)。將所得溶液在-5℃下攪拌過夜，用t-BuOMe(10mL)稀釋，用10％KHSO4(10mL)、NaHCO3(10mL，飽和)和NaCl(10mL，飽和)洗滌，干燥(Na2SO4)，過濾并濃縮。通過柱色譜法純化粗油(硅膠，EtOAc/己烷1/1梯度)而得到90(60mg，54％)。Rf0.23(AcOEt/己烷1∶1)。[α]D20＝-34.6(c＝1，CH2Cl2)。1H-NMR(500MHz，CDCl3)0.89-1.01(m，18H)，1.26-1.29(m，5H)，1.48(s，9H)，1.70-1.62(m，2H)，2.03-2.22(m，5H)，2.21-2.25(m，3H)，2.55-2.60(m，1H)，2.82-2.93(m，3H)，3.03-3.18(m，1H)，3.45-3.49(m，1H)，3.60-3.79(m，2H)，4.12-4.15(m，1H)，4.50-4.51(m，1H)，4.92-5.34(m，6H)，5.34-5.47(m，1H)，7.16-7.35(m，9H)，7.44-7.85(m，8H)。13C-NMR(125MHz，CDCl3)14.1，16.9，17.9，18.4，19.0，18.7，20.2，20.9，21.6，23.7，24.5，24.7，25.5，28.1，28.2，28.9，29.6，30.4，30.6，33.9，38.7，41.0，43.0，44.1，46.8，48.4，57.9，60.3，60.5，66.9，67.0，67.3，68.6，70.3，77.9，78.2，79.1，125.5，125.9，127.0，127.2，127.5，127.7，127.8，128.0，128.3，128.5，130.1，132.2，133.4，135.1，135.2，136.9，142.0，157.0，157.2，157.3，169.9，171.3，171.9，180.8。IR(凈)3326.4，3062.0，2961.1，2873.6，2248.6，1743.7，1681.9，1635.0，1537.2，1453.5，1367.4，1170.2。HRMS m/z C61H81N5O14Na(M+Na)計算值130.5677；測定值130.5634。
-Tamandarin B大環(huán)(92)向在氬氣環(huán)境中的被保護(hù)的直鏈前體90(60mg，0.054mmol)在MeOH中的溶液中加入Pd(OH)2(21mg)。用H2凈化該反應(yīng)體系并在氫氣(1atm)環(huán)境中攪拌過夜。將該混合物通過Celite過濾。濃縮濾液至得到游離直鏈前體91(45mg，96％)，為黃色油狀物，不經(jīng)純化將其用于下-步。
將粗氨基酸直鏈前體60(45mg，0.050mmol)溶于CH3CN(10mL)并冷卻至0℃。加入HATU(46mg，0.12mmol)，隨后滴加NNM(11μL，0.10mmol)。將該反應(yīng)混合物在0℃下攪拌1小時且然后攪拌過夜。在真空中濃縮該反應(yīng)混合物，用EtOAc(10mL)稀釋，用10％KHSO4(10mL)、5％NaHCO3(10mL)和NaCl(10mL，飽和)洗滌，干燥(Na2SO4)，過濾并濃縮。通過柱色譜法純化粗油(硅膠，EtOAc/己烷2/1)而得到被保護(hù)的大環(huán)92(28mg，65％)，為白色泡沫。Rf0.26(AcOEt/己烷1/2)。[α]D20＝-55.2(c＝1，CHCl3)。