專利名稱：作為p38抑制劑的咪唑并噻唑和咪唑并噁唑衍生物的制作方法
相關(guān)申請的相互參照本申請要求2003年5月15日提交的美國臨時(shí)專利申請序號(hào)60/470,735和2003年10月17日提交的美國臨時(shí)專利申請序號(hào)60/512,298的權(quán)益，此兩個(gè)申請的全文都通過引用結(jié)合到本文中。
背景技術(shù)：
許多慢性和急性病癥都與炎癥反應(yīng)的紊亂相關(guān)。很多細(xì)胞因子，包括，但不限于IL-1、IL-6、IL-8和TNFα參與到所述反應(yīng)中。雖然應(yīng)對許多生理性刺激的反應(yīng)，通常表達(dá)這些細(xì)胞因子，但是過度的、無節(jié)制的、或過度的和無節(jié)制的產(chǎn)生這些細(xì)胞因子常常導(dǎo)致炎癥和組織損傷。這是介導(dǎo)諸如類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的疾病成為病態(tài)的一個(gè)機(jī)制(Keffer，J.，等，EMBO J.，134025-4031，1991，F(xiàn)eldmann，M.，等，Annu.Rev.Immunol.，14397-440，1996和Bingham，C.O.，J.Rheumatol.Suppl.，653-9，2002)?，F(xiàn)在已有幾種針對減少全身水平的前炎癥性細(xì)胞因子如TNFα的治療劑(Pugsley，M.K.Curr.Opin.Invest.Drugs，21725-1731，2001以及Bondeson，J.，和Maini，R.N.，J.Clin.Pract.，55211-216，2001)，從而改善疾病。這些療法直接的作用是減少循環(huán)水平的細(xì)胞因子或抑制其活性。然而，這些療法并不直接阻斷調(diào)節(jié)前炎癥性細(xì)胞因子表達(dá)和分泌或調(diào)節(jié)其它炎癥和組織破壞的介導(dǎo)物表達(dá)的細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)。
已有報(bào)道，在許多炎癥和自身免疫性疾病中，p38MAP激酶(p38，也稱為CSBP或SAPK)信號(hào)通路，是造成前炎癥性細(xì)胞因子的表達(dá)增高的原因(見，例如，Dong，C.，等，Annu.Rev.Immunol.，2055-72，2002及其所引用的參考文獻(xiàn))。因此，p38MAP激酶通路的任何部分的抑制劑或調(diào)節(jié)p38MAP激酶通路的通路抑制劑，作為治療涉及炎癥和自身免疫反應(yīng)的疾病或病癥的療法可能是有用的。(Lee，J.C.，等，Immunopharm，47185-201，2000)。已經(jīng)顯示，所述通路被諸如滲透壓性休克、紫外光、自由基、細(xì)菌毒素、病毒、細(xì)胞因子和趨化因子的細(xì)胞性應(yīng)激物所激活，舉出一些例子，在反應(yīng)中介導(dǎo)許多細(xì)胞因子包括，但不限于IL-1、IL-6、IL-8和TNFα的表達(dá)(Ono，K.和Han，J.，Cellular Signalling，121-13，2000及其所引用的參考文獻(xiàn))。
通常p38MAP激酶通路被諸如酪氨酸激酶受體、趨化因子或G蛋白偶聯(lián)受體的細(xì)胞表面受體直接或間接地激活，所述的細(xì)胞表面受體已被如細(xì)胞因子、趨化因子或連接在同源受體上的脂多糖(LPS)的特殊的配體激活。隨后，p38MAP激酶被在蘇氨酸180和酪氨酸182的末端磷酸化作用激活。激活后，p38MAP激酶能使包括蛋白激酶的其它細(xì)胞內(nèi)蛋白磷酸化，并且能被轉(zhuǎn)移至細(xì)胞核，在那里它使轉(zhuǎn)錄因子磷酸化并激活導(dǎo)致前炎癥性細(xì)胞因子和其它能夠?qū)ρ装Y反應(yīng)、細(xì)胞粘合及蛋白降解起作用的蛋白質(zhì)的表達(dá)。例如，在諸如巨噬細(xì)胞和單核細(xì)胞的骨髓系細(xì)胞中，在對p38的激活的反應(yīng)中IL-1和TNFα都被轉(zhuǎn)錄出來。這些及其它細(xì)胞因子的隨后的翻譯和分泌在鄰近的組織，以及通過白細(xì)胞的浸潤作用啟動(dòng)某一局部或全身的炎癥反應(yīng)。雖然此反應(yīng)是對細(xì)胞應(yīng)激的正常生理反應(yīng)的一部分，但是急性或慢性的細(xì)胞應(yīng)激導(dǎo)致過度的、無節(jié)制的、或過度的和無節(jié)制的前炎癥性細(xì)胞因子的表達(dá)。這樣依次導(dǎo)致組織損傷，常常引起疼痛和虛弱。事實(shí)是，有四種已知的p38MAP激酶的同工型(isoforms)(p38α、p38β、p38δ和p38γ)，每種顯示出不同的表達(dá)水平、組織分布和調(diào)節(jié)功能，支持了它們是與許多疾病和生理性紊亂的病因?qū)W或后遺癥有關(guān)的觀念。
確實(shí)，許多自身免疫性疾病以及與慢性炎癥和急性炎癥相關(guān)的疾病，已經(jīng)與p38MAP激酶的激活和炎癥性細(xì)胞因子的過度表達(dá)或調(diào)節(jié)異常相關(guān)聯(lián)。所述這些疾病包括，但不限于類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎；類風(fēng)濕性脊椎炎；骨關(guān)節(jié)炎；痛風(fēng)、其它關(guān)節(jié)炎的病癥；膿毒癥；敗血性休克；內(nèi)毒素性休克；革蘭氏陰性膿毒癥；中毒性休克綜合征；哮喘；成人呼吸窘迫綜合征；慢性阻塞性肺病；慢性肺炎；炎性腸道疾病；節(jié)段性回腸炎；銀屑??；濕疹；潰瘍性結(jié)腸炎；胰腺纖維變性；肝纖維化；急性和慢性腎病；腸激惹綜合征；熱病(pyresis)；再狹窄；腦性瘧疾；中風(fēng)和局部缺血性損傷；神經(jīng)性外傷；阿爾茨海默氏??；亨廷頓氏病；帕金森氏病；急性和慢性疼痛；過敏性鼻炎；過敏性結(jié)膜炎；慢性心力衰竭；急性冠脈綜合征；惡病質(zhì)；瘧疾；麻瘋??；利什曼病；萊姆病；萊特爾氏綜合征；急性滑膜炎；肌肉退行性變性，粘液囊炎；肌腱炎；腱鞘炎；突出的、破裂的或脫垂的椎間盤綜合征；骨硬化??；血栓癥；癌癥；再狹窄；矽肺??；肺肉瘤??；諸如骨質(zhì)疏松癥的骨再吸收病；移植物抗宿主反應(yīng)；和諸如多發(fā)性硬化癥、狼瘡和纖維肌痛(fibromyalgia)的自身免疫性疾??；AIDS和諸如帶狀皰疹、I型或II型單純皰疹、流感病毒和巨細(xì)胞病毒的其它病毒性疾?。灰约疤悄虿?。
許多研究已經(jīng)顯示，通過或者遺傳的或者化學(xué)的方法，減低p38MAP激酶、減少其上游激活物或下游效應(yīng)物的活性，鈍化炎癥反應(yīng)和預(yù)防或?qū)⒔M織損傷減至最低(見，如，English，J.M.and Cobb，M.H.，Trends in Pharmacol.Sci.，2340-45，2002；和Dong，C.等，Annu.Rev.Immunol.，2055-72，2002)。因此，p38活性的抑制劑，也抑制過度的或無節(jié)制的細(xì)胞因子的產(chǎn)生以及可抑制多于一種單一的前炎癥性細(xì)胞因子，作為抗炎癥劑和療法可能是有用的。此外，大量與p38MAP激酶相關(guān)的炎癥反應(yīng)有關(guān)的疾病顯示，有效地治療這些病癥的方法是需要的。然而，到本申請的提交日期為止，尚沒有已經(jīng)核準(zhǔn)的已知直接抑制p38MAP激酶的酶家族的可用的藥物，而那些通過結(jié)合到細(xì)胞因子來減少或降低細(xì)胞因子水平起作用的已經(jīng)核準(zhǔn)的藥物，一般是不具有口服生物可利用性的，并且因此必須采用如注射那樣的技術(shù)給藥。
因此，治療p38和細(xì)胞因子相關(guān)的病癥的新的化合物和方法是需要的。
發(fā)明簡述總的來說，本發(fā)明涉及能夠抑制p38map激酶的化合物、在體內(nèi)或體外抑制p38map激酶的方法、治療與p38map激酶活性或細(xì)胞因子活性相關(guān)的病癥的方法。
一方面，本發(fā)明提供由式I表示的化合物，或其前藥、溶劑化物或鹽(優(yōu)選藥學(xué)上可接受的鹽) 其中X是O或S(O)m；Y是OR4或NR4R5；m是0、1或2；n是1或2；R1表示1或2個(gè)獨(dú)立選自氫、-CN、-COOH、鹵素、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、C3-C6環(huán)烷基、C3-C6環(huán)烷氧基、芳基、氨基羰基、C1-C6烷基羰基和C1-C6烷氧基羰基的取代基；Ar是芳基；R3表示1-2個(gè)獨(dú)立選自氫、鹵素、氨基、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、C3-C6環(huán)烷基、C3-C6環(huán)烷氧基、芳基、氨基羰基、C1-C6烷基羰基和C1-C6烷氧基羰基的取代基；R4和R5是各自獨(dú)立選自氫、C1-C6烷基、C3-C6環(huán)烷基、芳基和雜環(huán)基的取代基；或者R4和R5與它們連接的N原子一起，形成在環(huán)中含有3-8個(gè)原子的雜環(huán)；條件是，當(dāng)X是S(O)m，m是0，Ar是苯基，Y是NR4R5，R4是氫和R5是烷基時(shí)，此時(shí)如果R5是羥烷基，則R51)不是-CH2(CH3)2CH2OH，以及2)在相對于N原子的α碳原子上不被苯基取代(即，與N原子連接的R5的碳原子不帶有苯基)。
在式I的優(yōu)選的實(shí)施方案中，X是O或S，最優(yōu)選O。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，Ar是苯基或萘基，最優(yōu)選苯基；在優(yōu)選的實(shí)施方案中，苯基可被1-3個(gè)鹵素或三氟甲基取代基取代。最優(yōu)選的苯基是4-氟苯基。
在另外的優(yōu)選的實(shí)施方案中，Y是NR4R5，且優(yōu)選R4是氫。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，R5選自C2-C6羥烷基、C2-C6氨基烷基、羥基芳基、氨基芳基、C3-C6環(huán)烷基和雜環(huán)基，且尤其更優(yōu)選R5是含氮的雜環(huán)(氮雜環(huán))。
在進(jìn)一步優(yōu)選的實(shí)施方案中，R1和R3在所有的情況下各自表示H。
在其它的優(yōu)選的實(shí)施方案中，X是S(O)m，且m是0。在進(jìn)一步優(yōu)選的實(shí)施方案中，Ar是苯基或萘基，更優(yōu)選苯基；在優(yōu)選的實(shí)施方案中，苯基可被1-3個(gè)鹵素或三氟甲基取代基取代。最優(yōu)選的苯基是4-氟苯基。在另外的優(yōu)選的實(shí)施方案中，Y是NR4R5以及R4是氫；R5優(yōu)選是C2-C6羥烷基、C2-C6氨基烷基、羥基芳基、氨基芳基，或是環(huán)中有3-8個(gè)原子、其中1-3個(gè)原子是氮的含氮雜環(huán)。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，R1和R3兩者在所有的情況下都為氫。
另一方面，本發(fā)明提供了包含一種或多種式I化合物與藥學(xué)上可接受的載體的藥用組合物。
再一方面，本發(fā)明提供了治療與p38相關(guān)的病癥的方法。所述方法包括給予哺乳動(dòng)物有效量的式I化合物，以治療與p38相關(guān)的病癥。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，與p38相關(guān)的病癥是類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、骨關(guān)節(jié)炎或痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎(更優(yōu)選類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎)；節(jié)段性回腸炎、潰瘍性結(jié)腸炎、炎性腸道疾病或銀屑?。换蛟鲋承约膊?、自身免疫性疾病或炎性疾病。
又一方面，本發(fā)明提供了治療與細(xì)胞因子活性相關(guān)的病癥的方法。所述方法包括給予需要治療的患者有效量的式I化合物，以治療與變化的細(xì)胞因子活性相關(guān)的病癥。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，與p38相關(guān)的病癥是類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、骨關(guān)節(jié)炎或痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎；節(jié)段性回腸炎、潰瘍性結(jié)腸炎、炎性腸道疾病或銀屑病；或增殖性疾病、自身免疫性疾病或炎性疾病。
另一方面，本發(fā)明提供了治療與p38的具體同工型(如p38α、p38β、p38γ或p38δ，或其任何組合，且最優(yōu)選p38α)相關(guān)的病癥的方法。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，與p38相關(guān)的病癥是類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、骨關(guān)節(jié)炎或痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎；節(jié)段性回腸炎、潰瘍性結(jié)腸炎、炎性腸道疾病或銀屑病；或增殖性疾病、自身免疫性疾病或炎性疾病。
另一方面，本發(fā)明提供了治療與p38、其它激酶、或p38和其它激酶相關(guān)或由它們介導(dǎo)的病癥的方法。
另一方面，本發(fā)明提供了治療與一種或多種細(xì)胞因子相關(guān)的病癥的方法，其中所述細(xì)胞因子優(yōu)選選自，但不限于IL-1、IL-6、IL-8和TNFα。一般來說，本方法包括給予哺乳動(dòng)物(例如，需要這種治療的哺乳動(dòng)物)有效量的式I化合物，以治療該哺乳動(dòng)物。優(yōu)選的哺乳動(dòng)物患者為人。
另一方面，本發(fā)明提供了在體外或體內(nèi)抑制細(xì)胞內(nèi)p38活性的方法。一般來說，所述方法包括，在所述細(xì)胞中的p38活性被抑制的條件下，將含有p38的細(xì)胞與抑制p38的有效量的式I化合物接觸。
另一方面，本發(fā)明提供了測定細(xì)胞或組織樣本中p38蛋白的存在、位置或數(shù)量或其任何組合的方法。所述方法包括a)在式I化合物能夠與p38蛋白結(jié)合的條件下，將所述細(xì)胞或組織樣本與式I化合物接觸；和b)測定式I化合物在該細(xì)胞或組織樣本中的存在、位置或數(shù)量或其任何組合，從而測定在細(xì)胞或組織樣本中p38蛋白的存在、位置或數(shù)量或其任何組合。
在本發(fā)明的治療方法的某些實(shí)施方案中，一種或多種式I化合物可與另一種藥劑如另一種藥物活性劑聯(lián)合用于本發(fā)明的方法中。
還一方面，本發(fā)明提供了由式II表示的化合物 其中R1選自氫、-CN、-COOH、鹵素、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、C3-C6環(huán)烷基、C3-C6環(huán)烷氧基、芳基、氨基羰基、C1-C6烷基羰基和C1-C6烷氧基羰基的基團(tuán)；以及Ar是芳基。式II化合物尤其用于合成式I的咪唑并噁唑和咪唑并噻唑化合物。在優(yōu)選的式II的實(shí)施方案中，Ar是苯基或萘基，最優(yōu)選苯基；在某些優(yōu)選的實(shí)施方案中，苯基被1-3個(gè)鹵素、三氟甲基或C1-C6烷氧基取代基所取代。最優(yōu)選的苯基是4-氟苯基。在進(jìn)一步優(yōu)選的實(shí)施方案中，R1是H。