1H-NMR(500MHz，CDCl3)0.90-1.02(m，24H)，1.29(d，6.6Hz，3H)，1.48(s，9H)，1.71-1.85(m，2H)，2.05-2.09(m，2H)，2.19-2.23(m，2H)，2.52(s，3H)，2.96(dd，J＝4.7和16.9Hz，1H)，3.46(dd，J＝10.7和14.0Hz，1H)，3.67(dd，J＝4.3和13.9Hz，1H)，3.73-3.77(m，2H)，3.78-3.83(m，1H)，3.99-4.05(m，1H)，4.39(dd，J＝3.1和10.3Hz，1H)，4.56-4-.59(m，1H)，4.92(t，J＝12.0Hz，1H)，4.97-5.00(m，2H)，5.00-5.02(m，1H)，7.36-7.37(m，1H)，7.49-7.52(m，2H)，7.56-7.58(m，2H)，7.72-7.74(m，1H)，7.76-7.79(m，2H)，7.98-8.00(m，1H)。13C-NMR(125MHz，CDCl3)15.6，18.4，189，18.9，20.6，21.2，23.9，25.3，25.4，28.0，28.4，28.5，30.8，35.6，39.0，39.3，39.5，47.2，48.8，56.3，57.5，60.7，66.0，69.3，71.9，79.6，80.7，126.3，126.9 127.5，127.8，128.2，128.5，128.9，132.8，133.9，135.9，156.2，169.0，170.1，170.9，171.7，172.0 173.2。IR(凈)3339.5，2962.0，2872.0，2248.4，1742.0，1665.7，1635.5，1529.6，1451.1，1167.4，851.3。
-Tamandarin B(93)向Boc保護(hù)的大環(huán)92(28mg，0.032mmol)在HPLC二噁烷(3mL)中的溶液中加入HCl在二噁烷(3mL)中的溶液。將所得溶液在室溫下攪拌2小時。濃縮該溶液并用CH2Cl2稀釋殘余物且再次濃縮至得到鹽酸鹽(定量產(chǎn)率)，為白色固體，將其直接用于下一步。向冷卻至0℃的大環(huán)胺鹽(25mg，0.031mmol)和側(cè)鏈(14.6mg，0.046mmol)在CH2Cl2(4mL)中的混合物中加入BOP(20.3mg，0.046mmol)和NMM(14μL，0.12mmol)。在0℃下30分鐘后，將該反應(yīng)體系在室溫下攪拌過夜。用NaCl溶液(2mL，飽和)處理該反應(yīng)體系并用EtOAc(2×10mL)提取。用10％HCl(5mL)、5％NaHCO3(5mL，飽和)和NaCl(10mL，飽和)洗滌有機(jī)層，干燥(Na2SO4)，過濾并濃縮。通過HPLC純化粗油(8mg，61％)。1H-NMR(500MHz，CDCl3)δ0.82-0.96(m，24H)，1.09-1.28(m，14H)，1.31(d，J＝6.8，3H)，1.39(d，J＝6.8，3H)，1.64(m，3H)，2.10(m，4H)，2.48(s，3H)，3.10(s，3H)，3.09-3.15(m，2H)，3.35-3.41(m，2H)，3.43-3.82(m，5H)，4.29-4.33(m，1H)，4.42-4.47(m，1H)，4.65-4.70(m，1H)，4.72(t，J＝6.8，1H)，4.87(t，J＝8.3，1H)，5.02(d，J＝5.3，1H)，5.29-5.32(m，2H)，7.24-7.27(m，1H)，7.45-7.63(m，4H)，7.67-7.83(m，4H)。HRMS m/zC56H83N7O13Na(M+Na)計算值1084.5946；測定值1084.5987。
實施例9用Tamandarin大環(huán)上的酰胺鍵取代酯鍵如方案27和28中所示制備通式XXX的化合物。
方案27
方案28 N-Boc-L-別-蘇氨酸甲酯(106)向N-Boc-L-別-蘇氨酸(500mg，2.28mmol)在DMF(5mL)中的溶液中加入KHCO3(637mg，4.56mmol)和MeI(227μl，3.65mmol)并將該反應(yīng)體系在室溫下攪拌5小時。加入水(20mL)并用乙醚(3×20mL)提取該混合物，干燥(Na2SO4)并蒸發(fā)至得到甲酯106(494mg，93％)，不經(jīng)純化將其用于下一步。1H-NMR(500MHz，CDCl3)1.19-1.25(m，3H)，1.48(s，9H)，3.78(s，3H)，4.05-4.10(m，1H)，4.32-4.40(m，1H)，4.45-4.54(m，1H)。
2-叔丁氧羰基氨基-1，3-丁二醇(107)向冷卻至0℃的甲酯106(450mg，1.93mmol)在HPLC EtOH(7mL)中的溶液中分批加入硼氫化鈉(146mg，3.86mmol)。將該反應(yīng)混合物在0℃下攪拌2小時并在室溫下攪拌2小時。用NH4Cl(飽和，15mL)使反應(yīng)猝滅，用AcOEt(3×10mL)提取，干燥(Na2SO4)并蒸發(fā)。通過柱色譜法純化粗油(硅膠，EtOAc/己烷2/1)而得到二醇107(347mg，87％)，為無色油狀物。Rf0.21(AcOEt/己烷1/2)。[α]D20＝-10.7(c＝1，CHCl3)。1H-NMR(500MHz，CDCl3)1.28(d，J＝6.9Hz，3H)，1.48(s，9H)，3.43-3.54(m，1H)，3.73(dd，J＝4.0 nd 14.1Hz，1H)，3.98(dd，J＝5.9和13.1Hz，1H)，4.00-4.05(m，1H)，5.33-5.40(m，1H)。13C-NMR(125MHz，CDCl3)20.3，28.2，28.3，56.1，62.4，69.9，79.8，153.3。IR(凈)3343.8，2975.1，2931.7，1686.4，1520.0，1366.6，1248.9，1171.1，1046.3。
2-叔丁氧羰基氨基-1-(叔丁基二甲基硅烷氧基)-3-丁二醇向冷卻至0℃的二醇107(340mg，1.65mmol)在CH2Cl2(4mL)中的溶液中加入Et3N(274uL，1.98mmol)和DMAP(8mg，0.04mmol)。將該溶液攪拌5分鐘并加入TBSCI(248mg，1.65mmol)。將該反應(yīng)體系在室溫下攪拌18小時，用NH4Cl(飽和，15mL)猝滅并用CH2Cl2(3×10mL)提取，干燥(Na2SO4)并蒸發(fā)。通過柱色譜法純化粗油(硅膠，EtOAc/己烷1/9)而得到TBS醇(300mg，56％)，為無色油狀物。Rf0.37(AcOEt/己烷1/9)。[α]D20＝-24.7(c＝1，CHCl3)。1H-NMR(500MHz，CDCl3)0.05(s，6H)，0.86(s，9H)，1.30(d，J＝6.8Hz，3H)，1.47(s，9H)，3.46-3.51(m，1H)，4.75-4.80(m，1H)，4.89-4.92(m，1H)，3.98(dd，J＝1.9和11.5Hz，1H)，5.22-5.30(m，1H)。IR(凈)3447.8，2954.8，2857.1，2362.1，1699.0，1498.3，1254.3，1173.8，1108.1，836.9，777.5。
2-叔丁氧羰基氨基-1-(叔丁基二甲基硅烷氧基)-3-甲磺酰氧基丁烷(108)向冷卻至0℃的醇(100mg，0.31mmol)在CH2Cl2(10mL)中的溶液中加入Et3N(64μL，0.46mmol)和MsCl(31μl，0.40mmol)。將該溶液攪拌1小時并用NH4Cl(飽和，15mL)猝滅并用AcOEt(3×10mL)提取，干燥(Na2SO4)并蒸發(fā)而得到108(113mg，91％)，經(jīng)進(jìn)一步純化將粗殘余物用于下一步。1H-NMR(500MHz，CDCl3)0.04(s，6H)，0.88(s，9H)，1.45-1.50(m，12H)，2.99(s，3H)，3.66-3.71(m，1H)，4.85-4.90(m，1H)，4.80-4.92(m，1H)。