再一方面，本發(fā)明提供了式III化合物或其鹽 其中X是O或S(O)m；m和n分別獨(dú)立為0、1或2；p是1或2；R1是獨(dú)立選自氫、-CN、-COOH、鹵素、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、C3-C6環(huán)烷基、C3-C6環(huán)烷氧基、芳基、氨基羰基、C1-C6烷基羰基和C1-C6烷氧基羰基的基團(tuán)；Ar是芳基；R3是獨(dú)立選自氫、鹵素、氨基、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、C3-C6環(huán)烷基、C3-C6環(huán)烷氧基、芳基、氨基羰基、C1-C6烷基羰基和C1-C6烷氧基羰基的基團(tuán)；以及L是C1-C6烷基或芳基。在式III的優(yōu)選的實(shí)施方案中，X是O或S，最優(yōu)選O。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，Ar是苯基或萘基，最優(yōu)選苯基；在某些優(yōu)選的實(shí)施方案中，苯基被1-3個(gè)鹵素、三氟甲基或C1-C6烷氧基取代基所取代。最優(yōu)選的苯基是4-氟苯基。在進(jìn)一步優(yōu)選的實(shí)施方案中，R1和R3在所有的情況下各自表示H。式III化合物用于例如制備如本文所述的式I化合物。
在另一方面，本發(fā)明提供了制備式III化合物的方法。所述方法包括在金屬催化劑的存在下和在形成式III化合物的條件下，使由式IV表示的化合物或其鹽 其中X是O或S(O)m；m是0、1或2；n是1或2；R1是獨(dú)立選自氫、-CN、-COOH、鹵素、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、C3-C6環(huán)烷基、C3-C6環(huán)烷氧基、芳基、氨基羰基、C1-C6烷基羰基和C1-C6烷氧基羰基的基團(tuán)；以及Ar是芳基，與由式V表示的化合物或其鹽反應(yīng) 其中
Z選自鹵素、三氟甲磺酸酯、甲磺酸酯或另一個(gè)合適的基團(tuán)；p是1或2；R3是獨(dú)立選自氫、鹵素、氨基、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、C3-C6環(huán)烷基、C3-C6環(huán)烷氧基、芳基、氨基羰基、C1-C6烷基羰基和C1-C6烷氧基羰基的基團(tuán)；Y是S(O)nL；n是0、1或2；以及L是C1-C6烷基；由此制備式III化合物。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，在式IV化合物中，X是O或S，最優(yōu)選O。在某些優(yōu)選的實(shí)施方案中，在式IV化合物中，Ar是苯基或萘基，最優(yōu)選苯基；在某些優(yōu)選的實(shí)施方案中，苯基被1-3個(gè)鹵素、三氟甲基或C1-C6烷氧基取代基所取代；最優(yōu)選的苯基是4-氟苯基。在進(jìn)一步優(yōu)選的實(shí)施方案中，在式IV或式V化合物中，R1和R3在所有的情況下各自表示H。
本發(fā)明包括制備式I化合物或其鹽的方法，所述方法包括使其中n是2的式III化合物與式HOR4或HNR4R5的親核試劑(其中R4和R5具有在式I中描述的含義)或其共軛堿在-S(O)n基團(tuán)被置換的條件下反應(yīng)，生成式I化合物或其鹽。
通過本文的描述，本發(fā)明的這些和其它部分以及優(yōu)點(diǎn)是顯而易見的。
圖的描述

圖1說明一種制備式I的咪唑并噁唑化合物的方法。
圖2說明一種制備式I的咪唑并噻唑化合物的方法。
圖3說明用化合物L(fēng)XXXVII治療的大鼠的踝直徑的平均增加。
圖4說明用化合物L(fēng)XXXIV治療的大鼠的踝直徑的平均增加。
圖5說明用化合物CXIX治療的大鼠的踝直徑的平均增加。
圖6說明用化合物CCLXXXI治療的大鼠的踝直徑的平均增加。
圖7說明用化合物CCLXXVIII治療的大鼠的踝直徑的平均增加。
圖8說明用化合物CCLXXIX治療的大鼠的踝直徑的平均增加。
圖9說明用化合物CCLXXX治療的大鼠的踝直徑的平均增加。
發(fā)明詳述本發(fā)明提供了化合物、藥用組合物和用于治療人和獸的與p38或細(xì)胞因子活性相關(guān)或者與p38或細(xì)胞因子有關(guān)的病癥的方法。
定義術(shù)語“烷基”指的是含有碳和氫的(飽和)基團(tuán)。烷基可能是直鏈或支鏈的。典型的烷基包括，但不限于甲基、乙基、丙基、異丙基、己基、叔丁基、仲丁基等。C1-C6烷基是在其直鏈或支鏈烷基主鏈上有從1到6個(gè)碳原子的烷基。烷基可任選被以下的一個(gè)或多個(gè)部分所取代例如羥基、羧酸根、氧代、鹵素、巰基、氰基、硝基、氨基、-NR12R13、C1-C6烷硫基、芳硫基、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、芳氧基、烷基羰基氧基、芳基羰基氧基、C3-C6環(huán)烷基、C3-C6環(huán)烷氧基、C2-C6鏈烯基、C2-C6炔基、芳基、氨基羰基、C1-C6烷基羰基、C3-C6環(huán)烷基羰基、雜環(huán)基羰基、芳基羰基、芳氧基羰基、C1-C6烷氧基羰基、C3-C6環(huán)烷氧基羰基、雜環(huán)氧基羰基、C1-C6烷基磺?；?、芳基磺?；?、雜環(huán)基等。
“環(huán)烷基”指的是在環(huán)部分含有從3到7個(gè)碳原子的環(huán)的環(huán)狀烷基。環(huán)烷基可被對烷基所述的一個(gè)或多個(gè)部分所取代。
術(shù)語“鏈烯基”指的是至少有1個(gè)碳-碳雙鍵的烴基。C2-C6鏈烯基是在其直鏈或支鏈的鏈烯基主鏈上有從2到6個(gè)碳原子的鏈烯基。典型鏈烯基包括，但不限于乙烯基、丙烯基、2-丁烯基等。鏈烯基可被如用于描述烷基的一個(gè)或多個(gè)部分所取代。
在此使用的術(shù)語“炔基”，指的是至少有1個(gè)碳-碳三鍵的烴基。C2-C6炔基是在其直鏈或支鏈的炔基主鏈上有從2到6個(gè)碳原子的炔基。典型炔基部分包括丙炔基、己炔基等。炔基可被如用于描述烷基的一個(gè)或多個(gè)部分所取代。
術(shù)語“芳基”指的是芳香碳環(huán)的或雜芳族部分，含有1、2或3個(gè)環(huán)。芳基可以是碳環(huán)的或在芳環(huán)中可任選含有1-4個(gè)雜原子(例如氮、硫或氧)。典型的芳基包括，但不限于苯基、萘基、吡啶基、嘧啶基、三唑基(triazyl)、喹唑啉基、噻唑基、苯并噻吩基、呋喃基、咪唑基等。芳基任選可被以下的一個(gè)或多個(gè)取代基所取代例如羥基、鹵素、巰基、氰基、硝基、氨基、-NR12R13、C1-C6烷硫基、芳硫基、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、芳氧基、烷基羰基氧基、芳基羰基氧基、C3-C6環(huán)烷基、C3-C6環(huán)烷氧基、C2-C6鏈烯基、C2-C6炔基、芳基、羧酸根、氨基羰基、C1-C6烷基羰基、C3-C6環(huán)烷基羰基、雜環(huán)基羰基、芳基羰基、芳氧基羰基、C1-C6烷氧基羰基、C3-C6環(huán)烷氧基羰基、雜環(huán)氧基羰基、芳氧基羰基、C1-C6烷氧基羰基、C1-C6烷基磺?；?、芳基磺?；?、雜環(huán)基等。
術(shù)語“雜環(huán)基”或“雜環(huán)”指的是穩(wěn)定的非芳族飽和或不飽和3-7元單環(huán)雜環(huán)或8-11元雙環(huán)雜環(huán)，且可以被稠合、螺環(huán)連接或橋接以形成另外的環(huán)。每一個(gè)雜環(huán)包含一個(gè)或多個(gè)碳原子和從1到4個(gè)選自氮、氧或硫的雜原子。雜環(huán)基可能連接于任何橋環(huán)碳上而導(dǎo)致產(chǎn)生穩(wěn)定的結(jié)構(gòu)。優(yōu)選的雜環(huán)包括3-7元單環(huán)雜環(huán)(更優(yōu)選5-7元單環(huán)雜環(huán))和8-10元雙環(huán)雜環(huán)。所述這些基團(tuán)的實(shí)例包括哌啶基、吡喃基、哌嗪基、嗎啉基、硫嗎啉基、硫嗎啉基、砜、氧代哌啶基、氧代吡咯烷基、氧氮雜_基、氮雜_基、異噁唑基、四氫吡喃基、四氫呋喃基、間二氧雜環(huán)戊烯基、二氧芑基、氧雜硫醇基(oxathiolyl)、苯并二氧雜環(huán)戊烯基、二硫雜環(huán)戊二烯基、噻吩基、四氫噻吩基、四氫噻吩砜基、二氧六環(huán)基、二氧戊環(huán)基、四氫呋喃并二氫呋喃基、四氫吡喃并二氫呋喃基、二氫吡喃基、四氫呋喃并呋喃基和四氫吡喃并呋喃基。盡管橋環(huán)氧可以不被取代，雜環(huán)可任選被一個(gè)或多個(gè)如上對烷基所述的取代基所取代，且橋環(huán)氮原子可能被氫、C1-C6烷基、C3-C6環(huán)烷基、C2-C6鏈烯基、C2-C6炔基、芳基、氨基羰基、C1-C6烷基羰基、芳基羰基、芳氧基羰基、C1-C6烷氧基羰基、C1-C6烷基磺?；?、芳基磺?；螂s環(huán)基所取代。在此使用的“氮雜環(huán)”，指的是如上所述的橋環(huán)含氮雜環(huán)。優(yōu)選的氮雜環(huán)包括(不限于)取代的或未被取代的吡咯烷基、哌啶基、哌嗪基、嗎啉代、氮雜_基、奎寧環(huán)基(1-氮雜雙環(huán)[2.2.2]辛基)和托烷基(8-甲基-8-氮雜雙環(huán)[3.2.1]辛基)。
術(shù)語“鹵素”是指選自氟、氯、溴和碘的原子。
在此使用的術(shù)語“氨基”，指的是由式-NR10R11表示的部分，其中R10和R11分別獨(dú)立選自氫、C1-C6烷基、C3-C6環(huán)烷基、芳基和雜環(huán)基部分；或R10和R11與它們二者連接的氮原子一起形成3-8元雜環(huán)(如以上對雜環(huán)基部分所述，可以稠合或橋接)。優(yōu)選的氨基包括-NH2、一烷基氨基(-NHC1-C6烷基)、二烷基氨基(-N(C1-C6烷基)2)、一芳基氨基(-NH-芳基)、芳基烷基氨基(-N(芳基)(C1-C6烷基))等。
R12選自氫、C1-C6烷基和芳基。R13選自-C(O)-C1-C6烷基、-C(O)-C3-C6環(huán)烷基、-C(O)-芳基、-C(O)-雜環(huán)基、-C(O)O-C1-C6烷基、-C(O)O-C3-C6環(huán)烷基、-C(O)O-芳基、-C(O)O-雜環(huán)基、-C(O)-氨基、-SO2-C1-C6烷基、-SO2-C3-C6環(huán)烷基-SO2-芳基和-SO2-雜環(huán)基。
除非另有特別所指，任何氮原子的N-氧化物形式包括在本發(fā)明的化合物和方法之中。
I.本發(fā)明的化合物一方面，本發(fā)明提供由式I表示的化合物，或其鹽(優(yōu)選藥學(xué)上可接受的鹽) 其中
X是O或S(O)m；Y是OR4或NR4R5；m是0、1或2；n是1或2；R1是獨(dú)立選自氫、-CN、-COOH、鹵素、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、C3-C6環(huán)烷基、C3-C6環(huán)烷氧基、芳基、氨基羰基、C1-C6烷基羰基和C1-C6烷氧基羰基的基團(tuán)；Ar是芳基；R3是獨(dú)立選自氫、鹵素、氨基、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、C3-C6環(huán)烷基、C3-C6環(huán)烷氧基、芳基、氨基羰基、C1-C6烷基羰基和C1-C6烷氧基羰基的基團(tuán)；R4和R5各自獨(dú)立選自氫、C1-C6烷基、C3-C6環(huán)烷基、芳基和雜環(huán)基；或者R4和R5與它們連接的N原子一起形成在環(huán)中含有3-8個(gè)原子的雜環(huán)；條件是當(dāng)X是S(O)m、m是0、Ar是苯基、Y是NR4R5、R4是氫和R5是烷基時(shí)，此時(shí)如果R5是羥烷基，則R51)不是-CH2(CH3)2CH2OH，以及2)在相對于N原子的α碳原子上不被苯基取代(即，與NR4R5的N原子連接的R5的碳原子不帶有苯基)。
在式I的優(yōu)選的實(shí)施方案中，X是O或S，最優(yōu)選O。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，Ar是苯基或萘基，最優(yōu)選苯基；在優(yōu)選的實(shí)施方案中，苯基可被1-3個(gè)鹵素或三氟甲基取代基取代。最優(yōu)選的苯基是4-氟苯基。
在另外的優(yōu)選的實(shí)施方案中，Y是NR4R5，且優(yōu)選R4是氫。在某些優(yōu)選的實(shí)施方案中，R5選自C2-C6羥烷基、C2-C6氨基烷基、羥基芳基、氨基芳基、C3-C6環(huán)烷基和雜環(huán)基，且更優(yōu)選R5是C2-C6羥烷基或含氮雜環(huán)(氮雜環(huán))，更優(yōu)選奎寧環(huán)-3-基。
在進(jìn)一步優(yōu)選的實(shí)施方案中，R1和R3在所有的情況下各自表示H。
在其它的優(yōu)選的實(shí)施方案中，X是S(O)m、并且m是0。在進(jìn)一步優(yōu)選的實(shí)施方案中，Ar是苯基或萘基，更優(yōu)選苯基；在優(yōu)選的實(shí)施方案中，苯基可被1-3個(gè)鹵素或三氟甲基取代基取代。最優(yōu)選的苯基是4-氟苯基。在另外的優(yōu)選的實(shí)施方案中，Y是NR4R5以及R4是氫；R5優(yōu)選是C2-C6羥烷基、C2-C6氨基烷基、羥基芳基、氨基芳基，或是環(huán)中有3-8個(gè)原子、其中1-3個(gè)原子是氮的含氮雜環(huán)。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，R1和R3兩者在所有的情況下都為氫。
式I化合物還可包括示蹤物、標(biāo)記物或標(biāo)簽物部分，如放射性同位元素(如同氚、碳-14或硫-35)，熒光標(biāo)記等，此為本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員所知曉。這樣的標(biāo)記化合物可用于在細(xì)胞中或組織類型中探測或確定p38的存在的方法中。
在優(yōu)選的實(shí)施方案中，式I化合物經(jīng)挑選保存該化合物想要的活性(例如，抑制細(xì)胞因子活性，包括抑制TNFα活性和IL-1活性，或抑制p38活性)。從而，式I化合物的取代基(R1、R3、R4、Y等)應(yīng)該經(jīng)挑選保存這樣的活性。可用體內(nèi)和體外的測定法如在本說明書中的其它地方描述的測定法確定活性的保存。
例如，像在此所描述的那樣，優(yōu)選的式I化合物包括其中基團(tuán)Ar是苯基或萘基，更優(yōu)選被至少一個(gè)鹵素部分、優(yōu)選氟原子所取代的苯基或萘基的化合物，更優(yōu)選位于它所連接的苯環(huán)的4-位上(相對于苯環(huán)對咪唑并噁唑或咪唑并噻唑部分的連接點(diǎn))。
在某些優(yōu)選實(shí)施方案中，式I化合物中，R3是氫。
在式I化合物的優(yōu)選實(shí)施方案中，Y是-OR4或-NR4R5，更優(yōu)選為-NR4R5。在優(yōu)選實(shí)施方案中，-NR4R5表示-NH-羥基烷基或-NH-雜環(huán)基，其中雜環(huán)基部分是環(huán)系中有3-8個(gè)原子、其中1-3個(gè)原子是氮原子的含氮雜環(huán)。