3-疊氮基-2-叔丁氧羰基氨基-1-(叔丁基二甲基硅烷氧基)丁烷(109)向甲磺酸酯108(500mg，1.26mmol)在HMPA(2mL)中的溶液中加入NaN3(409mg，6.29mmol)和15-冠-5醚(252mg，1.26mmol)。將該溶液在55℃下攪拌3小時。將該反應(yīng)混合物加入到EtOAc(30mL)中，用鹽水(10mL)洗滌，干燥(Na2SO4)并蒸發(fā)。通過柱色譜法純化粗油(硅膠，EtOAc/己烷1/15)而得到疊氮化物109(160mg，34％)，為無色油狀物。Rf0.33(AcOEt/己烷1/15)。[α]D20＝-46.6(c＝0.4，CHCl3)。1H-NMR(500MHz，CDCl3)0.04(s，6H)，0.88(s，9H)，1.32(d，J＝6.7Hz，3H)，1.48(s，9H)，3.51-3.61(m，1H)，4.75-4.90(m，2H)，4.50-4.62(m，1H)。13C-NMR(125MHz，CDCl3)-5.5，14.1，16.5，25.8，28.3，31.6，55.2，57.2，62.4，174.3。IR(凈)3326.1，2954.0，2931.1，2857.9，2359.9，2107.2，1718.2，1005.7，1471.2，1366.0，1254.5，1167.7，1098.0，838.1。
3-氨基-叔丁氧羰基氨基-1-(叔丁基二甲基硅烷氧基)丁烷(110)向在氬氣環(huán)境中的疊氮化物109(35mg，0.10mmol)在EtOH(1mL)中的溶液中加入10％Pd/C(7mg)。用H2凈化該反應(yīng)體系并在氫氣(1atm)環(huán)境中攪拌過夜。將該混合物通過Celite過濾。濃縮濾液至得到胺110(29mg，90％)。不經(jīng)進(jìn)一步純化將粗殘余物用于下一步。1H-NMR(500MHz，CDCl3)0.05(s，6H)，0.90(s，9H)，1.12(d，J＝6.7Hz，3H)，1.47(s，9H)，3.21-3.31(m，1H)，3.42-3.48(m，1H)，3.63-3.82(m，2H)，5.01-5.10(m，1H)。13C-NMR(125MHz，CDCl3)-5.1，19.1，21.3，26.2，28.8，47.1，56.9，64.5，176.5。
3-(N-Cbz-N，O-二甲基酪氨酰)氨基-2-叔丁氧羰基氨基-1-(叔丁基二甲基硅烷氧基)丁烷(111)向冷卻至0℃的胺110(20mg，0.062mmol)在CH2Cl2(1mL)中的溶液中加入NMM(7μL，0.069mmol)和HOBt(25mg，0.18mmol)。將該溶液在0℃下攪拌15分鐘并加入N-Cbz-N，O-二甲基酪氨酸(21)(21mg，0.062mmol)在CH2Cl2(1mL)中的溶液。最后加入于CH2Cl2(1mL)中的DCC(14.2mg，0.069mmol)的溶液。將該混合物在室溫下攪拌16小時并過濾以除去沉淀。用CH2Cl2(10mL)稀釋濾液并用10％KHSO4(10mL)、5％NaHCO3(10mL)和NaCl(10mL，飽和)洗滌，干燥(Na2SO4)，過濾并濃縮。通過柱色譜法純化粗油(硅膠，EtOAc/己烷1/3)而得到111(26mg，70％)，為白色泡沫。RfO.36(AcOEt/己烷1/3)。[α]D20＝-40.1(c＝0.5，CHCl3)。1H-NMR(500MHz，CDCl3)0.09(s，6H)，0.95(s，9H)，1.14-1.17(m，3H)，1.43(s，9H)，2.86(s，3H)，3.29-3.32(m，1H)，3.42-3.48(m，1H)，3.60-3.68(m，2H)，3.82(s，3H)，4.17-4.18(m，1H)，4.87-4.89(m，1H)，4.95-4.96(m，1H)，5.02-5.14(m，2H)，5.21-5.22(m，2H)，6.34-6.37(m，1H)，6.79-6.83(m，2H)，6.98-7.00(m，1H)，7.01-7.17(m，2H)，7.20-7.36(m，5H)。13C-NMR(125MHz，CDCl3)-5.5，17.9，18.2，25.8，28.3，33.2，44.5，55.12，62.6，67.3，57.1，66.1，113.8，127.5，127.9，128.4，129.8，158.2，171.5。IR(凈)3328.5，2930.3，2856.3，2361.0，2346.6，2249.0，1708.8，1513.7，1452.5，1449.5。HRMS m/zC34H53N5O7Na(M+Na)計算值666.3550；測定值666.3571。
3-(N-Cbz-N，O-二甲基酪氨酰)氨基-2-叔丁氧羰基氨基-1-丁醇(112)將111(15mg，0.086mmol)在AcOH(1mL)中的溶液在室溫下攪拌15小時。濃縮該反應(yīng)體系至得到112(11mg，90％)，為無色油狀物。經(jīng)進(jìn)一步純化將粗殘余物用于下一步。1H-NMR(500MHz，CDCl3)1.04(d，J＝6.9Hz，3H)，1.45(s，9H)，2.81(s，3H)，2.88-2.92(m，1H)，3.02-3.09(m，1H)，3.29-3.33(m，1H)，3.51-3.62(m，1H)，3.70-3.79(m，1H)，3.78(s，3H)，4.02-4.08(m，1H)，4.43-4.47(m，1H)，4.51-4.55(m，1H)，5.05-5.18(m，2H)，5.22(s，2H)，5.98-5.99(m，1H)，6.72((d，J＝7.9Hz，2H)，6.90-7.01(m，2H)，7.22-7.38(m，5H)。
實施例10Lac9單元的修飾如本文所述制備通式I的化合物，其中R5含有修飾的乳酸單元。
按照Petit和Larcheveque在《有機(jī)合成》(Org.Synth.)7537-44(1998)中所述的步驟由(S)-絲氨酸制備(R)-縮水甘油酸(117)。

在有Et3N存在下通過使N-Boc-脯氨酸與芐基溴反應(yīng)制備L-脯氨酸芐酯(118)的三氟乙酸鹽。使用三氟乙酸除去Boc基團(tuán)。隨后使(R)-縮水甘油酸(117)與119反應(yīng)得到脯氨酸衍生物120。
在不開放環(huán)氧化物部分的情況下使用在MeOH中的LiOH除去芐酯。然后將N-縮水甘油基-L-脯氨酸用于制備合適的R5部分以制備通式I、IA或II的化合物，或另一方面，使N-縮水甘油基-L-脯氨酸直接與大環(huán)的游離胺，例如化合物35、脫保護(hù)的61偶聯(lián)。
N-縮水甘油基-L-脯氨酸芐酯(120)向冷卻至0℃的L-脯氨酸芐酯(156mg，0.49mmol)在DMF(2mL)中的溶液中加入NMM(56μl，0.53mmol)和HOBt(198mg，1.47mmol)。將該溶液在0℃下攪拌15分鐘并加入縮水甘油酸21(100mg，1.13mmol)在CH2Cl2(2mL)中的溶液。最后加入DCC(253mg，1.23mmol)在CH2Cl2(2mL)中的溶液。將該混合物在室溫下攪拌16小時并過濾以除去沉淀。用CH2Cl2(10mL)稀釋殘余物并用10％KHSO4(10mL)、5％NaHCO3(10mL)和NaCl(10mL，飽和)洗滌，干燥(Na2SO4)，過濾并濃縮。通過柱色譜法純化粗油(硅膠，EtOAc/己烷1/1)而得到120(95mg，70％)，為白色泡沫。Rf0.26(AcOEt/己烷1/1)。1H-NMR(500MHz，CDCl3)旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體混合物1.87-1.92(m，2H)，1.91-1.98(m，2H)，1.99-2.03(m，1H)，2.19-2.20(m，2H)，2.20-2，22(m，1H)，2.66-2,68(m，1H)，2,80-2,82(m，1H)，2.94-2,95(m，2H)，3.30-3,31(m，1H)，3.56-3.57(m，2H)，357-370(m，2H)，3.72-3.85(m，1H)，4.57-4.59(m，1H)，4.70-4.72(m，1H)，5.16(s，2H)，5.22-5.29(m，2H)，7.25-7.38(m，10H)。