在式I化合物的其它的實(shí)施方案中，Y是-NHR7，且R7選自-C(O)-烷基、-C(O)-芳基、-C(O)O-烷基、-C(O)O-芳基、-C(O)-NR8R9、-S(O)2-烷基和-S(O)2-芳基，其中R8和R9各自獨(dú)立選自氫、烷基和芳基。
一般地，在此描述的結(jié)構(gòu)意味著包括結(jié)構(gòu)的所有立體化學(xué)形式，即每個(gè)不對稱中心的R和S構(gòu)型，除非特別指出某個(gè)具體的立體化學(xué)。因此，本化合物的單一的立體化學(xué)異構(gòu)體(即，充分純的對映異構(gòu)體和非對映異構(gòu)體)以及對映異構(gòu)體和非對映異構(gòu)體的混合物，如外消旋混合物，包括在本發(fā)明的范圍中。而且，除非另有說明，所有的幾何異構(gòu)體，如在雙鍵的E-和Z-構(gòu)型，包括在本發(fā)明的范圍中。本發(fā)明的某些化合物可以互變異構(gòu)體的形式存在。除非另有說明，本化合物的所有這些互變異構(gòu)體形式被考慮包括在本發(fā)明的范圍中。
本發(fā)明還包括為活性化合物的前藥的化合物。一般地，前藥是在體內(nèi)代謝(例如，通過例如脫氨基作用、脫烷作用、脫酯化作用等的代謝轉(zhuǎn)化)后產(chǎn)生活性化合物的化合物?！八帉W(xué)上可接受的前藥”指的是，在合理的醫(yī)學(xué)判斷的范圍內(nèi)，在患者身上無不適當(dāng)?shù)亩拘?、刺激、過敏反應(yīng)等，以及對想要的應(yīng)用是有效的適合于藥學(xué)用途的化合物，可能的情況下，包括本發(fā)明化合物的藥學(xué)上可接受的酯以及兩性離子的形式。由本發(fā)明所計(jì)劃的藥學(xué)上可接受的前藥類型的實(shí)例在T.Higuchi和V.Stella，Pro-drugs as Novel Delivery Systems，Vol.14 of the A.C.S.Symposium Series，以及在Edward B.Roche，編輯，Bioreversible Carriers in Drug Design，American PharmaceuticalAssociation and Pergamon Press，1987中有描述，以上兩篇文獻(xiàn)通過引用結(jié)合到本文中。
本發(fā)明化合物和組合物還可包括代謝物。在此使用的術(shù)語“代謝物”指的是本發(fā)明化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽、類似物或衍生物的代謝產(chǎn)物，所述的代謝產(chǎn)物在體內(nèi)或體外表現(xiàn)出與本發(fā)明化合物相似的活性。
本發(fā)明化合物和組合物還可包括水合物和溶劑化物。在此使用的術(shù)語“溶劑化物”指的是由溶質(zhì)(在本發(fā)明中，式I化合物和溶劑)形成的復(fù)合物。為了本發(fā)明所用的這些溶劑優(yōu)選應(yīng)該不影響溶質(zhì)的生物學(xué)活性。作為實(shí)例，溶劑可以是水、乙醇或乙酸。
II.用于制備本發(fā)明化合物的方法和中間體可用各種方法制備本發(fā)明化合物，其中一些是本領(lǐng)域已知的。例如，合成嘧啶基取代的咪唑并噻唑的方法在PCT專利公開號(hào)WO03/00682中已有描述。一般地，從商業(yè)上可得的文獻(xiàn)中已知的起始原料、化合物，或者從現(xiàn)成的中間體，通過采用本領(lǐng)域人員已知的標(biāo)準(zhǔn)的合成方法和程序，或依照此處所教的對專業(yè)技術(shù)人員將是顯而易見的方法，可制備本發(fā)明化合物。用于制備有機(jī)分子和官能團(tuán)轉(zhuǎn)化和處理的標(biāo)準(zhǔn)的合成方法和程序可從相關(guān)的科學(xué)文獻(xiàn)中或本領(lǐng)域的標(biāo)準(zhǔn)教科書中得到。盡管不限于任何一種或多種資源，但是經(jīng)典的文本如Smith，M.B.；March，J.March′s Advanced OrganicChemistryReactions，Mechanisms，and Structure，第5版；John Wiley和SonsNew York，2001；以及Greene，T.W.；Wuts，P.G.M.ProtectiveGroups in Organic Synthesis，第3冊；John Wiley和SonsNew York，1999是有用的和本領(lǐng)域?qū)I(yè)技術(shù)人員已知的有機(jī)合成方面公認(rèn)的參考教材。以下合成方法的描述計(jì)劃是為了闡明，并不是限制用于制備本發(fā)明化合物的普通的程序。
在實(shí)施方案中，本發(fā)明包括中間體化合物。例如，本發(fā)明提供了由式II表示的新的化合物及其鹽 其中R1選自氫、-CN、-COOH、鹵素、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基；C3-C6環(huán)烷基、C3-C6環(huán)烷氧基、芳基、氨基羰基、C1-C6烷基羰基和C1-C6烷氧基羰基的基團(tuán)；以及Ar是芳基。與專業(yè)技術(shù)人員將認(rèn)可從此處所述的一樣，式II化合物特別用于合成式I的咪唑并噁唑化合物。例如，如在圖1中所示，式II化合物，諸如4，可在Heck反應(yīng)條件下與適當(dāng)?shù)柠u代嘧啶化合物(諸如5)反應(yīng)，通常使用鈀催化劑(諸如Pd(OAc)2)，生成式I化合物或這些化合物的前體。在式II化合物優(yōu)選的實(shí)施方案中，Ar是苯基或萘基，最優(yōu)選苯基；在某些優(yōu)選的實(shí)施方案中，苯基被如1-3個(gè)鹵素、三氟甲基或C1-C6烷氧基的取代基所取代。在某些優(yōu)選的實(shí)施方案中，苯基選自未被取代的苯基、4-氟苯基、3-甲氧基苯基、4-甲氧基苯基、3，4-二氟苯基、4-甲基苯基、4-溴苯基、3-氟苯基和4-三氟甲基苯基。最優(yōu)選的苯基是4-氟苯基。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，R1是H。在最優(yōu)選的實(shí)施方案中，R1是H并且Ar是4-氟苯基。
另一方面，本發(fā)明提供由式III表示的化合物或其鹽 其中X是O或S(O)m；m和n分別獨(dú)立為0、1或2；p是1或2；R1獨(dú)立選自氫、-CN、-COOH、鹵素、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基；C3-C6環(huán)烷基、C3-C6環(huán)烷氧基、芳基、氨基羰基、C1-C6烷基羰基和C1-C6烷氧基羰基；Ar是芳基；R3獨(dú)立選自氫、鹵素、氨基、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、C3-C6環(huán)烷基、C3-C6環(huán)烷氧基、芳基、氨基羰基、C1-C6烷基羰基和C1-C6烷氧基羰基；以及L是C1-C6烷基或芳基。式III化合物是有用的，例如，如在此所描述的，用于制備另外的式I化合物。例如，n是2的基團(tuán)S(O)nL一般是適合被本領(lǐng)域已知的包括氧和氮親核試劑的親核試劑置換的離去基團(tuán)。對于n是0或1的式III化合物，可完成硫代烷基硫原子的氧化，優(yōu)選使用精選的方法，生成適合于親核置換的化合物。如在此處所描述，OxoneTM(過硫酸氫鉀制劑TM)是為達(dá)此目的的優(yōu)選的氧化劑。式III化合物的鹽的形式可包括諸如那些在下面描述的藥學(xué)上可接受的鹽。
采用在此描述的方法，或其它普通的專業(yè)技術(shù)人員將會(huì)明白的方法可制備式III化合物。例如，如在此所描述的，在Heck條件下，通過使式II化合物與4-鹵代-2-烷硫基嘧啶反應(yīng)可制備式III化合物。用于Heck反應(yīng)的金屬催化劑典型為如Pd(OAc)2的鈀催化劑。優(yōu)選地，諸如三苯膦的添加劑或諸如碳酸銫的堿可用于促進(jìn)反應(yīng)。
在式III化合物與分子式HOR4或HNR4R5的親核試劑的反應(yīng)中，在充當(dāng)質(zhì)子海綿(proton sponge)的堿的存在下，反應(yīng)通常便利地完成；當(dāng)胺親核試劑被用作置換式III化合物的砜的部分時(shí)，諸如Hunig′s堿的位阻胺堿對于此目的是有用的。諸如2，6-二甲基吡啶的其它的位阻胺堿對于此目的也是有用的。如果氧親核試劑被用于置換反應(yīng)，則可使用諸如碳酸鉀(見，如在下文的實(shí)施例3中)的其它堿。
在實(shí)施方案中，本發(fā)明提供制備式III化合物的方法。所述方法包括在金屬催化劑的存在下和在能形成式III化合物的條件下，使由式IV表示的化合物或其鹽 其中X是O或S(O)m；m是0、1或2式；n是1或2；R1獨(dú)立選自氫、-CN、-COOH、鹵素、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基；C3-C6環(huán)烷基、C3-C6環(huán)烷氧基、芳基、氨基羰基、C1-C6烷基羰基和C1-C6烷氧基羰基；以及Ar是芳基，
與由式V表示的化合物或其鹽反應(yīng) 其中Z選自鹵素、三氟甲磺酸酯、甲磺酸酯或其它合適的基團(tuán)的基團(tuán)；p是1或2；R3獨(dú)立選自氫、鹵素、氨基、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、C3-C6環(huán)烷基、C3-C6環(huán)烷氧基、芳基、氨基羰基、C1-C6烷基羰基和C1-C6烷氧基羰基；Y是S(O)nL；n是0、1或2；以及L是C1-C6烷基，制備式III化合物。式IV化合物可由如在此描述的那樣制備(例如，如在圖1和2所示以及在實(shí)施例1和2中描述)，或者可依照已知的或按在此處所述的對于專業(yè)技術(shù)人員將是顯而易見的方法制備。在式IV化合物的優(yōu)選的實(shí)施方案中，X是O；Ar是苯基或萘基，最優(yōu)選苯基；在某些優(yōu)選的實(shí)施方案中，苯基被例如1-3個(gè)鹵素、三氟甲基或C1-C6烷氧基取代基所取代。在某些優(yōu)選的實(shí)施方案中，苯基選自未被取代的苯基、4-氟苯基、3-甲氧基苯基、4-甲氧基苯基、3，4-二氟苯基、4-甲基苯基、4-溴苯基、3-氟苯基和4-三氟甲基苯基。最優(yōu)選的苯基是4-氟苯基。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，R1在所有的情況下都是H。在最優(yōu)選的實(shí)施方案中，X是O，R1是H和Ar是4-氟苯基。式V化合物已在文獻(xiàn)中被報(bào)道(如，4-碘代-2-甲硫基嘧啶；見，如，PCT公開號(hào)WO 02/04447(2002))。另外的式V化合物可由專業(yè)技術(shù)人員依照在此處所述的方法，采用僅僅是常規(guī)的實(shí)驗(yàn)制備。
用于制備本發(fā)明的咪唑并噁唑化合物的方法在下面的實(shí)施例中描述和在圖1中說明。在圖1、步驟a中，適合的取代的α-鹵代酮1(其中Ar是芳基部分)與任選被取代的2-氨基噁唑2反應(yīng)。該反應(yīng)典型地于室溫下在諸如乙腈或類似的惰性有機(jī)溶劑中進(jìn)行。如固體溴化氫鹽的產(chǎn)物3典型地通過過濾從反應(yīng)混合物中分離。如在圖1、步驟b中所指出的，通過向步驟a的產(chǎn)物中加入諸如四氯化鈦的脫水劑，使化合物3環(huán)化，得到咪唑并噁唑化合物4。隨著對最后反應(yīng)混合物作適當(dāng)?shù)膒H修正，該反應(yīng)得到4。如圖1的步驟c所示，最常見是在鈀催化劑的實(shí)施下，使4與適當(dāng)取代的嘧啶5偶合得到化合物6。適合于Heck型反應(yīng)的鈀催化劑一般是優(yōu)選的。該反應(yīng)典型地于升高的溫度下，在最便利為二甲基甲酰胺的無水溶劑中進(jìn)行。雖然可使用其它的4-碘代-嘧啶，但優(yōu)選的嘧啶試劑是4-碘代-2-硫代甲基嘧啶。因?yàn)榛衔?和5生成6的Heck型反應(yīng)不總是能進(jìn)行至完成，所以通過在后面的階段分離(優(yōu)選回收和再循環(huán))未反應(yīng)的起始原料4可與4和6的混合物一起被帶入到下一步驟。
用在文獻(xiàn)中已知的多種標(biāo)準(zhǔn)氧化劑可進(jìn)行氧化步驟d(圖1)。一種優(yōu)選的方法是于室溫下使用OxoneTM水溶液。在步驟e中，用氧或氮親核試劑置換7的砜離去基團(tuán)生成另外的本發(fā)明化合物8(其中Y是在式I中定義的基團(tuán))，可依靠新產(chǎn)生的鍵的性質(zhì)使用許多標(biāo)準(zhǔn)的反應(yīng)過程進(jìn)行。至于胺親核試劑，例如，一種優(yōu)選的方法是伴隨振搖下，在升高的溫度下，使伯胺或仲胺的鹽在二甲亞砜(DMSO)溶液中與諸如二異丙基乙胺的位阻有機(jī)堿進(jìn)行反應(yīng)。另一種優(yōu)選的方法是伴隨振搖或攪拌下，于熱的二甲亞砜中使用過量的胺游離堿。然后，可使用標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)分離和純化化合物8。如果需要，可對化合物8進(jìn)行進(jìn)一步官能基化(functionalization)。例如，可進(jìn)行對本領(lǐng)域普通專業(yè)人員來說是常規(guī)的去保護(hù)而得到未保護(hù)的化合物(例如，如使保護(hù)基團(tuán)如叔丁氧基羰基可從保護(hù)的胺除去，生成未保護(hù)的胺)。作為備選，酰胺化合物或磺胺化合物的形成可通過使伯胺或仲胺(見，例如，從化合物CCLXXX制備的表1中的化合物CCLXXVIII和CCLXXIX)?；梢詫?shí)現(xiàn)。
用于制備本發(fā)明的咪唑并噻唑化合物的類似的方法示于圖2中。
如在圖2步驟a中所示，適合取代的α-鹵代酮9(其中Ar是芳基部分)與任選被取代的2-氨基噻唑10反應(yīng)得到稠合的雜環(huán)11。該反應(yīng)典型地在諸如乙醇等的惰性溶劑中，任選于升高的溫度下進(jìn)行。如在步驟b中描述，由11與適合取代的嘧啶5偶合生成12最通常由鈀催化劑促成。所述反應(yīng)典型地于升高的溫度下，在最優(yōu)選二甲基甲酰胺的無水溶劑中進(jìn)行。盡管可使用其它鹵代嘧啶，但優(yōu)選的嘧啶試劑是4-碘代-2-硫代甲基嘧啶。在步驟c中，12的硫代甲基可被氧化生成適合于步驟d中置換反應(yīng)的砜基。氧化步驟c可采用文獻(xiàn)中已知的許多標(biāo)準(zhǔn)的氧化劑來施行。優(yōu)選的方法是于室溫下使用OxoneTM的水溶液，后者的優(yōu)點(diǎn)是對咪唑并噻唑的硫原子不產(chǎn)生過度氧化。在步驟d中以氧或氮親核試劑置換13的離去基團(tuán)，得到本發(fā)明另外的化合物14(其中Y是如在式I中定義的基團(tuán))，此可采用許多依靠所生成的新鍵的性質(zhì)的標(biāo)準(zhǔn)方法進(jìn)行。至于胺親核試劑，例如，一種優(yōu)選的方法是在與諸如二異丙基乙胺的位阻有機(jī)堿一起的二甲亞砜溶液中，于升高的溫度并伴隨振搖下，實(shí)施13與伯或仲胺的鹽的反應(yīng)。另一種優(yōu)選的方法是在伴隨振搖或攪拌下，使用在熱的二甲亞砜中的過量的胺游離堿。如上所述，如果需要，隨后可進(jìn)行產(chǎn)物14的進(jìn)一步官能基化。
III.本發(fā)明的治療和診斷方法在另一方面，本發(fā)明提供了治療與p38或一種或多種細(xì)胞因子相關(guān)(如，直接或間接由之介導(dǎo))的病癥的方法。例如，在優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述方法包括給予需要治療的對象(如，有此治療需要的哺乳動(dòng)物)以有效治療量或預(yù)防量的本發(fā)明化合物。本發(fā)明化合物優(yōu)選為式I化合物。作為備選，所述化合物可為式II、式III、式IV或式V化合物，或其任何的組合。對象包括一種或多種的細(xì)胞或組織、或生物體。優(yōu)選的對象為哺乳動(dòng)物。所述的哺乳動(dòng)物可包括任何哺乳動(dòng)物。作為非限制性的實(shí)例，優(yōu)選的哺乳動(dòng)物包括牛、豬、綿羊、山羊、馬、駱駝、水牛、貓、狗、大鼠、小鼠和人。更優(yōu)選的哺乳動(dòng)物對象是人。
依照本發(fā)明的方法，本化合物可經(jīng)過任何本領(lǐng)域已知的藥物傳輸路徑給予對象。明確典型的給藥途徑包括經(jīng)口、眼睛、直腸、頰、局部、鼻、眼、皮下、肌肉、靜脈(大劑量注射(bolus)和輸注)、腦內(nèi)、透皮和肺的途徑。
在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了治療其中p38活性對疾病表型(phenotype)起作用的病癥的方法。所述方法包括給予有需要的患者以有效治療量或預(yù)防量的本發(fā)明化合物。此外，本發(fā)明化合物優(yōu)選為式I化合物。作為備選，所述化合物可為式II、式III、式IV或式V化合物，或其任何的組合。
術(shù)語“p38相關(guān)的病癥”指的是p38MAP激酶信號(hào)通路直接或間接地牽涉其中的疾病或其它有害的病癥。這包括，但不限于由IL-1、TNFα、IL-6或IL-8失調(diào)或過度表達(dá)引起的病癥，所述的失調(diào)或過度表達(dá)由持續(xù)的、延長的、增強(qiáng)的或提高的p38活性水平而產(chǎn)生。這樣的病癥包括，不限于炎性疾病、自身免疫性疾病、骨破壞性疾病、增殖性疾病、傳染病、神經(jīng)變性疾病、變態(tài)反應(yīng)、中風(fēng)中的再灌注/缺血、心臟病發(fā)作、血管生成紊亂、器官低氧癥、血管增生、心臟肥大、凝血酶引起的血小板聚集以及與前列腺素或環(huán)加氧酶通路相關(guān)的病癥，如涉及前列腺素內(nèi)過氧化物合酶-2的病癥。p38相關(guān)的病癥可包括任何與p38同工型相關(guān)的或由p38同工型介導(dǎo)的病癥。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，p38相關(guān)的病癥是與p38α相關(guān)的病癥。
術(shù)語“調(diào)節(jié)p38活性”指的是不論是在體外還是在體內(nèi)都增強(qiáng)或減弱p38的活性。調(diào)節(jié)p38活性優(yōu)選指的是減弱(抑制)p38的活性。在某些優(yōu)選的實(shí)施方案中，細(xì)胞中的p38活性，比較未被處理的對照細(xì)胞的p38活性，至少被抑制了20％，更優(yōu)選至少被抑制了30％、40％、50％、80％、90％、95％或99％。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，在依照本發(fā)明方法處理后，細(xì)胞(或組織)中的p38活性恢復(fù)到細(xì)胞(或組織)類型的正常的范圍。
在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了治療與一種或多種細(xì)胞因子相關(guān)的病癥的方法。所述方法包括給予需要的對象有效治療量或預(yù)防量的本發(fā)明化合物。再有，本發(fā)明化合物優(yōu)選為式I化合物。作為備選，本化合物可以是式II、式III、式IV或式V化合物，或其任何的組合。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，細(xì)胞因子中的至少一種優(yōu)選選自IL-1、IL-6、IL-8和TNFα。在更優(yōu)選的實(shí)施方案中，細(xì)胞因子選自IL-1、IL-6、IL-8和TNFα。作為非限制性的實(shí)例，所述方法包括給予需要治療的對象(如，需要這種治療的哺乳動(dòng)物)有效量的本發(fā)明化合物。所述對象可包括一種或多種的細(xì)胞或組織、或生物體。優(yōu)選的對象為哺乳動(dòng)物。哺乳動(dòng)物可包括任何哺乳動(dòng)物。作為非限制性的實(shí)例，優(yōu)選的哺乳動(dòng)物包括牛、豬、綿羊、山羊、馬、駱駝、水牛、貓、狗、大鼠、小鼠和人。更優(yōu)選的哺乳動(dòng)物對象是人。
如在此處所用的，與細(xì)胞因子活性變化相關(guān)的病癥，指的是相比較沒有患病的狀態(tài)其中細(xì)胞因子活性發(fā)生改變的病癥。這包括，但不限于由IL-1、TNFα、IL-6或IL-8產(chǎn)生過多或失調(diào)引起的病癥，所述的失調(diào)或過度表達(dá)由持續(xù)的、延長的、增強(qiáng)的或提高的可能與p38活性有關(guān)的細(xì)胞因子水平而產(chǎn)生。這樣的病癥包括，不限于炎性疾病、自身免疫性疾病、骨破壞性疾病、增殖性疾病、傳染病、神經(jīng)變性疾病、變態(tài)反應(yīng)、中風(fēng)中的再灌注/缺血、心臟病發(fā)作、血管生成紊亂、器官低氧癥、血管的增生、心臟肥大、凝血酶引起的血小板聚集以及與諸如前列腺素內(nèi)過氧化物合酶-2的環(huán)加氧酶和脂氧合酶信號(hào)通路相關(guān)的病癥。與細(xì)胞因子相關(guān)的病癥可包括任何與IL-1(具體是IL-1β)、TNFα、IL-6或IL-8，或任何其它可被p38調(diào)控的細(xì)胞因子相關(guān)的或由上述因子介導(dǎo)的病癥。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，與細(xì)胞因子相關(guān)的病癥是與TNFα相關(guān)的病癥。
在此處所用的，術(shù)語“有效治療量”和“有效預(yù)防量”，指的是足夠治療、改善或預(yù)防確定的疾病或病癥、或顯示出可檢測的治療、預(yù)防或抑制作用的本發(fā)明化合物的量。所述的這種作用可用如在下面的實(shí)施例中所披露的測定法檢測。對于某個(gè)患者的精確的有效量將取決于患者的體重、體型和健康狀況；病癥的性質(zhì)和程度；以及選用給予的治療劑或治療劑的聯(lián)合。至于特定情況的有效治療量和預(yù)防量，可由屬于臨床醫(yī)生技能和判斷的常規(guī)經(jīng)驗(yàn)決定。
對于任何化合物，有效治療量或預(yù)防量可起先在如腫瘤細(xì)胞的細(xì)胞培養(yǎng)試驗(yàn)、或通常是大鼠、小鼠、兔、狗或豬的動(dòng)物模型上評估。動(dòng)物模型還可用于確定適合的濃度范圍和給藥途徑。然后這些信息可被用于確定給予人的劑量和途徑。
治療/預(yù)防效能和毒性可通過標(biāo)準(zhǔn)的藥學(xué)方法在細(xì)胞培養(yǎng)或?qū)嶒?yàn)動(dòng)物中確定，如，ED50(在50％的群體中有效的治療劑量)和LD50(造成群體中50％致死的劑量)。治療和毒性作用的劑量比率為治療指數(shù)，可以用ED50/LD50的比率表示。顯示出大的治療指數(shù)的藥用組合物是優(yōu)選的。從細(xì)胞培養(yǎng)試驗(yàn)和動(dòng)物研究得到的數(shù)據(jù)可用于確定人用的劑量范圍。在此種組合物中包含的劑量優(yōu)選在包括少或無毒性的ED50的循環(huán)濃度的范圍內(nèi)。劑量依所用的劑型、患者的敏感性和給藥途徑不同可在此范圍內(nèi)變化。
更明確地，起初的血漿靶濃度可在從約5μg/mL到約100μg/mL，優(yōu)選從約10μg/mL到約100μg/mL，更優(yōu)選從約20μg/mL到約100μg/mL的范圍內(nèi)變動(dòng)。為了達(dá)到這樣的血漿濃度，依給藥途徑的不同，可給予本發(fā)明化合物從0.1μg到100,000mg不等的劑量。文獻(xiàn)中提供了關(guān)于詳細(xì)劑量和傳輸方法的指導(dǎo)，且一般為本領(lǐng)域醫(yī)師所用。通常，以單次的、分次的或連續(xù)的劑量，對于體重從約40kg至約100kg的患者(對于如果高于或低于這個(gè)體重范圍的患者，特別是低于40kg的兒童，劑量可進(jìn)行調(diào)整)來說，劑量將在從約1mg/天到約10g/天，或從約0.1g/天到約3g/天，或從約0.3g/天到約3g/天，或從約0.5g/天到約2g/天的范圍內(nèi)。
精確的劑量將由醫(yī)師依照涉及需要治療的對象的因素決定。為了提供足夠水平的活性藥劑或維持想要的效果，調(diào)整劑量和給藥方法?？杉{入考慮的因素包括疾病狀態(tài)的嚴(yán)重程度、患者的全身健康狀況、患者的年齡、體重和性別、飲食、給藥的時(shí)間和頻率、聯(lián)合用藥、反應(yīng)敏感性以及對治療的耐受/反應(yīng)。依照具體劑型的半衰期和清除速率，長效藥用組合物可每3-4天、每周、或每兩周一次給藥。
本發(fā)明方法還可被用于治療自身免疫性疾病以及與慢性炎癥和急性炎癥有關(guān)的疾病。這些疾病包括，但不限于類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎；風(fēng)濕性脊椎炎；骨關(guān)節(jié)炎；痛風(fēng)、其它關(guān)節(jié)炎病癥；膿毒癥；敗血性休克；內(nèi)毒素性休克；革蘭氏陰性膿毒癥；中毒性休克綜合征；肌筋膜疼痛綜合征(myofacial pain syndrome(MPS))；志賀氏菌病；哮喘；成人呼吸窘迫綜合征；慢性阻塞性肺??；慢性肺炎；炎性腸道疾??；節(jié)段性回腸炎；銀屑??；濕疹；潰瘍性結(jié)腸炎；腎小球腎炎；硬皮病；慢性甲狀腺炎；格雷夫氏病(Grave′s disease)；自身免疫性胃炎；重癥肌無力；自身免疫性溶血性貧血；自身免疫性嗜中性白血球減少癥；血小板減少癥；胰腺纖維變性；包括肝纖維化的慢性活動(dòng)性肝炎；急性和慢性腎??；腸激惹綜合征；熱?。辉侏M窄；腦性瘧疾；中風(fēng)和局部缺血性損傷；神經(jīng)性外傷；阿爾茨海默氏??；亨廷頓氏??；帕金森氏??；急性和慢性疼痛；包括過敏性鼻炎和過敏性結(jié)膜炎的過敏癥；心臟肥大、慢性心力衰竭；急性冠脈綜合征；惡病質(zhì)；瘧疾；麻瘋??；利什曼?。蝗R姆??；萊特爾氏綜合征；急性滑膜炎；肌肉退行性變性，粘液囊炎；肌腱炎；腱鞘炎；突出的、撕裂的或脫垂的椎間盤綜合征；骨硬化病；血栓癥；矽肺病；肺肉瘤?。恢T如骨質(zhì)疏松癥或與多發(fā)性骨髓瘤有關(guān)的骨疾??；包括但不限于轉(zhuǎn)移性乳腺癌、結(jié)腸直腸癌、惡性黑色素瘤、胃癌以及非小細(xì)胞肺癌的癌癥；移植物抗宿主反應(yīng)；以及諸如多發(fā)性硬化癥、狼瘡和纖維肌痛的自身免疫性疾病；AIDS和諸如帶狀皰疹、I型或II型單純皰疹、流感病毒、嚴(yán)重急性呼吸道癥候群(SARS)和巨細(xì)胞病毒的其它病毒性疾??；以及糖尿病。另外，本發(fā)明的方法還可被用于治療增殖性疾病(包括良性和惡性增生)，包括急性骨髓性白血病、慢性骨髓性白血病、卡波西肉瘤(Kaposi′s sarcoma)、轉(zhuǎn)移性黑色素瘤、多發(fā)性骨髓瘤、包括轉(zhuǎn)移性乳腺瘤的乳腺癌、結(jié)腸直腸癌、惡性黑色素瘤、胃癌、非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)；骨轉(zhuǎn)移等；包括神經(jīng)肌肉痛、頭痛、癌痛、牙痛和關(guān)節(jié)痛的疼痛疾患；包括實(shí)體瘤血管生成、眼睛新血管形成和幼稚型血管瘤的血管源性疾??；與環(huán)加氧酶和脂氧合酶信號(hào)通路相關(guān)的病癥，包括與前列腺素內(nèi)過氧化合酶-2相關(guān)的病癥(包括水腫、發(fā)熱、痛覺喪失和疼痛)；器官組織缺氧；凝血酶引起的血小板聚集。另外，本發(fā)明化合物可用于治療包括哺乳動(dòng)物在內(nèi)的動(dòng)物的原生動(dòng)物性疾病。
在實(shí)施方案中，本發(fā)明的方法可被用于治療人或非人動(dòng)物，優(yōu)選哺乳動(dòng)物?？杀恢委煹牟溉閯?dòng)物包括，不限于牛、豬、綿羊、山羊、馬、駱駝、水牛、貓、狗、大鼠、和小鼠。
應(yīng)該理解的是依照本發(fā)明的治療包括預(yù)防疾病、改善癥狀、減緩疾病的進(jìn)展、恢復(fù)損傷或治愈疾病。
一方面，治療與p38或一種或多種細(xì)胞因子相關(guān)的疾病病癥，導(dǎo)致被治療的患者的群體平均存活時(shí)間較之未被治療的患者的群體的平均存活時(shí)間增加。優(yōu)選地，所述平均存活時(shí)間增加多于30天；更優(yōu)選地，多于60天；更優(yōu)選多于90天；尤其更優(yōu)選多于120天。可采用任何可重復(fù)的方法檢測群體的平均存活時(shí)間的增加。在優(yōu)選的方面，群體的平均存活時(shí)間的增加是可檢測到的，例如，在用活性化合物開始治療后，計(jì)算群體的平均存活時(shí)間長度。在另一個(gè)優(yōu)選的方面，也可檢測群體的平均存活時(shí)間的增加，例如，在用活性化合物完成第一輪的治療后，計(jì)算群體的平均存活時(shí)間長度。
另一方面，治療與p38或一種或多種細(xì)胞因子相關(guān)的疾病病癥，導(dǎo)致被治療的患者的群體死亡率較之只接受載體的患者的群體的死亡率降低。在另一方面，治療與p38或一種或多種細(xì)胞因子相關(guān)的疾病病癥，導(dǎo)致被治療的患者的群體的死亡率較之未被治療的患者的群體的死亡率降低。再一方面，治療與p38或一種或多種細(xì)胞因子相關(guān)的疾病病癥，導(dǎo)致被治療的患者的群體的死亡率較之接受用非本發(fā)明化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽、代謝物、類似物或衍生物的藥物單一治療的患者的群體的死亡率降低。優(yōu)選地，所述死亡率降低多于2％；更優(yōu)選地，多于5％；更優(yōu)選地，多于10％；最優(yōu)選地，多于25％。在優(yōu)選的方面，所述被治療的患者群體的死亡率的降低可采用任何可重復(fù)的方法檢測。在另一個(gè)優(yōu)選的方面，群體的死亡率的降低是可檢測的，例如，在用活性化合物開始治療后，計(jì)算群體的每單位時(shí)間的疾病相關(guān)死亡的平均數(shù)。在另一個(gè)優(yōu)選的方面，群體的死亡率的降低還可被檢測，例如，在用活性化合物完成第一輪的治療后，計(jì)算群體的每單位時(shí)間的疾病相關(guān)死亡的平均數(shù)。
另外一方面，治療與p38或一種或多種細(xì)胞因子相關(guān)的疾病病癥，導(dǎo)致腫瘤的生長率降低。優(yōu)選地，治療后，腫瘤的生長率相對于治療前的數(shù)據(jù)減少至少5％；更優(yōu)選地，腫瘤的生長率減少至少10％；更優(yōu)選地，減少至少20％；更優(yōu)選地，減少至少30％；更優(yōu)選地，減少至少40％；更優(yōu)選地，減少至少50％；尤其更優(yōu)選地，減少至少50％；以及最優(yōu)選地，減少至少75％?？刹捎萌魏慰芍貜?fù)的測量方法檢測腫瘤生長率。在優(yōu)選的方面，依照每單位時(shí)間的腫瘤直徑變化測量腫瘤的生長率。