13C-NMR(125MHz，CDCl3)22.2，24.9，28.7，30.9，31.5，45.9，46.3，46.4，47.2，48.0，48.5，58.7，59.3，66.9，67.4，128.1，128.2，128.4，128.5，128.7，170.0，182.3。HRMS m/zC15H17NO4a(M+Na)計算值298.1055；測定值298.1047。
通過使用在甲醇中的LiOH/H2O水解芐酯由化合物120制備N-縮水甘油基-L-脯氨酸。
實施例11Tamandarin類似物的生物活性在本實施例中所述的實驗證實tamandarin類似物具有所需的生物活性。
本文所用的“GI50”指的是能夠產(chǎn)生50％細(xì)胞生長抑制作用的化合物劑量。通過比較給藥化合物的細(xì)胞生長與未給予該化合物的相同細(xì)胞的生長來評價GI50。
本文所用的“LC50”指的是能夠在細(xì)胞中產(chǎn)生50％致死率的化合物劑量。通過比較給藥化合物的細(xì)胞群中的細(xì)胞死亡與未給予該化合物的相同細(xì)胞群中的細(xì)胞死亡來評價LC50。
“NCI-60”指的是來自國家癌癥研究所(National CancerInstitute)(NCI，F(xiàn)rederick，Md.)的60個腫瘤細(xì)胞系組?！癗CI-60平均值”為用選擇的化合物處理的組的GI50或LC50的平均值。
下表中公開了化合物數(shù)據(jù)。
表1.tamandarin B的體外結(jié)果(單位摩爾)


表2.Phe5tamandarin B的體外結(jié)果(單位摩爾)


細(xì)胞系

使用比色法分析細(xì)胞生長抑制使用sulforhodamine B(SRB)反應(yīng)的比色試驗類型適合于定量測定細(xì)胞生長和存活力[按照Philip Skehan等在如下文獻(xiàn)中所述的技術(shù)(1990)，“用于抗癌藥篩選的新比色細(xì)胞毒性試驗”(New colorimetriccytotoxicity assay for anticancer drug screening)-《國家癌癥研究雜志》(J.Natl.Cancer Inst.)821107-1112]。
這種試驗形式使用9mm直徑的96孔細(xì)胞培養(yǎng)微量培養(yǎng)板(Faircloth，1988；Mosmann，1983)。大部分細(xì)胞系獲自來源于不同人癌癥類型的美國模式培養(yǎng)物保藏所(American Type CultureCollection)(ATCC)。
將細(xì)胞維持在補(bǔ)充了0.1g/l青霉素和0.1g/l硫酸鏈霉素的RPMI1640 10％FBS中且然后在37℃、5％CO2和98％濕度下保溫。就這些實驗而言，使用胰蛋白酶從分匯合培養(yǎng)物中收集細(xì)胞并在平板接種前重新懸浮于新鮮培養(yǎng)基中。
以5×103個細(xì)胞/孔將細(xì)胞接種在96孔微量滴定板中等分的195μl培養(yǎng)基中并通過在不含藥物的培養(yǎng)基中生長18小時使它們與平板表面粘附。此后，以溶于DMSO/EtOH/PBS(0.5∶0.5∶99)的10到10-8μg/ml的5μl等分批加入樣品。接觸48小時后，通過SRB方法測定抗腫瘤作用通過添加50μl冷50％(wt/vol)三氟乙酸(TCA)固定細(xì)胞并在4℃下保溫60分鐘。用去離子水洗滌平板并干燥。向各微量滴定孔中加入100μl SRB溶液(在1％乙酸中0.4％wt/vol)并在室溫下保溫10分鐘。通過用1％乙酸洗滌來除去未結(jié)合的SRB。使平板風(fēng)干并用Tris緩沖液溶解結(jié)合的染色劑。用自動分光光度測定平板讀出器在490nm單一波長處讀取光密度。