另外一方面，治療與p38或一種或多種細(xì)胞因子相關(guān)的疾病病癥，導(dǎo)致腫瘤再生長有所減少。優(yōu)選地，治療后，腫瘤再生少于5％；更優(yōu)選地，腫瘤再生少于10％；更優(yōu)選地，少于20％；更優(yōu)選地，少于30％；更優(yōu)選地，少于40％；更優(yōu)選地，少于50％；尤其更優(yōu)選地，少于50％；以及最優(yōu)選地，少于75％?？刹捎萌魏慰芍貜?fù)的測量方法檢測腫瘤再生長。在優(yōu)選的方面，腫瘤再生長是可測的，例如，通過測量治療后的先期的腫瘤縮小之后的腫瘤直徑的增加。在另一個(gè)優(yōu)選的方面，腫瘤再生長的減少是指治療停止后腫瘤重新生長故障。
另外一方面，治療與p38或一種或多種細(xì)胞因子相關(guān)的疾病病癥，導(dǎo)致細(xì)胞的增殖率減少。優(yōu)選地，治療后，細(xì)胞的增殖率減少至少5％；更優(yōu)選地，減少至少10％；更優(yōu)選地，至少20％；更優(yōu)選地，至少30％；更優(yōu)選地，至少40％；更優(yōu)選地，至少50％；尤其更優(yōu)選地，至少50％；以及最優(yōu)選地，至少75％?？刹捎萌魏慰芍貜?fù)的測量方法檢測細(xì)胞的增殖率。在優(yōu)選的方面，細(xì)胞的增殖率是可測的，例如，通過測定每單位時(shí)間的組織樣本中分裂細(xì)胞的數(shù)量。
另外一方面，治療與p38或一種或多種細(xì)胞因子相關(guān)的疾病病癥，導(dǎo)致增殖細(xì)胞的比率減少。優(yōu)選地，治療后，增殖細(xì)胞的比率減少至少5％；更優(yōu)選地，減少至少10％；更優(yōu)選地，至少20％；更優(yōu)選地，至少30％；更優(yōu)選地，至少40％；更優(yōu)選地，至少50％；尤其更優(yōu)選地，至少50％；以及最優(yōu)選地，至少75％。可采用任何可重復(fù)的測量方法檢測增殖細(xì)胞的比率。在優(yōu)選的方面，增殖細(xì)胞的比率是可測的，例如，通過定量法測定分裂細(xì)胞的數(shù)量相對于組織樣本中的未分裂的細(xì)胞的數(shù)量。在另一優(yōu)選的方面，增殖細(xì)胞的比率等于有絲分裂指數(shù)。
另外一方面，治療與p38或一種或多種細(xì)胞因子相關(guān)的疾病病癥，導(dǎo)致細(xì)胞的增殖面積或區(qū)域的大小減少。優(yōu)選地，治療后，細(xì)胞的增殖面積或區(qū)域的大小相對于治療前的大小減少至少5％；更優(yōu)選地，減少至少10％；更優(yōu)選地，減少至少20％；更優(yōu)選地，減少至少30％；更優(yōu)選地，減少至少40％；更優(yōu)選地，減少至少50％；尤其更優(yōu)選地，減少至少50％；以及最優(yōu)選地，減少至少75％。可采用任何可重復(fù)的測量方法檢測細(xì)胞的增殖面積或區(qū)域的大小。在優(yōu)選的方面，細(xì)胞的增殖面積或區(qū)域的大小可測定為細(xì)胞的增殖面積或區(qū)域的直徑或?qū)挾取?br> 本發(fā)明的方法可包括確認(rèn)需要治療的對象。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，該方法包括確認(rèn)需要治療的哺乳動(dòng)物。在更優(yōu)選的實(shí)施方案中，該方法包括確認(rèn)需要治療的人。確認(rèn)需要治療的對象可用指示可從治療中獲益的對象的任何辦法來完成。例如，確認(rèn)需要治療的對象可通過臨床診斷、實(shí)驗(yàn)室測試或任何其它本領(lǐng)域?qū)I(yè)人員已知的方法進(jìn)行，包括用于確認(rèn)的方法的任何組合。
如在本文中別處所描述的，本發(fā)明化合物可被配方入藥用組合物中，如果需要，可經(jīng)由許可治療所述疾病或病癥的任何途徑給藥。優(yōu)選的給藥途徑是口服給藥?？刹捎脝蝿┝拷o藥形式給藥，或本發(fā)明化合物可以以分開的劑量或以持續(xù)釋放的制劑或給藥方法(如，泵)在一定時(shí)間期間內(nèi)給藥。無論如何，給予患者本發(fā)明化合物，應(yīng)該對所給予的化合物的量和選擇的給藥途徑進(jìn)行選擇，以便有效地治療病癥。
本發(fā)明的方法還包括將本發(fā)明的一種或多種化合物與一種或多種其它的用于治療病癥的治療劑一起使用。即，例如，在某些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了將本發(fā)明化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽或溶劑化物與其它的藥用活性劑一起聯(lián)合用于治療疾病。
藥用活性劑包括對治療任何病癥有用的任何藥劑。在一個(gè)非限制性的實(shí)例中，本發(fā)明化合物是可與其它的治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的藥用活性劑聯(lián)合使用的藥用活性劑。這樣的其它藥用活性劑包括，但不限于復(fù)合金屬蛋白酶抑制劑和其它的DMARDs(緩解疾病的抗風(fēng)濕性藥)，諸如甲氨蝶呤、柳氮磺胺吡啶、羥化氯喹、青霉胺、環(huán)胞霉素A、硫羥蘋果酸金鈉、auroanofin和金硫葡萄糖；CD8拮抗劑；抗-TNFα劑；免疫抑制劑和NSAIDs(非類固醇抗炎藥)。至于治療其它的病癥，可用任何另外的活性藥劑，這對專業(yè)技術(shù)人員將是顯而易見的。
依照本發(fā)明的方法，活性成分的聯(lián)合可以為以下方式(1)復(fù)合配方的和在合并的制劑中同時(shí)給予或傳遞的；(2)通過備選的或用如分開的制劑平行傳遞；或(3)通過本領(lǐng)域已知的任何其它的聯(lián)合治療計(jì)劃。如在交替治療中傳遞，本發(fā)明的方法可包括順序給予或傳遞活性成分，如用單獨(dú)的溶液劑、乳劑、混懸劑、片劑、丸劑或膠囊劑，或在單獨(dú)的注射器中使用不同的注射劑。一般來說，在交替治療中，順序(即序貫)給予每一種活性成分的有效劑量，而在同時(shí)治療中，同時(shí)給予二種或多種活性成分的有效劑量。也可使用不同順序的間歇聯(lián)合療法。
在本發(fā)明的實(shí)施方案中，提供了在體外或體內(nèi)抑制細(xì)胞中p38活性的方法。所述方法包括在細(xì)胞或組織的p38活性被抑制的條件下，使含有p38的細(xì)胞或組織與抑制p38的有效量的本發(fā)明化合物接觸。接觸細(xì)胞指的是其中化合物或物質(zhì)的其它組合物直接與細(xì)胞或組織接觸，或足夠接近以致于在細(xì)胞或組織中引發(fā)想要的生物學(xué)效應(yīng)的狀況。例如，可采用任何允許在p38與本發(fā)明化合物間相互作用的方法，使含有p38的細(xì)胞或組織與本發(fā)明化合物接觸，在細(xì)胞中引發(fā)想要的生物學(xué)效應(yīng)。例如，采用將本發(fā)明化合物諸如式I化合物、前藥或中間體導(dǎo)入的方法，可實(shí)現(xiàn)與細(xì)胞或組織的接觸。將藥用組合物導(dǎo)入，可實(shí)現(xiàn)與細(xì)胞或組織的接觸。將活性化合物直接導(dǎo)入含有p38的細(xì)胞或組織中，可實(shí)現(xiàn)與細(xì)胞或組織的接觸。
作為備選，例如，通過將化合物直接或間接地靶向含有p38的細(xì)胞或組織中而導(dǎo)入化合物的方法，可實(shí)現(xiàn)與細(xì)胞或組織的接觸。在本發(fā)明化合物，優(yōu)選式I，能夠與p38蛋白結(jié)合的條件下，可實(shí)現(xiàn)與細(xì)胞或組織的接觸。所述的條件可包括使本化合物與含有p38的細(xì)胞或組織接近程度、pH、溫度或影響本發(fā)明化合物與p38蛋白結(jié)合的任何條件。
另一方面，本發(fā)明提供了調(diào)節(jié)細(xì)胞內(nèi)p38活性和細(xì)胞分泌p38的方法。所述方法包括，在細(xì)胞中的p38活性被調(diào)節(jié)(更優(yōu)選，被抑制)的條件下，使含有p38的細(xì)胞與抑制p38有效量的本發(fā)明化合物接觸。在某些實(shí)施方案中，細(xì)胞與本發(fā)明化合物在體外接觸；在另一些實(shí)施方案中，細(xì)胞與本發(fā)明化合物在體內(nèi)接觸。在某些實(shí)施方案中，本發(fā)明化合物是以與藥學(xué)上可接受的載體在一起的藥用組合物的形式提供的。
另一方面，本發(fā)明提供了調(diào)節(jié)細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞因子活性或水平的方法。所述方法包括，在細(xì)胞中的細(xì)胞因子活性或水平被調(diào)節(jié)(更優(yōu)選，被抑制)的條件下，使含有細(xì)胞因子的細(xì)胞與抑制細(xì)胞因子有效量的本發(fā)明化合物接觸。在某些實(shí)施方案中，細(xì)胞與本發(fā)明化合物在體外接觸；在另一些實(shí)施方案中，細(xì)胞與本發(fā)明化合物在體內(nèi)接觸。在某些實(shí)施方案中，本發(fā)明化合物是以與藥學(xué)上可接受的載體在一起的藥用組合物的形式提供的。
另一方面，本發(fā)明提供了確定式I化合物作為用作治療與p38或細(xì)胞因子相關(guān)的病癥的治療劑是否有效的方法。在一些實(shí)施方案中，所述方法包括使p38與本發(fā)明化合物接觸，和確定本發(fā)明化合物是否調(diào)節(jié)(優(yōu)選，抑制)p38的活性。在一些實(shí)施方案中，所述方法包括使p38與本發(fā)明化合物接觸，和確定本發(fā)明化合物是否調(diào)節(jié)(優(yōu)選，抑制)細(xì)胞因子的活性。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，接觸步驟在體外發(fā)生；在某些優(yōu)選的實(shí)施方案中，接觸步驟包括使含有p38的細(xì)胞與式I化合物接觸。
本發(fā)明的方法有許多用途。例如，在體外抑制p38活性的方法可用于例如開發(fā)篩選試驗(yàn)中(如，作為陽性對照)，或作為研究或診斷工具來研究p38在細(xì)胞功能中的作用(如抑制p38以確定在細(xì)胞中這樣的抑制對其它功能的影響)。對此目的特別有用的是其中含有諸如放射性同位元素或熒光標(biāo)記的標(biāo)簽物或標(biāo)記物的本發(fā)明化合物。這樣標(biāo)記的化合物可被用于為檢測或確定細(xì)胞或組織類型中p38的存在、活性或分布的方法，例如，通過將細(xì)胞或組織與標(biāo)記的本發(fā)明化合物接觸，然后檢測細(xì)胞或組織中標(biāo)記物的存在或不存在。
因此，設(shè)計(jì)診斷試驗(yàn)作為本發(fā)明的一部分。例如，組織活檢樣本可取自患有與p38相關(guān)或與細(xì)胞因子相關(guān)的病癥的患者?？赏ㄟ^測試活檢樣本來確定存在于樣本中的p38活性水平(或細(xì)胞因子水平)；然后可將樣本與本發(fā)明化合物接觸，測量p38活性水平(或細(xì)胞因子水平)以確定式I化合物是否具有想要的作用(如，抑制p38或細(xì)胞因子活性)。這樣的測試可被用于確定在患者中使用本發(fā)明化合物治療是否可能是有效的。作為選擇，可將樣本與標(biāo)記的本發(fā)明化合物(如，熒光標(biāo)記的化合物)接觸，然后檢測樣本(如，在共焦顯微鏡下)以確定在組織樣本中p38的分布。在療程期間重復(fù)采取活檢樣本，可能也被用于研究治療的功效。依照在本說明書中所述，使用本發(fā)明化合物的其它的診斷測試對本領(lǐng)域的普通專業(yè)人員而言將是顯而易見的。
因此，例如，本發(fā)明提供了用于確定細(xì)胞或組織樣本中的p38蛋白存在、位置或數(shù)量，或其任何組合的方法。所述方法包括a)在化合物能與p38蛋白結(jié)合的條件下，使細(xì)胞或組織樣本與本發(fā)明化合物接觸；以及b)確定細(xì)胞或組織樣本中的本發(fā)明化合物的存在、位置或數(shù)量，或其任何組合，從而確定細(xì)胞或組織樣本中的p38蛋白的存在、位置或數(shù)量，或其任何組合。確定細(xì)胞或組織樣本中的本發(fā)明化合物的存在、位置或數(shù)量，或其任何組合，可使用任何顯示所述化合物在細(xì)胞或組織中的存在、位置或數(shù)量，或其任何組合方法來實(shí)施。例如，如前所述，可使用放射性或熒光標(biāo)記的方法。確定本發(fā)明化合物的存在、位置或數(shù)量，或其任何組合的另外的方法對專業(yè)技術(shù)人員將是顯而易見的。
在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了確定(1)對于治療患有與p38相關(guān)的病癥的患者，本發(fā)明化合物是否將是有用的治療劑，或(2)疾病的嚴(yán)重程度或(3)在使用疾病緩解劑治療期間的病程的方法。所述方法包括a)在使用本發(fā)明化合物或另一個(gè)疾病緩解劑治療之前、期間或之后，從患者獲取細(xì)胞或組織樣本；b)使樣本與本發(fā)明化合物接觸；以及c)確定與樣本結(jié)合的本發(fā)明化合物的量，其中被本化合物結(jié)合的p38蛋白與樣本中的p38蛋白的量有關(guān)。
在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了確定(1)對于治療患有與細(xì)胞因子相關(guān)的病癥的患者，本發(fā)明化合物是否將是有用的治療劑，或(2)疾病的嚴(yán)重程度或(3)在使用疾病緩解劑治療期間的病程的方法。所述方法包括a)在使用本發(fā)明化合物或另一個(gè)疾病緩解劑治療之前、期間或之后，從患者獲取細(xì)胞或組織樣本；b)使樣本與本發(fā)明化合物接觸；以及c)確定與樣本結(jié)合的本發(fā)明化合物的量，其中被本化合物結(jié)合的p38蛋白與樣本中的p38蛋白的量有關(guān)，且樣本中的p38蛋白的量與細(xì)胞因子的釋放量有關(guān)。在典型的實(shí)施方案中，這樣的方法可這樣實(shí)施通過從癌癥細(xì)胞系獲取細(xì)胞，使從癌癥細(xì)胞系獲取的細(xì)胞，例如，從轉(zhuǎn)移性乳腺癌、結(jié)腸直腸癌、惡性黑色素瘤、胃癌或非小細(xì)胞肺癌系獲得的細(xì)胞與本發(fā)明化合物接觸，并確定它們的結(jié)合。
IV.藥用組合物雖然純的本發(fā)明化合物給藥是可以行得通的，但將本化合物配制成藥用組合物可能是優(yōu)選的。同樣地，在本發(fā)明的另一方面，提供了在本發(fā)明的方法中有用的藥用組合物。更具體地，對于治療與p38活性或細(xì)胞因子活性或其任何組合相關(guān)的病癥，本發(fā)明的藥用組合物可能是特別有用的。藥用組合物是為了治療或改善病癥，在體外或體內(nèi)或兩者都可給予患者(對象)的任何的組合物。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，藥用組合物可在體內(nèi)給予。所述對象可包括一種或多種細(xì)胞或組織、或生物體。優(yōu)選的對象是哺乳動(dòng)物。哺乳動(dòng)物包括，諸如作為非限制性實(shí)例的牛、豬、綿羊、山羊、馬、駱駝、水牛、貓、狗、大鼠、小鼠和人的任何哺乳動(dòng)物。更優(yōu)選的哺乳動(dòng)物對象是人。
本發(fā)明的藥用組合物可依照具體的給藥方式和劑型，與諸如載體、溶劑、穩(wěn)定劑、佐劑、稀釋劑等的藥學(xué)上可接受的賦形劑一起配制。依照制劑和給藥途徑，藥用組合物通常應(yīng)該被配制成以達(dá)到生理上相適應(yīng)的pH，范圍可從約pH 3至約pH 11，優(yōu)選從約pH 3至約pH 7。在備選的實(shí)施方案中，可優(yōu)選將pH調(diào)節(jié)到從約pH 5.0至約pH 8.0的范圍。
更具體地，本發(fā)明的藥用組合物包含至少一種有效治療量或預(yù)防量的本發(fā)明化合物以及一種或多種藥學(xué)上可接受的賦形劑。任選地，本發(fā)明的藥用組合物可包含本發(fā)明化合物的組合，或可包括用于治療或預(yù)防細(xì)菌感染中有用的第二種活性成分(如，抗菌劑或抗微生物劑)。
例如，為了腸胃外的或經(jīng)口給藥，本發(fā)明化合物的制劑最典型為固體、液體溶液、乳液或懸浮液，當(dāng)為了經(jīng)肺給藥時(shí)，可吸入的制劑通常為液體或粉劑，且優(yōu)選粉狀制劑。優(yōu)選的本發(fā)明的藥用組合物還可配制成凍干的固體，其在給藥前用生理上相容的溶劑重新配制?；蛘?，本發(fā)明的藥用組合物還可配制成糖漿劑、乳膏劑、軟膏劑、片劑等。
術(shù)語“藥學(xué)上可接受的賦形劑”指的是為了給予諸如本發(fā)明化合物的藥劑的賦形劑。該術(shù)語是指可給予的無不適合毒性的任何藥用賦形劑。藥學(xué)上可接受的賦形劑部分由被給予的具體的組合物，也由用于給予組合物的具體的方法確定。因此，存在廣泛的多種本發(fā)明組合物的適當(dāng)?shù)闹苿?見，如，Remington′s Pharmaceutical Sciences)。
適當(dāng)?shù)馁x形劑可以是包括諸如蛋白質(zhì)、多糖、聚乳酸、聚羥基乙酸、聚合氨基酸、氨基酸共聚物和無活性的病毒粒子的大的、緩慢代謝的高分子載體分子。其它典型的賦形劑包括諸如抗壞血酸的抗氧化劑；諸如EDTA的螯合劑；諸如糊精、羥烷基纖維素、羥烷基甲基纖維素、硬脂酸的碳水化合物；諸如油、水、鹽水、丙三醇和乙醇的液體；潤濕劑或乳化劑；pH緩沖物質(zhì)等。脂質(zhì)體也包括在藥學(xué)上可接受的賦形劑的定義之中。
為了預(yù)期的給藥方法，本發(fā)明的藥用組合物可以任何適當(dāng)?shù)男问脚渲?。例如?dāng)計(jì)劃用于口服時(shí)，則可制備片劑、含片、糖錠劑、水或油混懸劑、非水溶液劑、可分散的散劑或顆粒劑(包括微粉化的粒子或納米粒子)、乳劑、硬或軟膠囊劑、糖漿劑或酏劑。計(jì)劃用于口服的組合物可依照本領(lǐng)域已知的用于制備藥用組合物的任何方法制備，為了提供適口的制劑，所述的組合物可含有包括甜味劑、芳香劑、著色劑和防腐劑的一種或多種材料。
特別地適合用于和片劑一起的藥學(xué)上可接受的賦形劑，包括，例如，諸如纖維素、碳酸鈣或碳酸鈉、乳糖、磷酸鈣或磷酸鈉的惰性稀釋劑；諸如交聯(lián)羧甲基纖維素鈉、交聯(lián)聚維酮、玉米淀粉，或藻酸的崩解劑；諸如聚維酮、淀粉、明膠或阿拉伯膠的粘合劑；以及諸如硬脂酸鎂、硬脂酸或滑石等的潤滑劑。片劑可不包衣，或使用包括微囊包封的已知的技術(shù)包衣以延長在胃腸道的崩解和吸收，從而提供了在較長的時(shí)期的持續(xù)作用。例如，可單獨(dú)或與蠟一起使用諸如甘油單硬脂酸酯或甘油雙硬脂酸酯的延時(shí)材料。
口服應(yīng)用的制劑可以硬明膠膠囊呈現(xiàn)，其中活性成分與例如纖維素、乳糖、磷酸鈣或高嶺土的惰性固體稀釋劑混合，或以軟明膠膠囊呈現(xiàn)，其中活性成分與諸如丙三醇、丙二醇、聚乙二醇、花生油、液體石蠟或橄欖油的非水的或油介質(zhì)混合。
在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的藥用組合物可配制成包含本發(fā)明的化合物與至少一種適合于混懸劑加工的藥學(xué)上可接受的賦形劑混合的混懸劑。在另一個(gè)實(shí)施方案中，通過添加適合的賦形劑，本發(fā)明的藥用組合物可配制成適合制備混懸劑的可分散的粉末和顆粒。
適合用于與混懸劑有關(guān)的賦形劑包括助懸劑，諸如羥甲基纖維素鈉、甲基纖維素、羥丙基甲基纖維素、藻酸鈉、聚乙烯吡咯烷酮、黃蓍膠、阿拉伯樹膠、如天然產(chǎn)生的磷脂(如，卵磷脂)的分散劑或潤濕劑、烯化氧和脂肪酸(如，聚氧乙烯硬脂酸酯)的縮聚物、環(huán)氧乙烷和長鏈脂肪醇(如，十七亞乙基氧基鯨蠟醇(heptadecaethyleneoxycethanol))的縮聚物、環(huán)氧乙烷和衍生自脂肪酸與己糖醇酐的偏酯的縮聚物(如，聚氧乙烯脫水山梨醇單油酸酯)；以及諸如卡波姆(carbomer)、蜂蠟、固體石蠟或十六烷醇的增稠劑?；鞈覄┻€可包含一種或多種諸如乙酸、對羥苯甲酸甲酯和/或?qū)αu苯甲酸正丙酯的防腐劑；一種或多種著色劑；一種或多種調(diào)味劑；及一種或多種諸如蔗糖或糖精的甜味劑。
本發(fā)明的藥用組合物還可以水包油乳劑的形式出現(xiàn)。油相可以是諸如橄欖油或花生油的植物油、諸如液體石蠟的礦物油，或它們的混合物。適合的乳化劑包括諸如阿拉伯樹膠和黃蓍膠的天然產(chǎn)生的樹膠；諸如大豆卵磷脂、衍生于脂肪酸的酯或偏酯的天然產(chǎn)生的磷脂；諸如脫水山梨醇單油酸酯的己糖醇酐；以及這些偏酯與環(huán)氧乙烷的縮聚物，如聚氧乙烯脫水山梨醇單油酸酯。該乳劑還可含有甜味劑和調(diào)味劑。糖漿劑和酏劑可與諸如諸如丙三醇、山梨醇或蔗糖的甜味劑一起配制。這樣的制劑還可包含緩和劑、防腐劑、調(diào)味劑或著色劑。
還有，本發(fā)明的藥用組合物可以諸如無菌的可注射的水乳濁液或油質(zhì)的混懸液的可注射的無菌制劑的形式存在。所述的乳濁液或混懸液可依照已知的技術(shù)，使用那些適合的分散劑或潤濕劑和以上已經(jīng)提及的助懸劑配制?？勺⑸涞臒o菌制劑還可以是在無毒的非胃腸途徑可接受的稀釋劑或溶劑中的可注射的無菌溶液劑或混懸劑，例如以1，2-丙二醇溶液?？勺⑸涞臒o菌制劑還可制備成凍干粉劑。在可接受的介質(zhì)和溶劑中間，可以使用的是水、林格氏溶液(Ringer′ssolution)和等滲的氯化鈉溶液。另外，無菌的不揮發(fā)性油可作為溶劑或助懸介質(zhì)使用。為了此目的，可使用任何溫和的不揮發(fā)性油，包括合成的甘油一酯或甘油二酯。還有，諸如油酸的脂肪酸可同樣地應(yīng)用在可注射的制劑中。
為了獲得本發(fā)明藥用組合物的穩(wěn)定的水溶性的劑型，可將本發(fā)明化合物的藥學(xué)上可接受的鹽溶解于有機(jī)酸或無機(jī)酸的水溶液，諸如0.3M的丁二酸，或更優(yōu)選檸檬酸的溶液中。如果可溶性的鹽的形式是不可用的，則可將式(I)化合物溶解在適合的助溶劑或助溶劑的組合中。適合的助溶劑的實(shí)例包括在濃度范圍為總體積的0-60％的醇、丙二醇、聚乙二醇300、聚山梨醇酯80、丙三醇等。在一個(gè)實(shí)施方案中，式I的活性化合物溶解于DMSO中并用水稀釋。本藥用組合物也可以以活性成分的鹽形式在適當(dāng)?shù)乃越橘|(zhì)，如水或等滲鹽水或葡萄糖溶液的溶液形式存在。在本發(fā)明中也構(gòu)思了已經(jīng)被由取代或添加化學(xué)的或生物化學(xué)的部分所修飾的化合物，這些修飾的部分，例如，通過酯化作用、糖基化、聚乙二醇化(PEGylation)等，使它們更適合于傳遞(如，增加溶解性、生物活性、可口性，減少副作用等)。
在優(yōu)選的實(shí)施方案中，為口服給藥，可將本發(fā)明化合物配制成適于低溶解性化合物的脂質(zhì)基制劑。脂質(zhì)基制劑通常能夠提高這些化合物的口服生物利用度。同樣地，優(yōu)選的本發(fā)明藥用組合物包含有效治療量或預(yù)防量的本發(fā)明化合物以及至少一種藥學(xué)上可接受的賦形劑，所述賦形劑選自中鏈脂肪酸或其丙二醇酯(如，諸如辛酸和癸酸的脂肪酸的可食用脂肪酸的丙二醇酯)和藥學(xué)上可接受的表面活性劑如聚乙二醇40(polyoxyl 40)氫化蓖麻油。
在備選的優(yōu)選的實(shí)施方案中，可加入作為水增溶劑的環(huán)糊精。優(yōu)選的環(huán)糊精包括α、β、γ環(huán)糊精的羥丙基、羥乙基、葡糖基、麥芽糖基(maltosyl)和麥芽糖三基(maltotriosyl)衍生物。特別優(yōu)選的環(huán)糊精增溶劑是羥丙基-β-環(huán)糊精(HPBC)，其可加入任何的上述組合物中以進(jìn)一步提高本發(fā)明化合物的水溶性特性。在一個(gè)實(shí)施方案中，組合物包含0.1％-20％的羥丙基-β-環(huán)糊精，更優(yōu)選1％-15％的羥丙基-β-環(huán)糊精，以及尤其更優(yōu)選2.5％-10％的羥丙基-β-環(huán)糊精。所使用的增溶劑的量將依據(jù)在組合物中的本發(fā)明化合物的量而定。
藥用組合物包含足夠達(dá)到預(yù)期的療效的活性成分的總量。更明確地，在一些實(shí)施方案中，藥用組合物包含有效治療的量(即，抑制p38的本發(fā)明化合物的量，其在預(yù)防或治療直接或間接與p38相關(guān)的或由p38介導(dǎo)的疾病或病癥的現(xiàn)有的癥狀中是有效的)。在某些實(shí)施方案中，藥用組合物包含抑制細(xì)胞因子的有效治療量的本發(fā)明化合物(即，預(yù)防與一種或多種細(xì)胞因子相關(guān)的疾病或病癥的現(xiàn)有癥狀的發(fā)展或減輕這些癥狀的有效量，所述細(xì)胞因子有如，但不限于IL-1、IL-6、IL-8和TNFα)?？膳c載體原料結(jié)合產(chǎn)生單一劑型的本發(fā)明化合物的總量將依據(jù)所治療的患者和具體的給藥模式不同而異。優(yōu)選這樣配制組合物，以便以0.01-100mg/kg體重/天之間的劑量的p38抑制劑給予接受該組合物的患者。
為了幫助對本發(fā)明的理解，包括了下列的實(shí)施例。涉及本發(fā)明的實(shí)驗(yàn)當(dāng)然不應(yīng)該被解釋為對本發(fā)明的具體限制，且那些將是在本領(lǐng)域技術(shù)人員知識(shí)識(shí)范圍內(nèi)的、本發(fā)明的現(xiàn)在已知的或隨后發(fā)展的這些變化(如在此已描述的和在隨后的權(quán)利要求書中所述的)，均被認(rèn)為是落入本發(fā)明的范圍之內(nèi)。
實(shí)施例參考下列的非限制性實(shí)施例對本發(fā)明化合物作更詳細(xì)的描述，所述實(shí)施例對本發(fā)明提供了更充分的說明，但不被解釋為是對其范圍的限制。實(shí)施例對本發(fā)明的某些化合物的制備，以及這些化合物在體外和/或體內(nèi)的試驗(yàn)作了說明。以下的實(shí)施例詳細(xì)描述了本發(fā)明具有代表性的化合物的化學(xué)合成。反應(yīng)步驟是說明性的，本發(fā)明不應(yīng)該被解釋為被它們所表達(dá)的化學(xué)反應(yīng)和條件限制。尚未努力去優(yōu)化在這些反應(yīng)中所獲得的產(chǎn)率，因?yàn)榉磻?yīng)時(shí)間、溫度、溶劑和/或試劑的變化會(huì)增加產(chǎn)率，這對于本領(lǐng)域的熟練技術(shù)人員來說將是顯而易見的。
實(shí)施例13-({4-[6-(4-氟苯基)咪唑并[2，1-b][1，3]噁唑-5-基]嘧啶-2-基}氨基)-2，2-二甲基丙-1-醇的制備依照下列具有代表性的方法制備由式I(其中X是O)表示的本發(fā)明化合物。
除非另有規(guī)定，使用商業(yè)上可獲得的化合物為一般認(rèn)可的。
步驟12-氨基-噁唑向氨腈(33mL，50％wt在水中，0.416mol)的THF(100mL)溶液加入2-羥基乙醛(25g，0.416mol)的水(40mL)溶液，隨后，于0℃，逐滴加入2M的氫氧化鈉(42mL，0.083mol)。持續(xù)攪拌共達(dá)24小時(shí)。然后，于真空中濃縮反應(yīng)混合物以除去大部分的THF。殘余的水層用乙酸乙酯(4×200mL)萃取。將萃取液在硫酸鈉上干燥，于真空中蒸發(fā)掉溶劑。這樣得到白色固體產(chǎn)物A(23g，66％)。
步驟2 于室溫下，以20分鐘的時(shí)間，向2-溴代-1-(4-氟苯基)-乙酮(CAS號(hào)403-29-2，I)(60g，0.376mol)的無水四氫呋喃(THF)溶液(200mL)中加入2-氨基-噁唑(A)(16g，0.19mol)的無水乙腈溶液。將混合物攪拌24小時(shí)后冷卻至0℃。通過過濾收集沉淀物，并用冷乙腈(3×30mL)洗滌，于真空電爐中干燥得到淺黃色結(jié)晶的1-(4-氟苯基)-2-(2-咪唑-1，3-噁唑-3(2H)-基)乙酮?dú)滗逅猁}(B)(42.0g，77％)。
MS(ES+)203(M+1)。
1H NMR(300MHz，DMSO)δ7.95(brs，1H)，9.7(brs，1H)，8.14(m，2H)，7.99(d，J＝0.9，1H)，7.61(d，J＝1.5Hz，1H)，7.51(t，J＝8.7Hz，2H)，5.79(s，2H)。
步驟3 于-10℃的冰浴中，將1-(4-氟苯基)-2-(2-亞氨基-1，3-噁唑-3(2H)-基)乙酮?dú)滗逅猁}(B)(13.0g，43.0mmol)懸浮于無水甲苯(100mL)中并攪拌。
以20分鐘的時(shí)間，逐滴加入四氯化鈦(24mL，0.225mol)。加完后，將該混合物于0℃攪拌1小時(shí)，后于110℃加熱5小時(shí)。任由該反應(yīng)混合物冷卻至室溫，倒出多余的甲苯，加入冰水(200mL)。劇烈攪拌1小時(shí)后，混合物用碳酸鈉處理并繼續(xù)攪拌30分鐘。向混合物中加入乙酸乙酯(100mL)并再繼續(xù)攪拌1小時(shí)。移去有機(jī)相，水性殘余物用乙酸乙酯(3×100mL)萃取。合并的有機(jī)相在無水硫酸鈉上干燥，過濾，在真空中濃縮得到標(biāo)題化合物(8.0g，92％)。
MS(ES+)203(M+1)；1H NMR(300MHz，DMSO)δ7.95(brs，1H)，7.92(brs，1H) 7.79(m，2H)，7.74(d，J＝8.4，1H)，7.19(m，2H)。
步驟4 氬氣氛下，向6-(4-氟苯基)咪唑并[2，1-b][1，3]噁唑(C)(1g，4.9mmol)和4-碘代-2-硫代甲基嘧啶(D)(2.49g，9.8mmol)(10mL)的脫氣的二甲基甲酰胺(10mL)溶液中序貫加入Pd(OAc)2(0.222g，0.9mmol)和三苯基膦(0.518g，1.9mmol)。向混合物中加入碳酸銫(2.41g，7.4mmol)，以氬氣充滿反應(yīng)容器并密封之。伴隨劇烈的磁攪拌，反應(yīng)混合物于80℃下加熱15小時(shí)。將粘性漿液冷卻至室溫，通過疊在硅膠頂部的Celite床過濾。用乙酸乙酯(3×10mL)洗滌殘余物，過濾。以水(2×100mL)洗滌濾液。有機(jī)相在無水硫酸鎂上干燥，過濾，在真空中除去溶劑。殘余物用硅膠柱層析純化，得到淺黃色固體樣的6-(4-氟苯基)-5-[2-(甲基硫烷基)嘧啶-4-基]咪唑并[2，1-b][1，3]噁唑(E)(化合物X，表1)(0.474g，30％)，m.p.144-145℃。
1H NMR(300MHz CDCl3)δ8.2(d，1H)，8.1(s，1H)，7.6(t，2H)，7.4(s，1H)，7.1(t，2H)，6.8(d，1H)，2.6(s，3H)。
13C NMR(300MHz in CDCl3)172.3，164.5，161.2，156.1，155.8，147.0，137.6，130.9，130.8，130.4，116.0，115.8，115.5，114.7，110.5，and 14.2。
步驟5 向6-(4-氟苯基)-5-[2-(甲基硫烷基)嘧啶-4-基]咪唑并[2，1-b][1，3]噁唑(E)(2.0g，6.13mmol)的甲醇(250mL)溶液中緩慢加入OxoneTM(過硫酸氫鉀)(11.3g，18.4mmol)的水(50mL)溶液。將該混合物于室溫下攪拌24小時(shí)。在真空中除去溶劑，將殘余物溶解于二氯甲烷中，以水洗滌，在無水硫酸鈉上干燥。過濾移去固體物并在真空中除去溶劑。殘余物用硅膠柱層析純化，得到白色固體樣的6-(4-氟苯基)-5-[2-(甲磺?；?嘧啶-4-基]咪唑并[2，1-b][1，3]噁唑(F)(化合物XI，表1)(1.8g，82％)。
MS(ES+)359(M+1).