計算來自一式三份孔的數(shù)據(jù)的平均值+/-SD的值?？梢杂嬎慵?xì)胞反應(yīng)的某些參數(shù)GI＝生長抑制，TGI＝總生長抑制(抑制細(xì)胞效應(yīng))和LC＝細(xì)胞殺傷(細(xì)胞毒性效應(yīng))。
表1中解釋了有關(guān)本發(fā)明化合物生物活性的數(shù)據(jù)(以摩爾單位計)。


盡管已經(jīng)完整地描述了本發(fā)明，但是本領(lǐng)域技術(shù)人員理解可以在不影響本發(fā)明范圍或其任何實施方案的情況下在寬范圍和等同范圍的條件、配制和其它參數(shù)下實施本發(fā)明。將本文引述的所有專利和公開文獻(xiàn)的全部內(nèi)容引入本文作為參考。
權(quán)利要求
1.通式I的化合物或其藥物上可接受的鹽 其中R1和R2獨立為H或C1-4烷基，或R1和R2共同形成脯氨酸或高脯氨酸殘基的烷基環(huán)；R3選自氨基酸側(cè)鏈和第一種熒光團(tuán)；R4為H或CH3；R5為H、胺保護(hù)基、氨基酸殘基、多肽、含有第二種熒光團(tuán)的肽、與固相支持物結(jié)合的化學(xué)部分或含有約1-約50個非氫原子的部分；R6為異亮氨酸側(cè)鏈或纈氨酸側(cè)鏈；W為O或NH；X為O或NH；且Y為H或羥基保護(hù)基；Z為C(O)或C(O)-CH(CH3)-C(O)；條件是如果R1和R2共同形成脯氨酸殘基的烷基環(huán)，R4為甲基且X為O，那么R3為萘基甲基。
2.具有如下通式的權(quán)利要求1所述的化合物或其藥物上可接受的鹽 其中R1和R2獨立為H或C1-4烷基，或R1和R2共同形成脯氨酸殘基的烷基環(huán)；R3選自氨基酸側(cè)鏈和第一種熒光團(tuán)；R4為H或CH3；R5為H、胺保護(hù)基、氨基酸殘基、多肽、含有第二種熒光團(tuán)的肽、與固相支持物結(jié)合的化學(xué)部分或含有約1-約50個非氫原子的部分；R6為異亮氨酸側(cè)鏈或纈氨酸側(cè)鏈；X為O或NH；且Y為H或羥基保護(hù)基；條件是如果R1和R2共同形成脯氨酸殘基的烷基環(huán)，R4為甲基且X為O，那么R3為萘基甲基。
3.權(quán)利要求2所述的化合物，其中R1為H且R2為甲基。
4.權(quán)利要求2所述的化合物，其中R1和R2為甲基。
5.權(quán)利要求2所述的化合物，其中R1和R2共同形成脯氨酸殘基的烷基環(huán)。
6.權(quán)利要求2所述的化合物，其中R3為氨基酸側(cè)鏈。
7.權(quán)利要求2所述的化合物，其中R3為萘基甲基。
8.權(quán)利要求2所述的化合物，其中R3為任選被OH、OCH3、CO(C6H5)、F、Cl、Br、I、CH3或C2H5取代的芐基。
9.權(quán)利要求2所述的化合物，其中R3含有熒光團(tuán)。
10.權(quán)利要求2所述的化合物，其中R4為CH3。
11.權(quán)利要求2所述的化合物，其中R4為H。
12.權(quán)利要求2所述的化合物，其中R5為H。
13.權(quán)利要求2所述的化合物，其中R5為胺保護(hù)基。
14.權(quán)利要求2所述的化合物，其中R5為氨基酸殘基或多肽。
15.權(quán)利要求2所述的化合物，其中R5含有熒光團(tuán)。