1H NMR(300MHz，DMSO)δ8.75(brm.1H) 8.22(brd，2H)，7.68(m，2H)，7.30-7.42(m，3H)，3.39(s，3H)。
步驟6 3-({4-[6-(4-氟苯基)咪唑并[2，1-b][1，3]噁唑-5-基]嘧啶-2-基}氨基)-2，2-二甲基丙-1-醇(化合物XXXIX，表1)。
向6-(4-氟苯基)-5-[2-(甲磺?；?嘧啶-4-基]咪唑并[2，1-b][1，3]噁唑(F)(0.5g，1.4mmol)的二甲亞砜溶液中加入3-氨基-2，2-二甲基丙醇(0.430mg，3.8mmol)，隨后加入二異丙基乙胺(0.631g，5.0mmol)。將該混合物于100℃下加熱過夜。冷卻至室溫后，反應(yīng)物用水稀釋并用二氯甲烷(2×50mL)萃取。將合并的有機(jī)相在無水硫酸鈉上干燥，過濾，在真空中除去溶劑。殘余物用乙酸乙酯/己烷(3∶1)洗脫，經(jīng)硅膠柱層析純化，得到3-({4-[6-(4-氟苯基)咪唑并[2，1-b][1，3]噁唑-5-基]嘧啶-2-基}氨基)-2，2-二甲基丙-1-醇(G)(0.46g，86％)，m.p.149℃；1H NMR(300MHz CDCl3)δ8.06(s，1H) 7.98(d，J＝5.4Hz，1H)，7.59(m，2H)，7.45(s，1H)，7.11(t，2H)，6.49(d，J＝5.4Hz，1H)，3.29(d，J＝7.2Hz，2H)，3.21(s，2H)，0.95(s，6H)。
可使用類似于上述實(shí)施例的方法制備表1中所示的化合物(附在這里，通過引用結(jié)合于本文中)。
實(shí)施例24-{4-[6-(4-氟苯基)-咪唑并[2，1-b]噻唑-5-基]-嘧啶-2-基氨基}-哌啶-1-羧酸叔丁酯的制備依照下列具有代表性的方法制備由式I(X＝S)表示的本發(fā)明的示例性化合物。
步驟1 向2-氨基噻唑(H)(23.7g，0.23mol)和2-溴代-1-(4-氟苯基)-乙酮(I)(50g，0.23mol)的混合物中加入純乙醇(600mL)。反應(yīng)在劇烈攪拌下回流16小時(shí)。在真空中將反應(yīng)混合物減少到原先體積的一半。將殘余液體傾入冰中，溶液在被加入氫氧化銨溶液(30％)后變成堿性。過濾并用水洗滌所得到的精細(xì)的固體。這樣得到的黑黃色固體在真空電爐中于50℃干燥，得到6-(4-氟苯基)-咪唑并[2，1-b]噻唑(J)(43.0g，86％)。
ESMS[M+H]+＝219；1H NMR(300MHz CDCl3)δ8-7.6(m，3H)，7.38(bs，1H)，7.08(bs，2H)，6.79(bs，1H)；13C75MHz(NMR CDCl3)δ163.2(d，C-F，J＝244.7Hz)，150.1，146.8，130.3(C-C-C-C-F)，126.7(d，C-C-C-F，J＝7.73Hz)，118.4，115.5(d，C-C-F，J＝21.4Hz)，112.4，107.6；步驟2 向6-(4-氟苯基)-咪唑并[2，1-b]噻唑(J)(6.0g，27.6mmol)、4-碘代-2-硫代甲基嘧啶(10.4g，41.3mmol)、碳酸銫(13.4g，41.3mmol)、三苯基膦(2.88g，11mmol)和乙酸鈀(1.22g，5.5mmol)的混合物中加入無水二甲基甲酰胺(60mL)。將反應(yīng)混合物密封并于80C振搖12小時(shí)。加入水(200mL)將反應(yīng)淬滅。水層以乙酸乙酯(3×100mL)萃取。有機(jī)相用水(100mL)和飽和的氯化鈉水溶液(100mL)序貫洗滌。有機(jī)相在硫酸鈉上干燥，過濾，在真空中蒸發(fā)掉溶劑。粗產(chǎn)物經(jīng)硅膠柱層析純化，用乙酸乙酯/己烷(20-30％)梯度洗脫。蒸發(fā)掉溶劑后，得到白色固體樣的6-(4-氟苯基)-5-(2-甲基硫烷基-嘧啶-4-基)-咪唑并[2，1-b]噻唑(K)(化合物CXXXIX，表2)(3.5g，37％)m.p.151-152℃；ESMS[M+H]+＝343；1H NMR(300MH.z，CDCl3)δ8.61(d，J＝4.41Hz，1H)，8.27(d，J＝5.43Hz，1H)，7.66-7.58(m，2H)，7.2-7.12(m，2H)，7.0(d，J＝4.56Hz，1H)，6.86(d，J＝5.43Hz，1H)，2.64(s，3H)；13C NMR(75MHz，CDCl3)δ172.6，163.1(d，C-F，J＝247.1Hz)，156.4，156.1，152.7，150.0，131.1(d，C-C-C-F，J＝8.1Hz)，130.7(d，C-C-C-C-F，J＝3.15Hz)，122.2，120.2，115.9(d，C-C-F，J＝21.5Hz)，112.8，111.9，14.2；C16H11FN4S2的分析計(jì)算值C 56.12；H 3.24；N 16.36；實(shí)測值C 55.81；H 3.20；N 16.10。
步驟3 向6-(4-氟苯基)-5-(2-甲基硫烷基-嘧啶-4-基)-咪唑并[2，1-b]噻唑(K)和6-(4-氟苯基)-咪唑并[2，1-b]噻唑(J)(0.205g，0.6mmol)的甲醇(25mL)的(1.1∶1)的混合物中逐滴加入過硫酸氫鉀(1.23g，1.8mmol)的水(5mL)溶液。將反應(yīng)物于室溫中攪拌16小時(shí)。于室溫、真空中除去揮發(fā)性物質(zhì)。向殘余物中加入二氯甲烷。有機(jī)相用水和飽和的氯化鈉水溶液序貫洗滌。有機(jī)相在無水硫酸鈉上干燥，過濾，于真空中蒸發(fā)掉溶劑。粗產(chǎn)物經(jīng)硅膠柱層析純化，用乙酸乙酯己烷(1∶1)洗脫，得到白色固體樣的6-(4-氟苯基)-5-(2-甲磺?；?嘧啶-4-基)-咪唑并[2，1-b]噻唑(L)(化合物CXL，表2)(0.113g，98％)m.p.197-198℃；ESMS[M+H]+＝375；1H NMR(300MHz，CDCl3)δ8.84-8.9(m，1H)，8.56-8.5(bd，1H)，7.68-7.58(m，2H)，7.38-7.30(m，1H)，7.26-7.16(m，2H)，7.1(m，1H)，3.38(s，3H)；13C NMR(75MHz，CDCl3)δ165.8，163.4(d，C-F，J＝248.6Hz)，157.4，156.9，154.4，152.1，131.1(d，C-C-C-F，J＝8.3Hz)，130.3(d，C-C-C-C-F，J＝6.3Hz)，123.2，119.5，117.3，116.2(d，C-C-F，J＝21.6Hz)，113.9，39.2；C16H11FN4O2S2.0.045CHCl3的分析計(jì)算值C，51.33；H，2.96；N，14.96；實(shí)測值C，50.76；H，2.83；N，14.62。
步驟4 向6-(4-氟苯基)-5-(2-甲磺?；?嘧啶-4-基)-咪唑并[2，1-b]噻唑(L)(1.05g，2.8mmol)的二甲亞砜(12.0mL)溶液中加入4-氨基-哌啶-1-羧酸叔丁酯(1.12g，5.6mmol)，隨后加入Hunig′s堿(0.76mL，5.6mmol)。將反應(yīng)混合物密封并于100℃振搖12小時(shí)。冷卻至室溫后，加入水(50mL)，水層以乙酸乙酯(4×20mL)萃取。合并的有機(jī)相用飽和的氯化鈉水溶液(3×50mL)洗滌，在無水硫酸鈉上干燥。過濾有機(jī)相，于真空中蒸發(fā)掉溶劑。粗產(chǎn)物經(jīng)硅膠柱層析純化，用乙酸乙酯/己烷(3/2)洗脫。得到淡黃色固體樣的4-{4-[6-(4-氟苯基)-咪唑并[2，1-b]噻唑-5-基]-嘧啶-2-基氨基}-哌啶-1-羧酸叔丁酯(M)(化合物CCXXXIII，表2)(1.2g，88％)m.p.209-211℃；
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ8.51(d，J＝6Hz)，8.07(d，J＝7.2Hz)，7.65-7.5(m，2H)，7.16-7.1(m，2H)，6.93(d，J＝6Hz)，6.48(d，J＝7.2Hz)，5.17(bs，1H)，3.9-4.2(m，5H)，3.03-2.97(m，2H)，2.16-2.07(m，2H)，1.49(s，9H)；13C NMR(75MHz，CDCl3)δ162.96(d，C-F，J＝247Hz)，161.5，157.7，156.94，154.7，151.9，148.99，131.07(d，C-C-C-F，J＝8.5Hz)，130.9(d，C-C-C-C-F，J＝3.2Hz)，121.7，120.8，115.6(d，C-C-F，J＝21.6Hz)，107.2，79.7，48.4，42.7(bs)，32.2，28.4；ESMS[M+H]+＝495；C25H27FN6O2S.0.065 CH2Cl2的分析計(jì)算值C，60.71；H，5.50；N，16.99；實(shí)測值C，60.15；H，5.14；N，16.41實(shí)施例3N′-{4-[6-(4-氟苯基)咪唑并[2，1-b][13]噻唑-5-基]嘧啶-2-基}-N，N-二甲基乙烷-1，2-二胺的制備 向6-(4-氟苯基)-5-[2(甲磺?；?嘧啶-4-基]咪唑并[2，1-b][1，3]噻唑(L；見上述的實(shí)施例2)(200mg，0.53mmol)的干燥二甲亞砜(4mL)溶液中加入N，N-二甲基乙醇胺(273mg，3.06mmol)和碳酸鉀(365mg，2.64mmol)。于100℃下攪拌反應(yīng)混合物6小時(shí)，用水(5mL)稀釋，用乙酸乙酯(2×10mL)萃取。有機(jī)相用水洗滌，在無水硫酸鈉上干燥，過濾，在真空中蒸發(fā)掉溶劑。殘余物經(jīng)硅膠柱層析純化，得到化合物N′-{4-[6-(4-氟苯基)咪唑并[2，1-b][1，3]噻唑-5-基]嘧啶-2-基氧基}-N，N-二甲基乙胺(N)(108mg)。
1H NMR(300MHz，DMSO)δ8.55(d，J＝4.8Hz，1H)，8.41(d，J＝5.4Hz，1H)，7.65(m，2H)，7.52(d，J＝4.5Hz，1H)，7.32(t，J＝9.3Hz，2H)，6.82(d，J＝5.4，1H)，4.53(t，J＝5.7Hz，2H)，2.98(t，J＝5.7Hz，2H)，2.46(s，6H).MS(ES+)384(M+1)。
可使用類似于實(shí)施例2和3的方法制備表2中所示的化合物(附在這里，通過引用結(jié)合于本文中)。
H)實(shí)施例4針對在體外抑制由p38MAP激酶所致的ATF2的磷酸化的能力，篩選本發(fā)明化合物。在這個(gè)體外試驗(yàn)中，化合物的抑制ATF2磷酸化的能力與在體內(nèi)抑制p38MAP激酶和TNFα的表達(dá)有關(guān)，因此，該能力是體內(nèi)潛在治療活性的一個(gè)指標(biāo)(Raingeaud，J.等，J.Biol.Chem.)2707420-7426，1995，Brinkman，M.N.，等，J.Bil.Chem.27430882-30886，1999以及Fuchs，S.Y.等，J.Biol.Chem.27512560-12564，2000)。
材料從Upstate(Charlottesville，VA)獲得所有激酶和底物ATF2。p38MAP激酶是伴GST融合的氨基末端的重組人全長蛋白，在大腸桿菌(E.coli.)中表達(dá)并純化。ATF2是含有在大腸桿菌中表達(dá)的人ATF2的氨基酸19-96的GST融合蛋白。所有蛋白質(zhì)分成等份并于-80℃儲(chǔ)存。
方法使用試驗(yàn)緩沖液實(shí)施p38 MAP激酶試驗(yàn)。所述試驗(yàn)緩沖液包含25mM HEPES，pH 7-5、10mM MgCl2、2mM DTT、20mM β-甘油磷酸酯、0.1mM Na3VO4、40μM ATP和1.25μM的ATF2，以及6ng的p38α蛋白、12ng p38β蛋白、1.5ng p38γ，或0.4ng JNK2α2。用DMSO系列稀釋化合物，于25x終濃度時(shí)使用2μL的試驗(yàn)化合物。介質(zhì)對照僅用DMSO。于室溫，將試驗(yàn)化合物與20μL的酶在激酶緩沖液(25mM HEPES，pH 7.5，10mM MgCl2、2mM DTT、20mM β-甘油磷酸酯和0.1mM Na3VO4)中預(yù)孵育15分鐘。反應(yīng)起始于加入30μL底物溶液，以得到終濃度為40μM ATP和1.25μM ATF2的激酶緩沖液。反應(yīng)物在37℃孵育30分鐘，通過加入18μL的200mM EDTA終止反應(yīng)。使用ELISA方法檢測在Thr 69的ATF2的磷酸化作用。于37℃將高度結(jié)合的96孔板(Corning 3369)用50μL的激酶反應(yīng)物包被1小時(shí)。包被的板用200μL的洗滌緩沖液(25mM Tris HCI，pH8.3、192mM氨基乙酸、0.1％SDS和0.05％吐溫-20)洗滌三次。然后，以SuperBlock的TBS(Pierce，37535)洗滌板三次。阻斷后，于37℃以50μL的兔抗-膦-ATF2抗體(Cell Signaling，9221L，1∶500)孵育板30分鐘。在用50μL HRP結(jié)合的山羊抗兔抗體(Cell Signaling，7074，1∶500)于37℃孵育30分鐘前，用洗滌緩沖液洗滌板三次。先用洗滌緩沖液洗滌板三次，再于室溫，用50μL的Ultra TMB-ELISA(Pierce，34028)孵育板8分鐘。最后，加入50μL的磷酸(1M)終止反應(yīng)，在SpectraMax 250讀板器上讀取450nm處的板的吸光率。
結(jié)果對于本發(fā)明的某些化合物的p38α試驗(yàn)結(jié)果示于表1和表2中。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，在此體外的試驗(yàn)中，本發(fā)明化合物抑制ATF2的磷酸化作用。優(yōu)選的化合物顯示的IC50值小于500nM，更優(yōu)選小于100nM，尤其更優(yōu)選小于20nM。
實(shí)施例5針對在體外抑制由于脂多糖(LPS)的刺激所致的TNFα和IL-1β從THP-1細(xì)胞的釋放的能力，篩選本發(fā)明化合物。在這個(gè)體外試驗(yàn)中，化合物的抑制TNFα和IL-1β的釋放的能力與在體內(nèi)抑制p38活性、TNFα和IL-1β的表達(dá)有關(guān)，因此，該能力是體內(nèi)潛在治療活性的一個(gè)指標(biāo)(Lee J.C.等，Ann.N.Y.Acad.Sci.696149-170，1993和Nature，372739-746，1994).
材料將從ATCC(TIB202)獲得的THP-1細(xì)胞在37℃、5％ CO2的RPMI 1640培養(yǎng)基(MediaTech，Herndon，VA)中維持，所述培養(yǎng)基含有4.5g/L葡萄糖，并補(bǔ)充有10％胎牛血清、1％的青霉素/鏈霉素和50μM的β-巰基乙醇。
方法起初將試驗(yàn)化合物溶解于有1％DMSO(v/v)的RPMI培養(yǎng)基中。然后，在RPMI介質(zhì)中用全部隨后的稀釋劑系列稀釋化合物。試驗(yàn)在無菌條件下進(jìn)行。收集培養(yǎng)密度為6-8×105細(xì)胞/mL的THP-1細(xì)胞，并將其以106細(xì)胞/mL再懸浮于RPMI培養(yǎng)基中。向每個(gè)孔中加入100μL的再懸浮細(xì)胞，其中含有100μL的試驗(yàn)化合物。在兩倍終濃度時(shí)制備試驗(yàn)化合物。最終的DMSO濃度不超過0.5％(v/v)。在使用脂多糖(LPS)(Sigma L-2880，4mg/mL儲(chǔ)存于PBS中)刺激前，細(xì)胞于37℃、5％CO2中預(yù)孵育30分鐘。對于TNFα和IL-1β的釋放，每個(gè)孔中的LPS終濃度分別為10μg/mL或30μg/mL。無刺激的對照細(xì)胞懸浮液僅接受PBS介質(zhì)。為了TNFα和IL-1β的釋放，細(xì)胞混合物分別孵育18或48小時(shí)。取150μL的懸浮液并轉(zhuǎn)移至新鮮板并于-20℃儲(chǔ)存直到進(jìn)一步分析。使用ELISA試劑盒(Biosource(KHC3012用于TNFα；KAC1192用于IL-1β))測試TNFα和IL-1β的水平。使用SpectraMAX 250作為讀板器。采用非線性回歸以產(chǎn)生量效曲線進(jìn)行分析。經(jīng)過計(jì)算的IC50值是產(chǎn)生TNFα或IL-1β水平下降50％的試驗(yàn)化合物的濃度。
結(jié)果在這個(gè)體外試驗(yàn)中，本發(fā)明化合物抑制TNFα、IL-1β或TNFα和IL-1β兩者的釋放。本發(fā)明的某些化合物的TNFα抑制數(shù)據(jù)示于表1和2中。優(yōu)選的化合物顯示，針對TNFα和/或IL-1β的IC50值小于500nM，更優(yōu)選的化合物小于200nM，再更優(yōu)選的化合物小于100nM，尤其更優(yōu)選地小于20nM。
實(shí)施例6針對在體外抑制由于脂多糖(LPS)的刺激所致的TNFα從初級人外周血單核細(xì)胞(PBMC)的釋放的能力，篩選本發(fā)明化合物。在這個(gè)體外試驗(yàn)中，化合物的抑制TNFα的釋放的能力與在體內(nèi)抑制p38活性有關(guān)，因此，該能力是體內(nèi)潛在治療活性的一個(gè)指標(biāo)(Osteoarthritis和Cartilage，10961-967，2002以及Laufer，S.A.和Wagner，G.K.，J.Med.Chem.452733-2740，2002)。
材料和方法從3-8個(gè)個(gè)體供血者采集的血清中，通過Ficoll-HyPaque密度梯度采用差速離心分離人外周血單核細(xì)胞(PBMC)。分離的PBMC含有約10％ CD-14陽性單核細(xì)胞、90％淋巴細(xì)胞和＜1％的粒細(xì)胞和血小板。在存在化合物或缺乏化合物情況下，用脂多糖(LPS；50ng/mL；Sigma，St.Louis，MO)刺激，在無血清的GIBCOTMRPMI培養(yǎng)基(Invitrogen，Carlsbad，CA)中，于37℃將PBMC(106/mL)一式兩份在聚苯乙烯板中培養(yǎng)24小時(shí)。采用ELISA使用商業(yè)上可獲得的試劑盒(MDS Panlabs#309700)測定細(xì)胞懸浮液中的TNFα水平。
結(jié)果在這個(gè)試驗(yàn)中，優(yōu)選的本發(fā)明化合物抑制TNFα的釋放的IC50值小于500nM，更優(yōu)選小于100nM，尤其更優(yōu)選小于20nM。
實(shí)施例7針對在動(dòng)物模型體內(nèi)抑制TNFα釋放的能力篩選本發(fā)明化合物。(見，如，Griswold D.E.等，Drugs Exp.Clin.Res.19243-248，1993，Badger，A.M.等，J.Pharmacol.Exp.Ther.，2791453-1461，1996，Dong，C.等，Annu.Rev.Immunol.，2055-72，2002(及其在此引用的參考文獻(xiàn))，Ono，K.和Han，J.，Cellular Signalling，121-13，2000(及其在此引用的參考文獻(xiàn))和Griffiths，J.B.等，Curr.Rheumatol.Rep.，1139-148，1999).
沒有受任何具體的理論的約束，相信在此模型中TNFα的抑制是由于化合物抑制p38MAP激酶所致。
體內(nèi)LPS刺激研究將雄性Sprague-Dawley大鼠(0.2-0.35kg)隨機(jī)分成六組或更多組，在每個(gè)案例中，將在適合的制劑中的試驗(yàn)化合物，通過輸注或大劑量注射的方式靜脈給藥，或經(jīng)口給藥。輸注或大劑量注射結(jié)束后30分鐘，以及經(jīng)口給藥1-2小時(shí)后，靜脈給予脂多糖大腸桿菌/0127B8(0.8mg/kg)。用LPS處理后1.5小時(shí)收集血樣。采用得自Biosource(KRC3011C)的ELISA試劑盒測定血清TNFα水平，并與介質(zhì)處理的對照組比較。
結(jié)果在這個(gè)體內(nèi)試驗(yàn)中，優(yōu)選的本發(fā)明化合物抑制TNFα的釋放。優(yōu)選的靜脈給藥的化合物顯示小于20mg/kg的ED50值，更優(yōu)選小于5mg/kg，尤其更優(yōu)選小于1mg/kg。優(yōu)選的經(jīng)口給藥的化合物顯示小于100mg/kg的ED50值，更優(yōu)選小于20mg/kg，尤其更優(yōu)選小于1mg/kg。
實(shí)施例8激酶選擇性使用選擇性板(panel)測試本發(fā)明化合物與p38MAP激酶的β和γ同工型、SrcP60和JNK2α2的交叉反應(yīng)性。p38β、p38γ和JNK2α2的試驗(yàn)在實(shí)施例4中描述。SrcP60試驗(yàn)檢測化合物抑制SrcP60催化的底物肽的磷酸化的能力。
方法用DMSO系列稀釋化合物，于25x終濃度時(shí)使用1μL的試驗(yàn)化合物。介質(zhì)對照僅用DMSO。于室溫，將試驗(yàn)化合物與10μL含有5.3單位SrcP60酶(Upstate，Charlottesville，VA)的水預(yù)孵育15分鐘。通過加入14μL底物混合物(45mM HEPES，pH 7.5，18mMMgCl2、36mM β-甘油磷酸酯和0.18mM Na3VO4、71.5μM ATP以及1.8μM CDC2p34底物((生物素-KVEKIGEGTYGVVYK-酰胺，委托(custom)合成，New England Peptide)啟動(dòng)反應(yīng)。反應(yīng)物于室溫下孵育3.5小時(shí)，通過加入25μL的25mM EDTA終止反應(yīng)。將8μL的反應(yīng)混合物移至Costar Black 96孔聚苯乙烯板中，96μL的檢測混合物(30μL的APC-Strepavidin(Perkin Elmer Life Sciences)(1mg/mL在水中)、8μL的Eu-P66(Perkin Elmer Life Sciences)(500μg/mL)的1mL的Tris-EDTA緩沖液pH 8.0(Fluka))。反應(yīng)物于室溫下孵育1小時(shí)。使用在Victor2V讀板器(Perkin Elmer Life Sciences)上的Victor V程序LANCE 615/665于665和615nm處讀取時(shí)間分段(Time resolved)熒光數(shù)據(jù)。
結(jié)果在表III中顯示激酶選擇性板數(shù)據(jù)。對p38β的選擇性范圍為從3-至71-倍，其中LXXXVII顯示出對p38β的17-倍的選擇性(與p38α比較)。與p38α比較，觀察到的對p38γ和Src的選擇性的最低值是465-倍。當(dāng)化合物L(fēng)XXXVII、LXXXIV、LXXI、CXIX和CCLXXXI顯示在JNK2α2上的選擇性的范圍從83-至191-倍，化合物CCLXXVIII，CCLXXIX和CCLXXX顯示在JNK2α2上的選擇性稍低一些，對p38α活性的范圍從28-至64-倍。
表III.先導(dǎo)化合物的體外效能和選擇性。已報(bào)告IC50值(nM)。
針對24種另外的酶(Upstate，Charlottesville，VA)的板，篩選本發(fā)明不同的化合物。在含有40μMATP的反應(yīng)中試驗(yàn)0.1μM和1μM化合物。在存在和缺乏試驗(yàn)化合物的情況下測量放射標(biāo)記的磷酸酯(phosphate)(32P)與每一種酶底物的結(jié)合。表IV(a)和IV(b)顯示針對這些化合物的寬激酶板選擇性(broad kinase panel)的值。與緩沖液對照比較，報(bào)告的結(jié)果為在化合物的存在下，32P與底物的結(jié)合物量的減少百分比。
表IV(a).選擇性寬板。與缺乏化合物時(shí)的激酶活性比較，在O.1μM和1μM的濃度下針對激酶，篩選化合物。報(bào)告在每個(gè)濃度時(shí)的抑制百分率。
表IV(b).選擇性寬板。與缺乏化合物時(shí)的激酶活性比較，通過在0.1μM和1μM的濃度下抑制激酶來篩選化合物。報(bào)告在每個(gè)濃度時(shí)的抑制百分率。
實(shí)施例9在體內(nèi)建立的II型膠原關(guān)節(jié)炎的研究在膠原引起的大鼠關(guān)節(jié)炎模型中試驗(yàn)化合物。在第0天和第6天，在雌性Lewis大鼠(0.16-0.2kg)尾根部和背部的兩個(gè)位置上皮下注射300μl含有2mg/mL小牛II型抗原的弗氏不完全佐劑(Freund′sIncomplete Adjuvant)。在研究的第9天，用卡鉗測量雙側(cè)后腿踝關(guān)節(jié)。這種測量被認(rèn)為是正常的、疾病前的測量。當(dāng)在一只后爪明顯出現(xiàn)踝關(guān)節(jié)腫脹(卡鉗測量值從0.263到0.282英寸)時(shí)，大鼠被收入到研究的治療期。此發(fā)生在研究的第10或11天且被認(rèn)為是關(guān)節(jié)炎的第1天。除非另外指明，將被編入的動(dòng)物隨機(jī)分組并于關(guān)節(jié)炎的第1-7天(治療日)灌胃給予介質(zhì)對照或化合物(1、3.3、10或30mg/kg，每日二次)，或地塞米松(0.0375mg/kg，每日二次)。在每個(gè)治療日測量踝直徑。對于7個(gè)先導(dǎo)化合物的踝直徑的平均增加示于下列的圖3-9中。
在第7天處死后，將動(dòng)物的兩只后爪切下并稱重。將在所有組別中的所有動(dòng)物的膝和踝存放、脫鈣于5％的甲酸中，并修整(trimmed)為對半等分的、脫水的、清除的、滲透的和包埋在石蠟中的兩只大致相等的經(jīng)度的(踝)或額狀面(膝)。對整塊(Blocks)切片并以甲苯胺藍(lán)染色。
組織經(jīng)過顯微鏡精細(xì)檢查并對膝和踝炎癥(細(xì)胞浸潤)、血管翳形成和浸潤、軟骨損傷(甲苯胺染色丟失和膠原質(zhì)破壞)和骨再吸收評分。評分的等級為0-5級，其中0分為正常而5分則表示嚴(yán)重?fù)p傷或疾病的證據(jù)或者兩者都有。
結(jié)果試驗(yàn)化合物表現(xiàn)出對包括炎癥和骨損傷的關(guān)節(jié)炎的臨床上的和組織病理學(xué)參數(shù)的劑量依賴性抑制作用。結(jié)果在表V中概述為疾病參數(shù)的測量值減少50％(ED50，以mg/kg表示)。
表V.本發(fā)明化合物抑制膠原所致的大鼠關(guān)節(jié)炎。以mg/kg表示的ED50值顯示針對關(guān)節(jié)炎的幾個(gè)參數(shù)。
實(shí)施例10對化合物對抗多種癌細(xì)胞系的活性進(jìn)行了試驗(yàn)。癌細(xì)胞系包括那些關(guān)于乳腺癌、結(jié)腸直腸癌、惡性黑色素瘤、胃癌和非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)的癌細(xì)胞。
所有在此引用的參考文獻(xiàn)的內(nèi)容通過引用結(jié)合于本文中。
表1 表1-1
表1-2
表1-3
表1-4
表1-5
表1-6
表1-7
表1-8
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表1-10
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表2 表2-1
表2-2
表2-3
表2-4
表2-5
表2-6
表2-7
表2-8
表2-9
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表2-11
表2-12
表2-13
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表2-15
表2-16
表2-17
表2-18

權(quán)利要求
1.一種式I的化合物，或式I化合物的前藥、溶劑化物或鹽 其中X是O或S(O)m；Y是OR4或NR4R5；m是0、1或2；n是1或2；R1獨(dú)立選自氫、-CN、-COOH、鹵素、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基；C3-C6環(huán)烷基、C3-C6環(huán)烷氧基、芳基、氨基羰基、C1-C6烷基羰基和C1-C6烷氧基羰基；Ar是芳基；R3獨(dú)立選自氫、鹵素、氨基、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、C3-C6環(huán)烷基、C3-C6環(huán)烷氧基、芳基、氨基羰基、C1-C6烷基羰基和C1-C6烷氧基羰基；R4和R5各自獨(dú)立選自氫、C1-C6烷基、C3-C6環(huán)烷基、芳基和雜環(huán)基；或者R4和R5與它們連接的N原子一起，形成在環(huán)中含有3-8個(gè)原子的雜環(huán)；條件是，當(dāng)X是S(O)m、m是0、Ar是苯基、Y是NR4R5、R4是氫和R5是烷基時(shí)，此時(shí)如果R5是羥烷基，則R51)不是-CH2(CH3)2CH2OH，以及2)在相對于N原子的α碳原子上不被苯基取代(即，與N原子連接的R5的碳原子不帶有苯基)。
2.依據(jù)權(quán)利要求1的化合物，其中X是O或S。
3.依據(jù)權(quán)利要求2的化合物，其中X是O。
4.依據(jù)權(quán)利要求1的化合物，其中Ar是苯基或萘基。
5.依據(jù)權(quán)利要求1的化合物，其中Ar是苯基。
6.依據(jù)權(quán)利要求5的化合物，其中所述苯基是4-氟苯基。
7.依據(jù)權(quán)利要求1的化合物，其中所述化合物選自化合物L(fēng)XXXVII、LXXXIV、LXXI、CXIX、CCLXXXI、CCLXXVIII、CCLXXIX和CCLXXX。
8.依據(jù)權(quán)利要求1的化合物，其中所述化合物是藥學(xué)上可接受的鹽。
9.一種式II的化合物或其鹽 其中R1選自氫、-CN、-COOH、鹵素、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基；C3-C6環(huán)烷基、C3-C6環(huán)烷氧基、芳基、氨基羰基、C1-C6烷基羰基和C1-C6烷氧基羰基；以及Ar是芳基。
10.一種式III的化合物或其鹽 其中X是O或S(O)m；m和n分別獨(dú)立為0、1或2；p是1或2；R1獨(dú)立選自氫、-CN、-COOH、鹵素、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基；C3-C6環(huán)烷基、C3-C6環(huán)烷氧基、芳基、氨基羰基、C1-C6烷基羰基和C1-C6烷氧基羰基；Ar是芳基；R3獨(dú)立選自氫、鹵素、氨基、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、C3-C6環(huán)烷基、C3-C6環(huán)烷氧基、芳基、氨基羰基、C1-C6烷基羰基和C1-C6烷氧基羰基；以及L是C1-C6烷基或芳基。
11.一種藥用組合物，它包含一種或多種由式I表示的化合物和藥學(xué)上可接受的載體。
12.一種治療與P38相關(guān)的病癥的方法，所述方法包括確定需要治療的對象并給予所述對象有效治療與P38相關(guān)的病癥的量的式I化合物。
13.依據(jù)權(quán)利要求12的方法，其中式I化合物與另一種藥用活性劑聯(lián)合。
14.依據(jù)權(quán)利要求12的方法，其中所述的對象為選自牛、豬、綿羊、山羊、馬、駱駝、水牛、貓、狗、大鼠、小鼠和人的哺乳動(dòng)物。
15.依據(jù)權(quán)利要求12的方法，其中所述對象是人。
16.依據(jù)權(quán)利要求12的方法，其中所述與p38相關(guān)的病癥是與具體的p38同工型相關(guān)的病癥。
17.依據(jù)權(quán)利要求16的方法，其中所述具體的p38同工型選自p38α、p38β、p38δ和p38γ。
18.依據(jù)權(quán)利要求17的方法，其中所述具體的p38同工型是p38α。
19.一種治療與一種或多種細(xì)胞因子活性改變相關(guān)的病癥的方法，所述方法包括確定需要治療的對象和給予所述對象有效治療一種或多種細(xì)胞因子活性改變的量的式I化合物。
20.依據(jù)權(quán)利要求19的方法，其中式I化合物與另一種藥用活性劑聯(lián)合。
21.依據(jù)權(quán)利要求19的方法，其中所述對象選自牛、豬、綿羊、山羊、馬、駱駝、水牛、貓、狗、大鼠、小鼠和人。
22.依據(jù)權(quán)利要求19的方法，其中所述對象是人。
23.依據(jù)權(quán)利要求19的方法，其中一種或多種細(xì)胞因子的至少一種選自IL-1、IL-6、IL-8和TNFα。
24.一種在體內(nèi)或體外抑制細(xì)胞內(nèi)p38活性的方法，所述方法包括使細(xì)胞與一定量的有效抑制細(xì)胞內(nèi)p38活性的式I化合物接觸。
25.一種確定細(xì)胞或組織中的p38蛋白的存在、位置或數(shù)量或其任何組合的方法，所述方法包括a)在式I化合物能與p38蛋白結(jié)合的條件下，使細(xì)胞或組織與式I化合物接觸；以及b)確定細(xì)胞或組織中的式I化合物的存在、位置或數(shù)量，或其任何組合，從而確定細(xì)胞或組織中的p38蛋白的存在、位置或數(shù)量或其任何組合。
26.一種制備式I化合物或其鹽的方法，所述方法包括在-S(O)n基團(tuán)被置換的條件下，使其中n是2的式III化合物與其中R4和R5具有式I中描述的含義的式HOR4或HNR4R5的親核試劑或其共軛堿反應(yīng)，生成式I化合物或其鹽。
27.一種制備式III化合物的方法，所述方法包括在金屬催化劑的存在下和在形成式III化合物的條件下，使式IV化合物，或式IV化合物的鹽 其中X是O或S(O)m；m是0、1或2式；n是1或2；R1獨(dú)立選自氫、-CN、-COOH、鹵素、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基；C3-C6環(huán)烷基、C3-C6環(huán)烷氧基、芳基、氨基羰基、C1-C6烷基羰基和C1-C6烷氧基羰基；以及Ar是芳基，與由式V表示的化合物，或式V化合物的鹽反應(yīng) 其中Z選自鹵素、三氟甲磺酸酯或其它適合的離去基團(tuán)；p是1或2；R3獨(dú)立選自氫、鹵素、氨基、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、C3-C6環(huán)烷基、C3-C6環(huán)烷氧基、芳基、氨基羰基、C1-C6烷基羰基和C1-C6烷氧基羰基；Y是S(O)nL；n是0、1或2；以及L是C1-C6烷基。
全文摘要
本發(fā)明涉及能夠在體內(nèi)或體外抑制P38的式I化合物。
文檔編號(hào)C07D235/00GK1823072SQ200480019855
公開日2006年8月23日 申請日期2004年5月14日 優(yōu)先權(quán)日2003年5月15日
發(fā)明者M·阿什維爾, S·阿利, 劉繼峰, 劉彥彬, P·羅塞, B·梅科寧, R·塞利亞, M·坦頓, W·弗羅納, V·阿托科寧 申請人:艾科爾公司