16.權(quán)利要求2所述的化合物，其中R5選自下列基團(tuán)-(N-甲基)亮氨酸；-(N-甲基)亮氨酸-脯氨酸；-(N-CBz-N-甲基)亮氨酸；-(N-甲基)亮氨酸-脯氨酸-乳酸；-(N-甲基)亮氨酸-脯氨酸-丙酮酸；-(N-甲基)亮氨酸-脯氨酸-乳酸-谷氨酰胺-焦谷氨酸；-(N-甲基)亮氨酸-脯氨酸-乳酸-谷氨酰胺-環(huán)戊酸；-(N-甲基)亮氨酸-脯氨酸-乳酸-亮氨酸-焦谷氨酸；-(N-甲基)亮氨酸-脯氨酸-乳酸-谷氨酰胺-環(huán)戊酸；-(N-甲基)亮氨酸-脯氨酸-丙氨酸-亮氨酸-焦谷氨酸；和-(N-甲基)亮氨酸-脯氨酸-(N-甲基)丙氨酸-亮氨酸-焦谷氨酸。
17.權(quán)利要求2所述的化合物，其中R6為纈氨酸側(cè)鏈。
18.權(quán)利要求2所述的化合物，其中R6為亮氨酸側(cè)鏈。
19.權(quán)利要求2所述的化合物，其中Y為H。
20.權(quán)利要求2所述的化合物，其中Y為羥基保護(hù)基。
21.權(quán)利要求2所述的化合物，其中X為O。
22.權(quán)利要求2所述的化合物，其中X為NH。
23.權(quán)利要求2所述的化合物，其中R1和R2共同形成脯氨酸殘基的烷基環(huán)；R3為任選被一個或多個選自O(shè)H、OCH3、CO(C6H5)、F、Cl、Br、I、CH3和C2H5的基團(tuán)取代的芐基；R4為H；R6為纈氨酸側(cè)鏈；X為O；且Y為H。
24.權(quán)利要求2所述的化合物，其中R1為H；R2為CH3；R3為任選被一個或多個選自O(shè)H、OCH3、CO(C6H5)、F、Cl、Br、I、CH3和C2H5的基團(tuán)取代的芐基；R4為CH3；R5如上述所定義；R6為纈氨酸側(cè)鏈；X為O；且Y為H。
25.權(quán)利要求2所述的化合物，其中R1為CH3；R2為CH3；R3為任選被一個或多個選自O(shè)H、OCH3、CO(C6H5)、F、Cl、Br、I、CH3和C2H5，優(yōu)選OCH3的基團(tuán)取代的芐基；R4為CH3；R6為纈氨酸側(cè)鏈；X為O；且Y為H。
26.權(quán)利要求2所述的化合物，其中R1和R2共同形成脯氨酸殘基的烷基環(huán)；R3為萘基甲基；R4為CH3；R6為纈氨酸側(cè)鏈；X為O；且Y為H。
27.權(quán)利要求2所述的化合物，其中R5由1-5個氨基酸殘基組成。
28.權(quán)利要求2所述的化合物，具有如下結(jié)構(gòu)
29.權(quán)利要求2所述的化合物，具有如下結(jié)構(gòu)
30.權(quán)利要求2所述的化合物，具有如下結(jié)構(gòu)
31.權(quán)利要求2所述的化合物，具有如下結(jié)構(gòu)
32.權(quán)利要求2所述的化合物，具有如下結(jié)構(gòu)
33.具有如下結(jié)構(gòu)的化合物
34.組合物，包括權(quán)利要求1-33中任意一項的化合物和藥物上可接受的賦形劑或載體。
35.抑制、治療或預(yù)防腫瘤發(fā)生的方法，包括使細(xì)胞接觸有效量的權(quán)利要求1-33中任意一項的化合物。
36.預(yù)防或抑制癌細(xì)胞生長的方法，包括使癌細(xì)胞接觸有效量的權(quán)利要求1-33中任意一項的化合物。
37.抑制或預(yù)防蛋白質(zhì)合成的方法，包括使細(xì)胞或細(xì)胞成分接觸有效量的權(quán)利要求1-33中任意一項的化合物。
38.強(qiáng)化編程性細(xì)胞死亡的方法，包括使細(xì)胞或細(xì)胞成分接觸有效量的權(quán)利要求1-33中任意一項的化合物。
39.提供免疫抑制治療的方法，包括對需要的受試者給予有效量的權(quán)利要求1-33中任意一項的化合物。
全文摘要
本發(fā)明涉及通式I的化合物，其中R
文檔編號C07K5/00GK1819837SQ200480013388
公開日2006年8月16日 申請日期2004年3月19日 優(yōu)先權(quán)日2003年3月21日
發(fā)明者瑪?shù)铝铡.·茹利 申請人:瑪?shù)铝铡.·茹利